專利名稱：一種富硒毛頭鬼傘菌絲體及其菌粉的制備方法
技術領域：
本發明涉及一種富硒毛頭鬼傘菌絲體的制備方法，本發明還涉及了一種富硒毛頭鬼傘菌粉的制備方法。
背景技術：
硒(Se)是人體必需的一種微量元素，具有多種重要的生理功能，硒的攝入量不足與克山病、大骨節病、心血管疾病、腫瘤等許多疾病的發生有關。人體獲取硒主要從食物中吸收，食物來自于農產品，農產品從土壤中吸收硒，而土壤缺硒是世界上廣泛存在的問題， 地球土壤的自然含硒量一般也只有0. 1 2. 0 μ g/g，平均為0. 2 μ g/g。我國恰恰處在全球的缺硒帶。目前，補硒劑主要有兩類，一是無機硒，如亞硒酸鈉、硒酸鈉；二是有機硒，包括有機硒制劑、富硒地區出產的天然產物，以及人工生物轉化的各種動、植物和微生物產品。毛頭鬼傘(Coprinus comatus)是近年來人工開發生產的一種具有商業潛力的珍稀食用菌新品，其性平味甘，有益脾胃、清神寧智、增食欲及治療痔瘡等功效，還具有一定的降血糖、降血脂、提高免疫活性、抗腫瘤、抗病毒和抗菌等生物學功能，所以被聯合國糧農組織(FAO)和世界衛生組織(WHO)確定為集“天然、營養、保健”三種功能為一體的16種珍稀食用菌之一。硒是一種具有副作用的營養素，安全范圍較窄，有機硒的安全性遠高于無機硒。近年來，對生物富硒的報道較多，真菌液體發酵過程有很強的富集、轉化微量元素的能力，更有價值的是無機形態的微量元素經真菌吸收后，形成有機形態的元素。目前，作為有機硒制品富硒食用菌的研究和開發倍受關注，但是目前沒有對富硒毛頭鬼傘菌絲體及菌粉制備方法方面的研究。
發明內容
本發明的第一個目的旨在提供一種富硒毛頭鬼傘菌絲體的制備方法。本發明的第二個目的是提供一種富硒毛頭鬼傘菌菌粉的制備方法。本發明的目的是通過以下技術措施來實現的一種富硒毛頭鬼傘菌絲體的制備方法，其包括以下步驟(1)取毛頭鬼傘菌菌種于斜面培養基培養得到毛頭鬼傘菌斜面菌種；(2)取步驟(1)中的毛頭鬼傘菌斜面菌種接種到搖瓶培養基中進行搖床培養得到液體菌種；(3)取步驟⑵中所得的液體菌種轉接入含硒鹽的發酵培養基中進行發酵至發酵液透明，氣味清香，按濕重計算菌絲體生物量為20 30g/L，pH為5 7時，停止發酵，得到富硒毛頭鬼傘菌絲體。本發明推薦的實施例是所述步驟(1)中的斜面培養基的配方為土豆150 300g，葡萄糖 15 30g，蛋白胨 1. 5 3g,KH2PO4I 3g,MgSO4 ·7Η200· 5 1. SgjVB1O. 01 0. 03g，瓊脂15 30g，蒸餾水lOOOmL，pH自然；培養溫度為25 30°C。
本發明所述步驟O)中的搖瓶培養基推薦的配方為土豆150 300g，葡萄糖 15 30g，蛋白胨 2 4g, KH2PO4I 3g, MgSO4 · 7Η20 0· 5 1. 5g, VB1O. 01 0. 03g，蒸溜水lOOOmL，pH自然。所述的斜面菌種的接種量為0. 5 1. Ocm2菌落面積的菌絲。本發明推薦的所述步驟O)的搖床培養的培養條件為搖床轉速100 150r/ min，溫度25 ，裝液量與容器體積比為1 2 3，培養時間3 4d。本發明推薦的所述步驟(3)中的發酵培養基的配方為葡萄糖20 30g，玉米粉 20 40g，花生粕 2 6g, KH2P042 4g, MgSO4 · 7H20 0· 5 1. 