專利名稱：一種培育紅桿芋的方法
技術領域：
本發明涉及一種草本植物的組織培養方法，尤其是涉及一種培育紅桿芋的方法。
背景技術：
紅桿芋Colocasia ‘Red Mem’，為多年生草本植物，株高50-60厘米。葉柄為紫紅色，為人工選育的優良品種。紅桿芋性喜高溫多濕，適應性強，可在岸邊、濕地種植，觀賞效果好。做為國外引進的品種引種數量較少，其分株慢，市場需求量大，種苗供應受限制。通過組培技術，極大提高繁殖速度和苗的整齊度，更好地保持原有的母本性狀。紅桿芋 Colocasia ‘Red Stem’在國內的組培報道尚未見。
發明內容
本發明的目的就是為了克服上述現有技術存在的缺陷而提供一種可極大提高繁殖速度和苗的整齊度，更好地保持原有的母本性狀的一種培育紅桿芋的方法。本發明的目的可以通過以下技術方案來實現一種培育紅桿芋的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟(1)無菌材料的獲得春天紅桿芋剛萌芽時挖取其基部小芽，用自來水沖洗池后于超凈工作臺上，用濃度為75wt%的乙醇浸泡20-40s，lwt%。的升汞溶液浸泡10-20min，經無菌水沖洗5-6次后用無菌濾紙吸干表面水份，取小芽基部切成Icm長接種于誘導培養基上；(2)芽的分化和增殖是小芽接種于誘導培養基上3周后，小芽基部開始膨大，出現黃綠色突起，2周后可見明顯的愈傷組織，培養1個月，然后切下帶芽愈傷組織放入不定芽增殖培養基進行培養；(3)不定芽壯苗培養在不定芽增殖培養基中誘導出的叢生芽，將大叢芽分成小叢或單芽后，放入壯苗培養基上，不定芽迅速伸長，20天后可以長成2-3cm的小植株；(4)生根培養取高度為2_3cm的小植株，轉接入生根培養基中誘導生根，10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后可以長至4-6cm ；(5)煉苗與移栽生根培養20-30天，根系長至l-2cm時，選擇根系發達生長健壯的無菌苗，室內開瓶煉苗3天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后，即可移栽室外，給予肥水管理即可。所述的小芽誘導培養基的成分為MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L、MS+6-BA3. Omg/ L+NAAO. 3mg/L 或 MS+6-BA5. 0mg/L+NAA0. 5mg/L。所述的小芽誘導培養基的成分優選MS+6-BA5. 0mg/L+NAA0. 5mg/L。所述的增殖培養基的成分為MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L、MS+6-BA2. Omg/L+NAAO. 2mg/L 或 MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. 3mg/L。所述的增殖培養基的成分優選MS+6-BA2. Omg/L+NAAO. 2mg/L0所述的壯苗培養基的成分為MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L、MS+6-BA1. Omg/ L+NAAO. lmg/L 或 MS+6-BA2. Omg/L+NAAO. 2mg/L。所述的壯苗培養基的成分優選MS+6-BA1. Omg/L+NAAO. lmg/L。所述的生根培養基的成分為MS+NAAO. 05mg/L、MS+NAA0. lmg/L 或 MS+NAAO. 2mg/L。
所述的生根培養基的成分優選MS+NAAO. lmg/L。所述的小芽誘導培養基、增殖培養基、壯苗培養基和生根培養基成分還包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，該培養基的培養溫度為2446°C，光照為70-90 μ mol/ms，pH值為 5. 5-6. O。與現有技術相比，本發明通過組培技術，可大大提高繁殖速度和苗木的整齊度，更好地保持原有的母本性狀，并且能夠提高成活率，從而提高產量。
具體實施例方式下面結合具體實施例對本發明進行詳細說明。實施例1一種培育紅桿芋的方法，該方法包括以下步驟(1)無菌化處理春天紅桿芋剛萌芽時挖取其基部小芽，用自來水沖洗池后于超凈工作臺上，用濃度為75wt%的乙醇浸泡30s，Iwt%。