專利名稱：一種通過葉片誘導叢生芽快速繁殖蝴蝶蘭方法
技術領域：
本發明涉及一種通過葉片快速繁殖蝴蝶蘭的方法，本發明屬于無性繁殖的組培方法。
背景技術：
蝴蝶蘭是統名花，以其形態優美別致、花朵碩大、花色艷麗、色澤豐富、花期長，被稱為“蘭花之后”，而為單軸莖附生花卉，植株極少萌發側芽枝，常規的繁殖方法難以滿足市場需求，而組織培養是快速繁殖蝴蝶蘭的最有效途徑。1960年，Morel提出了離體無性繁殖蘭花的方法。隨著蝴蝶蘭的推廣，對蝴蝶蘭快繁體系的研究也逐漸深入。利用成熟果莢進行無菌播種，獲得播種苗；利用無菌播種苗進行誘導擬原球莖或叢生芽；外植體進行消毒， 獲得叢生芽或擬原球莖；也有通過無菌葉片脫分化培養獲得原球莖，原球莖進一步增殖分化成叢生芽，進行繁殖。目前通過葉片直接誘導叢生芽的培養方面尚未見到詳細的報道。盡管蝴蝶蘭快繁技術取得一定進展，但蝴蝶蘭叢生芽繁殖系數低、擬原球莖需分化專用培養基、且擬原球莖分化變異率高，這些都是制約蝴蝶蘭工廠化生產的因素。
發明內容
針對上述問題，本發明提供了一種通過葉片誘導叢生芽的快速繁殖蝴蝶蘭的新方法，本方法具有繁殖速度快、生長周期短、降低生產成本的優點，對于蝴蝶蘭產業化生產具有重要意義。本發明的方法是先用蝴蝶蘭花梗芽進行消毒、培養得到無菌材料，無菌材料去葉， 用無菌花梗芽萌發獲得叢生芽，叢生芽進行繁殖的同時，利用常規繁殖中廢棄的葉片如無菌葉片及叢生芽葉片進行誘導叢生芽，葉片與叢生芽繁殖繼代進行，即每代叢生芽的葉片都能再利用，誘導新的叢生芽，最后以叢生芽培養為組培苗。用蝴蝶蘭花梗芽獲得無菌材料的步驟中，蝴蝶蘭花梗芽經過75%乙醇棉球進行擦拭，剝離花梗芽苞片，將裸露出花梗芽的芽段經0. 升汞浸泡10-15分鐘，用無菌水反復沖洗后接入誘導培養基l/3MS+BA2-;3mg/L+NAA0. ang/L+蛋白胨2g/L+椰子水100ml/L+蔗糖20g/L。培養條件包括溫度25士2°C、光照時間10-12小時/天、光照強度1200_1500Lx。 經過45天-60天的培養，獲得無菌小苗。無菌小苗進行快繁的過程中，對無菌葉片進行分切，直徑約Icm的方塊，邊緣用刀片劃傷，將葉片平鋪在誘導叢生芽的專用培養基花寶1號2g/L+BA2-5mg/ L+NAA0. 1-0. ang/L+蛋白胨2g/L+椰子水100ml/L+蔗糖20g/L。同時，利用去除葉片的小芽，進行常規的叢生芽誘導l/3MS+BA2-;3mg/L+NAA0. 2mg/L+蛋白胨2g/L+椰子水100ml/L+ 蔗糖20g/L。培養條件包括溫度25士2°C、光照時間10-12小時/天、光照強度1200-1500Lx。 經過45天-60天的培養，獲得叢生芽。在誘導過程中，葉片四周萌發出叢生芽，最多一塊葉片分化出13個叢生芽。用葉片誘導的叢生芽，及用小芽誘導的叢生芽完成增殖、壯苗、生根的步驟中，在增殖的多次繼代過程中，葉片和小芽不斷誘導分化出新的叢生芽。通常在完成10次繼代增殖后，將叢生芽進行壯苗，隨后轉入生根培養基。本方法中，所用的培養基介紹如下MS為基本培養基配方，1/3MS表示大量元素的用量為正常用量的1/3，其它微量等成份不變；BA，NAA為常用的植物激素；蛋白胨是牛肉蛋白胨；椰子水為椰子內的液體；花寶1號是進口肥料，購于香港。葉片誘導叢生芽的現象，具體見圖片。關于誘導率，統計結果表明，所處理的3個品種，均可以通過葉片誘導出叢生芽。不同品種的葉片誘導叢生芽的比率30-70%。一塊直徑約Icm的葉片誘導叢生芽的數量高達13個芽，平均3個芽。本發明通過葉片誘導叢生芽，達到快速繁殖蝴蝶蘭的目的，與現有技術相比，本方法具有以下優點。(1)傳統的方法是通過葉片等其它器官誘導擬原球莖，該途徑需要經過擬原球莖再分化階段，步驟增多，耗費成本，且原球莖分化過程中變異率較高。該發明優點在于利用蝴蝶蘭常規快繁中廢棄的葉片，在同一培養基中直接誘導出叢生芽，通過此途徑可獲得大量叢生芽，降低了成本，大大地縮短了新品種的培育周期，對于新品種快速推向市場具有突破性的技術革新。株葉片平均至少可切下4塊葉片，一塊葉片平均誘導出3個芽，葉片誘導的芽數為 12個芽。考慮到誘導成功率30-70%，按30%核算，可誘導出3.6個芽。即增值率翻了近3 倍。利用葉片誘導叢生芽應用前景可觀，對于珍貴的新品種需短期快繁出大量的克隆苗，應用該方法可有效縮短蝴蝶蘭的快繁時間，在蝴蝶蘭的工廠化生產中有很大的應用價值。