5g, VB1IO 20 X 10、， Na2Se034 6X 10_3g，蒸餾水lOOOmL，pH自然；所述的液體菌種接種量為3 5%。本發明中的斜面培養基、搖瓶培養基和發酵培養基在配制好后進行滅菌處理，然后再接種菌種，以保證得到的得到的富硒毛頭鬼傘菌絲體無其他雜菌污染。所述的滅菌處理采用現有的常規滅菌方式進行即可。本發明推薦的所述步驟(3)的發酵培養的培養條件為生物反應器溫度25 ^°C，無菌空氣的通氣量6 lOL/min，培養時間5 6d。在此條件下，不僅適合于毛頭鬼傘菌的生長，而且能讓毛頭鬼傘菌處于良性生長狀態中，可以充分地吸收元素硒，有利于菌體富集微量元素硒，并且也不會傷害毛頭鬼傘菌菌體，使生物量保持在較高的水平范圍。本發明所述步驟(3)中發酵的放罐質量標準為發酵液透明，氣味清香，按濕重計算菌絲體生物量為20 30g/L，富硒率為80 85%，pH為5 7，且無任何雜菌污染。本發明的第二個目的是通過以下技術措施來實現的一種上述富硒毛頭鬼傘菌菌粉的制備方法，其包括以下步驟(1)取毛頭鬼傘菌菌種于斜面培養基培養得到毛頭鬼傘菌斜面菌種；(2)取步驟(1)中的毛頭鬼傘菌斜面菌種接種到搖瓶培養基中進行搖床培養得到液體菌種；(3)取步驟O)中所得的液體菌種轉接入含硒發酵培養基中進行發酵至發酵液透明，氣味清香，按濕重計算菌絲體生物量為20 30g/L，pH為5 7時，停止發酵，得到富硒毛頭鬼傘菌絲體；(4)取步驟C3)所得的富硒毛頭鬼傘菌絲體進行干燥，然后粉碎得到富硒毛頭鬼傘菌粉。本發明推薦的實施例是所述步驟(1)中的斜面培養基的配方為土豆150 300g，葡萄糖 15 30g，蛋白胨 1. 5 3g, KH2PO4I 3g,MgSO4 ·7Η20 0· 5 1. SgjVB1O. 01 0. 03g，瓊脂15 30g，蒸餾水lOOOmL，pH自然；培養溫度為25 30°C。本發明所述步驟O)中的搖瓶培養基推薦的配方為土豆150 300g，葡萄糖 15 30g，蛋白胨 2 4g, KH2PO4I 3g, MgSO4 · 7Η20 0· 5 1. 5g, VB1O. 01 0. 03g，蒸溜水lOOOmL，pH自然。所述的斜面菌種的接種量為0. 5 1. Ocm2菌落面積的菌絲。本發明推薦的所述步驟O)的搖床培養的培養條件為搖床轉速100 150r/ min，溫度25 ，裝液量與容器體積比為1 2 3，培養時間3 4d。本發明推薦的所述步驟(3)中的發酵培養基的配方為葡萄糖20 30g，玉米粉 20 40g，花生粕 2 6g, KH2P042 4g, MgSO4 · 7H20 0· 5 1. 5g, VB1IO 20 X 10、， Na2Se034 6X 10_3g，蒸餾水lOOOmL，pH自然；所述的液體菌種接種量為3 5%。本發明中的斜面培養基、搖瓶培養基和發酵培養基在配制好后進行滅菌處理，然后再接種菌種，以保證得到的得到的富硒毛頭鬼傘菌絲體無其他雜菌污染。所述的滅菌處理采用現有的常規滅菌方式進行即可。本發明推薦的所述步驟(3)的發酵培養的培養條件為生物反應器溫度25 ^°C，無菌空氣的通氣量6 10L/min，培養時間5 6d。