專利名稱：一種節水型的大菱鲆養殖方法
技術領域：
本發明屬于海水魚類養殖技術領域，特別涉及一種提高大菱鲆免疫力，促進大菱 鲆生長、改善水質、節水節能、節省人力物力、綠色低碳的新型無公害的大菱鲆養殖方法。
背景技術：
大菱鲆(Scophthalmus maximus)，屬于鰈形目鲆科，英文名Turbot，俗稱歐洲比目 魚，含有豐富的膠質，體內無小骨亂刺，內臟團小、出肉率高、肌肉豐厚白嫩、味道鮮美、營養 豐富、備受消費者喜愛。大菱鲆引進10年來，以其良種優勢，先進的創新模式和工業化養殖 潮流，成為我國北方沿海引人注目的重要養魚工業。然而，隨著大菱鲆養殖業在我國的蓬勃 發展，特別是工廠化養殖規模的快速增長，養殖環境不斷惡化，病害日趨嚴重，這些已成為 制約其養殖業可持續發展的瓶頸。“溫室大棚+深井水養殖”是目前水產養殖最普遍的生產模式。這種養殖模式需 要大量的水循環，地下井水的過度開采使用，不僅浪費資源和能源，導致水資源枯竭，還會 嚴重影響地質概況，為地質災害埋下隱患。大量的養殖廢水排放，也造成海洋水體的嚴重污
^fe ο配合飼料和化學藥物，大量的水循環，進行高投入低產出的魚類精養，大大增加了 投入成本。傳統的抗生素和化學藥物的引用引起耐藥性菌株增加、魚類藥源性器官損害、藥 物殘留、危害生態環境等許多不良后果，造成水產品品質的下降和出口障礙。因此，“綠色養 殖”成為近年來國家的重大需求，引起水產界的廣泛關注。目前，用蛭弧菌游泳體來提高大 菱鲆的免疫力，促進大菱鲆快速生長的養殖方式在國內外尚未報道。已有的研究表明，作為一種有益微生物制劑，無論是在食品工業還是在(海洋) 水產養殖等領域，蛭弧菌的應用均是安全的。例如在國外，Lenz and Hespell (1978) 研究發現，蛭弧菌及對動物及人的細胞不具侵染性[Lenz R. W. , Hespell R. B. Attempts to grow bedellovibrios micurgically-injected into animal cells. Archives of Microbiology, 1978,119(3) =245-248] 在國內，林茂等(2006)研究了蛭弧菌對魚類細 胞的作用，發現它對魚類細菌沒有侵染作用[林茂，楊先樂，薛暉，曹海鵬，邱軍強。蛭弧菌 BDH21 02對魚類細胞及病原菌的作用。微生物學通報，2006，33(1) :7_11]。
發明內容
為克服上述現有養殖技術中存在的不足，本發明的目的在于提供一種節水型的大 菱鲆養殖方法；該方法通過在飼料和水體中添加蛭弧菌游泳體實現，具體包括養殖水源選 擇，池水的處理，飼料的處理，換水周期的控制，其特征按照養殖生態學原理，海洋生物的生 長環境要求，生物之間的相互關系及無公害養殖標準，人工創造養殖環境，減少投入成本， 改善水質，提高大菱鲆免疫力，促進大菱鲆快速生長，提高經濟效益。本發明的目的通過下述技術方案來實現一種節水型的大菱鲆養殖方法，包括以 下操作步驟
(1)取海域無污染的海水作為養殖用水；養殖用水經砂濾、沉淀后注入養殖池；在 養殖池上方蓋遮光布，控制光照強度為150 2001ux ；(2)在養殖池中加入蛭弧菌游泳體菌液，并加大曝氣，攪拌均勻，使池水中的蛭弧 菌游泳體的濃度達10 107pfu/mL ；(3)向養殖池中投放魚苗；(4)養殖期間正常曝氣，控制水溫在15 30°C，日投餌量為魚體重的質量百分數 3 5%，餌料在投入前用濃度為10 107pfu/mL的蛭弧菌游泳體菌液浸泡15 30min ；每 隔5 40天換掉池水(全池)一次，每次換水后加入蛭弧菌游泳體菌液，使池水中的蛭弧 菌游泳體濃度達到10 107pfu/mL。所述的蛭弧菌游泳體為蛭弧菌游離在宿主菌外部的狀態；步驟(1)所述養殖池的池底為凹型或平底，養殖池在注入養殖用水之前清洗消毒 干凈；所述遮光布的遮光率為95%。步驟⑵和(4)所述加入蛭弧菌游泳體菌液的方法為用養殖池中的池水稀釋菌 液后，均勻潑灑全池。步驟(2)所述加大曝氣的曝氣量為90 100L/h/m3 ；步驟(4)所述正常曝氣的曝 氣量為70 80L/h/m3。