專利名稱：大鯢精液保藏劑的制備方法
技術領域：
本發明涉及一種魚類的制種方法，特別是涉及一種大鯢精液保藏劑的制備方法，該技術屬于生物技術領域。
背景技術：
大鯢俗稱娃娃魚，為我國所特產，屬瀕危動物，被國家列為二類重點保護野生動物。通過近些年的大規模養殖，大鯢種質資源退化嚴重，生長速度顯著下降，各種疾病頻發。開展大鯢優良家系的選育，對于提高經濟效益等具有重要意義。由于種鯢的價格昂貴，人工繁育大鯢，環境、設備要求高、技術難度大，因此要養殖 商品大鯢和經驗不足的養殖戶，一定要到有水生野生動物馴養繁殖和經營利用許可證的正規繁育場獲取大鯢苗種。為了提高大鯢的成活率，應當選擇孵化出苗3個月、體長5厘米以上的大鯢幼苗。大鯢幼苗在運輸過程中，溫度與大鯢的活動、耗氧量等有著密切的關系。采用充氧運輸時，在40乘40的袋中，6-12厘米的幼苗，最多不能超過60尾。運輸大鯢幼苗不如運輸大鯢精液進行配種，因此，開發大鯢精液保藏劑特別具有經濟價值。
發明內容
本發明旨在提供一種大鯢精液保藏劑的制備方法。大鯢精液的保藏劑，這種保藏劑的成分為
NaCl 30 — 60 mmol/L, NaH2PO4 2 — 5 mmol/L, Na2HPO4 4 — 10 mmol/L ；NaHCO3 2 — 5mmol/L, Na2CO3 4 — 10 mmol/L, FeCl3 6 — 12 mmol/L, CaCl2 8 — 16 mmol/L, MgCl2 16 —32 mmol/L, ZnCl2 16 — 32 mmol/L, MnCl2 1 — 2 mmol/L,依地酸二鈉 2 — 5 mmol/L,維生素 C 2 — 5 mmol/ L,維生素 D 2 一 5 mmol/ L,維生素 E 2 一 5 mmol/ L,甘露醇 100 —200 mmol/L，螺旋藻多糖100 — 200 mmol/L，其余是水。
氯化鈉30 — 60 mmol/L,磷酸二氫鈉2 — 5 mmol/L,磷酸氫二鈉4 一 10 mmol/L ;碳酸氫鈉 2 — 5 mmol/L,碳酸鈉 4—10 mmol/L,氯化鐵 6—12 mmol/L,氯化I丐 8 — 16 mmol/L,氯化鎂16 - 32 mmol/L,氯化鋅16 — 32 mmol/L,氯化錳I 一 2 mmol/L,依地酸二鈉2 —5 mmol/L,維生素 C 2 一 5 mmol/ L,維生素 D 2 一 5 mmol/ L,維生素 E 2 一 5 mmol/ L,甘露醇100 - 200 mmol/L，螺旋藻多糖100 — 200 mmol/L，其余是水。將以上成分按照比例稱量，并用水溶解，定容。2.本發明的一種保藏大鯢精液的特殊方法是
O選取性腺成熟的大鯢雄魚，采集成熟精液；
2)用權利要求I的保藏劑稀釋大鯢精液；
稀釋的時候按照，大鯢精液稀釋液以“I - 3” “15 - 45”的比例稀釋；稀釋的時候溫度為10-15°C。螺旋藻多糖從螺旋藻提取出的生理活性多糖，無毒。性狀無色的或淡黃色粉末。溶于水，不溶于醇和油脂。質量指標外觀無色的或淡黃色粉末。螺旋藻多糖通過抑制機體內自由基氧化反應，降低脂質過氧化作用，減少組織脂褐質的形成，可以達到減緩機體衰老的作用。 螺旋藻多糖能增強骨髓細胞增殖活力、促進DNA修復合成作用，有良好抗輻射功能和降低放療、化療副作用，對電離輻射損傷具有明顯的防護效果。螺旋藻多糖能提高機體非特異性的細胞免疫功能，而且能促進機體轉異性體液免疫功能，提高低御病菌、病毒入侵的能力。螺旋藻多糖能促進胸腺、脾腺等免疫器官生長，促進免疫血清蛋白合成，消除免疫抑制劑對免疫系統的抑制作用。一種螺旋藻多糖的提取方法包括而不限于將螺旋藻原料浸入水中，攪勻后放 在-15°C的冰中冷凍72小時，取出快速融凍，離心過濾，藻渣提取螺旋藻多糖；濾渣中加入Na2 C O 3溶解成溶液，離心過濾，棄去濾渣，保留濾液.調節濾液P H至中性，濃縮，噴霧干燥即成。本發明的大鯢育種群體培育和生殖調控