本發明所述步驟(3)中發酵的放罐質量標準為發酵液透明，氣味清香，按濕重計算菌絲體生物量為20 30g/L，富硒率為80 85%，pH為5 7，且無任何雜菌污染。本發明所述的步驟中的富硒毛頭鬼傘菌絲體于50 60°C溫度下進行干燥。 干燥時間控制在4 6小時之間，以保證富硒毛頭鬼傘菌中的活性成分的活性。與現有技術相比，本發明具有以下有益效果(1)本發明采用毛頭鬼傘菌為載體，進行硒的有機化轉變，使得二者的生物學功能得到互補。(2)本發明采用液態深層發酵法培養富硒毛頭鬼傘菌絲體，與固態發酵法相比，具有生產周期短，沒有雜菌感染，生物量和富硒率的相對穩定，因而產品質量穩定。本發明易于機械化生產，自動化管理控制。
圖1是本發明制備富硒毛頭鬼傘菌的工藝流程方框圖；圖2是本發明制備富硒毛頭鬼傘菌菌粉的工藝流程方框圖。
具體實施例方式以下結合具體實施例對本發明作進一步描述，但不作為對本發明的限定。實施例一(1)按下述配方配制斜面培養基，滅菌后，接種經活化的毛頭鬼傘菌種，在溫度下培養至斜面上長滿新鮮的毛頭鬼傘菌。斜面培養基的配方為土豆200g，葡萄糖15g，蛋白胨2g，KH2P042g, MgSO4 · 7H20 IgiVB1O. Olg，瓊脂20g，蒸餾水1000mL，pH自然。其中，土豆采用的是土豆水提液。(2)按下述配方配制搖瓶培養基，滅菌后，挑取0. 5cm2菌落面積的毛頭鬼傘斜面菌種的菌絲，接種到三角瓶搖瓶培養基中，搖床轉速lOOr/min，溫度25°C，裝液量 75mL/250mL,培養3d，得液體菌種。搖瓶培養基的配方土豆200g，葡萄糖30g，蛋白胨4g，KH2P042g, MgSO4 · 7H201g， VB1O. Olg，蒸餾水1000mL，pH自然。其中，土豆采用的是土豆水提液。(3)按下述配方，在生物反應器中配制250L發酵培養基，然后進行滅菌。滅菌完成后將所得的液體菌種按接種量3% (ymm/ymm+&mimm)接種于發酵培養基中于溫度 25°C，無菌空氣通氣量為6L/min的條件下，培養時間5d，得富硒毛頭鬼傘菌絲體，按濕重計算菌絲體生物量為23. 5g/L，富硒率為80. 3%。其中，富硒率是指毛頭鬼傘菌絲體內富集的硒含量與培養基中所添加的硒含量之比值。發酵培養基的配方葡萄糖20g，玉米粉40g，花生粕4g，KH2P042g, MgSO4 · 7H201g, VB1IOXKT3g, Na2Se034X l(T3g，蒸餾水 1000ml，pH 自然。(4)將所得毛頭鬼傘菌絲體于60°C鼓風干燥設備中干燥4小時，然后取出用粉碎機粉碎后，得富硒毛頭鬼傘菌粉，密封保存。實施例二(1)按下述配方配制斜面培養基，然后滅菌后，接種經活化的毛頭鬼傘菌種，在 25°C溫度下培養至斜面上長滿新鮮的毛頭鬼傘菌。斜面培養基的配方為土豆200g，葡萄糖15g，蛋白胨2g，KH2P042g, MgSO4 · 7H20 IgiVB1O. Olg，瓊脂20g，蒸餾水1000mL，pH自然。其中，土豆采用的是土豆水提液。(2)按下述配方配制搖瓶培養基，滅菌后，挑取0. 75cm2菌落面積的斜面菌種的菌絲，接種到三角瓶搖瓶培養基中，搖床轉速150r/min，溫度^°C，裝液量100mL/250mL，培養 4d，得液體菌種。搖瓶培養基的配方土豆200g，葡萄糖30g，蛋白胨4g，KH2P042g, MgSO4 · 7H201g， VB1O. Olg，蒸餾水1000mL，pH自然。