步驟(3)所述投放魚苗在水溫15 30°C時按照以下標準魚苗重量為25 50g 時，投放密度為300 400尾/m2 ；魚苗重量為70 IOOg時，投放密度為200 300尾/m2 ； 魚苗重量為100 200g時，投放密度為100 150尾/m2。溫度升高時則減少養殖密度。步驟(4)所述餌料為顆粒餌料；所述餌料在早上、中午和晚上各投放一次，每次投 餌間隔5 6小時，投餌方式為灑遍全池。步驟⑵和⑷所述蛭弧菌為蛭弧菌(Bdellovibrio sp. )BDFM05，所述蛭弧菌于 2009年8月7日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO =M 209172。所述蛭弧菌BDFM05進行負染后于電子顯微鏡下進行形態觀察BDFM05呈單細胞， 橢圓形，大小為1. 43X0. 53um，端生鞭毛，鞭毛長度至少2um ；所述蛭弧菌BDFM05以雙層平 板法于28°C培養三天可形成直徑2 3mm的透明圓形噬菌斑；所述蛭弧菌BDFM05是由野生型蛭弧菌BDS02經紫外誘變得到；所述蛭弧菌游泳體菌液按照以下方法制備得到接種嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila，購于廣東省微生物所菌種保藏中心，編號GIM1. 172)于營養肉湯液體培養基 中，26 30°C培養20h，培養液經5000 8000rpm離心10 20min后，沉淀加入至DNB液 體培養基(營養肉湯0. 8g，酪蛋白酸水解物0. 5g，酵母精提物0. lg，溶于IOOOmL蒸餾水中， PH值為7. 2 7. 6)中，接入蛭弧菌BDFM05，28°C培養36 48h，培養液經6000 8000rpm 離心15 20min后，將蛭弧菌游泳體的上清經16000 18000rpm離心15 20min后，沉 淀用DNB液體培養基、水、生理鹽水或0. 2mol/L pH值為7. 2 7. 6的磷酸鹽緩沖液懸浮， 得到蛭弧菌游泳體菌液，蛭弧菌BDFM05游泳體菌液的濃度可達到109pfu/mL。所述DNB液體培養基是將營養肉湯0. Sg、酪蛋白酸水解物0. 5g和酵母精提物 0. Ig溶于IOOOmL蒸餾水中，調節pH值至7. 2 7. 6。與現有技術相比，本發明具有如下的有益效果發展無公害養殖，提高大菱鲆的免疫力，促進大菱鲆的快速生長，降低生產成本，提高經濟效益，是我國海水養殖業發展的必由之路。蛭弧菌能改善養殖生物腸道環境，提高 免疫力，促進生長。對魚類無毒性作用，對人類無致病性。蛭弧菌游泳體侵入宿主細菌的過程非常快，一般幾秒鐘內即可完成。相對于蛭弧 菌蛭質體而言，雖然存在著制備繁瑣、不易保存的弱點，但用蛭弧菌游泳體控制和消除海洋 致病或潛在致病菌起效快、活力強。這些優點使得蛭弧菌游泳體同樣適合作為抑止或清除 生物體及其環境中致病或潛在致病菌的生物凈化因子。由于蛭弧菌游泳體對水產的致病或潛在致病菌，特別是海洋弧菌有強的裂解力， 對水質也有一定的凈化作用，用蛭弧菌游泳體浸泡飼料，并在池水中潑灑一定濃度的蛭弧 菌游泳體菌液，既能促進大菱鲆的生長，提高免疫力，又能凈化水質，且最長可40天換(全 池)水一次，從而克服了抗生素濫用帶來的副作用和大量養殖廢水排放污染環境，節省人 力物力，為人類提供安全、綠色、無公害的水產品，提高養殖戶的收入。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明做進一步詳細的描述，但本發明的實施方式不限于此。本發明的具體實施地點為山東省某養殖場，實施時間為8個月。試驗地海域的水 源水質符合中華人民共和國國家標準漁業水質標準(GB11607-89)要求，海水經過砂濾、沉 淀處理后進入養殖池，符合農業部《無公害食品海水養殖用水水質》(NY5052-2001)要求。 大菱鲆的養殖池建在養殖大棚內，每個水池面積為40m2，水深1. 2米，池底盡量凹型，有利于 排水吸污等操作；但也可有平底的。水池上方蓋上遮光度為95%的遮光布，避免光照過強。 光照強度控制在150 2001ux。挑選體質健康、個體大小均勻的大菱鲆(Scophthalmus maximus)幼魚，平均體重 為28 士 2. 5g，平均體長為11 士0. 