專利名稱：一種基于啤酒糟和米糠粕的飼用微生態制劑的制作方法
技術領域：
本發明屬于飼用微生態制劑領域，特別是涉及基于纖維質的釀造廢棄物的高效低成本的新型微生物飼料添加剤。
背景技術：
中國已是世界第一啤酒大國，年產啤酒糟I千萬噸以上，啤酒糟含有豐富蛋白質(25-35%)、纖維素(14-25%)、脂類(6 —10%)、維生素等營養成分，但其水分含量高，不易貯存，一旦滯銷很容易霉爛、腐敗而影響 環境。目前國內一些啤酒生產企業將啤酒糟直接干燥處理，用于飼料出售，不僅能耗大，這種飼料中的非蛋白氮和無機氮不能被飼養動物有效利用，纖維素也阻礙了營養成分的吸收。因此合理的開發和利用啤酒糟不僅能變廢為寶，而且能給企業帶來一定的經濟效益。公開專利CN1745647A以廢酵母和黑曲霉接種啤酒糟發酵，公開專利CN101779749A以黑曲霉和產朊假絲酵母接種啤酒糟發酵，這些菌種對纖維素降解都不徹底，霉菌發酵后霉味明顯，降低飼料的適ロ，產品需要干燥處理，能耗大，特別是益生菌種類少，存活率低，益生效果很小。公開專利CN101139560A以乳酸桿菌，枯草桿菌和奇異酵母接種啤酒糟發酵，這些菌種對纖維素降解都不徹底，發酵只有一歩，需氧和厭氧發酵沒有分開，發酵效果不好，啤酒糟需要風干后再配料，重新加蒸餾水，過程煩長，不適合產業化。公開專利CN101584376A和CN101139560A以粗糙脈孢菌為纖維素降解菌，有不錯的降解能力，但啤酒糟先烘干，能耗太大，粗糙脈孢菌作為產品成份給畜禽吃，適ロ性不好，菌本身不是農業部批準的益生菌，雖然后者有乳酸菌加入，但ー步發酵，需氧和厭氧矛盾，乳酸菌菌體生長不好，加上這些產品都要干燥處理，菌體一般已死，益生菌效果不明顯。對于啤酒糟含水分較多，最好用其它含水分很少的エ農業副產物調節水分為好，如米糠，糠是稻谷加工過程中所產生的副產品，由種皮、果皮、外胚乳和糊粉層組成。米糠營養豐富，其中富含水分、粗蛋白質(12-15%)、粗脂肪(6-18%)、粗纖維(6-16%)，水溶性多糖、維生素、還含有油酸、亞油酸、磷脂等脂肪酸以及各種礦物質。中國是稻谷產量最大的國家，年產米糠也在千萬噸以上，米糠飼用時，一般是直接投料飼喂，但是由于米糠粗纖維過高，糠質干燥，難以消化，會吸收腸道內過多的水分，如果飼喂過多再加上飲水不足和管理不善，極易引起豬便秘。再者，米糠含有其它ー些抗營養因子，例如含有胰蛋白酶抑制因子(trypsininhibitor, TI)。因此,米糠經過適當處理后,飼用效果可能更好,公開專利CN102334611A接入納豆芽孢桿菌和酵母菌，公開專利CN102356815A接入酵素菌、枯草桿菌、酵母菌和嗜乳酸桿菌，這些菌對米糠的木質纖維素降解能力有限，而且后者需氧菌和厭氧菌ー步發酵，效果不好。這些發酵產品都要干燥處理，能耗大，益生菌菌酶保存率低，飼用效果不佳，不利于產業化推廣。
發明內容
本發明的目的在于生產ー種基于啤酒糟、米糠柏的高效極低成本的飼用微生態制齊U，添加量大，可達5-30%，綜合營養豐富，也稱微生物飼料蛋白，成品中益生菌主要有芽孢桿菌、乳酸菌、酵母菌、雙歧桿菌，活菌數60億以上cfu/g，功能酶、營養物質豐富，必需氨基酸勻恒，飼養效果顯著，價廉物美，保存期長，市場容量大，環境友好，社會和經濟效益明顯。本發明所述的基于啤酒糟和米糠的微生態制劑是以啤酒糟為主要氮源兼部分碳源，以米糠為主要碳源兼氮源，經食品級脈孢霉一期發酵預處理，充分降解稻殼來源的米糠中木質素和纖維素及啤酒糟中的粗纖維，再以芽孢桿菌和酵母菌為發酵菌種同時補料添加部分米糠柏和少量豆柏進行二期發酵，最后再添加部分米糠柏和少量豆柏作為氮源兼碳源，接種乳酸菌和耐酸雙歧桿菌并充分混勻后，分裝在單向膜厭氧袋中密封保存，即三期發酵獲得成品。本發明所有菌種
