專利名稱：一種可直接移栽的鐵皮石斛育苗方法
技術領域：
本發明涉及一種組培方法，尤其是針對鐵皮石斛的組培方法，屬于生物技術領域。
背景技術：
石斛屬植物中有不少是名貴中藥，在《本草綱目》中石斛被列為上品。我國76種石斛屬植物中有近40種作藥用，著名的有金釵石斛、鐵皮石斛、霍山石斛等，具有強陰益精、 補腎益力、輕生延年等作用，其藥用與保健功能日益被挖掘，其應用范圍正迅速擴大。同時， 石斛屬植物約有四分之一可供觀賞，以花艷麗而著稱，近年作為觀賞植物發展迅速，已形成獨立產業。鑒于集藥用和觀賞于一體的價值，使之過度的采伐利用，加之其本體自然繁殖率低，造成了石斛供需之間的緊張狀況，我國已將其列為瀕于絕滅的受保護的中藥品種之一。自1960年法國人Gmorel利用石斛基尖組織培養無病毒植株的無性繁殖技術創立以來，石斛組織培養技術逐步深化，尤其近年來石斛組織培養育苗逐步趨向產業化，石斛組織培養的最佳條件，包括適宜的光照、溫度、濕度、PH以及如何選用外植體，如何配置營養適宜的培養液等都取得長足進展。但是通過傳統的石斛組培方法，特別是鐵皮石斛組培方法培育出來的苗種由于還不夠壯實，生命力較弱，因此在移栽到自然環境中前都需要在大棚內進行3-5個月的訓化(煉苗)，而且其移栽后的生長周期較長，造成育苗成本較高。
發明內容
本發明要解決的技術問題是提供一種組培苗無需訓化，而可直接移栽的鐵皮石斛組培方法，提高了鐵皮石斛組培苗的擴繁速度、生產質量、移栽成活率，并縮短了移栽后鐵皮石斛的生長周期，提升了成年石斛的質量。為解決上述問題，本發明的鐵皮石斛育苗方法包括下列步驟
1)將鐵皮石斛的蒴果種子經消毒后，播入專用培養基I+專用組培杯+專用培養室里， 進行萌發培養，培養溫度為M-26°C，濕度為65-75%，光照度為1000-20001X，光照時間為 10-12小時/日，培養45-60天，外植體萌芽形成綠色的原球莖；
2)將原球莖轉入專用培養基II+專用組培杯+專用培養室里，進行原球莖增殖、分化培養，培養溫度為2248°C，濕度為65-75%，光照度為1500_25001x，光照時間為10-12小時/ 日，培養60天，由原球莖培育成1-2CM小苗，同時伴隨著有部分新原球莖產生，再將小苗轉入同樣的組培杯、培養基和環境下繼續培養1個月，將小苗培養成中苗，苗高為34cm ；
3)將中苗轉入專用培養基III+專用組培杯+專用培養室里，培養溫度為20-30°C，濕度為65-75%，光照度為2000-40001x，光照時間為10-12小時/日，培養60天，由小苗培育成高為5-9CM，莖粗為0. 4-0. 5CM的壯苗；
所述專用培養基I包括1/2MS基本培養基+芋頭汁15-25% (V/V)+瓊脂4_6g/L，PH值為 5. 2-5. 8 ；
所述專用培養基II包括MS基本培養基+ BA (6-卞氨基腺嘌呤)0. 1-0. 2mg/L+瓊脂 4-6g/L+ 土豆汁 6-10% (V/V) + 香蕉汁 10-14% (V/V)，PH 值為 5. 4-5. 8 ；所述專用培養基III包括MS基本培養基+ NAA (α-萘乙酸)0. l-0.2mg/L+香蕉汁
8-10%(V/V) + 土豆汁 5-7% (V/V) + 芋頭汁 8-12% (V/V) + 瓊脂 4_6g/L，PH 值為 5. 4-5. 8 ； 所述專用組培杯為具有適度空間容積的透明的塑料杯體，所述塑料杯體杯口通過透明
的塑料膜塑封，所述塑料膜上設置濾膜；
所述專用培養室為滅菌培養室，所述滅菌室采用自然光照，其頂端設置采光瓦和遮陽網，并設有溫度濕度調節設備。本發明的進一步優化方案，其特征在于所述塑料杯體為圓柱形，杯口直徑為
