專利名稱：一種川牛膝繁育方法
技術領域：
本發明涉及一種繁育方法，具體地說，涉及一種川牛膝的繁育方法。
背景技術：
川牛膝為莧科植物川牛膝officinalis Kuan.的干燥根，性平，味甘、微 苦，歸肝、腎經。川牛膝具有逐瘀通經，通利關節，利尿通淋的功效。川牛膝根含有牛膝多糖、 皂苷、留醇等物質，具有改善血液流變性、免疫調節、抗腫瘤、抗病毒以及利膽、保肝等作用， 供中醫臨床配方使用外，也是多種中成藥的原料。川牛膝是著名的傳產道地藥材，野生或栽培均有，主要分布在四川、貴州、云南等 省，其中以四川寶興、天全等傳統產區產量最大，質量最佳。近年來的研究表明牛膝具有較 明顯的抗腫瘤作用，川牛膝的種植面積增加很快，因此開展川牛膝的高效栽培技術研究，對 實現牛膝的規模化、規范化生產，促進川牛膝的產業化發展具有重要意義。川牛膝采用種子繁殖，川牛膝繁育過程中的各個環節，包括基地選擇、品種篩選、 整地、播種、田間管理、采收加工等，對川牛膝的繁育有著不同程度的影響，其中，種子的發 芽率直接影響著川牛膝的產量，因此，在播種前對川牛膝種子進行選擇和處理對川牛膝的 繁育有著重要的影響。《川牛膝規范化生產技術標準操作規程》(中國現代中藥，2006年第 8期)中公開了在播種前鑒定種子發芽率以確定播種量的方法，即采用傳統火試或手工搓揉 的方法對種子的發芽率進行檢測，然后確定每公頃的種子用量，依照該方法播種，種子發芽 率低，所需種子用量大，一般每公頃用種量為7. 5-11. 25kg。《川牛膝種子萌發特性的研究》 公開了用低溫、機械及超聲方法對川牛膝種子進行處理的方法，結果顯示在播種前于4°C冰 箱內儲藏4天、在發芽前取待試種子經手工搓揉5分鐘，有利于提高川牛膝種子發芽率。但 其結果表明，經該方法處理后，川牛膝種子的發芽率仍沒有明顯的提高，最高為41%。并且，由于川牛膝容易與野生頭花杯莧眾aiA^a c即iiaia雜交、在實際生產中種 子自種自留、未采取去雜保純措施等，川牛膝繁育中還存在栽培川牛膝中有效成分含量降 低(栽培川牛膝中杯莧甾酮含量僅為0. 03%左右)、品質下降、品種退化的問題。
發明內容
本發明的目的在于克服現有技術中所存在的上述的不足，提供一種新的川牛膝繁 育方法。按照本發明方法繁育的川牛膝，發芽、出苗率高，藥材中有效成分杯莧留酮含量較
尚ο為了實現上述目的，本發明提供了以下技術方案 一種川牛膝繁育方法，包括以下步驟
(1)采集種子
每年12月中旬，在川牛膝模式標本采集地的野生川牛膝種群中，采集川牛膝種子，曬
干；
(2)人工處理種子在0°C -4°C條件下貯藏步驟(1)采集的川牛膝種子60-80天，于15-25°C、500mg/L的 赤霉素溶液中浸泡處理Μ-3Μι，晾干，于0°C -4°C條件下繼續保存30-50天；
(3)整地
選擇海拔1500-1700米、土質疏松、有機質含量高、隔離條件好的生地或前作非川牛膝 的熟地作為良種繁育基地，按行距30cm，穴距25cm-30cm進行整地；
(4)播種
將步驟(2)所得川牛膝種子置于15-25°C、500mg/L的赤霉素溶液中浸泡處理8-12h，按 每穴8-10粒種子在良種繁育基地上進行播種，每畝施用KH2PO4 25-35公斤作為基肥；
(5)栽種及生長管理
出苗后按每穴4苗進行間苗，每畝總磷肥用量7. 66-12. 35 Kg/667m2，總氮肥用量 1.63-2. 94kg / 667m2，每次施肥均按重量比N :P =15 :20的比例進行分期施肥，適時人工除 草，第一年施用三次，其中基肥占總肥量的20%，苗肥占總肥量的40%，始花期追肥占總肥量 的40% ；第二年以后，回苗后施用總肥量的60%，始花期施用總肥量的40% ；
(6)適時采收種子