55cm，采用隨機區組試驗設計，按照300尾/m2的養殖密度 投入池中，平均分為A-D4個試驗組，B、C、D每個試驗組有8個小組，分別為Bi、Cl、Dl ；B2、 C2、D2 ；、B3、C3、D3 ；B4、C4、D4 ；B5、C5、D5 ；B6、C6、D6 ；B7、C7、D7 ；B8、C8、B8 ；Bl D8 每小 組再分為4組，即Bl-I B1-4…D8-1 D8-4，每組2個重復。試驗的處理如下A組正常流水，投喂正常的顆粒飼料(工廠生產的養殖方式)；B組在水中潑灑蛭弧菌游泳體菌液，使水體中游泳體菌液濃度分別達到10、103、 105、107pfu/mL，投放顆粒飼料；C組投喂濃度為10、ΙΟ3、105、107pfu/mL的蛭弧菌游泳體菌液浸泡后的顆粒飼料；D組在水中加入蛭弧菌游泳體菌液，使菌體濃度分別達到10、103、105、107pfu/ mL,同時分別投喂濃度為10、103、105、107pfU/mL的蛭弧菌游泳體菌液浸泡后的顆粒飼料；Bi、Cl、Dl組每5天換(全池)水一-次，換水后重新加菌；
B2、C2、D2組每10天換(全池)水--次，換水后]重新加菌
B3、C3、D3組每15天換(全池)水--次，換水后]重新加菌
B4、C4、D4組每20天換(全池)水--次，換水后]重新加菌
B5、C5、D5組每25天換(全池)水--次，換水后]重新加菌
B6、C6、D6組每30天換(全池)水--次，換水后]重新加菌
B7、C7、D7組每35天換(全池)水--次，換水后]重新加菌
B8、C8、D8組每40天換(全池)水--次，換水后]重新加菌
B1-1、α-1、01-Ρ..08_1 投放的菌液濃度為 10pfu/mL ；Bl-2、Cl-2、D1-2…D8-2 投放的菌液濃度為 103pfu/mL ；Bl-3、Cl-3、D1-3…D8-3 投放的菌液濃度為 105pfu/mL ；Bl-4、Cl-4、Dl-4... D8-4 投放的菌液濃度為 107pfu/mL ；所用顆粒符合中華人民共和國農業行業標準《無公害食品漁用配合飼料安全限 量》(NY5072-2002)的規定。試驗期間，日投餌量與魚體重的質量分數為3_5 %，每日投喂 三次(7 00，12:00，17:00)，每次投喂過程持續30min。試驗結束測量魚的生長指標、免疫指 標。(1)、魚體生長指標的測定方法如下每組隨機抽取40尾魚檢測生長情況，魚體長度測定采用精度為Imm的游標卡尺度 量，體長為魚的吻端到脊椎骨最下端之間的距離。體重采用電子天平稱量。試驗生長指標 按如下公式計算成活率(%) = Nt/NoX100% ；增重率(%) = (Wt-W0)/W0X 100% ；體長增長率(%) = (Lt-L0)/L0X 100% ；肥滿度=1。/1^或^/1^;式中N。為試驗開始時魚體總尾數；Nt為試驗結束時魚體總尾數；W。為試驗開始時 魚體重;Wt為試驗結束時魚體重；L。為試驗開始時魚體長；Lt為試驗結束時魚體長；試驗測得的大菱鲆各項生長指標見表一 表四從表中可以看出，A組成活率、增 重率、體長增長率、肥滿度分別為81. 45%、1792%、56. 65%、21. 43。與A組相比，B、C、D組 的成活率、增重率、體長增長率、肥滿度均有明顯提高。說明在常規的養殖方式下，不換水會 影響大菱鲆的成活率、增重率、體長增長率、肥滿度。在相同的換水周期下，隨著蛭弧菌濃度 的升高，成活率、增重率、體長增長率、肥滿度都在逐漸升高，且都明顯高于A組。Bl-I B8-1…D1-4 D8_4之間的成活率、增重率、體長增長率、肥滿度無明顯差 異。說明在水中和/或者是在飼料中添加濃度為10 IO7PfuAiL蛭弧菌游泳體菌液，5-40 天換(全池)水一次，對成活率、增重率、體長增長率、肥滿度影響不明顯，均可促進生長。由此可見，無論在水體中還是飼料中添加濃度為10 107pfu/mL蛭弧菌游泳體菌 液，40天換(全池)水一次，均可促進大菱鲆生長。相同換水周期下，蛭弧菌游泳體菌液濃 度越高，效果越好。在水中和飼料中同時添加，效果更佳。表一大菱鲆生長指標的檢測
權利要求