這里的脈孢霉為粗糙脈孢霉{Neurospora crassa),好食脈孢霉{Neurosporasi tophi la).中間脈孢霉(Neuro spora intermedia)的任意一種或多種。酵母菌為熱帶假絲酵母{Candida tropicalis),產朊假絲酵母(Candida utiHs),啤酒酵母{Saccharomyces cerevisiae)等的任意一種或多種。雙歧桿菌為兩歧雙歧桿菌(Bifidobacterium bifidum)等。乳酸菌為植物乳桿菌(ZacioAaciBw1S iara ),保加利亞乳桿菌{Lactobacillus bulgaricus、,嗜酸乳桿菌{Lactobacillus acidophilus、,乳酸乳桿菌(LacioAaciBw1S干酪乳桿菌(ZacioAaciBw1S casei)等的任意一種或
多種。芽孢桿菌為地衣芽孢桿菌iBaciIlus Iicheniformi5·)、枯草芽孢桿菌(ifeciBiAssubtiIIus的任意一種或多種。上述菌種為普通菌株，在中國
普通微生物菌種保藏管理中心(CGMCC)或市場上都能購買到。本發明產品的具體生產過程如下
I第一期生物預處理發酵
Cl)脈孢霉的種子和生產培養基。斜面培養基和平板培養基馬鈴薯200 g，蔗糖20 g，瓊脂20 g，定容IL中，pH5.0，110°C滅菌 30min。接種 30°C培養 4_10 天。種子液體培養基=KH2PO4 2g，MgSO4 O. 3g，CaCl2 O. 3g，蛋白胨5g，酵母浸膏3 g，麥芽汁 3g, FeSO4 · 7H20 O. 005g, ZnSO4 O. 0014g, MnSO4. 4H20 0. 0016g, CoCl2O. 002 g，定容于I L中，pH 5.0。500 ml三角瓶中加100 ml培養基，110°C滅菌30min。固態發酵生產種子培養基和生產培養基粉碎后的濕啤酒糟占培養基總質量40-90%，米糠柏占10-60%，硝酸氨占O. 1_3%，尿素占O. 1_3%，碳酸鈣占O. 1_5%，磷酸ニ氫鉀
O.1-3%，硫酸鎂O. 01-1%，培養基最終含水量為55-70%。(2)培養方法
將脈孢菌各在斜面培養基上劃單菌落復壯，再各挑選強壯的單菌落，各接種在新的斜面培養基25-38°C生長，斜面培養基菌種中的孢子用無菌水洗下接種于搖瓶培養基中，裝液量 100-250ml /L 三角瓶，150-220 r/min，25_38°C，培養 24_48h，再各以 1_5%(V/V)接種量，混合轉接到200L的種子罐中，于25-38°C，150-220 r /min培養24_48h，活菌總數為I X IO7cfu/ml以上，再各以1-10%接種量轉接到上述固態發酵培養基，充分攪拌后，25-38°C，發酵24-72h，作為固態發酵生產種子，以1-15%接種量接種到上述固態發酵培養基，充分攪拌后，25-38°C，發酵24-72h，完成一期預處理發酵。進入連續生產階段，一期固態發酵接種生產種子為上次發酵預處理的固態培養基菌劑，按1-20%接種量接種。
第二期發酵
(I)芽孢桿菌培養基
芽孢桿菌斜面和平板菌種培養基蛋白胨log，牛肉膏粉5g，氯化鈉5g，瓊脂15g，葡萄糖 20 g，蒸餾水 1000ml，最終 ρΗ7· 0±0· 2。110_121°C滅菌 20_30min.