其中，土豆采用的是土豆水提液。(3)按下述配方，在生物反應器中配制250L發酵培養基，然后進行滅菌。滅菌完成后將所得的液體菌種按接種量4% (ymm/ymm+&mimm)接種于發酵培養基中于溫度 ^°C，無菌空氣通氣量8L/min的條件下，培養時間6d，得富硒毛頭鬼傘菌絲體，按濕重計算菌絲體生物量為26. 4g/L，富硒率為85.0%。發酵培養基的配方葡萄糖20g，玉米粉40g，花生粕4g，KH2P042g, MgSO4 · 7H201g, VB1IOXKT3g, Na2Se035X l(T3g，蒸餾水 lOOOmL，pH 自然。(4)將所得毛頭鬼傘菌絲體于50°C鼓風干燥設備中干燥5小時，然后取出用粉碎機粉碎后，得富硒毛頭鬼傘菌粉，密封保存。實施例三(1)按下述配方配制斜面培養基，然后滅菌后，接種經活化的毛頭鬼傘菌種，在 30°C溫度下培養至斜面上長滿新鮮的毛頭鬼傘菌。斜面培養基的配方為土豆200g，葡萄糖15g，蛋白胨2g，KH2P042g, MgSO4 · 7H20 IgiVB1O. 01g，瓊脂20g，蒸餾水lOOOmL，pH自然。其中，土豆采用的是土豆水提液。(2)按下述配方配制搖瓶培養基，滅菌后，挑取Icm2菌落面積的菌絲，接種到三角瓶搖瓶培養基中，搖床轉速lOOr/min，溫度，裝液量90πι ν250ιΛ，培養4d，得液體菌種。搖瓶培養基的配方土豆200g，葡萄糖30g，蛋白胨4g，KH2P042g, MgSO4 · 7H201g， VB1O. 01g，蒸餾水lOOOmL，pH自然。其中，土豆采用的是土豆水提液。C3)按下述配方，在生物反應器中配制250L發酵培養基，然后進行滅菌。滅菌完成后將所得的液體菌種按接種量5% (ymm/ymm+&mimm)接種于發酵培養基中于溫度^°C，無菌空氣通氣量lOL/min的條件下，培養時間5d，得富硒毛頭鬼傘菌絲體，按濕重計算菌絲體生物量為24. 8g/L，富硒率為84. 7%。發酵培養基的配方葡萄糖20g，玉米粉40g，花生粕4g，KH2P042g, MgSO4 · 7H201g, VB1IOXKT3g, N￡ije034. 4X l(T3g/L，蒸餾水 lOOOmL，pH 自然。(4)將所得毛頭鬼傘菌絲體于55°C鼓風干燥設備中干燥6小時，然后用粉碎機粉碎后，得富硒毛頭鬼傘菌粉，密封保存。上述實施并不限制本發明的保護范圍，所有在不偏離本發明精神的基礎上所做修改和改進，均屬于本發明要求保護范圍。
權利要求
1.一種富硒毛頭鬼傘菌絲體的制備方法，其特征在于，其包括以下步驟(1)取毛頭鬼傘菌菌種于斜面培養基培養得到毛頭鬼傘菌斜面菌種；(2)取步驟(1)中的毛頭鬼傘菌斜面菌種接種到搖瓶培養基中進行搖床培養得到液體菌種；(3)取步驟O)中所得的液體菌種轉接入含硒發酵培養基中進行發酵至發酵液透明， 氣味清香，按濕重計算菌絲體生物量為20 30g/L，pH為5 7時，停止發酵，得到富硒毛頭鬼傘菌絲體。
2.根據權利要求1所述的富硒毛頭鬼傘菌絲體的制備方法，其特征在于，所述步驟(1) 中的斜面培養基的配方為土豆150 300g，葡萄糖15 30g，蛋白胨1. 5 3g，KH2PO4I 3g，MgSO4 · 7Η20 0· 5 1. 5g，VB1O. 01 0. 03g,瓊脂 15 30g,蒸餾水 IOOOmL, pH 自然；培養溫度為25 30°C。
