專利名稱：一種極東錦雞兒的微繁方法
技術領域：
本發明涉及一種微繁方法。
背景技術：
極東錦雞兒(Caragana fruticosa)是豆科錦雞兒屬的一種分布范圍極狹、資源量極少的瀕危樹種，喜光、耐寒、耐干旱、耐瘠薄，適宜于作綠化觀賞、蜜源和飼料植物及荒山綠化和水土保持林造林樹種。極東錦雞兒在我國主要分布于黑龍江省尚志市帽兒山山頂的巖石裸露處，分布面積很小，是黑龍江省特有種，已處于滅絕邊緣。開發極東錦雞兒規模化繁殖技術，不但可以有效擴大極東錦雞兒資源數量，而且可以增加東北地區尤其是干旱、瘠薄、寒冷地帶的可利用樹種資源，生態和經濟意義重大。極東錦雞兒用種子繁殖。但是由于極東錦雞兒數量稀少，導致可采種資源嚴重不足。同時，極東錦雞兒育性很差，果莢內經常無種子或僅有1粒種子，種實害蟲嚴重，種子被害率很高，并且利用種子繁殖存在苗木生長速度較慢，長勢不齊，很難在短時間內繁殖出大量、優質的苗木的問題。因此，依靠種子繁殖進行資源擴繁是不現實的。如果利用嫩枝扦插或嫁接的方式進行繁殖，存在可利用植物材料不足，繁殖周期長，增殖效率低的問題，因此很難在短時間內實現極東錦雞兒苗木的資源擴繁，使極東錦雞兒的種質資源保存和生態經濟利用受到了限制。
發明內容
本發明的目的是為了解決極東錦雞兒數量稀少、繁殖周期長、增殖效率低的問題， 而提供的一種極東錦雞兒的微繁方法。極東錦雞兒的微繁方法按以下步驟實現一、切取極東錦雞兒植株個體的帶芽莖段進行預處理，然后接種到含0. 1 lmg/L細胞分裂素、20 40g/L蔗糖和5 7g/ L瓊脂的增殖培養基上，在溫度為20 30°C、濕度為40 % 80 %、光照強度為20 100 μ mol · πΓ2 · S—1、每天光照12 Mh、每10 30天更換新鮮培養基的條件下培養1 3個月，獲得叢生芽苗；二、挑選健壯的叢生芽苗，以單個芽苗為單位進行切離，將切離后的單個芽苗切割成長度為1. 5 5. Ocm的帶頂芽的莖段，然后將帶頂芽的莖段接種到含有0. 05 0. 5mg/ L生長素、20 40g/L蔗糖和5 7g/L瓊脂的生根培養基上，在溫度為20 30°C、濕度為 40% 80%、光照強度為20 100 μ mol · πΓ2 · s_1、每天光照12 24h、每10 30天更換新鮮培養基的條件下培養1 2個月，獲得再生植株；三、將株高達如m、根系發達、葉片展開的再生植株在培養室內敞口煉苗3d，然后洗凈根系附著的培養基，再移植到栽培基質中并澆透水，在溫度為20 30°C、濕度為 60% 80%、光照強度為40 100 μ mol · πΓ2 · s—1、每天光照12 18h的條件下用塑料薄膜覆蓋容器口培養至長出的新葉完全展開后，去掉覆蓋的塑料薄膜，獲得極東錦雞兒苗木， 即完成極東錦雞兒的微繁方法；
其中步驟一中增殖培養基為MS培養基、1/2MS培養基(MS培養基中大量元素濃度減半)、DKff培養基、WPM培養基或QL培養基，pH值均為5 6 ；步驟一中細胞分裂素為芐基腺嘌呤(BA)、玉米素(ZT)、激動素(KT)或噻苯隆 (TDZ)；步驟二中生根培養基為V2MS培養基、DKW培養基或WPM培養基，pH值均為5 6 ；步驟二中生長素為萘乙酸(NAA)或吲哚丁酸(IBA)；步驟三中栽培基質按體積份數比由5份的草炭土、4份的蛭石和1份的珍珠巖組成。本發明中極東錦雞兒的微繁(即為極東錦雞兒芽增殖途徑的植株再生)，對母本破壞小，繁殖周期短，繁殖速度快，增殖效率高(每1個月增殖30 40倍)，而且產生的后代遺傳穩定性好；苗木成活率高達80% 85% ；可以實現縮短繁殖周期、提高繁殖效率、有效擴大極東錦雞兒資源數量的目標。
