專利名稱：紅花銀樺組培快繁及栽培方法
技術領域：
本發明涉及植物組織培養及栽培技術領域，更具體的說是涉及紅花銀樺組培快繁
及栽培方法。
背景技術：
紅花銀樺(Grevillea banksii)又稱昆士蘭銀樺、班西銀樺，是山龍眼科銀樺屬常 綠喬木，開紅花，花期長，花量大，抗污染能力強，原產于澳大利亞昆士蘭洲，在澳大利亞被 廣泛應用為行道樹、庭園樹。1967年引進臺灣，深受群眾喜愛。目前，香港、廣州、昆明等地 均有少量引種，均可正常生長及開花，園林景觀特性好。紅花銀樺樹冠修長，葉簇輪廓清晰 可見，春末夏初滿樹紅花，對栽培土質選擇不嚴，十分適宜華南地區作行道樹或庭園觀賞樹 種植。這些特點使得它將來有著廣闊的市場空間，廣州市城市綠地系統規劃已將紅花銀樺 列入廣州市中期推薦發展行道樹種，因此苗木生產者對該樹種種苗需求量大。但由于其在 澳大利亞產種子價格高昂，近萬元一公斤，且發芽率只有76%，成本較高。引進國內后由于 扦插繁殖比較困難，較難生根成活，成活率僅為20%，因此主要采取圈枝繁殖方式，但圈枝 繁殖不僅繁殖數量少、時間長，而且培育出來的苗木主干不明顯，分枝過多，影響樹形。
發明內容
本發明就是為了解決上述技術不足而提供的紅花銀樺組培快繁及栽培方法，利用 組織培養技術快速繁殖和栽培紅花銀樺，不僅繁育周期短，可以周年生產，獲得大量的優質 商品苗木，而且能保證紅花銀樺品種的優越性。 本發明是采用如下技術方案來實現上述目的一種紅花銀樺組培快繁及栽培方 法，其特征在于，包括以下步驟 (1)材料的選擇和消毒；選取帶芽點且健壯、無病的紅花銀樺枝條，剪成長1. 0 1. 5cm帶芽點的小段，用自來水流水沖洗15 20min，瀝干水后用75%的乙醇溶液浸泡 20s，再轉移到超凈工作臺上用0. 1%升汞溶液浸泡12 15min，用無菌水沖洗5 6次后 備用； (2)愈傷組織的培養；將步驟(1)所得的無菌芽點接種到誘導培養基中培養，誘導 產生愈傷組織，培養溫度為25± 1°C ，光照度30 40 ii mol *m—2 s—、光照時間為每天12小 時； (3)愈傷組織的增殖；把步驟(2)獲得的愈傷組織切成小塊接種到增殖培養基上 培養，使愈傷組織大量增殖，培養溫度為25± 1°C ，光照度30 40 ii mol *m—2 s—、光照時間 為每天12小時； (4)不定芽的誘導及擴繁；將步驟(2)或(3)所得的愈傷組織接種到分化培養基 里培養，誘導愈傷組織長出不定芽芽叢，再把芽叢分離接種到多個分化培養基培養，獲得大 量不定芽，培養溫度為25士rC，光照度30 40iimo1 m—2 s—、光照時間為每天12小時；
(5)不定芽的生根培養；當步驟(4)所得的不定芽長到2. 5 3cm高時，把不定芽
3分開轉接入生根培養基上培養20d，培養溫度為25士rC，光照度30 40iimo1 m—2 s—、 光照時間為每天12小時； (6)移栽和煉苗；當步驟(5)所得生根的不定芽高達3 5cm時，將其連帶培養基 一起移至煉苗場地煉苗，該煉苗場地遮光率為85 95%，溫度為15 25tV煉苗3 5d 后，將組培苗從瓶中取出，放在2(TC的溫水中洗去附著在根上的培養基，然后移栽到噴灑了 0. 3% 0. 5%高錳酸鉀溶液消毒的苗床上，保持15 25°〇的溫度、80%以上濕度的栽培條 件，35d后移栽到自然條件下的土壤中； 上述誘導培養基為MS+3. Omg L—VBA+0. lmg L—、AA+0. lmg L—'TDZ，3X蔗糖，