三年后開始采收種子，每年采收良種繁育基地的種子作為川牛膝繁育使用； 步驟(3)中所述有機質含量高指土壤中有機質含量不少于25-45g · Kg"1 (土壤有機質 是指土壤中含碳的有機化合物);隔離條件好是指良種繁育基地周圍至少半徑800米內無川 牛膝種植或有樹林、山地形成自然隔離。本發明所述每畝總磷肥用量7. 66-12. 35 Kg/667m2指的是磷肥中P元素的用量， 總氮肥用量1. 63-2. 94kg / 667m2指的是氮肥中N元素的用量。上述川牛膝繁育方法中，步驟(1)中所述川牛膝種子為紅牛膝(O^iAWa capitata. ) [=1(Cyathula officinalis Kuan.)。上述川牛膝繁育方法中，步驟(1)中所述川牛膝種子優選至少三年生紅牛膝種子 或一年生白牛膝種子。上述川牛膝繁育方法中，步驟(1)中所述川牛膝種子為當年采集的種子。上述川牛膝繁育方法中，步驟(2)中人工處理種子時種子的貯藏溫度最好為0°C。上述川牛膝繁育方法中，步驟(2)和步驟(4)中所述500mg/L的赤霉素溶液中浸泡 處理的溫度最好為20°C。川牛膝是地道川產藥材，采用種子繁殖，川牛膝繁育過程中的各個環節，包括基地 選擇、品種篩選、整地、播種、田間管理、采收加工等，對川牛膝的繁育有著不同程度的影響， 尤其是川牛膝種子的發芽率直接影響著川牛膝的產量，因此，在播種前對川牛膝種子進行 選擇和處理對川牛膝的繁育有著重要的影響。而現有技術中多采用鑒定種子發芽率后確定 播種量，川牛膝種子發芽率、出苗率低，不但影響了川牛膝的產量，而且所需種子量大；在播 種前低溫處理或機械搓揉，可以增加川牛膝種子的發芽率，但增加有限。并且現有技術中川 牛膝種子自留自種、并且沒有采取去雜的措施，使得川牛膝繁育中不但存在產量不高的不 足，還存在品質下降的不足。本發明人經反復試驗研究，發現川牛膝種子的萌發除受到環境條件(包括充足的 水分和氧氣等以外)，還受到植株年齡、儲藏時間、處理溫度、播種量、施肥量等的影響。因 而，發明人分析了播種量、播種期、施肥量、種子處理方法等對川牛膝繁育的發芽率、出苗率等進行研究，最終得出本發明的繁育方法。本發明的川牛膝繁殖方法中，每年十二月中旬采 收模式標本產地的多年生野生川牛膝植株成熟種子，保證了種性的純正和種子的生活力； 在人工處理種子步驟中在0°C -4°C條件下貯藏種子60-80天后，于20°C、500mg/L的赤霉素 溶液中浸泡處理M-36小時，晾干，繼續保存于0°C _4°C條件下30-50天，然后在播種前將 種子置于20°C、500mg/L的赤霉素溶液中浸泡處理8_12小時，保證了種子出苗的整齊度和 出苗率，為生產優質種子奠定基礎；選擇海拔1500-1700米，土質疏松、有機質含量高，自然 隔離條件好(周圍半徑800米內無川牛膝種植或有樹林、山地形成自然隔離)，生地或前作非 川牛膝的熟地，作為良種繁育田，確保不會產生“飛花”現象，保證種子純度；按行距30cm， 穴距25cm進行精細播種，保證川牛膝良種繁育基礎群體有良好的群體結構；每畝總磷肥用 量7. 66-12. 35 Kg/667m2，總氮肥用量1. 63-2. 94kg / 667m2。每次施肥均按重量比N =P =15 20的比例進行分期施肥，適時人工除草，第一年施用三次，其中基肥占總肥量的20%，苗肥 占總肥量的40%，始花期追肥占總肥量的40% ；第二年以后，回苗后施用總肥量的60%，始花 期施用總肥量的40%，既保證了植株健壯，又保證了花期有足夠的營養用于良種生產。按照本發明方法繁育川牛膝，整地、播種，出苗后川牛膝出苗率達90%以上，田間 苗勢整齊，性狀一致，表明按本發明方法處理的種子質量優于傳統方法。按每穴4苗間苗 后，按本發明的田間管理方法進行良種繁育田管理，三年后開始采收種子。播種后3年的于 11月采收川牛膝藥材，川牛膝藥材畝產可達600-800公斤(干重);對藥材進行外觀鑒定、理 化鑒定和主成分(以杯莧留酮為代表)含量測定，藥材外觀符合模式標本川牛膝根的形態特 征，按《中國藥典》2010版規定方法測定，川牛膝水分含量為11. 56%、總灰分為7. 06%，水溶 性浸出物為68. 68%，同時按2010年藥典，采用高效液相色譜法測定杯莧留酮含量，結果杯 莧甾酮含量為0. 0406%。表明按本發明技術生產的川牛膝種子質量和純度優于傳統種子生 產方法，藥材質量符合《中國藥典》2010版規定，為優質藥材。
