專利名稱：一種用于小型實驗動物灌注固定的器械的制作方法
技術領域：
本實用新型涉及一種實驗動物固定器械，特別是涉及一種用于小型實驗動 物灌注固定的器械。
背景技術：
灌注固定法在腦缺血/缺氧相關疾病的研究中應用十分廣泛，它對神經組織 (腦、脊髓)的快速沖洗、固定作用是任何一種離體固定法都無法替代的。有 文獻報道該固定法應用于較大動物的醫學實驗(貓、兔、狗)中較多見。迄今 為止，對于體重極小的動物使用此種固定法卻少有報道，相應的實驗裝置也未
見涉及。本裝置正是利用體重只有10-20克，C57BL/6N基因缺陷型小鼠，采用 灌注固定技術而研制的用于動物醫學科學研究的實用型機械。
二十一世紀危害人類健康的常見病、多發病中以心血管病居于榜首，其中 不管是原發或是繼發的，均以不同誘因所導致的腦組織、心血管組織最終缺血/ 缺氧為其主要的發病機制。顯而易見，腦和心血管缺血/缺氧的研究就顯得迫在 眉睫。為此，我們利用C57BL/6N小鼠腦底動脈環(Willis)先天缺如(缺血/ 缺氧發生時，腦血流供應代償消失)這一生理學特性，將其雙側頸總動脈與迷 走神經夾閉10分鐘，造成整個腦組織完全的缺血/缺氧，而后恢復血流，即為 再灌注，待動物存活24小時止，在2個標準大氣壓的高壓氧艙中持續治療45 分鐘，然后將動物快速致死取腦，進行隨后的抗缺氧/缺血及高壓氧治療機制方 面的相關研究。
基于C57BL/6N小鼠體重極輕這一生物學特性，可推測其腦組織 加細小、 嬌嫩(約幾克)。事實也證明了我們推測的正確性。稍有醫學基礎知識的人可知，腦組織位于顱腔內，其表面還有與之相連的十二對腦神經根出入顱腔，其外周 又被若干塊顱骨所包繞，在生理學上講，這是腦組織的先天屏障作用；但這也 為我們取得完整的全腦組織進行科學研究增加了很大難度。可想而知，稍有操 作不慎，既可前功盡棄，造成取材的失敗。還有，動物處死血流供應停止后， 腦組織在短時間內極易造成自身的融解腐敗。故在摘取腦組織時操作確保迅速、 快捷，以盡量保持組織結構的新鮮與完整。否則，時間稍久，腦細胞將發生一 系列的變性、壞死，同樣影響實驗結果的真實、可靠性。
再者，血液中含有大量的生物大分子，其中不乏許多內源性的過氧化物酶 類。而我們探討的正是超氧化物歧化酶(SOD-1)在腦缺血/缺氧中蛋白表達發 生的變化，如若不將腦組織中的血液沖洗干靜，定會發生內源、外源氧化物酶 的相互干擾。
因此，經心灌注固定是在摘取腦組織實驗過程中唯一可行的客觀選擇。本 實用新型的目的是提供一種用于小型實驗動物灌注固定的器械。
發明內容
本實用新型的器械包括支架、液體盛放裝置、液體輸送管道、三通管、液 體選擇/切換裝置、流速調控裝置以及穿剌裝置。利用該裝置，首先通過液體選 擇/切換裝置選擇用足量的室溫生理鹽水沖凈固定在試驗臺上的小鼠全身的血 液，然后選擇/切換固定液經心灌注后，沿全身血管完成一次體循環和肺循環， 而后回到右心室。因此，固定液流經了動物全身的所有組織，所有的組織均得 到固定。當然腦組織也不例外。經過固定液浸泡的腦，具有了一定硬度。同時 也將其所有的組織形態維持在生活狀態。這時，我們開顱取腦勢必就顯得輕而 易舉了。所以，選用經心灌注固定法對維持腦組織的形態、結構乃至全腦的完 好性具有關鍵意義。
圖1是本實用新型的用于小型實驗動物灌注固定的器械的示意圖。
，具體實施方式
參照附圖1，我們將對本實用新型的器械的構成和使用進一步進行說明。 本實用新型的用于小型實驗動物灌注固定的器械包括
支架1:該支架是具有穩固底座的鐵質"T"型支架，選用具有穩定底座的 鐵架，目的保持裝置的穩定性，架高可視動物實驗臺的不同需求可調。支架兩 側是左右等長且與地面平行的側臂，臂外側端向下制成"V"型彎勾，以分別懸 掛裝有生理鹽水和灌注液的液體盛放裝置所用，液體盛放裝置與動物水平面相 距50厘米。其原因有二第一，根據液體壓強計算公式可知，液體壓強與液面 的高度呈正相關。經過作者反復摸索，液面與動物水平面相距50厘米的高度所 產生的靜液壓剛好滿足可將沖洗液、灌注液輸送到動物全身各級大、中、小 血管，進而達到沖洗、固定的目的；第二，這個壓力的恒定也可維持各級血管 的結構完整性，不會引起由于壓力大小變化，造成動物血管的破裂，導致實驗 的失敗。另外，動物開胸將液體導入心臟等操作均需在體視顯微鏡下進行，一 旦手術完成，要求沖洗、灌注液事先備好，以達到爭分奪秒的效果，更重的是， 還可避免由于液體的更換，將空氣帶入液體內，近一步造成血管的堵塞，同樣 可致灌注結果的不理想。