芽孢桿菌搖瓶種子培養基和種子罐培養基牛肉膏5. Og/L,蛋白胨20. Og/L,葡萄糖5. Og/L, FeCl2 · 6H20 O. 07g/L, MnCl2 · 7H20 O. 01g/L, MgSO4 · 7H20 0. 15g/L, pH 6. 5-7. 0，110-121°C 滅菌 20-30min。 (2)酵母菌培養基
酵母菌斜面培養基和平板菌種培養基(100 ml):葡萄糖2 g、酵母浸出物I g、蛋白胨2g、瓊脂2 g，pH值約6. O。搖瓶種子培養基和種子罐培養基成分同斜面培養基，不加瓊脂。(3)二期發酵培養基由一期發酵預處理的固態菌劑再加10-30%米糠柏和1-20%的豆柏組成，含水量為45-55%。首次啟動二期發酵要制作混合酵母菌和混合芽孢桿菌液體種子液，再固態發酵產生固態種子，以1-15%接種量接到二期發酵培養基中。(4)培養方法
芽孢桿菌液體菌種培養無菌條件下分別將4で保存的芽孢桿菌菌種地衣芽孢桿菌{Bacillus枯草芽抱桿菌{Bacillus納豆桿菌{Bacillus
natto)。各接ー環至斜面培養基中，30-37で培養16-36 h復蘇菌種。再在平板上劃單菌落，挑取健壯種子，分別接種到上述芽孢桿菌搖瓶種子培養基，裝液量100-300ml /L三角瓶，150-240 r/min，28-38°C，培養16-24h，再以1_10%的接種量混合接種到上述200L種子罐培養基擴大培養，150-240r/min，通氣量為20_50L/min，培養16_24h后制得復合芽孢桿菌液體種子，活菌總數為2 X IO7 cfu/ml以上。酵母菌液體菌種培養
無菌條件下分別將4 °C保存的酵母菌菌種啤酒酵母i^accharomycGS cerevisiae),熱帶假絲酵母,產朊假絲酵母utilis、。分別接一環至斜面培養基中，28-38で培養24-48 h復蘇菌種。再挑單菌落各在平板上劃單菌落，挑取健壯種子，分別接種到上述酵母菌搖瓶種子培養基，裝液量100-300ml /L三角瓶，150-240 r/min，28-38°C，培養24_48h，再以1_10%的接種量混合接種到上述200L種子罐培養基擴大培養，150-240r/min,通氣量為20_50L/min，培養24_48h后制得復合酵母菌液體種子，活菌總數為2X IO7 cfu/ml以上。二期固態發酵
上述混合芽孢桿菌液體種子以1-10%接種量，混合酵母菌液體菌種以1-10%接種量，都接種到二期發酵培養基，充分攪拌，28-38°C通氣發酵12-72h，得到第一批二期固態發酵完成后的半成品。進入連續生產階段，種子為上次二期發酵的剰余固態菌劑，按1-20%接種量，接種到二期發酵培養基上，這樣循環接種利用。3第三期發酵 (I)乳酸菌培養基
MRS斜面培養基(g/L):蛋白胨10，酵母粉5，牛肉膏5，葡萄糖20，檸檬酸ニ銨2，吐溫80 I. O ml,こ酸鈉 25，K2HPO4 2，MgSO4 · 7 H2O 0. 58，MnSO4 · 4H20 0. 25，瓊月旨 20，pH 7. O。