圖1為Sl在不同溫度下的發芽率比較圖； 圖2為S6不同溫度下的發芽率比較圖； 圖3為剝殼與不剝殼發芽率比較圖； 圖4為不同年限種子發芽率比較圖； 圖5為不同儲藏方式種子發芽率比較圖； 圖6為新、陳種子發芽率比較圖7為播種量(X1)、播期(X2)、磷肥(X3)、氮肥(X4)與產量的關系圖； 圖8為播種量(X1)、播期(X2)、磷肥(X3)、氮肥(X4)與產量的互作效應圖；其中圖8 I 為播種量(X1)與播種期OQ的互作效應圖；圖8 II為播種量與磷肥的產量互作效應圖；圖 8 III為播種量與氮肥的產量互作效應圖；圖8 IV為播期與磷肥的產量互作效應圖；圖8 V為 播期與氮肥的產量互作效應圖；圖8 VI為磷肥與氮肥的產量互作效應圖。
具體實施例方式下面結合試驗例及具體實施方式
對本發明作進一步的詳細描述。但不應將此理解 為本發明上述主題的范圍僅限于以下的實施例，凡基于本發明內容所實現的技術均屬于本 發明的范圍。
本發明列舉的川牛膝繁育方法，包括以下步驟
(1)采集種子
在川牛膝模式標本采集地四川省寶興縣蜂桶寨鄉鹽井坪野生川牛膝種群中，根據川牛 膝的植物形態特征，進行目測鑒定，并對川牛膝藥材進行顯微鑒定，確認為川牛膝原植物， 采集多年生健康川牛膝植株，于12月中旬采集種子，曬干；
(2)人工處理種子
將采集的川牛膝種子在0°C -4°C條件下貯藏60-80天，于20°C、500mg/L的赤霉素溶液 中浸泡處理M_36h，晾干，于0°C -4°C條件下繼續保存30-50天；
(3)整地
選擇海拔1500-1700米、土質疏松、有機質含量高、隔離條件好的生地或前作非川牛膝 的熟地作為良種繁育基地，按行距30cm，穴距25cm進行整地；
(4)播種4月上旬，將步驟(2)所得川牛膝種子置于20°C、500mg/L的赤霉素溶液中浸 泡處理8-12h，按每穴8-10粒種子在良種繁育基地上進行播種，每畝施用KH2PO4 25-35公 斤作為基肥；
(5)栽種及生長管理
出苗后按每穴4苗進行間苗，每畝總磷肥用量7. 66-12. 35 Kg/667m2，總氮肥用量 1. 63-2. 94kg / 667m2。每次施肥均按重量比N =P =15 20的比例進行分期施肥，適時人工 除草，第一年施用三次，其中基肥占總肥量的20%，苗肥占總肥量的40%，始花期追肥占總肥 量的40% ；第二年以后，回苗后施用總肥量的60%，始花期施用總肥量的40% ；
(6)適時采收種子
三年后開始采收種子，每年采收良種繁育基地的種子作為川牛膝繁育使用；
步驟(3)中所述有機質含量高指土壤中有機質含量不少于25-45g · Kg"1 (土壤有機質 是指土壤中含碳的有機化合物);離條件好是指良種繁育基地周圍至少半徑800米內無川牛 膝種植或有樹林、山地形成自然隔離。
實施例本申請人于2003年12月采收模式標本產地的野生紅牛膝三年生以上植株成熟 種子，12月至2004年3月處理種子，即在不剝殼、不脫粒于0°C條件下貯藏80天，于20°C、 500mg/L的赤霉素溶液中浸泡處理36h，晾干，于0°C條件下繼續保存40天。2004年4月在 四川省寶興縣蜂桶寨鄉新康村(海拔1650米)選地2畝，按行距30cm、穴距25cm進行整 地，按每穴8-10粒種子在良種繁育基地上進行播種，出苗后出苗率達90%以上。按每穴4苗 間苗后，按上述田間管理規程進行良種繁育田管理，于2006年12月采收三年生種子。2007 年4月按傳統種植方式將種子播于四川省寶興縣隴東鎮崇興村大圓包，種子出苗整齊，出 苗率達到90%以上，田間苗勢整齊，性狀一致，表明按本發明方法處理的種子質量優于傳統 方法。按當地種植習慣進行田間管理，于2009年11月采收川牛膝藥材，川牛膝藥材畝產為 785公斤(干重)。對所采藥材進行外觀鑒定、理化鑒定和主成分(以杯莧留酮為代表)含量 測定，藥材外觀符合模式標本川牛膝根的形態特征，按《中國藥典》2010版規定方法測定水 分含量為11. 56%、總灰分為7. 06%，水溶性浸出物為68. 68%，同時采用高效液相色譜法測定 杯莧留酮含量為0. 0406%。表明按本發明技術生產的川牛膝種子質量和純度優于傳統種子生產方法，藥材質量符合《中國藥典》2010版規定，為優質藥材。試驗例1川牛膝發芽率的試驗研究 1材料與方法