0. 65%卡拉膠，PH5. 8 6. 2 ; 增殖培養基為MS+(2. 0 3. O)mg L—^-BA+NAA 0. 1，3%蔗糖，0. 65%卡拉膠， PH5. 8 6. 2 ; 分化培養基為MS+(0. 5 1. 5)mg L—'6-BA+NAA 0. 1，3%蔗糖，0. 65%卡拉膠， PH5. 8 6. 2 ; 生根培養基為MS+(0. 2 0. 6)mg *L—、AA， 3%蔗糖，0. 65X卡拉膠，PH5. 8 6. 2。
作為上述方案的進一步說明，所述增殖培養基為MS+2. 5mg L—^-BA+NAA 0. 1， 3%蔗糖，0. 65%卡拉膠，PH5. 8 6. 2 ; 分化培養基為MS+1. Omg L—丄6-BA+NAA 0. 1，3%蔗糖，0. 65%卡拉膠，PH5. 8 6. 2 ; 生根培養基為MS+0. 4mg L,AA， 3%蔗糖，0. 65%卡拉膠，PH5. 8 6. 2。所述增殖培養基為MS+2. 8mg L—'6-BA+NAA 0. 1 ， 3 %蔗糖，0. 65 %卡拉膠，
PH5. 8 6. 2 ; 分化培養基為MS+0. 8mg L—'6-BA+NAA 0. 1，3%蔗糖，0. 65%卡拉膠，PH5. 8 6. 2 ; 生根培養基為MS+0. 5mg *L—、AA， 3%蔗糖，0. 65%卡拉膠，0. 5X活性炭，PH5. 8 6. 2。 所述步驟(6)中苗床的基質為2 : 8體積比的砂和已堆漚腐熟的椰子殼混合物。 所述煉苗場地為室溫或室外陰棚。 本發明采用以上技術方案所能達到的有益效果是 1.本發明利用現代生物技術手段，采取組織培養的快繁技術，在短時間內生產大 量優質紅花銀樺苗木供應社會需求，供城市園林和工礦區綠化應用，對綠化、美化城鄉環 境、凈化污染區空氣、帶動花農調整傳統種植結構增加農民收入具有重大的社會意義和較 大的經濟效益。
具體實施例方式
為進一步闡述本發明，以下結合優選的實施例對本發明作詳細說明
實施例一 本實施例是一種花銀樺組培快繁及栽培方法，具體包括以下步驟 (1)材料的選擇和消毒；選取帶芽點且健壯、無病的紅花銀樺枝條，剪成長約
1. 5cm左右帶芽點的小段，用自來水流水沖洗20min，瀝干水后用75%的乙醇溶液浸泡20s，再轉移到超凈工作臺上用0. 1%升汞溶液浸泡12 15min，用無菌水沖洗5 6次后備用；
(2)愈傷組織的培養；將步驟(1)所得的無菌芽點接種到誘導培養基中培養，誘導 產生愈傷組織，該誘導培養基為MS+3. 0mg *L—k-BA+O. lmg *L—、AA+0. lmg *L—'TDZ， 3%蔗糖， 0. 65%卡拉膠，ra調至5. 8 6. 2，培養溫度為25士rC，光照度30 40iimo1 m—2 s—、 光照時間為每天12小時；培養20d左右芽點側部即可長出致密的愈傷組織；
(3)愈傷組織的增殖；把步驟(2)獲得的愈傷組織切成小塊接種到增殖培養基上 培養，使愈傷組織大量增殖，培養溫度為25士rC，光照度30 40mol *m—2 s—、光照時間為 每天12小時，該增殖培養基為MS+2. 5mg L—VBA+NAA 0. 1，3%蔗糖，0. 65%卡拉膠，PH調 至5. 8 6. 2，接種后愈傷組織大量增殖，偶有較粗的不定芽長出，但難以成長為良好的不 定芽； (4)不定芽的誘導及擴繁；將步驟(3)所得的愈傷組織接種到分化培養基里培 養，誘導愈傷組織長出不定芽芽叢，該分化培養基為MS+1. Omg L—^-BA+NAA 0. 1，3%蔗糖， 0. 65%卡拉膠，1^調至5. 8 6. 2，接種后7d左右開始長出不定芽，平均增殖倍數可達4. 0 倍，15d左右不定芽開始伸長，高約2. 