9-10cm,杯底直徑為5-6cm,杯高為 9-lOcm，壁厚 0. 15-0. 25mm。所述的組培苗可直接移栽的鐵皮石斛組培方法，其特征在于所述專用培養基I包括1/2MS基本培養基+芋頭汁20%(V/V) +瓊脂5g/L，PH值為5. 5。所述的組培苗可直接移栽的鐵皮石斛組培方法，其特征在于所述專用培養基II包括MS基本培養基+ BA (6-卞氨基腺嘌呤)0. 15mg/L+瓊脂5g/L+ 土豆汁8% (V/V) +香蕉汁 12%(V/V), PH 值為 5.5。所述的組培苗可直接移栽的鐵皮石斛組培方法，其特征在于所述專用培養基III包括MS基本培養基+NAA ( α -萘乙酸)0. 15mg/L+香蕉汁9% (V/V) + 土豆汁6% (V/V) +芋頭汁 10%(V/V) + 瓊脂 5g/L，PH 值為 5. 5。本發明改進了現有的培養基配方，滿足了組培苗在各個生長階段對各種營養成份的需要與均衡，獨創了具有透光性能好，感染率低空氣充足的專用組培杯，并提供清潔適宜的自然光環境，在三者的共同作用下，可以由一棵鐵皮石斛的蒴果種子通過7-8個月的組織培養，培育出20萬株的石斛組培苗，該組培苗無需傳統的3-5個月的訓化過程，可直接移栽到室外，移栽成活率在98%上以。本發明方法不僅提高了鐵皮石斛組培苗的擴繁速度、生產質量、移栽成活率，而且有效地縮短了鐵皮石斛大棚培育時間，提升成年鐵皮石斛的品質，這對瀕危緊缺藥用植物資源再生和持續利用有著十分積極的意義。
下面結合附圖和具體實施方式
對本發明作進一步詳細的說明。圖1為本發明專用組培杯的結構示意圖。圖中1-透明塑料杯、2-塑料膜塑封、3-濾膜。
具體實施例方式實施例1。第1階段，將成熟壯實的鐵皮石斛的蒴果種子經消毒后，在一個無菌的環境中，將其播入內裝有1/2MS基本培養基+芋頭汁15%(V/V) +瓊脂4g/L的培養基的透明塑料杯體 1里進行萌發培養，塑料杯體1杯口通過透明的塑料膜2塑封，塑料膜2上設置濾膜3。最后送入滅菌培養室里培養，滅菌室屋采用自然光照，其頂設置采光瓦和遮陽網層，內部設有溫度濕度調節設備。培養溫度為M_26°C，濕度為65-75%，光照度為1000-20001χ，光照時間為10-12小時/日，培養45-60天，外植體萌芽形成綠色的原球莖。第2階段，將原球莖在一個無菌的環境中，將其轉入內裝有MS基本培養基+
4BA (6-卞氨基腺嘌呤)0. lmg/L+瓊脂4g/L+ 土豆汁6% (V/V) +香蕉汁10% (V/V)的培養基的透明塑料杯體1里進行原球莖增殖、分化培養，塑料杯體1杯口通過透明的塑料膜2塑封， 塑料膜2上設置濾膜3。最后送入無菌培養室里培養，無菌室屋頂設置采光瓦和遮陽網層， 培養溫度為2248°C，濕度為65-75%，光照度為1500_25001x，光照時間為10-12小時/日， 培養60天，由原球莖培育成1-2CM小苗，同時伴隨著有部分新原球莖產生，再將小苗轉入同樣的組培杯、培養基和環境下繼續培養1個月，將小苗培養成中苗，苗高為34cm。第3階段，將中苗在一個無菌的環境中，將其轉入內裝有轉入MS基本培養基+ NAA ( α -萘乙酸)0. lmg/L+ 香蕉汁 8% (V/V) + 土豆汁 6% (V/V) + 芋頭汁 8% (V/V) + 瓊脂 4g/ L的培養基的透明塑料杯體1里進行壯苗培養，塑料杯體1杯口通過透明的塑料膜2塑封， 塑料膜2上設置濾膜3。最后送入無菌培養室里培養，無菌室屋采用自然光照，其頂設置采光瓦和遮陽網層，培養溫度為20-30°C，濕度為65-75%，光照度為2000-40001x，光照時間為 10-12小時/日，培養60天，由小苗培育成高為5-9CM，莖粗為0. 4-0. 5CM的壯苗。進一步優化方法，上述步驟中，培養基的PH值在5. 4，塑料杯體1為柱形，杯口直徑為9-10cm，杯底直徑為5-6cm，杯高為9-lOcm，壁厚0. 15-0. 25mm時，最為適宜。實施例2
在實施例1中，當專用培養基I配方體積比為1/2MS基本培養基+芋頭汁25%(V/V) +瓊脂6g/L，PH值為5. 8或為1/2MS基本培養基+芋頭汁20% (V/V) +瓊脂5g/L，PH值為5. 5 ； 或專用培養基II配方體積比為MS基本培養基+ BA (6-卞氨基腺嘌呤)0. 2mg/L+瓊脂 6g/L+ 土豆汁10% (V/V) +香蕉汁14% (V/V)，PH值為5. 8或為MS基本培養基+ BA (6-卞氨基腺嘌呤)0. 15mg/L+瓊脂5g/L+ 土豆汁8%(V/V) +香蕉汁12%(V/V)，PH值為5. 5 ；
