專利名稱：白蟻鏈霉菌(Streptomyces termitum)ACT-2菌株及其培養物和用途的制作方法
技術領域：
本發明屬于生物技術農業生產領域，尤其涉及白蟻鏈霉菌QStr印tomyces termitum) ACT-2菌株及其培養物和用途。
背景技術：
放線菌廣泛存在于土壤、空氣和水中，絕大部分放線菌具有產抗生素的能力。鏈霉菌所產生抗生素的占據了放線菌類產生抗生素類數量的80%。鏈霉菌在抗生素的工業生產中發揮著非常重要的作用。某些鏈霉菌所產生的抗生素類物質可以對有些植物病原菌有特異性的拮抗作用， 可抑制病原微生物的生長和繁殖。對由該種病原菌引起的植物病害有一定程度的防治效^ ο水稻白葉枯病是由水稻黃單胞桿菌(Z oryzae)引起的，對水稻生產具有嚴重的危害性。篩選對某種水稻白葉枯病菌具有一定拮抗作用的鏈霉菌，并使用到植物病害的防治中，具有較好的應用前景。目前，已見報道的對白葉枯病菌具有拮抗作用的微生物主要是細菌類，如枯草芽孢桿菌和腸桿菌等，而且抑菌效價較低，難以滿足農業生產的生物防治要求，而具有拮抗白葉枯病菌活性的放線菌類鮮見報道。
發明內容
為了拮抗水稻白葉枯病，本發明的第一個目的是提供白蟻鏈霉菌QStr印tomyces term! turn ) ACT-2菌株；本發明的第二個目的是提供上述的白蟻鏈霉菌(^仕印tomyces termitum) KC1-2菌株的培養物；本發明的第三個目的是提供一種上述的培養物的制備方法；本發明的第四個目的是提供一種上述的培養物的用途；本發明的第五個目的是提供一種具有對白葉枯病菌具有高拮抗活性的生物農藥。為了實現上述第一個目的，本發明采用了以下的技術方案
白蟻鏈霉菌termitum) ACT-2菌株，該菌株保藏于中國典型培養物保藏中心(CCTCC)，地址湖北省武漢市武昌珞珈山武漢大學生命科學學院，其保藏編號為 CCTCCC NO: M 2011008，保藏日期是 2011 年 1 月 7 日。為了實現上述第二個目的，本發明采用了以下的技術方案
一種對白葉枯病菌具有高拮抗活性的發酵液，該發酵液由上述的白蟻鏈霉菌 {Streptomyces termitum) ACT-2 菌株發酵得到。為了實現上述第三個目的，本發明采用了以下的技術方案 一種發酵液的制備方法，其特征在于該方法包括以下的步驟
(一)上述的白蟻鏈霉菌(份termitum) ACT-2菌株經高氏1號固體培養基活化后，用無菌水配成IXlO6個/ml的孢子懸浮液；(二)取1 ml接入高氏1號培養液，28 ！活化培養M h ；
(三》50 ml三角瓶中裝入50 ml高氏1號培養液，取培養M h的種子培養液，按0. 2% 的接種量接種，28 180 r/min，搖瓶培養48 h，得到對水稻白葉枯病菌具有高拮抗活性的發酵液。為了實現上述第四個目的，本發明采用了以下的技術方案
上述的白蟻鏈霉菌istr印tomyces termitum) ACT-2菌株或者該菌株的發酵液用于制備拮抗水稻白葉枯病菌的藥物中的應用。為了實現上述第五個目的，本發明采用了以下的技術方案
一種對白葉枯病菌具有高拮抗活性的生物農藥，該生物農藥至少包括上述的白蟻鏈霉菌Uti^ptomyces termituni) ACT-2菌株和該菌株的發酵液中的一種。本發明由于采用了上述的技術方案，Streptomyces termitum) ACT-2菌株及其發酵產物可以作為生物農藥，用于水稻白葉枯病菌等的防治。
圖1為蟻鏈霉菌Utreptomyces terniituni)kCl~2菌株的培養特征和形態特征；上左菌落正面；上右抑菌圈；下左基內菌絲和氣生菌絲；下右氣生菌絲和孢子絲。生物材料保藏說明
白蟻鏈霉菌termituni) ACT-2菌株，該菌株保藏于中國典型培養物保藏中心(CCTCC)，地址湖北省武漢市武昌珞珈山武漢大學生命科學學院，其保藏編號為 CCTCCC NO: M 2011008，保藏日期是 2011 年 1 月 7 日。
具體實施例方式實施例1
從水稻田土壤中分離篩選得到一株拮抗水稻白葉枯病菌白蟻鏈霉菌 termitum ) ACT-2 菌株。(一)培養基
高氏1號液體培養基可溶性淀粉20 g，KNO3 1 g，K2HPO4 0. 5 g，MgSO4 0. 5 g，NaCl 0.5 g，FeSO4 0.01 g，蒸餾水 1000 ml，pH 值 7. 2-7. 5。牛肉膏蛋白胨固體培養基牛肉膏3 g，蛋白胨10 g,NaCl 5 g，瓊脂20 g，水1000 ml, pH 值 7· 0-7. 2。(二)方法
