專利名稱：一種松材線蟲性誘劑的收集加工方法
技術領域：
本發明屬于昆蟲防治技術領域，具體為ー種松材線蟲性誘劑的收集加工方法。
背景技術：
松材線蟲病是世界性的檢疫性病害，在我國發生嚴重。線蟲在樹體內的快速繁殖是該病害嚴重發生的ー個重要原因，而高效頻繁的交配行為是松材線蟲快速繁殖的基礎。當前，雖然國內外對松材線蟲開展了大量的研究，但對其行為學的研究相當少見，大多數研究只是對其行為學進行簡單的現象描述，并沒 有對行為本身的規律、相關分子遺傳機制和理化條件等影響因素開展深入系統的研究。松材線蟲對寄主植物的侵染行為可以分為侵入前、侵入中和侵入后三個時期。在侵入前期，松材線蟲依靠傳媒昆蟲將自身帶到健康的松樹，并附著在天牛取食過程中造成的傷口處；在侵入中期，線蟲在寄主植物的傷ロ處蛻皮，而后進入寄主植物體內，在此過程中，松材線蟲的行為方式如何、怎樣克服樹脂引起的滯留作用等尚未見報道；在侵入后期，松材線蟲開始從侵入點周圍向皮層樹脂道遷移，井能夠殺死皮層細胞。當前對松材線蟲在寄主植物體內的運動遷移行為研究主要是測定了不同接種時間后的遷移距離、松材線蟲在寄主植物體內的分布狀況，以及影響線蟲遷移的理化因子等。研究發現，當蛹室內α-薇烯、β -菔烯和長葉烯三者之間的比例α -菔烯β -菔烯長葉烯=1:2. 7:1. I時,松材線蟲蛹室聚集達到高峰，而當濕度大于80%時，松材線蟲在切枝上的遷移運動比較活躍。另夕卜，低溫可以抑制松材線蟲的運動。性信息素引誘交配現象在許多線蟲中均有報道，但針對松材線蟲的研究極為少見。Kiyohara觀察了松材線蟲的交配行為，發現處女雌蟲對雄蟲具有明顯的性吸引，但已受精或交配過的雌蟲不再具有吸引力；進ー步研究發現，松材線蟲雄蟲對雌蟲分泌物及處女雌蟲釋放的揮發性物質具有強烈的性反應，同樣雌蟲也可以被雄蟲所吸引。因此，一般認為松材線蟲的性引誘方式為雌雄相互吸引。我們研究發現，雖然松材線蟲的雄蟲對雌蟲也有一定的吸引作用，但處女雌蟲對雄蟲的引誘在交配行為中起主導作用。對于松材線蟲來說，松材線蟲性信息素的化學組分、化學結構、化學性質和釋放量等方面，國內外尚無相關的報道，如何影響其交配行為尚有待于進一歩研究。
發明內容
針對現有技術中存在的各種問題，本發明的目的在于設計提供ー種松材線蟲性誘劑的收集加工方法的技術方案，所得的性誘劑安全可靠、簡便易行、對松材線蟲雄性成蟲的召喚和誘集效果好，能干擾松材線蟲的交配行為，使用安全、對環境不造成任何污染。所述的ー種松材線蟲性誘劑的收集加工方法，其特征在于包括以下步驟
O顯微鏡下，挑選處于IV齡已經開始生殖分化但性器官尚不成熟的幼蟲期的松材線蟲，并對雌蟲和雄蟲進行分離，然后在培養皿中分別飼養，可獲得所需的處女雌蟲，備用；
2)培養至處女雌蟲有明顯求偶召喚行為時，將其移至室溫為18-30°C的環境下，根據蟲體在培養皿中的位置，用支架將固相微萃取手柄固定于適宜的高度和角度，將固相微萃取針頭接近正在求偶召喚的雌蟲陰門附近，然后推出針頭，使其盡可能接近雌蟲腺體部位，持續收集雌蟲腺體釋放的性信息素2-4h，取出后立即在含有性信息素的萃取頭上滴加C18、C20、C21和C22正構烷烴混合標樣O. 8-1. 2μ ，然后再在GC進樣器中熱解析、脫附2_5min，色譜儀進樣ロ溫度230-260°C，最后將所得物質放入-18°C -22°C冰箱中保存，即得松材線蟲性誘劑。所述的ー種松材線蟲性誘劑的收集加工方法，其特征在于步驟I)中所述松材線蟲為未交配過的處女雌蟲。所述的ー種松材線蟲性誘劑的收集加工方法，其特征在于步驟2)中收集雌蟲腺體釋放性信息素時間為2. 5-3h。所述的ー種松材線蟲性誘劑的收集加工方法，其特征在于步驟2)中收集室溫為 20 0C -28°C，優選 22°C -25 °C。所述的ー種松材線蟲性誘劑的收集加工方法，其特征在于步驟2)中脫附時間為