5cm，葉片展開，長勢良好，在基部還有少量愈傷組織； 待培養基內的芽叢快長滿時，再把芽叢分離接種到多個分化培養基培養，以獲得大量不定 芽，但繼代間隔不能超過50d，培養溫度為25± 1°C ，光照度30 40 ii mol m—2 s—、光照時 間為每天12小時； (5)不定芽的生根培養；當步驟(4)所得的不定芽長到大約3cm高時，把不定芽分 開轉接入生根培養基上培養，該生根培養基為MS+0. 4mg L—、AA，3X蔗糖，0. 65%卡拉膠， ra調至5. 8 6. 2，20d，培養溫度為25士rC，光照度30 40iimo1 m—2 s—、光照時間為 每天12小時；在接種后10 15d后根系開始長出，20d生根率達80%以上，每株不定芽平 均長出3條左右的根，根系較粗，須根較多，平均根長4. 5cm，但有輕微褐變現象，根系為淺 褐色； (6)移栽和煉苗；當步驟(5)所得生根的不定芽高達3 5cm時，將其連帶培養基 一起移至室外陰棚煉苗，該陰棚的遮光率需為85 95%，溫度要保持在15 25tV煉苗 3 5d后，將組培苗從瓶中取出，放在20°C的溫水中洗去附著在根上的培養基，洗時注意不 能傷根，然后移栽到苗床上，移栽前用0. 3% 0. 5%高錳酸鉀溶液噴灑基質，該苗床的基 質為2 : 8體積比的砂和已堆漚腐熟的椰子殼混合物，移栽后保持15 251:的溫度、80% 以上濕度的栽培條件，35d后移栽到自然條件下的土壤中成活率可達100%。
實施例二 本實施例和實施例一相比，除增殖培養基、分化培養基和生根培養基的配方不同 外，其余步驟和實施例一的完全一致。 本實施例中的增殖培養基為MS+2. 8mg L—^-BA+NAA 0. 1，3%蔗糖，0. 65%卡拉 膠，PH調至5. 8 6. 2，其中6-BA的濃度高于實施例一的2. 5mg L-、與實施例一相比，愈 傷組織增殖更快，并能抑制不定芽的長出，更方便于愈傷組織的管理和接種；
分化培養基為MS+0. 8mg *L—VBA+NAA 0. 1，3%蔗糖，0. 65X卡拉膠，PH5. 8 6. 2， 其中6-BA的濃度低于實施例一的1. Omg L—、與實施例一相比，誘導不定芽生長的效果更 好，且不定芽基本沒有再分化出愈傷組織，更方便于不定芽芽叢的分離和生根培養；
生根培養基為MS+0. 5mg L—、AA， 3%蔗糖，0. 65%卡拉膠，0. 5%活性炭，8 6. 2，其中NAA的濃度低于實施例一的0. 4mg L—、而且在培養基中添加了粉末狀的活性炭， 用以抑制褐變，與實施例一相比，在同樣培養30d后，本實施例中不定芽的根系更粗壯發 達，且顏色淺于實施例一。 本發明上述方法所示僅為本發明較佳實施例之一部分，并不能以此局限本發明， 在不脫離本發明精髓的條件下，本領域技術人員所做的任何變動，都屬本發明的保護范圍。
權利要求
一種紅花銀樺組培快繁及栽培方法，其特征在于，包括以下步驟(1)材料的選擇和消毒；選取帶芽點且健壯、無病的紅花銀樺枝條，剪成長1.0～1.5cm帶芽點的小段，用自來水流水沖洗15～20min，瀝干水后用75％的乙醇溶液浸泡20s，再轉移到超凈工作臺上用0.1％升汞溶液浸泡12～15min，用無菌水沖洗5～6次后備用；(2)愈傷組織的培養；將步驟(1)所得的無菌芽點接種到誘導培養基中培養，誘導產生愈傷組織，培養溫度為25±1℃，光照度30～40μmol·m-2·s-1，光照時間為每天12小時；(3)愈傷組織的增殖；把步驟(2)獲得的愈傷組織切成小塊接種到增殖培養基上培養，使愈傷組織大量增殖，培養溫度為25±1℃，光照度30～40μmol·m-2·s-1，光照時間為每天12小時；(4)不定芽的誘導及擴繁；將步驟(2)或