的升汞溶液浸泡15min，經無菌水沖洗5-6次后用無菌濾紙吸干表面水份，取小芽基部切成Icm長接種于小芽誘導培養基MS+6-BA5. Omg/ L+NAAO. 5mg/L 上；(2)芽的分化和增殖小芽接種于小芽誘導培養基上3周后，小芽基部開始膨大，出現黃綠色突起，2周后可見明顯的愈傷組織，培養1個月后，切下帶芽愈傷組織放入增殖培養基MS+6-BA2. Omg/ L+NAAO. 2mg/L進行培養，基部愈傷組織比較多，但不影響不定芽的增殖，不定芽生長迅速并無玻璃化等不良現象，在該培養中生長發育良好；(3)不定芽壯苗培養在增殖培養基上誘導出叢生芽，叢生芽每叢只有2-3株可以伸長，其余處于矮化狀態，將大叢芽分成小叢或單芽后，放入壯苗培養基MS+6-BAlmg/L+NAA0. lmg/L上，不定芽迅速伸長，20天后可以長到2-3cm ；(4)生根培養取高度為2-3cm的小植株，轉接入生根培養基MS+NAAO. lmg/L中誘導生根，10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后可以長至4-6cm，根系粗壯，須根眾多，生根率為 100% ；(5)煉苗與移栽生根培養25天，根系長至l-2cm時，選擇根系發達生長健壯的無菌苗，室內開瓶煉苗3天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后，即可移栽室外，給予肥水管理即可，移栽成活率為95%。
實施例2一種培育紅桿芋的方法，該方法包括以下步驟(1)無菌化處理春天紅桿芋剛萌芽時挖取其基部小芽，用自來水沖洗池后于超凈工作臺上，用濃度為75wt%的乙醇浸泡20s，Iwt%。的升汞溶液浸泡lOmin，經無菌水沖洗5-6次后用無菌濾紙吸干表面水份，取小芽基部切成Icm長接種于小芽誘導培養基MS+6-BA1. Omg/ L+NAAO. lmg/L 上；(2)芽的分化和增殖小芽接種于小芽誘導培養基上3周后，小芽基部開始膨大，出現黃綠色突起，2周后可見明顯的愈傷組織，培養1個月后，切下帶芽愈傷組織放入增殖培養基MS+6-BA2. Omg/ L+NAAO. 2mg/L進行培養，基部愈傷組織比較多，但不影響不定芽的增殖，不定芽生長迅速并無玻璃化等不良現象，在該培養中生長發育良好；(3)不定芽壯苗培養在增殖培養基上誘導出叢生芽，叢生芽每叢只有2-3株可以伸長，其余處于矮化狀態，將大叢芽分成小叢或單芽后，放入壯苗培養基MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L上，不定芽迅速伸長，20天后可以長到2-3cm ；(4)生根培養取高度為2-3cm的小植株，轉接入生根培養基MS+NAAO. 05mg/L中誘導生根，10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后可以長至2-3cm ；(5)煉苗與移栽繼續生根培養20天，根系長至l-2cm時，選擇根系發達生長健壯的無菌苗，室內開瓶煉苗3天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后，即可移栽室外，給予肥水管理即可，移栽成活率為95%。實施例3一種培育紅桿芋的方法，該方法包括以下步驟(1)無菌化處理春天紅桿芋剛萌芽時挖取其基部小芽，用自來水沖洗池后于超凈工作臺上，用濃度為75wt%的乙醇浸泡40s，Iwt%。的升汞溶液浸泡20min，經無菌水沖洗5_6次后用無菌濾紙吸干表面水份，取小芽基部切成Icm長接種于小芽誘導培養基MS+6-BA3. Omg/ L+NAAO. 3mg/L 上；(2)芽的分化和增殖小芽接種于小芽誘導培養基上3周后，小芽基部開始膨大，出現黃綠色突起，2周后可見明顯的愈傷組織，培養1個月后，切下帶芽愈傷組織放入增殖培養基MS+6-BA3. Omg/ L+NAAO. 3mg/L進行培養，基部愈傷組織比較多，但不影響不定芽的增殖，不定芽生長迅速并無玻璃化等不良現象，在該培養中生長發育良好；(3)不定芽壯苗培養在增殖培養基上誘導出叢生芽，叢生芽每叢只有2-3株可以伸長，其余處于矮化狀態，將大叢芽分成小叢或單芽后，放入壯苗培養基MS+6-BA2. Omg/L+NAAO. 2mg/L上，不定芽迅速伸長，20天后可以長到2-3cm ；
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(4)生根培養取高度為2-3cm的小植株，轉接入生根培養基MS+NAAO. 2mg/L中誘導生根，10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后可以長至2-3cm ；(5)煉苗與移栽繼續生根培養30天，根系長至l-2cm時，選擇根系發達生長健壯的無菌苗，室內開瓶煉苗3天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后，即可移栽室外，給予肥水管理即可，移栽成活率為95%。實施例4一種培育紅桿芋的方法，該方法包括以下步驟(1)無菌化處理春天紅桿芋剛萌芽時挖取其基部小芽，用自來水沖洗池后于超凈工作臺上，用濃度為75wt%的乙醇浸泡30s，Iwt%。