3-4min。所述的ー種松材線蟲性誘劑的收集加工方法，其特征在于步驟2)中色譜儀進樣ロ溫度 240-250°C。所述的ー種松材線蟲性誘劑的收集加工方法，其特征在于步驟2)中C18、C20、C21和C22正構烷烴混合標樣O. 9-1. WL。所述的C18、C20、C21和C22正構烷烴混合標樣可以由市場上直接購得。上述ー種松材線蟲性誘劑的收集加工方法，以松材線蟲處女雌性成蟲中提取的性信息化合物為活性成分，具有召喚和誘集松材線蟲雄性成蟲的功效，能有效干擾松材線蟲的交配行為，降低松材線蟲的繁殖速度，從而達到控制松材線蟲病的目的。其收集加工方法簡便，綠色環保、設備投資少，節約能耗，簡便易行，貯藏和應用安全，成本低廉。本申請文件中涉及的百分含量除另有說明外，其它的均為純物質的重量百分含量。
具體實施例方式現結合本發明的實施例和藥效試驗，進ー步說明本發明的有益效果。實施例I :
在松材線蟲處女雌蟲有明顯求偶召喚行為時，將其移至室溫為25°C的環境下，將微萃取針頭接近正在求偶召喚的雌蟲陰門附近，然后推出針頭，使其盡可能接近雌蟲腺體部位，持續收集雌蟲腺體釋放的性信息素2h。取出后立即在含有性信息素的萃取頭上滴加C18、C20、C21和C22正構烷烴混標lPL，然后再在GC進樣器中熱解析、脫附3min，色譜儀進樣ロ溫度250°C，最后將所得物質(松材線蟲性誘劑)滴加到脫脂棉做成的誘芯上，每個誘芯含松材線蟲性誘劑600 μ g,置于松材線蟲飼養處，試驗重復三次。試驗統計松材線蟲雄性成蟲的平均累計誘蟲量、平均毎日每組誘蟲量、最高單日誘蟲量。所有調查數據采用Excel 2003和DPS 12.5進行分析，方差分析采用Duncan新復極差法，原始調查數據不作任何轉換。表I實施例中性誘劑對松材線蟲成蟲的室內召喚和誘集試驗結果
權利要求
1.一種松材線蟲性誘劑的收集加工方法，其特征在于包括以下步驟 .1)顯微鏡下，挑選處于IV齡已經開始生殖分化但性器官尚不成熟的幼蟲期的松材線蟲，并對雌蟲和雄蟲進行分離，然后在培養皿中分別飼養，可獲得所需的處女雌蟲，備用； .2)培養至處女雌蟲有明顯求偶召喚行為時，將其移至室溫為18-30°C的環境下，根據蟲體在培養皿中的位置，用支架將固相微萃取手柄固定于適宜的高度和角度，將固相微萃取針頭接近正在求偶召喚的雌蟲陰門附近，然后推出針頭，使其盡可能接近雌蟲腺體部位，持續收集雌蟲腺體釋放的性信息素2-4h，取出后立即在含有性信息素的萃取頭上滴加C18、C20、C21和C22正構烷烴混合標樣0. 8-1. 2ML，然后再在GC進樣器中熱解析、脫附2_5min，色譜儀進樣口溫度230-260°C，最后將所得物質放入-18°C -22°C冰箱中保存，即得松材線蟲性誘劑。
2.如權利I所述的一種松材線蟲性誘劑的收集加工方法，其特征在于步驟I)中所述松材線蟲為未交配過的處女雌蟲。
3..如權利I所述的一種松材線蟲性誘劑的收集加工方法，其特征在于步驟2)中收集雌蟲腺體釋放性信息素時間為2. 5-3h。
4.如權利I所述的一種松材線蟲性誘劑的收集加工方法，其特征在于步驟2)中收集室溫為 20°C -28°C，優選 22°C -25°C。
5.如權利I所述的一種松材線蟲性誘劑的收集加工方法，其特征在于步驟2)中脫附時間為 3_4min。
6.如權利I所述的一種松材線蟲性誘劑的收集加工方法，其特征在于步驟2)中色譜儀進樣口溫度240-250°C。
7.如權利I所述的一種松材線蟲性誘劑的收集加工方法，其特征在于步驟2)中C18、C20、C21和C22正構烷烴混合標樣0. 9-1. 1ML。
全文摘要
一種松材線蟲性誘劑的收集加工方法，屬于昆蟲防治技術領域。其特征在于包括以下步驟1)顯微鏡下挑選處女雌蟲；2)用固相微萃取針頭持續收集雌蟲腺體釋放的性信息素2-4h，取出后立即滴加正構烷烴混標0.8-1.2μL，然后GC進樣器中熱解析、脫附2-5min，色譜儀進樣口溫度230-260℃，將所得物質制備成正已烷溶液，放入-20℃冰箱中保存即可。上述一種松材線蟲性誘劑的收集加工方法，制得的性誘劑安全可靠、簡便易行、對松材線蟲雄性成蟲的召喚和誘集效果好，能干擾松材線蟲的交配行為，使用安全、對環境不造成任何污染。
文檔編號A01P19/00GK102630642SQ20121008508
公開日2012年8月15日 申請日期2012年3月28日 優先權日2012年3月28日
發明者白麗群, 胡加付, 郭愷, 黃小娟 申請人:浙江農林大學