(3)所得的愈傷組織接種到分化培養基里培養，誘導愈傷組織長出不定芽芽叢，再把芽叢分離接種到多個分化培養基培養，獲得大量不定芽，培養溫度為25±1℃，光照度30～40μmol·m-2·s-1，光照時間為每天12小時；(5)不定芽的生根培養；當步驟(4)所得的不定芽長到2.5～3cm高時，把不定芽分開轉接入生根培養基上培養20d，培養溫度為25±1℃，光照度30～40μmol·m-2·s-1，光照時間為每天12小時；(6)移栽和煉苗；當步驟(5)所得生根的不定芽高達3～5cm時，將其連帶培養基一起移至煉苗場地煉苗，該煉苗場地遮光率為85～95％，溫度為15～25℃，煉苗3～5d后，將組培苗從瓶中取出，放在20℃的溫水中洗去附著在根上的培養基，然后移栽到噴灑了0.3％～0.5％高錳酸鉀溶液消毒的苗床上，保持15～25℃的溫度、80％以上濕度的栽培條件，35d后移栽到自然條件下的土壤中；上述誘導培養基為MS+3.0mg·L-16-BA+0.1mg·L-1NAA+0.1mg·L-1TDZ，3％蔗糖，0.65％卡拉膠，PH5.8～6.2；增殖培養基為MS+(2.0～3.0)mg·L-16-BA+NAA 0.1，3％蔗糖，0.65％卡拉膠，PH5.8～6.2；分化培養基為MS+(0.5～1.5)mg·L-16-BA+NAA 0.1，3％蔗糖，0.65％卡拉膠，PH5.8～6.2；生根培養基為MS+(0.2～0.6)mg·L-1NAA，3％蔗糖，0.65％卡拉膠，PH5.8～6.2。
2. 根據權利要求1所述的紅花銀樺組培快繁及栽培方法，其特征在于所述增殖培養 基為MS+2. 5mg L—VBA+NAA 0. 1，3%蔗糖，0. 65%卡拉膠，PH5. 8 6. 2 ;分化培養基為MS+1. 0mg L—'6-BA+NAA 0. 1，3%蔗糖，0. 65%卡拉膠，8 6. 2 ; 生根培養基為MS+0. 4mg L,AA，3X蔗糖，0. 65%卡拉膠，PH5. 8 6. 2。
3. 根據權利要求1所述的紅花銀樺組培快繁及栽培方法，其特征在于所述增殖培養 基為MS+2. 8mg L—VBA+NAA 0. 1，3%蔗糖，0. 65%卡拉膠，PH5. 8 6. 2 ;分化培養基為MS+0. 8mg L—'6-BA+NAA 0. 1，3%蔗糖，0. 65%卡拉膠，8 6. 2 ; 生根培養基為MS+0. 5mg *L—、AA，3X蔗糖，0. 65%卡拉膠，0. 5X活性炭，PH5. 8 6. 2。
4. 根據權利要求1、2或3所述的紅花銀樺組培快繁及栽培方法，其特征在于所述步 驟(6)中苗床的基質為2 : 8體積比的砂和已堆漚腐熟的椰子殼混合物。
5. 根據權利要求4所述的紅花銀樺組培快繁及栽培方法，其特征在于所述煉苗場地 為室溫或室外陰棚。
全文摘要
本發明公開了一種快速繁育紅花銀樺的方法，主要包括材料的選擇和消毒、愈傷組織的培養、愈傷組織的增殖、不定芽的誘導及擴繁、不定芽的生根培養、移栽和煉苗等步驟。本發明利用組織培養快速繁殖技術，不僅繁育周期短，可以周年生產，獲得大量的優質商品苗木，而且能保證紅花銀樺品種的優越性。
文檔編號A01G31/00GK101743908SQ20091021405
公開日2010年6月23日 申請日期2009年12月22日 優先權日2009年12月22日
發明者何麗爛, 劉碧容, 吳小英, 張學平, 李磊, 楊悅林, 柯歡, 殷愛華, 溫海祥, 溫玉輝, 王志云, 王慧珍, 田雪琴, 羅昭潤, 胡羨聰, 蕭洪東, 薛克娜, 譚家得, 趙鴻杰, 陸耀東, 陳香 申請人:佛山市林業科學研究所;佛山科學技術學院