搖瓶和種子罐乳酸菌種子培養基大豆低聚糖2. 25%、葡萄糖2. 00%、蛋白胨I. 25%、酵母粉I. 25%、番茄汁6. 50%、吐溫80. 10%、磷酸氫ニ鉀O. 20%。pH 6. 5，IL的三角瓶裝液量200 ml。以上培養基配好后均在115_120°C條件下高壓滅菌20_30min。(2)雙歧桿菌的培養基
MRS斜面培養基(g/L):蛋白胨10，酵母粉5，牛肉膏5，葡萄糖20，檸檬酸ニ銨2，吐溫80 I. O ml,こ酸鈉 25，K2HPO4 2 ，MgSO4 · 7 H2O O. 58，MnSO4 · 4H20 O. 25，瓊月旨 20，pH 7. O。厭氧瓶和種子罐雙歧桿菌増殖培養基蛋白胨5. 0g，牛肉膏5. Og,胰蛋白胨10.(^，酵母浸出粉5.(^，葡萄糖10. 0g，吐溫-80 I. 0ml, K2HPO4 2. 0g，こ酸鈉5. 0g，檸檬酸氫ニ銨 2. 0g, ZnSO4 · 7H20 O. 25g，MgSO4 · 7H20 O. lg，聚果糖 5g 和碳酸鈣 Ig 番茄汁 65ml。加蒸懼水至1000ml,調pH值為6. 5。以上培養基配好后均在115_120°C條件下高壓滅菌15_30min。(3)三期發酵培養基
在二期固態發酵菌劑上，加1-40%米糠柏和1-30%豆柏，充分混勻，組成三期發酵培養基，含水量為30-35%。首次啟動三期發酵要制作乳酸菌和雙歧桿菌液體種子液，以1-15%接種量接到三期發酵培養基進行三期發酵。(4)培養方法 乳酸菌種子培養
將植物乳桿菌iLactobacillus plantarum),保加利亞乳桿菌{Lactobacillusbulgaricus),嗜酸乳桿菌iLactobaciIlus acidophiIus),乳酸乳桿菌iLactobaciIlusiis ),干酪乳桿菌{LactobaciIlus Paracasei)等在MRS斜面培養基上劃線活化,在33-38°C培養24-48h進行復壯，并形成單菌落，再各挑取單菌落，接種到乳酸菌種子培養基，33-38°C靜置培養24-48h，通入氮氣使溶氧維持為0，定時取樣，測定生物量。再按1_10%接種量接種到種子罐乳酸菌種子培養基靜置培養24-72h，通入氮氣使溶氧維持為0，定時取樣，測定生物量，活菌總數為5X IO7 cfu/ml以上。雙歧桿菌種子培養
首先是菌種活化，取保存的菌種，在厭氧操作臺上，在裝有MRS固體斜面培養基上劃線復壯，置于33-38で厭氧培養24 _48h，挑選強壯單菌落，接入裝有10 ml液體MRS培養基的充滿氮氣的厭氧管中，置于33-38°C厭氧培養24-48 h。再按O. 1_1%接種量，接到IL厭氧瓶雙歧桿菌增殖培養基中置于33-38°C厭氧培養24-48h，然后再按1_10%接種量接到種子罐雙歧桿菌增殖培養基中，進行33-38で厭氧培養，活菌總數為5X IO7 cfu/ml以上。第三期固態發酵