的升汞溶液浸泡15min，經無菌水沖洗5-6次后用無菌濾紙吸干表面水份，取小芽基部切成Icm長接種于小芽誘導培養基MS+6-BA3. Omg/ L+NAAO. 3mg/L 上；(2)芽的分化和增殖小芽接種于小芽誘導培養基上3周后，小芽基部開始膨大，出現黃綠色突起，2周后可見明顯的愈傷組織，培養1個月后，切下帶芽愈傷組織放入增殖培養基MS+6-BA1. Omg/ L+NAAO. lmg/L進行培養，基部愈傷組織比較多，但不影響不定芽的增殖，不定芽生長迅速并無玻璃化等不良現象，在該培養中生長發育良好；(3)不定芽壯苗培養在增殖培養基上誘導出叢生芽，叢生芽每叢只有2-3株可以伸長，其余處于矮化狀態，將大叢芽分成小叢或單芽后，放入壯苗培養基MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L上，不定芽迅速伸長，20天后可以長到2-3cm ；(4)生根培養取高度為2-3cm的小植株，轉接入生根培養基MS+NAAO. lmg/L中誘導生根，10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后可以長至2-3cm，根系粗壯，須根眾多，生根率為 100% ；(5)煉苗與移栽繼續生根培養25天，根系長至l-2cm時，選擇根系發達生長健壯的無菌苗，室內開瓶煉苗3天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后，即可移栽室外，給予肥水管理即可，移栽成活率為95%。所述的小芽誘導培養基、增殖培養基、壯苗培養基和生根培養基成分還包括蔗糖 30g/L、瓊脂6g/L，該培養基的培養溫度為M°C，光照為70μπιΟ1/πι8，ρΗ值為5. 5。實施例5—種培育紅桿芋的方法，該方法包括以下步驟(1)無菌化處理春天紅桿芋剛萌芽時挖取其基部小芽，用自來水沖洗池后于超凈工作臺上，用濃度為75wt%的乙醇浸泡20s，Iwt%。的升汞溶液浸泡lOmin，經無菌水沖洗5-6次后用無菌濾紙吸干表面水份，取小芽基部切成Icm長接種于小芽誘導培養基MS+6-BA 1. Omg/L+NAAO. lmg/L 上；(2)芽的分化和增殖小芽接種于小芽誘導培養基上3周后，小芽基部開始膨大，出現黃綠色突起，2周后可見明顯的愈傷組織，培養1個月后，切下帶芽愈傷組織放入增殖培養基MS+6-BA2. Omg/ L+NAAO. 2mg/L進行培養，基部愈傷組織比較多，但不影響不定芽的增殖，不定芽生長迅速并無玻璃化等不良現象，在該培養中生長發育良好；(3)不定芽壯苗培養在增殖培養基上誘導出叢生芽，叢生芽每叢只有2-3株可以伸長，其余處于矮化狀態，將大叢芽分成小叢或單芽后，放入壯苗培養基MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L上，不定芽迅速伸長，20天后可以長到2-3cm ；(4)生根培養取高度為2-3cm的小植株，轉接入生根培養基MS+NAAO. 05mg/L中誘導生根，10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后可以長至2-3cm ；(5)煉苗與移栽繼續生根培養20天，根系長至l-2cm時，選擇根系發達生長健壯的無菌苗，室內開瓶煉苗3天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后，即可移栽室外，給予肥水管理即可，移栽成活率為95%。所述的小芽誘導培養基、增殖培養基、壯苗培養基和生根培養基成分還包括蔗糖 30g/L、瓊脂6g/L，該培養基的培養溫度為25°C，光照為SOymol/ms，pH值為5. 8。實施例6一種培育紅桿芋的方法，該方法包括以下步驟(1)無菌化處理春天紅桿芋剛萌芽時挖取其基部小芽，用自來水沖洗池后于超凈工作臺上，用濃度為75wt%的乙醇浸泡40s，Iwt%。的升汞溶液浸泡20min，經無菌水沖洗5_6次后用無菌濾紙吸干表面水份，取小芽基部切成Icm長接種于小芽誘導培養基MS+6-BA5. Omg/ L+NAAO. 5mg/L 上；(2)芽的分化和增殖小芽接種于小芽誘導培養基上3周后，小芽基部開始膨大，出現黃綠色突起，2周后可見明顯的愈傷組織，培養1個月后，切下帶芽愈傷組織放入增殖培養基MS+6-BA3. Omg/ L+NAAO. 3mg/L進行培養，基部愈傷組織比較多，但不影響不定芽的增殖，不定芽生長迅速并無玻璃化等不良現象，在該培養中生長發育良好；(3)不定芽壯苗培養在增殖培養基上誘導出叢生芽，叢生芽每叢只有2-3株可以伸長，其余處于矮化狀態，將大叢芽分成小叢或單芽后，放入壯苗培養基MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L上，不定芽迅速伸長，20天后可以長到2-3cm ；(4)生根培養取高度為2-3cm的小植株，轉接入生根培養基MS+NAAO. 2mg/L中誘導生根，10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后可以長至2-3cm ；(5)煉苗與移栽