一種節水型的大菱鲆養殖方法，其特征在于包括以下操作步驟(1)取海域無污染的海水作為養殖用水；養殖用水經砂濾、沉淀后，注入養殖池；在養殖池上方蓋遮光布，控制光照強度為150～200lux；(2)在養殖池中加入蛭弧菌游泳體菌液，并加大曝氣，攪拌均勻，使池水中的蛭弧菌游泳體的起始濃度達10～107pfu/mL；(3)向養殖池中投放魚苗；(4)養殖期間正常曝氣，控制水溫在15～30℃，日投餌量為魚體重的質量百分數3～5％，餌料在投入前，用濃度為10～107pfu/mL蛭弧菌游泳體菌液浸泡15～30min；每隔5～40天換掉池水一次，每次換水后加入蛭弧菌游泳體菌液，使池水中的蛭弧菌游泳體濃度達到10～107pfu/mL。
2.根據權利要求1所述的一種節水型的大菱鲆養殖方法，其特征在于步驟(1)所述 養殖池的池底為凹型或平底，養殖池在注入養殖用水之前清洗消毒干凈；所述遮光布的遮 光率為95%。
3.根據權利要求1所述的一種節水型的大菱鲆養殖方法，其特征在于步驟⑵和⑷ 所述加入蛭弧菌游泳體菌液的方法為用養殖池中的池水稀釋菌液后，均勻潑灑全池。
4.根據權利要求1所述的一種節水型的大菱鲆養殖方法，其特征在于步驟(2)所述 加大曝氣的曝氣量為90 100L/h/m3 ；步驟(4)所述正常曝氣的曝氣量為70 80L/h/m3。
5.根據權利要求1所述的一種節水型的大菱鲆養殖方法，其特征在于步驟(3)所述 投放魚苗在水溫15 30°C時按照以下標準魚苗重量為25 50g時，投放密度為300 400尾/m2 ；魚苗重量為70 100g時，投放密度為200 300尾/m2 ；魚苗重量為100 200g 時，投放密度為100 150尾/m2。
6.根據權利要求1所述的一種節水型的大菱鲆養殖方法，其特征在于步驟(4)所述 餌料為顆粒餌料；所述餌料在早上、中午和晚上各投放一次，每次投餌間隔5 6小時，投餌 方式為灑遍全池。
7.根據權利要求1所述的一種節水型的大菱鲆養殖方法，其特征在于步驟⑵和⑷ 所述蛭弧菌為蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDFM05，所述蛭弧菌于2009年8月7日保藏于中 國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO :M 209172。
8.根據權利要求1所述的一種節水型的大菱鲆養殖方法，其特征在于所述蛭弧菌游 泳體菌液按照以下方法制備得到接種嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophila)于營養肉湯 液體培養基中，26 30°C培養20h，培養液經5000 8000rpm離心10 20min后，沉淀加 入至DNB液體培養基中，接入蛭弧菌BDFM05，28°C培養36 48h，培養液經6000 8000rpm 離心15 20min后，將蛭弧菌游泳體的上清經16000 18000rpm離心15 20min后，沉 淀用DNB液體培養基、水、生理鹽水或0. 2mol/L pH值為7. 2 7. 6的磷酸鹽緩沖液懸浮， 得到濃度為109pfu/mL蛭弧菌游泳體菌液。
9.根據權利要求8所述的一種節水型的九孔鮑養殖方法，其特征在于所述DNB液體 培養基是將營養肉湯0. 8g、酪蛋白酸水解物0. 5g和酵母精提物0. lg溶于1000mL蒸餾水 中，調節pH值至7. 2 7.6。
全文摘要
本發明公開了一種節水型的大菱鲆養殖方法。該方法包括養殖水源選擇，池水的處理，飼料的處理，換水周期的控制，按照養殖水體生態學原理，海洋生物的生長環境要求，生物之間的相互關系及無公害養殖標準，采用生物生態學的方法控制養殖環境。關鍵技術是在水體中添加蛭弧菌游泳體菌液，同時飼料也用蛭弧菌游泳體菌液浸泡，養殖期間可達到40天換掉池水一次。本發明為生物養殖方法，綠色、安全、無污染，效果顯著，能夠改善水質，促進大菱鲆生長，提高其成活率和免疫力，有極好的發展前景。對提高經濟效益和食用安全性，保障人類健康具有十分重要的意義。
文檔編號A23K1/18GK101940181SQ20101027095
公開日2011年1月12日 申請日期2010年8月31日 優先權日2010年8月31日
發明者何偉杰, 蔡俊鵬 申請人:華南理工大學