在二期固態發酵菌劑上，加1-40%米糠柏和1-30%豆柏組成三期發酵培養基，含水量為30-35%,首次啟動三期發酵要制作混合乳酸菌和雙歧桿菌液體種子液，混合乳酸菌種子液和雙歧桿菌種子液按I: α-4)比例，活菌總數為5Χ107 cfu/ml以上，以1-15%接種量接種到三期固態發酵菌劑上，充分攪拌后，盡快裝入單向膜厭氧袋，常溫下保存，即進行三期厭氧發酵，含水量30-35%，產品保質期可達I到2年，保存ニ到三個月活菌數達到高峰，可達200億cfu/g固體。進入連續發酵階段，三期發酵ー個月后，以此成品為種子，按1-20%接種量，接到上述三期發酵培養基中，攪拌充分后，裝入單向膜厭氧袋，常溫下保存，即進行三期厭氧發酵，進入連續生產階段，產品保質期可達I到3年，保存ニ個月活菌數達到高峰，可達200億cfu/go本發明固體原料不需高溫滅菌，成品不需要干燥處理，保質期一年以上，添加量達5-30%,活性益生菌數極高，酶量豐富，雜菌極少，飼養效果明顯，具有明顯的生態和社會效益。
具體實施例方式下述實施例中所用菌種僅為舉例說明，不是對本發明的限制，本發明保護范圍內的菌種均都實現發明目的。
實施例I
第一期生物預處理發酵 (O脈孢霉種子和生產培養基。斜面培養基和平板培養基馬鈴薯200 g，蔗糖20 g，瓊脂20 g，定容I L中，pH5.0，110°C滅菌 30min。接種 30°C，培養 7_10 天。種子液體培養基=KH2PO4 2g，MgSO4 O. 3g，CaCl2 O. 3g，蛋白胨5g，酵母浸膏3 g，麥芽汁 3g, FeSO4 · 7H20 O. 005g, ZnSO4 O. 0014g, MnSO4. 4H20 0. 0016g, CoCl2O. 002 g，定容于I L中，pH 5.0。500 ml三角瓶中加100 ml培養基，110°C滅菌30min。固態發酵生產種子培養基和生產培養基粉碎后的濕啤酒糟占培養基總質量67%，米糠柏占28%，硝酸氨占2%，尿素占1%，碳酸鈣占1%，磷酸ニ氫鉀1%，硫酸鎂O. 1%，培養基最終含水量為59%。(2)培養方法
將粗糖脈抱霉(Neurospora crassa CGMCC3. 1600),好食脈抱霉(Neurosporasitophila, CGMCC3. 1618).中間脈抱霉(Neurospora intermedia, CGMCC 3.591)。各在斜面培養基上劃單菌落復壯，再各挑選強壯的單菌落，接種在新的脈孢菌斜面培養基30°C生長，斜面培養基菌種中的孢子用無菌水洗下接種于搖瓶培養基中，裝液量200ml /IL三角瓶，180 r/min, 30 0C，條件下培養24h，再以1%接種量，混合轉接到200L的種子罐中，于30°C，180 r /m in培養24h，活菌總數為5 X 108cfu/ml以上，再以10%(重量)接種量轉接到上述固態發酵培養基，充分攪拌后，30°C，發酵48h，作為固態發酵生產種子，以10%接種量(重量)接種到上述固態發酵培養基，充分攪拌后，30°C，發酵48h，完成一期預處發酵。進入連續生產階段，一期發酵接種生產種子為上次發酵的預處理的固態培養基，按10%(重量)接種量接種接到新的一期培養基中。實施例2 第二期發酵
(I)芽孢桿菌培養基
芽孢桿菌斜面和平板菌種培養基蛋白胨10g，牛肉膏粉5g，氯化鈉5g，瓊脂15g，葡萄糖 20 g，蒸餾水 1000ml，最終 ρΗ7·0±0·2。110°C滅菌 30min.
