專利名稱：一種花椰菜的花藥培養方法
技術領域：
本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種花椰菜的花藥培養方法。
背景技術：
花椰菜(Ara1S1SicaVar. Aotryds)又名菜花,為我國秋冬主栽品種之一。因其食用部分粗纖維少，營養價值高，深受消費者的喜愛。利用不同生態型品種進行雜交，可以培育出新的花椰菜品種，具有很強的雜種優勢。但花椰菜屬十字花科異花授粉作物，自交衰退嚴重，自交不親和系選育較困難，品種依靠群體雜合性保持穩定。而且培育雜 交品種難度大。通過花藥培養可以保特親本的純度穩定，加快雜種后代的選擇效果。對于加快培育優良的椰菜品種具有很好的應用價值。
發明內容
本發明的目的在于提供一種花椰菜的花藥培養方法。本發明提供的一種花椰菜的花藥培養方法，所述的培養方法包括以下步驟(I)花藥采集和消毒處理；(2)花藥愈傷組織培養；(3)愈傷組織分化培養；(4)分化苗生根培養；(5)煉苗、假植、移栽。所述的培養方法具體包括以下步驟
(1)花藥采集和消毒處理
①花藥采集在晴天上午取長度為3mm花藥飽滿的花蕾，經過鏡檢確定此時的花粉發育處于單核期或單核后期；
②花藥消毒處理花蕾經70%酒精浸泡30秒后，用0.I %升汞溶液消毒300分鐘，然后用無菌水沖洗5次；
(2)花藥愈傷組織培養
①誘導愈傷組織培養基基礎培養基E3+BA0. 5mg/L+ NAA0. I mg/L,
培養基配制方法按常規操作。②接種取消毒過的花蕾，在無菌條件下用解剖針或鑷子除去花瓣，以鑷子夾住花絲，取出花藥，花藥直接均勻地接種于誘導愈傷組織培養基上，每200ml組培瓶中接3粒花藥；
③培養接種后置25±1°C暗培養7天，然后每天光照培養12小時，光照強度800勒克斯，相對濕度為65%;
(3)愈傷組織分化培養
①分化培養基MS+0.5-lmg/L 6-BA + 0. 5 mg/L NAA ；
②愈傷組織塊生長增大，并逐漸轉為綠色，然后轉入分化培養基進行培養；
③培養條件溫度25°C、濕度70%、光照強度1000 1500LX；
(4)分化苗生根培養
①生根培養基l/2MS+0. I mg/L NAA+活性碳0. 2% ；②當苗長高到3 4厘米，長出3片葉時，接入生根培養基進行培養；
③培養條件溫度25°C、濕度70%、光照強度1500 2000LX；
(5 )假植育苗
①煉苗當苗基部長出根，長度達2cm時打開瓶蓋，環境溫度25°C，濕度控制在85%，光照強度2000LX，煉苗3 5天；
②假植經煉苗后，移到塑料小盤中育苗，假植后環境溫度25°C，濕度控制在90%，光照強度2000LX，成活后移大田栽培。經過3 5代花藥培養，使花椰菜后代趨于穩定，可作為花椰菜育種雜交親本的材料。
本發明的優點通過花藥培養可以保特親本的純度穩定，加快雜種后代的選擇效果。對于加快培育優良的椰菜品種具有很好的應用價值。
圖I為花藥愈傷圖。圖2為愈傷分化成幼苗。圖3為生根培養。圖4為假植苗。
具體實施例方式實施例I
I、花藥采集和消毒處理
(I)花藥采集在晴天上午取長度為3_左右花藥飽滿的花蕾作為實驗材料，經過鏡檢確定此時的花粉發育處于單核期或單核后期。(2)花藥消毒處理花蕾經70%灑精浸泡30秒后，用O. 1%升汞溶液消毒300分鐘，然后用無菌水沖洗5次。2、接種培養花藥愈傷組織
(I)誘導愈傷組織培養基E3*+BA0. 5mg/L+ NAAO. I mg/L。培養基配制方法按常規操作。(2)接種取消毒過的花蕾，在無菌條件下用解剖針或鑷子除去花瓣，以鑷子夾住花絲，取出花藥。花藥直接均勻地接種于誘導愈傷組織培養基上(剔除花絲、癟粒花藥)每瓶(200組培瓶)中接3粒花藥。(3)培養接種后置25±1°C度暗培養7天，然后每天光照培養12小時，光照強度800勒克斯，相對濕度為65%左右。培養30 40天可見花藥愈傷組織，如圖I所示。3、愈傷組織分化培養