或專用培養基III配方體積比為MS基本培養基+ NAA (α-萘乙酸)0.2mg/L+香蕉汁 10% (V/V) + 土豆汁7% (V/V) +芋頭汁12% (V/V) +瓊脂6g/L，PH值為5. 8或為MS基本培養基 + NAA (α -萘乙酸)0. 15mg/L+ 香蕉汁 9% (V/V) + 土豆汁 6% (V/V) + 芋頭汁 10% (V/V) + 瓊脂5g/L，PH值為5. 5時，也能達到實施例1的效果。 以上所述僅為本發明的較佳實施例，并不用以限制本發明，凡在本發明的精神和原則之內所作的任何修改、等同替換和改進等，均包含在本發明的保護范圍之內。
權利要求
1.一種可直接移栽的鐵皮石斛育苗方法，其特征在于該育苗方法包括下列步驟1)將鐵皮石斛的蒴果種子經消毒后，播入專用培養基I+專用組培杯+專用培養室里， 進行萌發培養，培養溫度為M-26°C，濕度為65-75%，光照度為1000-20001X，光照時間為 10-12小時/日，培養45-60天，外植體萌芽形成綠色的原球莖；2)將原球莖轉入專用培養基II+專用組培杯+專用培養室里，進行原球莖增殖、分化培養，培養溫度為2248°C，濕度為65-75%，光照度為1500_25001x，光照時間為10-12小時/ 日，培養60天，由原球莖培育成1-2CM小苗，同時伴隨著有部分新原球莖產生，再將小苗轉入同樣的組培杯、培養基和環境下繼續培養1個月，將小苗培養成中苗，苗高為34cm ；3)將中苗轉入專用培養基III+專用組培杯+專用培養室里，培養溫度為20-30°C，濕度為65-75%，光照度為2000-40001x，光照時間為10-12小時/日，培養60天，由小苗培育成高為5-9CM，莖粗為0. 4-0. 5CM的壯苗；所述專用培養基I包括1/2MS基本培養基+芋頭汁15-25% (V/V)+瓊脂4-6g/L，PH值為 5. 2-5. 8 ；所述專用培養基II包括MS基本培養基+ BA (6-卞氨基腺嘌呤)0. 1-0. 2mg/L+瓊脂 4-6g/L+ 土豆汁 6-10% (V/V) + 香蕉汁 10-14% (V/V)，PH 值為 5. 4-5. 8 ；所述專用培養基III包括MS基本培養基+ NAA (α-萘乙酸)0. l-0.2mg/L+香蕉汁 8-10% (V/V) + 土豆汁 5-7% (V/V) + 芋頭汁 8-12% (V/V) + 瓊脂 4_6g/L，PH 值為 5. 4-5. 8 ；所述專用組培杯為具有適度容積的透明的塑料杯體(1)，所述塑料杯體(1)杯口通過透明的塑料膜(2 )塑封，所述塑料膜(2 )上設置濾膜(3 )；所述專用培養室為滅菌培養室，所述滅菌室采用自然光照，其頂端設置采光瓦和遮陽網，內部設有溫度濕度調節設備。
2.根據權利要求1所述的可直接移栽的鐵皮石斛育苗方法，其特征在于所述塑料杯體 (1)為柱形，杯口直徑為9-10cm,杯底直徑為5-6cm,杯高為9-lOcm，壁厚0. 15-0. 25mm。
3.根據權利要求1所述的可直接移栽的鐵皮石斛育苗方法，其特征在于所述專用培養基I包括1/2MS基本培養基+芋頭汁20%(V/V) +瓊脂5g/L，PH值為5. 5。
4.根據權利要求1所述的可直接移栽的鐵皮石斛育苗方法，其特征在于所述專用培養基II包括MS基本培養基+ BA (6-卞氨基腺嘌呤)0. 15mg/L+瓊脂5g/L+ 土豆汁8% (V/V) + 香蕉汁12%(V/V)，PH值為5. 5。
5.根據權利要求1所述的可直接移栽的鐵皮石斛育苗方法，其特征在于所述專用培養基III包括MS基本培養基+NAA ( α -萘乙酸)0. 15mg/L+香蕉汁9% (V/V) + 土豆汁6% (V/V) +芋頭汁10%(v/v) +瓊脂5g/L，PH值為5. 5。
全文摘要
本發明涉及一種組培方法，尤其是針對鐵皮石斛的組培方法，屬于生物技術領域。要解決的技術問題是提供一種組培苗可直接移栽的鐵皮石斛組培方法。為解決上述問題，本發明改進了現有的培養基配方，獨創了具有透光性能好，感染率低空氣充足的專用組培杯，并提供清潔適宜的自然光環境，在三者的共同作用下，可以由一棵鐵皮石斛的蒴果種子通過7-8個月的組織培養，培育出20萬株的石斛組培苗，該組培苗無需傳統的3-5個月的訓化(煉苗)過程，可直接移栽到室外，移栽成活率在98%上以。
文檔編號A01H4/00GK102499085SQ20111033281
公開日2012年6月20日 申請日期2011年10月28日 優先權日2011年10月28日
發明者章亞輝, 章紀海 申請人:樂清市鼎元生物科技有限公司