采用梯度稀釋分離法。取ι g 土壤，加入9 ml蒸餾水，進行梯度稀釋(KT1-KT4),選擇合適的濃度(10_2)100 μ 1涂布高氏1號培養基平板，28 °C培養M h，出現圓形白色干燥菌落，可初步確定該菌株為放線菌。挑取單菌落，進一步分離、純化后，對所分離純化的菌株進行拮抗白葉枯病菌的能力測定。選取對白葉枯病菌具有拮抗能力的放線菌菌株編號，置 4 °C冰箱中保存，備用。用高氏1號斜面培養基進行菌種活化傳代，菌株每4 w轉接一次; 菌種使用之前需先活化。對選出的菌株進行形態學、生理生化和16S rDNA序列鑒定。該白蟻鏈霉菌(Streptomyces termi turn )菌落表面干燥、粗糙，邊緣整齊，為白色不透明；氣生菌絲色澤較深，直、柔曲，分枝較多，無橫隔，粗壯，不斷裂，菌絲直徑約為2. 53/3頁
μm0基內菌絲較氣生菌絲色澤淺，呈網狀交織，菌絲短，分枝多，無橫隔，易斷裂，菌絲直徑約為2.0 μπι。孢子絲多呈直線，存在分叉，極少部分呈彎曲狀。孢子呈橢圓形、長圓形，表面光潔(圖1)。16S rDNA測序結果表明，與白蟻鏈霉菌QStr印tomyces termituni)菌株的同源性達99%，該菌株的16S rDNA序列在GeneBank的登錄號為HQ680451。在高氏1號培養基上，28 °C培養10 d條件下，經15代連續傳代培養，其培養特征、 形態特征和對白葉枯病菌的拮抗能力基本穩定。實施例2
對水稻白葉枯病菌具有拮抗作用的白蟻鏈霉菌QStr^tomyces termitum) ACT-2菌株發酵液的制備方法。(一)菌株:ACT_2菌株。(二)方法
菌種經高氏1號固體培養基活化后，用無菌水配成1 X IO6個/ml的孢子懸浮液，取1 ml 接入高氏1號培養液，28 °C活化培養對h;250 ml三角瓶中裝入50 ml高氏1號培養液， 按洲接種量，28 150 r/min，搖瓶培養48 h，獲取對白葉枯病菌具有拮抗活性的發酵液， 以牛津杯法測定抑菌效果，抑菌圈直徑為21. 73 mm。經發酵條件初步優化，當250 ml三角瓶中裝入50 ml高氏1號培養液，取培養M h的種子培養液，按0. 2%的接種量接種，28 V，180 r/min,搖瓶培養48 h，可以得到對水稻白葉枯病菌具有高拮抗活性的發酵液，以牛津杯法測定抑菌效價，獲得最大抑菌圈直徑為 26. 20 mm。將白葉枯病菌均勻涂布到牛肉膏蛋白胨固體培養基上，將在高氏1號固體培養基上活化后的ACT-2菌株，通過打孔法取直徑為5 mm的小塊菌餅，移接到牛肉膏蛋白胨固體培養基上。28 °C培養72 h。經檢測，獲得最大抑菌圈直徑為38.00 mm。
權利要求
1.白蟻鏈霉菌菌株，其特征在于該菌株保藏于中國典型培養物保藏中心，其保藏編號為CCTCCC NO: M 2011008，保藏日期是2011年1月7日。
2.一種對白葉枯病菌具有高拮抗活性的發酵液，其特征在于該發酵液由權利要求1 所述的白蟻鏈霉菌i^tr^tomyces termitum) ACT-2菌株發酵得到。
3.根據權利要求2所述的一種發酵液的制備方法，其特征在于該方法包括以下的步驟權利要求1所述的白蟻鏈霉菌(份termitum) ACT-2菌株經高氏1號固體培養基活化后，用無菌水配成1 X IO6個/ml的孢子懸浮液； 取1 ml接入高氏1號培養液，28 ！活化培養M h ；250 ml三角瓶中裝入50 ml高氏1號培養液，取培養M h的種子培養液，按0.洲的接種量接種，28 180 r/min，搖瓶培養48 h，得到對水稻白葉枯病菌具有高拮抗活性的發酵液。
4.根據權利要求1所述的白蟻鏈霉菌termitum)KCX-2菌株或者該菌株的發酵液用于制備拮抗水稻白葉枯病菌的藥物中的應用。
5.一種具有對白葉枯病菌具有高拮抗活性的生物農藥，其特征在于該生物農藥至少包括權利要求1所述的白蟻鏈霉菌iStr印tomyces termitum) ACT-2菌株和該菌株的發酵液中的一種。
全文摘要
本發明屬于生物技術農業生產領域，尤其涉及白蟻鏈霉菌(Streptomycestermitum)ACT-2菌株及其培養物和用途。白蟻鏈霉菌(Streptomycestermitum)ACT-2菌株，該菌株保藏于中國典型培養物保藏中心(CCTCC)，地址湖北省武漢市武昌珞珈山武漢大學生命科學學院，其保藏編號為CCTCCCNO:M2011008，保藏日期是2010年1月7日。從水稻田土壤中分離篩選得到具有拮抗白葉枯病菌作用的白蟻鏈霉菌(Streptomycestermitum)ACT-2菌株及其發酵產物可以作為生物農藥，用于水稻白葉枯病菌等的防治。
文檔編號A01P1/00GK102363753SQ20111005316
公開日2012年2月29日 申請日期2011年3月7日 優先權日2011年3月7日
發明者宋迤明, 董夏夢, 蔣冬花 申請人:浙江師范大學