液體盛放裝置2:可選用兩個玻璃質帶有標準刻度，、上端留有開口、下端 逐漸變細呈直徑約為1厘米、長約5厘米的玻璃管的吊瓶，其上口保持開放， 與外界相通，以維持一定的靜液壓。
液體輸送管道3和三通管6:液體輸送管道可由三根乳膠管組成，兩根乳膠 管的一端分別與液體盛放裝置，如吊瓶相緊密連通，兩乳膠管各長50厘米，乳膠管另一端分別與硬塑料質地的三通管6的兩個開口連通，三通管6的第三開 口與一根帶有透明懸液壺的乳膠管相連，通過透明的懸液壺可觀察液體灌注時 的流速，以便隨時調節流速，控制流量。
液體選擇/切換裝置4和液體選擇/切換裝置5:液體選擇/切換裝置位于與 吊瓶相連通的乳膠管上，用于進行液體的選擇/切換。
流速調控裝置7:流速調控裝置位于透明懸液壺的下方，可以隨時調節流速、 控制流量。
穿刺裝置8:將插入動物心臟的穿刺裝置設計為lmm直徑軟管，其原因有二-首先，動物心臟極小；其次，太硬的裝置極易將心臟毀壞。 裝置使用過程如下
沖洗液的灌注先將造模成功的小鼠9仰臥位固定于手術臺10上，兩側
盛液瓶2裝有事先配制的室溫的沖洗液及4。C保存的固定液，暴露動物心臟， 于左心尖部將軟塑管8端口小心插入至右心耳，先灌沖洗液(生理鹽水)，流 速控制以快為最佳。要求10min內完成，在這一過程中，可見右心耳流出液的 顏色由開始的鮮紅逐漸變淡粉色為止，總液量為30毫升。整個操作在體視鏡 下完成。
沖洗液灌注完成后，關閉同側的螺懸夾，打開對側螺懸夾，進行固定液 的灌注，流速控制為前1/2液量流速稍快(30滴/分鐘)，后1/2緩慢(20滴/ 分鐘)，其流速控制通過懸液壺流速觀查決定，要求30min內完成。隨后剪 開右心耳，拔出穿刺心臟裝置，動物翻轉呈腹臥狀。快速剪開頭部皮膚，撬開 顱骨，剪開硬、軟腦膜，迅速摘取全腦，沿正中裂輕輕剖開呈左右相等的兩部 分，用生理鹽水稍沖洗，將腦組織重新放入固定液中，進行后固定。待條件成 熟，既可進行后續的實驗研究
權利要求1、一種用于小型實驗動物灌注固定的器械，包括支架，該支架是具有穩固底座的鐵質“T”型支架，架高可視動物實驗臺的不同需求可調；支架兩側是左右等長且與地面平行的側臂，臂外側端向下制成“V”型彎勾，以分別懸掛裝有生理鹽水和灌注液的液體盛放裝置所用；液體盛放裝置，可選用兩個玻璃質帶有標準刻度、上端留有開口、下端逐漸變細呈直徑為1厘米、長5厘米的玻璃管的吊瓶，其上口保持開放，與外界相通，以維持一定的靜液壓；液體輸送管道，液體輸送管道可由三根乳膠管組成，兩根乳膠管的一端分別與液體盛放裝置相緊密連通，兩乳膠管各長50厘米，兩根乳膠管另一端分別與硬塑料質地的三通管的上端兩個開口連通，三通管的下端開口與一根帶有透明懸液壺的乳膠管相連，通過透明的懸液壺可觀察液體灌注時的流速，以便隨時調節流速，控制流量；液體選擇/切換裝置，位于與吊瓶相連通的乳膠管上，用于進行液體的選擇/切換；流速調控裝置，位于透明懸液壺的下方，可以隨時調節流速、控制流量；穿刺裝置，將插入動物心臟的穿刺裝置設計為1mm直徑軟管。
2、 根據權利要求1所述的用于小型實驗動物灌注固定的器械，其中所述液體盛 放裝置與動物水平面相距50厘米。
專利摘要本實用新型的器械包括支架、液體盛放裝置、液體輸送管道、三通管、液體選擇/切換裝置、流速調控裝置以及穿刺裝置。利用該裝置，首先通過液體選擇/切換裝置選擇用足量的生理鹽水沖凈固定在試驗臺上的實驗動物全身的血液，然后選擇/切換固定液經心灌注后沿全身血管完成一次體循環和肺循環，而后回到右心室。由此，得到固定的腦組織。經過固定液浸泡的腦，具有了一定硬度。同時也將其所有的組織形態維持在生活狀態。因此，利用本器械經心灌注固定法對維持腦組織的形態、結構乃至全腦的完好性具有關鍵意義。
文檔編號A61D7/00GK201394094SQ20092015200
公開日2010年2月3日 申請日期2009年4月23日 優先權日2009年4月23日
發明者李寶紅, 旭 賀 申請人:首都醫科大學