將大鯢育種群體建立育種檔案，在人工養殖條件下集中飼養培育，達到2-3月齡。育種群體的年培育溫度控制在12-24°C，采用正常日照，繁殖季節水溫控制在10-15°C，光照時間6-8h，光照強度800-12001UX，連續照射O. 5-1月，水流交換量為2_3m3/h，
親魚在非繁殖季節利用市售鉺料飼喂，
繁殖季節利用添加5%蚯蚓的市售鉺料飼喂。經過以上培育達到性成熟，產出成熟卵子和精子。精液采集和運輸
選擇性成熟的雄魚，采用腹部擠壓法采集精液，將雄魚泄殖孔周圍擦干，用玻璃吸管吸取乳白的精液，不要吸取排出的黃色尿液。將采集的精液全部盛入20ml的干燥的玻璃瓶中，將裝有精液的玻璃瓶置于冰上。精液在運送途中避免光線直射。長途運輸的大鯢精液用于配種的方法
O選取性腺成熟的大鯢雄魚和雌魚，分別采集成熟精液和卵子；
2)用本發明的保藏劑稀釋大鯢精液。稀釋的時候按照，大鯢精液稀釋液以(I — 3)ml (15 -45) ml的比例稀釋；稀釋的時候溫度為10-15°C。將稀釋的大鯢精液與卵粒均勻混合，卵粒與精液體積比為(15 — 30)ml : (O. I —
O.5) ml，攪拌后10-15°C靜置5_20min，加入適量10_15°C溪流水人工受精。3)大鯢魚苗的獲得將受精卵移至10_15°C溪流水中孵化，按照常規大鯢苗種生產方法管理，培育大鯢魚苗。大鯢魚苗的培養方法
在4個Im3水缸中，分別進行飼養，早期用微流水，每天交換量O. 3m3，保持水質清新，每天早晚各I次除去池底沉淀。第I個水缸中放養初孵仔魚數量在4000尾左右，不投放顆粒飼料
第2個水缸中放養伏底魚苗(體長Icm) 2000尾，顆粒飼料粒徑80-100 μ m,
第3個水缸中放養5-10cm魚苗1000尾，顆粒飼料粒徑200-400 μ m，第4個水缸中放養20-25cm魚苗500尾。顆粒飼料粒徑800 μ m左右。第1-4個水缸的水體中，螺旋藻投喂量10-20萬個/ml，輪蟲投喂量10_20個/ml，鹵蟲投喂量5-10個/ml。
具體實施方式
具體實施例I
O選取性腺成熟的大鯢雄魚和雌魚，分別采集成熟精液和卵子；
2)用本發明的保藏劑稀釋大鯢精液。氯化鈉30mmol/L,磷酸二氫鈉2mmol/L,磷酸氫二鈉4 mmol/L ;碳酸氫鈉2mmol/L,碳酸鈉4 mmol/L,氯化鐵6mmol/L,氯化|丐8 mmol/L,氯化鎂16mmol/L,氯化鋅16 mmol/L,氯化猛lmmol/L,依地酸二鈉2 mmol/L,維生素C 2mmol/ L,維生素D 2mmol/ L,維生素E 2 mmol/ L,甘露醇100 mmol/L,螺旋藻多糖100 mmol/L,其余是水。將以上成分按照比例稱量，并用水溶解，定容。稀釋的時候按照，大鯢精液稀釋液以(l)ml (15)ml的比例稀釋；稀釋的時候溫度為10 °C。將稀釋的大鯢精液與卵粒均勻混合，卵粒與精液體積比為(15) ml (0. l)ml，攪拌后10°C靜置lOmin，加入適量10°C溪流水人工受精。3)大鯢魚苗的獲得將受精卵移至10°C溪流水中孵化，按照常規大鯢苗種生產方法管理，培育大鯢魚苗。建立大鯢魚苗種系進行測量，30天體長為10. 21-15. 47cm,體重為25. 56-27. 34g，生長快，存活率高達79. 3%，抗病力強，與常規育種得到30天地相比，體長長10. 8%，體重高15. 5%，存活率高12. 9%ο具體實施例2