繼續生根培養30天，根系長至l-2cm時，選擇根系發達生長健壯的無菌苗，室內開瓶煉苗3天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后，即可移栽室外，給予肥水管理即可，移栽成活率為95%。所述的小芽誘導培養基、增殖培養基、壯苗培養基和生根培養基成分還包括蔗糖 30g/L、瓊脂6g/L，該培養基的培養溫度為^°C，光照為90μπιΟ1/πι8，ρΗ值為6. 0。
權利要求
1.一種培育紅桿芋的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟(1)無菌材料的獲得春天紅桿芋剛萌芽時挖取其基部小芽，用自來水沖洗池后于超凈工作臺上，用濃度為75wt%的乙醇浸泡20-40s，lwt%。的升汞溶液浸泡10-20min，經無菌水沖洗5-6次后用無菌濾紙吸干表面水份，取小芽基部切成Icm長接種于誘導培養基上；(2)芽的分化和增殖是小芽接種于誘導培養基上3周后，小芽基部開始膨大，出現黃綠色突起，2周后可見明顯的愈傷組織，培養1個月，然后切下帶芽愈傷組織放入不定芽增殖培養基進行培養；(3)不定芽壯苗培養在不定芽增殖培養基中誘導出的叢生芽，將大叢芽分成小叢或單芽后，放入壯苗培養基上，不定芽迅速伸長，20天后可以長成2-;3em的小植株；(4)生根培養取高度為2-3cm的小植株，轉接入生根培養基中誘導生根，10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后可以長至4-6cm ；(5)煉苗與移栽生根培養20-30天，根系長至l_2cm時，選擇根系發達生長健壯的無菌苗，室內開瓶煉苗3天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后，即可移栽室外，給予肥水管理即可。
2.根據權利要求1所述的一種培育紅桿芋的方法，其特征在于，所述的小芽誘導培養基的成分為 MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L、MS+6_BA3. 0mg/L+NAA0. !3mg/L 或 MS+6-BA5. Omg/ L+NAA0. 5mg/L。
3.根據權利要求2所述的一種培育紅桿芋的方法，其特征在于，所述的小芽誘導培養基的成分優選 MS+6-BA5. 0mg/L+NAA0. 5mg/L。
4.根據權利要求1所述的一種培育紅桿芋的方法，其特征在于，所述的增殖培養基的成分為 MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L、MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L 或 MS+6-BA3. Omg/ L+NAA0. 3mg/L。
5.根據權利要求4所述的一種培育紅桿芋的方法，其特征在于，所述的增殖培養基的成分優選 MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L。
6.根據權利要求1所述的一種培育紅桿芋的方法，其特征在于，所述的壯苗培養基的成分為 MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L、MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L 或 MS+6-BA2. Omg/ L+NAA0. 2mg/L。
7.根據權利要求6所述的一種培育紅桿芋的方法，其特征在于，所述的壯苗培養基的成分優選 MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L。
8.根據權利要求1所述的一種培育紅桿芋的方法，其特征在于，所述的生根培養基的成分為 MS+NAA0. 05mg/L、MS+NAA0. lmg/L 或 MS+NAA0. 2mg/L。
9.根據權利要求8所述的一種培育紅桿芋的方法，其特征在于，所述的生根培養基的成分優選 MS+NAA0. lmg/L ο
10.根據權利要求1所述的一種培育紅桿芋的方法，其特征在于，所述的小芽誘導培養基、增殖培養基、壯苗培養基和生根培養基成分還包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，該培養基的培養溫度為M_26°C，光照為70-90ymol/ms, pH值為5. 5-6. 0。
全文摘要
本發明涉及一種培育紅桿芋的方法，該方法包括以下步驟(1)無菌材料的獲得；(2)芽的分化和增殖；(3)不定芽壯苗培養；(4)生根培養；(5)煉苗與移栽。與現有技術相比，本發明通過組培技術，可大大提高繁殖速度和苗木的整齊度，更好地保持原有的母本性狀，并且能夠提高成活率，從而提高產量，移栽成活率可達95％。
文檔編號A01H4/00GK102273406SQ20101020095
公開日2011年12月14日 申請日期2010年6月12日 優先權日2010年6月12日
發明者沈勤, 陳建華, 黃建榮 申請人:上海上房園藝有限公司