3.根據權利要求1所述的富硒毛頭鬼傘菌絲體的制備方法，其特征在于，所述步驟(2) 中的搖瓶培養基的配方為土豆150 300g，葡萄糖15 30g，蛋白胨2 4g，KH2PO4I 3g，MgSO4 · 7Η20 0· 5 1. 5g，VB1O. 01 0. 03g，蒸餾水 IOOOmL, pH 自然；所述的斜面菌種的接種量為0. 5 1. Ocm2菌落面積的菌絲。
4.根據權利要求1所述的富硒毛頭鬼傘菌絲體的制備方法，其特征在于，所述步驟(2) 的搖床培養的培養條件為搖床轉速100 150r/min，溫度25 ^°C，裝液量與容器體積比為1 2 3，培養時間3 4d。
5.根據權利要求1所述的富硒毛頭鬼傘菌絲體的制備方法，其特征在于，所述步驟(3) 中的發酵培養基的配方為葡萄糖20 30g，玉米粉20 40g，花生粕2 6g，KH2P042 4g, MgSO4 · 7H20 0· 5 1. 5g, VB1IO 20X l(T3g，Na2Se034 6X l(T3g，蒸溜水 IOOOmL, pH 自然；所述的液體菌種接種量為3 5%。
6.根據權利要求1所述的富硒毛頭鬼傘菌絲體的制備方法，其特征在于，所述步驟(3) 的發酵培養的培養條件為生物反應器溫度25 ，無菌空氣的通氣量6 lOL/min，培養時間5 6d。
7.—種權利要求1 6任一權利要求所述的富硒毛頭鬼傘菌菌粉的制備方法，其特征在于，其包括以下步驟(1)取毛頭鬼傘菌菌種于斜面培養基培養得到毛頭鬼傘菌斜面菌種；(2)取步驟(1)中的毛頭鬼傘菌斜面菌種接種到搖瓶培養基中進行搖床培養得到液體菌種；(3)取步驟O)中所得的液體菌種轉接入含硒發酵培養基中進行發酵至發酵液透明， 氣味清香，按濕重計算菌絲體生物量為20 30g/L，pH為5 7時，停止發酵，得到富硒毛頭鬼傘菌絲體；(4)取步驟C3)所得的富硒毛頭鬼傘菌絲體進行干燥，然后粉碎得到富硒毛頭鬼傘菌粉。
8.根據權利要求7所述的富硒毛頭鬼傘菌菌粉的制備方法，其特征在于，所述的步驟 (4)中的富硒毛頭鬼傘菌絲體于50 60°C溫度下進行干燥。
9.根據權利要求8所述的富硒毛頭鬼傘菌菌粉的制備方法，其特征在于，所述的干燥時間控制在4 6小時之間。
全文摘要
本發明公開了一種富硒毛頭鬼傘菌絲體的制備方法，其特征在于，其包括以下步驟(1)取毛頭鬼傘菌菌種于斜面培養基培養得到毛頭鬼傘菌斜面菌種；(2)取步驟(1)中的毛頭鬼傘菌斜面菌種接種到搖瓶培養基中進行搖床培養得到液體菌種；(3)取步驟(2)中所得的液體菌種轉接入含硒發酵培養基中進行發酵至發酵液透明，氣味清香，菌絲體生物量為20～30g/L，pH為5～7時，停止發酵，得到富硒毛頭鬼傘菌絲體。本發明還公開了一種富硒毛頭鬼傘菌菌粉的制備方法。本發明采用毛頭鬼傘菌為載體，進行硒的有機化轉變，使得二者的生物學功能得到互補。
文檔編號A01G1/04GK102283021SQ20111019408
公開日2011年12月21日 申請日期2011年7月12日 優先權日2010年11月26日
發明者余杰, 崔鵬舉, 楊明泉, 覃煥達, 賈愛娟 申請人:廣東美味鮮調味食品有限公司