1. 1試驗材料
試驗材料為產區生產上主要使用的、不同來源的紅牛膝(OaiAWa capitete)和白牛 條UJyeithulei officinalis Kuan.)種子(表1 )，采集于四川省寶興縣和天全縣(紫石)，包括 2006,2007,2008三年種子。選取健壯飽滿、無損傷和無蟲害的種子進行發芽實驗。表1實驗材料
權利要求
1.一種川牛膝繁育方法，包括以下步驟(1)采集種子每年12月中旬，在川牛膝模式標本采集地的野生川牛膝種群中，采集川牛膝種子，曬干；(2)人工處理種子在0°C _4°C條件下貯藏步驟(1)采集的川牛膝種子60-80天，于15-25°C、500mg/L的 赤霉素溶液中浸泡處理Μ-3Μι，晾干，于0°C -4°C條件下繼續保存30-50天；(3)整地選擇海拔1500-1700米、土質疏松、有機質含量高、隔離條件好的生地或前作非川牛膝 的熟地作為良種繁育基地，按行距30cm，穴距25cm-30進行整地；(4)播種將步驟(2)所得川牛膝種子置于15-25°C、500mg/L的赤霉素溶液中浸泡處理8-12h，按 每穴8-10粒種子在良種繁育基地上進行播種，每畝施用KH2PO4 25-35公斤作為基肥；(5)栽種及生長管理出苗后按每穴4苗進行間苗，每畝總磷肥用量7. 66-12. 35 Kg/667m2，總氮肥用量 1.63-2. 94kg / 667m2，每次施肥均按重量比N :P =15 :20的比例進行分期施肥，適時人工除 草，第一年施用三次，其中基肥占總肥量的20%，苗肥占總肥量的40%，始花期追肥占總肥量 的40% ；第二年以后，回苗后施用總肥量的60%，始花期施用總肥量的40% ；(6)適時采收種子三年后開始采收種子，每年采收良種繁育基地的種子作為川牛膝繁育使用；步驟(3)中所述有機質含量高指土壤中有機質含量不少于25-45g · Kg"1 ；隔離條件好 是指良種繁育基地周圍至少半徑800米內無川牛膝種植或有樹林、山地形成自然隔離。
2.根據權利要求1所述的川牛膝繁育方法，其特征在于步驟(1)中所述川牛膝種子為 紅牛膝或白牛膝。
3.根據權利要求2所述的川牛膝繁育方法，其特征在于步驟(1)中所述川牛膝種子為 三年生或三年以上生紅牛膝種子或一年生白牛膝種子。
4.根據權利要求2所述的川牛膝繁育方法，其特征在于步驟(1)中所述川牛膝種子為 當年采集的種子。
5.根據權利要求1-4任意一項所述的川牛膝繁育方法，其特征在于步驟(2)中人工處 理種子時種子的貯藏溫度最好為0°C。
6.根據權利要求1-4任意一項所述的川牛膝繁育方法，其特征在于步驟(2)和步驟 (4)中所述500mg/L的赤霉素溶液中浸泡處理的溫度最好為20°C。
全文摘要
本發明公開了一種川牛膝的繁育方法。本發明的川牛膝繁育方法，包括采集種子、人工處理種子、整地、播種、栽種及生長管理、適時采收種子等步驟，其中人工處理種子的方法為在0℃-4℃條件下貯藏步驟(1)采集的川牛膝種子60-80天，于15-25℃、500mg/L的赤霉素溶液中浸泡處理24-36h，晾干，于0℃條件下繼續保存30-50天；按每穴8-10粒種子在良種繁育基地上進行播種，每畝施用KH2PO4 25-35公斤作為基肥。按照本發明方法繁育川牛膝，整地、播種，出苗后川牛膝出苗率達90%以上，田間苗勢整齊，性狀一致，播種后3年采收川牛膝藥材，川牛膝藥材畝產可達600-800公斤(干重)；藥材中杯莧甾酮含量可達0.04％以上。
文檔編號A01C1/00GK102119628SQ201010616309
公開日2011年7月13日 申請日期2010年12月31日 優先權日2010年12月31日
發明者劉天成, 劉帆, 唐莉, 徐攀輝, 楊華, 王巧, 田孟良, 胡丹, 胡瑩瑩, 鄭順林 申請人:雅安三九中藥材科技產業化有限公司