芽孢桿菌搖瓶種子培養基和種子罐培養基牛肉膏5. 0g/L，蛋白胨20. 0g/L,葡萄糖5. 0g/L, FeCl2 · 6H20 0. 07g/L, MnCl2 · 7H20 0. 01g/L, MgSO4 · 7H20 0. 15g/L, pH 7. 0，110°C滅菌30min。(2)酵母菌培養基
酵母菌斜面培養基和平板菌種培養基(100 ml):葡萄糖2 g、酵母浸出物I g、蛋白胨2g、瓊脂2 g，pH值約6. O。搖瓶種子培養基和種子罐培養基成分同斜面培養基，不加瓊脂。(3) 二期發酵培養基由一期發酵預處理的固態菌劑再加15%米糠和5%豆柏組成，含水量為48%。首次啟動二期發酵要制作酵母菌和芽孢桿菌液體種子液，再固態發酵產生固態種子，以10%接種量接到二期發酵培養基。 (4)培養方法
芽孢桿菌液體菌種培養無菌條件下分別將4で保存的芽孢桿菌菌種地衣芽孢桿菌(.Bacillus Ii cheni formi s, CGMCC I. 813)、枯草芽抱桿菌subtil is, CGMCCI. 884)、納豆桿菌UaciBw1S ο, CGMCC I. 1086)。各接ー環至斜面培養基中，37 °C培養36 h復蘇菌種。再在平板上劃單菌落，挑取健壯種子，分別接種到上述芽孢桿菌搖瓶種子培養基，裝液量200ml /IL三角瓶，220 r/min，30°C培養16h，再各以2%的接種量接種到上述200L種子罐培養基擴大培養，220r/min,通氣量為40L/min，培養24h后制得混合芽孢桿菌液體種子，活菌總數為lX109cfu/ml以上。酵母菌液體菌種培養
無菌條件下分別將4 °C保存的酵母菌菌種啤酒酵母cerevisiae,CGMCC 2. 1527)，熱帶假絲酵母{Candida tropicalis, CGMCC 2. 637)，產朊假絲酵母{Candida util is, CGMCC 2.1180)。接ー環至斜面培養基中，30で培養24 h復蘇菌種。再分別在平板上劃單菌落，挑取健壯種子，分別接種到上述酵母菌搖瓶種子培養基，裝液量200ml /IL三角瓶，220 r/min，30°C培養24h，再各以1%的接種量接種到上述200L種子罐培養基擴大培養，220r/min,通氣量為40L/min，培養24h后制得混合酵母菌液體種子，活菌總數為I X 109cfu/ml以上。二期固態發酵
上述混合芽孢桿菌液體種子以5%接種量，混合酵母菌液體菌種以5%接種量，接種到ニ期固體發酵培養基，充分攪拌，35°C通氣發酵48h，得到第一批二期固態發酵完成后的半成品。進入連續生產階段，固態發酵種子為上次二期發酵的剰余固態菌劑，按10%接種量，接種到新的二期固體發酵培養基上，這樣循環接種利用。實施例3 第三期發酵
(I)乳酸菌培養基
MRS斜面培養基(g/L):蛋白胨10，酵母粉5，牛肉膏5，葡萄糖20，檸檬酸ニ銨2，吐溫80 I. O ml,こ酸鈉 25，K2HPO4 2，MgSO4 · 7 H2O O. 58，MnSO4 · 4H20 O. 25，瓊月旨 20，pH 7. O。搖瓶和種子罐乳酸菌種子培養基(g/L):大豆低聚糖2. 25%、葡萄糖2. 00%、蛋白胨
I.25%、酵母粉I. 25%、番茄汁6. 50%、吐溫80. 10%、磷酸氫ニ鉀O. 20%。pH 6. 5，IL的三角瓶裝液量200 ml ο以上培養基配好后均在115°C條件下高壓滅菌30min。(2)雙歧桿菌(ガi/Yi/o如Cieriws 應，CGMCC I. M77)的培養基MRS斜面培養基(g/L):蛋白胨10，酵母粉5，牛肉膏5，葡萄糖20，檸檬酸ニ銨2，吐溫80 I. O ml,こ酸鈉 25，K2HPO4 2，MgSO4 · 7 H2O O. 58，MnSO4 · 4H20 O. 25，瓊月旨 20，pH 7. O。厭氧瓶和種子罐雙歧桿菌増殖培養基蛋白胨5. 0g，牛肉膏5. Og,胰蛋白胨10. 0g，酵母浸出粉5. 0g，葡萄糖10. Og,吐溫-80 I. 0ml, K2HPO4 2. Og,こ酸鈉5. 0g，檸檬酸氫ニ銨 2. 0g, ZnSO4 · 7H20 O. 25g，MgSO4 · 7H20 O. lg，聚果糖 5g 和碳酸鈣 Ig 番茄汁 65ml，加蒸懼水至1000ml,調pH值為6. 5。以上培養基配好后均在115°C條件下高壓滅菌30min。(3)三期發酵培養基