具體實施例方式具體實施方式
一本實施方式極東錦雞兒的微繁方法按以下步驟實現一、切取極東錦雞兒植株個體的帶芽莖段進行預處理，然后接種到含0. 1 lmg/L細胞分裂素、20 40g/L蔗糖和5 7g/L瓊脂的增殖培養基上，在溫度為20 30°C、濕度為40% 80%、光照強度為20 100 μ mol ·πΓ2 · s—1、每天光照12 Mh、每10 30天更換新鮮培養基的條件下培養1 3個月，獲得叢生芽苗；二、挑選健壯的叢生芽苗，以單個芽苗為單位進行切離，將切離后的單個芽苗切割成長度為1. 5 5. Ocm的帶頂芽的莖段，然后將帶頂芽的莖段接種到含有0. 05 0. 5mg/ L生長素、20 40g/L蔗糖和5 7g/L瓊脂的生根培養基上，在溫度為20 30°C、濕度為 40% 80%、光照強度為20 100 μ mol · πΓ2 · s_1、每天光照12 24h、每10 30天更換新鮮培養基的條件下培養1 2個月，獲得再生植株；三、將株高達如m、根系發達、葉片展開的再生植株在培養室內敞口煉苗3d，然后洗凈根系附著的培養基，再移植到栽培基質中并澆透水，在溫度為20 30°C、濕度為 60% 80%、光照強度為40 100 μ mol · πΓ2 · s—1、每天光照12 18h的條件下用塑料薄膜覆蓋容器口培養至長出的新葉完全展開后，去掉覆蓋的塑料薄膜，獲得極東錦雞兒苗木， 即完成極東錦雞兒的微繁方法；其中步驟一中增殖培養基為MS培養基、1/2MS培養基(MS培養基中大量元素濃度減半)、DKff培養基、WPM培養基或QL培養基，pH值均為5 6 ；步驟一中細胞分裂素為芐基腺嘌呤(BA)、玉米素(ZT)、激動素(KT)或噻苯隆 (TDZ)；步驟二中生根培養基為V2MS培養基、DKW培養基或WPM培養基，pH值均為5 6 ；步驟二中生長素為萘乙酸(NAA)或吲哚丁酸(IBA)；步驟三中栽培基質按體積份數比由5份的草炭土、4份的蛭石和1份的珍珠巖組成。
本實施方式步驟一中極東錦雞兒植株個體的帶芽莖段為無菌組織培養苗的帶芽莖段或野外多年生植株的帶芽莖段。本實施方式步驟一中每10 30天更換新鮮培養基，在每次更換新鮮培養基前可將已經形成的叢生芽分割成小的叢芽群，然后分別接種到新鮮培養基上，可循環重復進行， 以獲得更多增殖倍數的芽苗，直至產生能夠滿足需求的芽苗數量。本實施方式步驟三中移植后的培養過程中每天用噴霧器噴水1次。本實施方式中涉及的MS培養基、1/2MS培養基、DKW培養基、WPM培養基和QL培養基的成分如表1所示。表 權利要求
1.一種極東錦雞兒的微繁方法，其特征在于極東錦雞兒的微繁方法按以下步驟實現 一、切取極東錦雞兒植株個體的帶芽莖段進行預處理，然后接種到含0. 1 lmg/L細胞分裂素、20 40g/L蔗糖和5 7g/L瓊脂的增殖培養基上，在溫度為20 30°C、濕度為40% 80%、光照強度為20 100 μ mol · πΓ2 · s—1、每天光照12 Mh、每10 30天更換新鮮培養基的條件下培養1 3個月，獲得叢生芽苗；二、挑選健壯的叢生芽苗，以單個芽苗為單位進行切離，將切離后的單個芽苗切割成長度為1. 5 5. Ocm的帶頂芽的莖段，然后將帶頂芽的莖段接種到含有0. 05 0. 