(I)分化培養基MS+0. 5-lmg/L 6-BA + O. 5 mg/L NAA。(2)愈傷組織塊生長增大，并逐漸轉為綠色，然后轉入分化培養基，每瓶接2個愈傷組織塊。(3)培養條件溫度25°C、濕度70%、光照強度1000 1500LX，培養15-20天，愈傷分化成幼苗，如圖2所示。
4、生根培養
(I)生根培養基l/2MS+0. I mg/L NAA+ 活性碳 0. 2%。(2)當苗長高到3 4厘米，長出3片葉時，轉入生根培養基進行培養。(3)培養條件溫度25°C、濕度70%、光照強度1500 2000LX，培養10-15天，根系發達，如圖3所示。5、假植育苗
(I)煉苗當苗基部長出根，長度達2cm時打開瓶蓋，環境溫度25°C，濕度控制在85%左右，光照強度約2000LX。煉苗3 5天。(2)假植經煉苗后，移到塑料小盤中育苗，育苗的土壤要經過消毒處理，假植后環 境溫度25°C，濕度控制在90%，光照強度2000LX，一個星期后得到假植苗，如圖4所示。成活后移大田栽培。6、培育花椰菜雜交親本經過3 5代花藥培養，使花椰菜后代趨于穩定，可作為花椰菜育種雜交親本的材料。附E3培養基
權利要求
1.ー種花椰菜的花藥培養方法，其特征在于所述的培養方法包括以下步驟(1)花藥采集和消毒處理；(2)花藥愈傷組織培養；(3)愈傷組織分化培養；(4)分化苗生根培養；(5)煉苗、假植、移栽。
2.根據權利要求I所述的花椰菜的花藥培養方法，其特征在于，所述的培養方法具體包括以下步驟 (1)花藥采集和消毒處理 ①花藥采集在睛天上午取長度為3mm花藥飽滿的花蕾，經過鏡檢確定此時的花粉發育處于單核期或單核后期； ②花藥消毒處理花蕾經70%酒精浸泡30秒后，用0.I %升汞溶液消毒300分鐘，然后用無菌水沖洗5次； (2)花藥愈傷組織培養 ①誘導愈傷組織培養基基礎培養基E3+BA0.5mg/L+ NAA0. I mg/L, 培養基配制方法按常規操作； ②接種取消毒過的花蕾，在無菌條件下用解剖針或鑷子除去花瓣，以鑷子夾住花絲，取出花藥，花藥直接均勻地接種于誘導愈傷組織培養基上，每200ml組培瓶中接3粒花藥； ③培養接種后置25±1°C暗培養7天，然后每天光照培養12小時，光照強度800勒克斯，相対濕度為65%; (3)愈傷組織分化培養①分化培養基MS+0.5-lmg/L 6-BA + 0. 5 mg/L NAA ； ②愈傷組織塊生長増大，并逐漸轉為綠色，然后轉入分化培養基進行培養； ③培養條件溫度25°C、濕度70%、光照強度1000 1500LX； (4)分化苗生根培養 ①生根培養基l/2MS+0.I mg/L NAA+活性碳0. 2% ； ②當苗長高到3 4厘米，長出3片葉時，接入生根培養基進行培養； ③培養條件溫度25°C、濕度70%、光照強度1500 2000LX； (5 )假植育苗 ①煉苗當苗基部長出根，長度達2cm時打開瓶蓋，環境溫度25°C，濕度控制在85%，光照強度2000LX，煉苗3 5天； ②假植經煉苗后，移到塑料小盤中育苗，假植后環境溫度25°C，濕度控制在90%，光照強度2000LX，成活后移大田栽培。全文摘要
本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種花椰菜的花藥培養方法。以花椰菜的花藥為材料，按無菌操作要求接種，進行花藥誘導愈傷組織培養、愈傷組織分化培養、分化苗生根培養等步驟完成花椰菜新種苗的育成。通過花藥培養可以保特親本的純度穩定，加快雜種后代的選擇效果。對于加快培育優良的椰菜品種具有很好的應用價值。
文檔編號A01H4/00GK102726300SQ201210231849
公開日2012年10月17日 申請日期2012年7月6日 優先權日2012年7月6日
發明者吳枝泉, 吳雨英, 張麗, 張緒璋, 湯紹康 申請人:福建農林大學