具體實施例方式以下實施例進一步說明本發明的內容，但不應理解為對本發明的限制。在不背離本發明精神和實質的情況下，對本發明方法、步驟或條件所作的修改或替換，均屬于本發明的范圍。若未特別指明，實施例中所用的技術手段為本領域技術人員所熟知的常規手段。實施例1航蝴1號紅花蝴蝶蘭花梗芽經過75%乙醇棉球進行擦拭，剝離花梗芽苞片， 將裸露出花梗芽的芽段經0. 升汞浸泡12分鐘，用無菌水沖洗后接入誘導培養基: l/3MS+BA3mg/L+NAA0. ang/L+蛋白胨2g/L+椰子水100ml/L+蔗糖20g/L。培養條件包括溫度25 士 2 °C、光照時間10-12小時/天、光照強度1200-1500LX。經過48天的培養，獲得無
菌小苗。利用無菌葉片進行切段，切為直徑約Icm的方塊，葉片邊緣用刀片劃傷，將14塊葉片平鋪在誘導叢生芽的專用培養基花寶1號+BA5mg/L+NAA0. ang/L++蛋白胨2g/L+椰子水100ml/L+蔗糖20g/L。培養條件包括溫度25士2°C、光照時間10-12小時/天、光照強度1200-1500LX。經過56天的培養，葉片邊緣叢生芽。在誘導過程中，葉片四周萌發出叢生芽， 總計獲得32個叢生芽。
權利要求
1.一種通過葉片快速繁殖蝴蝶蘭的方法，其特征在于，利用葉片誘導叢生芽，最后以叢生芽作為繁殖對象培養無性系組培苗。
2.根據權利要求1所述的一種通過葉片快速繁殖蝴蝶蘭的方法，其特征在于，所述葉片是通過以下步驟得到步驟一，取蝴蝶蘭花梗芽進行消毒、培養得到無菌材料；步驟二，無菌材料去葉，用無菌花梗芽萌發獲得叢生芽；步驟三，叢生芽組織進行繁殖，分切擴繁；步驟四，切取無菌材料或/和叢生芽葉片作為新的繁殖原材料。
3.根據權利要求2所述的一種通過葉片快速繁殖蝴蝶蘭的方法，其特征在于，所述步驟一中，蝴蝶蘭花梗芽經過75%乙醇棉球進行擦拭，剝離花梗芽苞片，將裸露出花梗芽的芽段經0. 升汞浸泡10-15分鐘，用無菌水沖洗后接入誘導培養基l/3MS+BA2-;3mg/ L+NAAO. ang/L+蛋白胨2g/L+椰子水100ml/L+蔗糖20g/L。培養條件包括溫度25士2°C、光照時間10-12小時/天、光照強度1200-1500LX。經過45天-60天的培養，獲得無菌小苗。
4.根據權利要求1-3任一所述的一種通過葉片快速繁殖蝴蝶蘭的方法，其特征在于， 在所述利用蝴蝶蘭葉片誘導叢生芽過程中，無菌條件下，將葉片分切成直徑約Icm的方塊， 葉片邊緣用刀片劃傷，將葉片平鋪在誘導叢生芽的專用培養基花寶1號2g/L+BA2-5mg/ L+NAAO. 1-0. 2mg/L+ 蛋白胨 2g/L+ 椰子水 100ml/L+ 蔗糖 20g/L。
5.根據權利要求4所述的一種通過葉片快速繁殖蝴蝶蘭的方法，其特征在于，在所述利用蝴蝶蘭葉片誘導叢生芽過程中，同時，利用去除葉片的小芽，進行常規的叢生芽誘導 l/3MS+BA2-3mg/L+NAA0. ang/L+ 蛋白胨 2g/L+ 椰子水 100ml/L+ 蔗糖 20g/L，培養條件包括溫度25士2°C、光照時間10-12小時/天、光照強度1200-1500LX。
全文摘要
本發明公開了一種通過葉片誘導叢生芽快速繁殖蝴蝶蘭的方法，尤其是一種將蝴蝶蘭花梗芽進行消毒、培養得到無菌材料，無菌材料去葉，用無菌花梗芽萌發獲得叢生芽，叢生芽進行繁殖的同時，利用無菌材料或/和叢生芽中的葉片進行誘導叢生芽，最后以叢生芽作為繁殖對象培養組培苗來快速繁殖蝴蝶蘭的方法。本方法具有繁殖速度快、生長周期短、降低生產成本的優點。
文檔編號A01H4/00GK102283110SQ20101029619
公開日2011年12月21日 申請日期2010年9月29日 優先權日2010年9月29日
發明者侯學瑛, 姬澎, 張占路, 徐明全, 趙貴林, 鄭平, 陳肖英 申請人:深圳市農科植物克隆種苗有限公司, 深圳市農科集團公司