5mg/L生長素、20 40g/L蔗糖和5 7g/L瓊脂的生根培養基上，在溫度為20 30°C、濕度為40% 80%、光照強度為20 100 μ mol · πΓ2 · s—1、每天光照12 Mh、每10 30天更換新鮮培養基的條件下培養1 2個月，獲得再生植株；三、將株高達4cm、根系發達、葉片展開的再生植株在培養室內敞口煉苗3d，然后洗凈根系附著的培養基，再移植到栽培基質中并澆透水，在溫度為20 30°C、濕度為60% 80%、光照強度為40 100 μ mol · m_2 · s_\每天光照12 18h的條件下用塑料薄膜覆蓋容器口培養至長出的新葉完全展開后，去掉覆蓋的塑料薄膜，獲得極東錦雞兒苗木，即完成極東錦雞兒的微繁方法；其中步驟一中增殖培養基為MS培養基、1/2MS培養基、DKW培養基、WPM培養基或QL培養基，pH值均為5 6 ；步驟一中細胞分裂素為芐基腺嘌呤、玉米素、激動素或噻苯隆；步驟二中生根培養基為1/2MS培養基、DKW培養基或WPM培養基，pH值均為5 6 ；步驟二中生長素為萘乙酸或吲哚丁酸；步驟三中栽培基質按體積份數比由5份的草炭土、4份的蛭石和1份的珍珠巖組成。
2.根據權利要求1所述的一種極東錦雞兒的微繁方法，其特征在于步驟一中極東錦雞兒植株個體的帶芽莖段為帶有頂芽或腋芽、且長度為1. 0 2. Ocm的莖段。
3.根據權利要求1所述的一種極東錦雞兒的微繁方法，其特征在于步驟一中預處理的過程為用體積濃度為70% 80%的乙醇溶液浸泡20 60s后再用另一份體積濃度為70% 80%的乙醇溶液浸泡20 60s，然后用無菌水沖洗3 7次，再用質量濃度為 0. 05% 0. 2%的氯化汞溶液攪拌浸泡8 15min，然后用無菌水沖洗3 7次。
4.根據權利要求1所述的一種極東錦雞兒的微繁方法，其特征在于步驟一中在溫度為 25°C、濕度為60%、光照強度為50 μ mol · πΓ2 · s—1、每天光照16h、每15天更換新鮮培養基的條件下培養2個月，獲得叢生芽苗。
5.根據權利要求1所述的一種極東錦雞兒的微繁方法，其特征在于步驟二中在溫度為 27°C、濕度為70%、光照強度為60 μ mol ·πΓ2· s—1、每天光照18h、每20天更換新鮮培養基的條件下培養1. 5個月，獲得再生植株。
6.根據權利要求1所述的一種極東錦雞兒的微繁方法，其特征在于步驟三中在溫度為 25°C、濕度為70%、光照強度為40μπιΟ1 · πΓ2 · s—1、每天光照16h的條件下用塑料薄膜覆蓋容器口培養至長出的新葉完全展開后，去掉覆蓋的塑料薄膜，獲得極東錦雞兒苗木。
全文摘要
一種極東錦雞兒的微繁方法，它涉及一種微繁方法。它解決了極東錦雞兒數量稀少、繁殖周期長、增殖效率低的問題。方法一、帶芽莖段預處理后進行增殖培養，得叢生芽苗；二、叢生芽苗切離后進行生根培養，得再生植株；三、再生植株進行移植培養至長出的新葉完全展開，獲得極東錦雞兒苗木即完成。本發明中極東錦雞兒的微繁，對母本破壞小，繁殖周期短，繁殖速度快，增殖效率高(每1個月增殖30～40倍)，而且產生的后代遺傳穩定性好；苗木成活率高達80％～85％；可以實現縮短繁殖周期、提高繁殖效率、有效擴大極東錦雞兒資源數量的目標。
文檔編號A01H4/00GK102228002SQ201110108969
公開日2011年11月2日 申請日期2011年4月28日 優先權日2011年4月28日
發明者楊玲, 沈海龍, 翟曉杰 申請人:東北林業大學, 楊玲, 沈海龍