在二期固態發酵菌劑上，加35%米糠柏和5%豆柏 ，充分混勻，組成三期發酵培養基，含水量為32%。首次啟動三期發酵要制作乳酸菌和雙歧桿菌液體種子液，以10%接種量(重量)接到三期發酵培養基進行三期發酵。(4)培養方法 乳酸菌種子培養
將植物乳桿菌iLactobacillus plan tarum, CGMCC I. 557),保加利亞乳桿菌^Lactobacillus bulgari cus, CGMCC 7· 74ぬ 嗜酸乳桿菌(LacioAaciBtts acidophilus,CGMCC I. 2467)，乳酸乳桿 M(Lactobacillus Iactis, CGMCC I. 2467)，干酪乳桿菌{Lactobacillus casei, CGMCC I. 62)等各在MRS斜面培養基上劃線活化，在37°C培養28h進行復壯，并形成單菌落，再各挑取單菌落，接種到乳酸菌種子培養基，37°C靜置培養24h，通入氮氣使溶氧維持為0，定時取樣，測定生物量。再各按2%接種量接種到種子罐乳酸菌種子培養基靜置培養48h，通入氮氣使溶氧維持為0，定時取樣，測定生物量，活菌總數為I X 109cfu/ml 以上。袁 iBifidobacterium bifidum, CQKC I. 2477)種子培養
首先是菌種活化，取保存的菌種，在厭氧操作臺上，在裝有MRS固體斜面培養基上劃線復壯，置于37で厭氧培養48h，挑選強壯單菌落，接入裝有10 ml液體MRS培養基的充滿氮氣的厭氧管中，置于37で厭氧培養24 h。再按1%接種量，接到IL厭氧瓶雙歧桿菌増殖培養基中置于37で厭氧培養48h，然后再按2%接種量接到種子罐雙歧桿菌増殖培養基中，進行37で厭氧培養，活菌總數為lX109cfu/ml以上。第三期固態發酵
在二期固態發酵菌劑基礎上，加35%米糠柏和5%豆柏組成，配成三期發酵培養基，含水量為32%，首次啟動三期發酵要制作混合乳酸菌和雙歧桿菌液體種子液，混合乳酸菌種子液和雙歧桿菌種子液按1:2比例以10%接種(重量)到三期發酵培養基中，充分攪拌后，盡快裝入單向膜厭氧袋，常溫下保存，即進行三期厭氧發酵，含水量32%，產品保質期可達2年，保存ニ個月活菌數達到高峰，可達200億cfu/g固體。進入連續生產階段，三期發酵ー個月后，以此成品為種子，按10%接種量(重量)，接到上述三期發酵培養基中，攪拌充分后，裝入單向膜厭氧袋，常溫下保存，即進行三期厭氧發酵，進行連續生產，產品保質期可達2年，保存ニ個月活菌數達到高峰，可達200億cfu/g，產品檢測結果如表I。表1，三期發酵成品檢測結果
權利要求
1.ー種基于啤酒糟和米糠的微生態制劑，其特征是以啤酒糟和米糠經食品級霉菌一期發酵預處理，再以芽孢桿菌和酵母菌為發酵菌種同時補料添加部分米糠和豆柏進行二期發酵，最后再添加部分米糠和少量豆柏作為氮源兼部分碳源，接種乳酸菌和耐酸雙歧桿菌并充分混勻后，分裝在單向膜厭氧袋中密封保存，即三期發酵獲得成品。
2.根據權利要求I所述的微生態制劑，其特征是所述預處理中的發酵培養基配方為粉碎后的濕啤酒糟占培養基總質量40-90%，米糠柏占10-60%，硝酸氨占O. 1-3%，尿素占O. 1-3%，碳酸鈣占O. 1-5%，磷酸ニ氫鉀O. 1-3%，硫酸鎂O. 01-1%,培養基最終含水量為55-70% ； 首次啟動一期發酵要制作液體霉菌種子液，活菌總數為IXlO7 cfu/ml以上，以1-10%(重量)接種量接到一期發酵培養基中，再固態發酵產生固態霉菌種子，以1-15%接種量接到白酒糟培養基中，進行24-72h的一期發酵，進入連續生產階段，接種種子為上次預處理的固態培養基，按1-20%接種量接種。