O選取性腺成熟的大鯢雄魚和雌魚，分別采集成熟精液和卵子；
2)用本發明的保藏劑稀釋大鯢精液。氯化鈉60 mmol/L,磷酸二氫鈉5 mmol/L,磷酸氫二鈉10 mmol/L ;碳酸氫鈉5mmol/L,碳酸鈉10 mmol/L,氯化鐵12 mmol/L,氯化|丐16 mmol/L,氯化鎂32 mmol/L,氯化鋅32 mmol/L,氯化猛 2 mmol/L,依地酸二鈉 5 mmol/L,維生素 C5 mmol/ L,維生素 D 5 mmol/L，維生素E 5 mmol/ L，甘露醇200 mmol/L，螺旋藻多糖200 mmol/L，其余是水。將以上成分按照比例稱量，并用水溶解，定容。稀釋的時候按照，大鯢精液稀釋液以(2) ml (40) ml的比例稀釋；稀釋的時候溫度為15°C。將稀釋的大鯢精液與卵粒均勻混合，卵粒與精液體積比為(30) ml (0. 5)ml，攪拌后15°C靜置20min，加入適量15°C溪流水人工受精。3)大鯢魚苗的獲得將受精卵移至15°C溪流水中孵化，按照常規大鯢苗種生產方法管理，培育大鯢魚苗。建立大鯢魚苗種系進行測量，30天體長為12. 19-17. 67cm,體重為24. 39-29. 21g，生長快，存活率高達79. 3%，抗病力強，與常規育種得到30天地相比，體長長
12.1%，體重高16. 7%，存活率高13. 1%。權利要求
1.大鯢精液的保藏劑，這種保藏劑的成分為 氯化鈉30 — 60 mmol/L,磷酸二氫鈉2 — 5 mmol/L,磷酸氫二鈉4 一 10 mmol/L ;碳酸氫鈉 2 — 5 mmol/L,碳酸鈉 4—10 mmol/L,氯化鐵 6—12 mmol/L,氯化I丐 8 — 16 mmol/L,氯化鎂16 - 32 mmol/L,氯化鋅16 — 32 mmol/L,氯化錳I 一 2 mmol/L,依地酸二鈉2 —5 mmol/L,維生素 C 2 一 5 mmol/ L,維生素 D 2 一 5 mmol/ L,維生素 E 2 一 5 mmol/ L,甘露醇100 - 200 mmol/L，螺旋藻多糖100 — 200 mmol/L，其余是水。
2.本發明的大鯢精液的保藏劑的制備方法，將權利要求I的成分按照比例稱量，并用水溶解，定容。
3.本發明的一種保藏大鯢精液的特殊方法，其特征是 (O選取性腺成熟的大鯢雄魚，采集成熟精液； (2)用權利要求2的保藏劑稀釋大鯢精液；稀釋的時候按照，大鯢精液稀釋液以“I 一3” “15 — 45”的比例稀釋；稀釋的時候溫度為10-15°C。
全文摘要
本發明涉及一種大鯢精液保藏劑，其成分包括氯化鈉，磷酸二氫鈉，磷酸氫二鈉；碳酸氫鈉，碳酸鈉，氯化鐵，氯化鈣，氯化鎂，氯化鋅，氯化錳等，其余是水。本方法發明工藝簡單，成本低，可操作性強，大大提高大鯢的繁育率。
文檔編號A01N1/02GK102742569SQ20121027767
公開日2012年10月24日 申請日期2012年8月7日 優先權日2012年1月15日
發明者李國 申請人:李國