3.根據權利要求I所述的微生態制劑，其特征是所述二期發酵培養基由一期發酵預處理的固態菌劑再加10-30%米糠柏和1-20%的豆柏組成，含水量為45-55% ； 首次啟動二期發酵要制作酵母菌和芽孢桿菌液體種子液，酵母菌和芽孢桿菌比例為(I :1) (I :4)，活菌總數為2 X IO7 cfu/ml以上，以ト10% (重量)接種量接到部分的二期發酵培養基中，再固態發酵產生固態種子，以1-15%接種量接到另外的二期發酵培養基中，進行12-48h 二期發酵；進入連續生產階段，種子為上次二期發酵的剰余固態菌劑，按1-20%接種量，接種二期發酵培養基上，這樣循環利用。
4.根據權利要求I所述的微生物飼料，其特征是所述三期發酵培養基由二期發酵的固態菌劑再加1-40%米糠柏和1-30%豆柏組成，三期發酵培養基含水量為30-35%，首次啟動三期發酵要制作乳酸菌和雙歧桿菌液體種子液，乳酸菌和雙歧桿菌活菌數之比為(I 1) (I :4)，乳酸菌和雙歧桿菌液體種子液中的活菌總數為5 X IO7 cfu/ml以上，以1-15%(重量)接種量接到三期發酵培養基中，攪拌充分后，裝入單向膜厭氧袋，常溫下保存，即進行三期厭氧發酵；發酵ー個月后，以此成品為種子，按1-20%接種量，接到上述三期發酵培養基中，攪拌充分后，裝入單向膜厭氧袋，常溫下保存，即進行三期厭氧發酵，進入連續生產階段。
5.根據權利要求2所述的微生態制劑，其特征是所述啤酒糟在潮濕狀態下經過粉碎，大約20到100目左右。
6.根據權利要求I一 5之一所述的微生態制劑，其特征是所述霉菌為粗糙脈孢霉{Neurospora crassa),好食脈抱霉 i^eurospora,中間脈抱霉{Neurosporaintermedia)的任意ー種或多種；酵母菌為熱帶假絲酵母{Candida tropicalis) ,f11月元假絲酵母啤酒酵母(feccAaro焊Ce1S cerevisiae)的任意一種或多種；雙歧桿菌為兩歧雙歧桿菌(Bifidobacterium bifidum);乳酸菌為植物乳桿菌{LactobaciIlus iar應)，保加利亞乳桿菌(Zac οAaciBw1S buIgaricus^),嗜酸乳桿菌{Lactobacillus acidophilus、,乳酸乳桿菌{Lactobacillus I act is),干酪乳桿菌{Lactobacillus casei)的任意一種或多種；芽孢桿菌為地衣芽孢桿菌)、枯草芽抱桿菌{Bacillus納豆桿菌{Bacillus的任意ー種或多種。
全文摘要
本發明涉及利用啤酒糟和米糠粕經益生菌三期發酵，生產一種高效、極低成本的飼用微生態制劑，或者叫微生物飼料添加劑。其特征是啤酒糟和米糠粕經過脈孢菌一期初步發酵預處理，充分降解木質素、纖維素等，再添加部分米糠粕和少量豆粕經芽孢桿菌和酵母菌二期發酵，吸收霉菌降解廢棄物產生的營養物質及霉菌本身解體的營養物質。然后加部分米糠粕和少量豆粕，經乳酸菌、雙歧桿菌等最后在單向膜厭氧袋中經三期厭氧發酵成成品。本發明固體原料不需高溫滅菌，成品不需要干燥處理，保質期一年以上，添加量達5-30%，活性益生菌數極高，酶量豐富，雜菌極少，飼養效果明顯，具有明顯的生態和社會效益。
文檔編號A23K1/00GK102687792SQ20121017674
公開日2012年9月26日 申請日期2012年6月1日 優先權日2012年6月1日
發明者倪忠, 崔鳳杰, 崔恒林, 施海峰, 李萍萍, 楊勝利, 王浩森, 謝永明, 譚小力, 陳華友, 齊向輝 申請人:江蘇大學