專利名稱：一種誘導葡萄茋類物質積累的方法
技術領域：
本發明涉及一種誘導葡萄葉、葡萄莖及葡萄果實中芪類物質白藜蘆醇、白藜蘆醇苷、紫檀芪積累的方法。
背景技術：
芪類物質(Stilbenes)是植保素的重要組成成分，存在于一些藥用植物和食用植物中，如決明、藜蘆、虎杖、葡萄、花生。其生物合成依賴于植物苯丙烷次生代謝途徑，生成的芪類物質、查爾酮類物質、木質素等產物作為植物抗毒素、UV保護因子、花和果實色素、細胞壁結構成分和信號傳導分子等，在植物逆境生理及病理過程中發揮了重要的作用[1]。白藜蘆醇是苗合酶(stilbene synthase, STS)合成的最主要的物質。該途徑其它關鍵酶還有苯丙氨酸解氨酶(Phenylalanine ammonia lyase, PAL),肉桂酸-4-輕化酶(Cinnamate-4-hydroxylase, C4H),4_ 肉桂酸輔酶 A 連接酶(4-coumarate CoA ligase, 4CL)，這些限速酶共同決定了植物材料中芪類物質的積累水平。芪類物質包括二苯乙烯單體或聚合而成的多種化合物，比如反式和順式白藜蘆醇(Trans & Cis-resveratrol)、虎杖苷(Polydatin)、紫擅苗(Pterostilbene)、白皮杉醇(Piceatannol)、赤松素(Pinosylvin)、葡萄抗毒素(viniferins)以及其它多聚體。苗類物質生物活性研究早期多集中在其抗菌活性方向。1992年Renaud提出著名的“法國悖論”(French paradox),即法國人飲酒量與冠心病發病率之間出現矛盾。同年Siemann與Creasy首先證實葡萄酒中含有天然的反式白藜蘆醇，并且對于人的肝、皮膚、心臟及血液循環、脂代謝有著重要的調理藥效。關于芪類物質的藥理藥效研究逐漸升溫，至目前已經發現白藜蘆醇、紫檀芪、白藜蘆醇苷等活性成分在抗氧化、抗炎、心血管保護、雌激素樣調節及抗腫瘤方面有特殊的功效，芪類物質的藥用價值受到人們的廣泛關注[2'3'4]。在芪類活性成分獲取方面，選擇合適的植物材料成為該領域熱點問題。以最主要的芪類物質白藜蘆醇為例，目前主要是從寥科植物虎杖根莖中提取。虎杖在采挖后必須重新種植，導致生產成本偏高。我國新疆有大面積的葡萄種植，這使得利用大量葡萄資源獲取芪類活性成分成為可能。由于葡萄相關材料芪類物質含量較低，直接獲取芪類物質的產率很低。新生葡萄葉含有一定量的白藜蘆醇，且變化范圍較大(0. 04 - 46 μ g/g);成熟的葡萄皮中也含有一定量的白藜蘆醇(50 - 100 μ g/g)，且以紅皮葡萄含量較高；葡萄藤莖中含有微量的順式白藜蘆醇(3. 5 μ g/kg)。在這些材料中，白藜蘆醇苷含量較白藜蘆醇高，部分材料含有極少量的紫檀芪。所有材料中，葡萄果肉中芪類物質含量極低[5]。為了提高葡萄相關材料的可利用性，使用誘導方式升高其中芪類物質含量成為研究關注熱點。在誘導方式方面分為生物誘導和非生物誘導，其中以生物誘導和紫外誘導誘導效率較高，對葡萄芪類物質有明確且顯著的升高。但在實踐操作中，生物誘導會影響在體葡萄的產量和品質并可能導致葡萄感病；而紫外誘導操作復雜，輻照量不易控制，使其不便于大田開展，這使得通過化學誘導劑進行誘導成為關注重點。
在通過各種化學誘導劑誘導芪類物質積累的方案中，誘導劑的選擇成為誘導的關鍵。以葡萄芪類物質代表物一白藜蘆醇為例，已知的葡萄材料白藜蘆醇的化學誘導劑分為三大類1、鋁劑氯化鋁、硫酸鋁M ;乙磷鋁m ;2、重金屬硫酸銅M ;3、植物激素茉莉酸、茉莉酸甲酯[9];乙烯[1°]冰楊酸[11]。分析上述化學誘導葡萄白藜蘆醇積累的技術方案時，發現存在著下述幾點不足i.上述誘導方案對離體葡萄組織誘導效果不佳上述誘導方案對芪類物質合成途徑影響專一性不高，在體誘導過程中可能會影響葡萄的品質及產量上述誘導方案針對芪類物質如白藜蘆醇苷、紫檀芪的誘導特征不明上述誘導方案并未考慮到實際操作難度，在大田操作時，材料選擇及誘導劑的使用方式決定了誘導成本，鋁劑誘導方案對特殊葉材料選擇、莖干注射、乙磷鋁協同UV光照處理、硫酸銅協同殼聚糖等誘導技術實施起來費時費力，無法實現大規模誘導上述誘導方案未考慮到誘導劑的土壤和植株的殘留毒性，在農業生產上酸性鋁、可溶銅鹽的植物毒性已被公認，激素類試劑也具有一定的殘留毒性，這些誘導試劑使用中會在土壤蓄積，造成一定的環境毒性，影響后續作物種植，也會在植株及果實中殘留，影響食用者健康；vi.上述誘導方案未考慮到在大田應 用時會對操作人員的影響，酸性鋁、乙磷鋁以及硫酸銅、植物激素均具有一定的動物毒性，實際操作中可能會對操作人員造成一定的毒害，甚至在果實產生蓄留，具潛在毒性。2002年我國葡萄種植面積近600萬畝。隨著對葡萄相關產品需求的增加葡萄種植面積呈現快速上升趨勢，2009僅新疆維吾爾自治區葡萄種植面積就高達150萬畝。為了充分利用這一有利條件和資源，針對已有提高葡萄相關材料中芪類物質白藜蘆醇、白藜蘆醇苷、紫檀芪含量方法的不足，本發明的現實意義在于提供一種增加葡萄品質、提高葡萄營養保健價值及葡萄生產相關副產品綜合利用的方法。參考文獻
[1]Chong Jj Poutaraud A, Hugueney P， (2009) metabolism and roles ofstilbenes in plants. Plant Sci, 177:143-155
[2]Soleas GJj Diamandis EPj Goldberg DM, (1997) Resvertrol: a moleculewhose time has come and gone Clinical Biochem, 30:91—113
[3]Roupe KAj Remsberg CM，Yanez JAj Davies NM，(2006) Pharmacometrics ofstilbenes: seguing towards the clinic. Curr Clin Pharmac, 1:81—101
[4]王曉琴，王振華，劉梅，張波，(2010)氧化還原調控在紫檀芪誘導HeLa細胞內質網凋亡途徑中的作用。中國藥理學通報，26 :1184-1188
[5]Moreno A, Castro Mj Falque Ej (2007) Evolution of trans- andcis-resveratrol content in red grapes (Vitis vinifera L. cv Menciaf Albarelloand Merenzao) during ripening. Eur Food Res Technol, 227:667-674
[6]Adrian M，Jeandet P，Bessis R，Joubert JMj (1996) Induction of PhytoalexinResveratrol. Synthesis in Grapevine Leaves Treated with Aluminum ChlorideAlCl3. Agric· Food Chem. , 44:1979 - 1981
[7]亓桂梅，CreasyGL，(2005)乙磷鋁和紫外線照射對葡萄葉片中芪類化合物的誘導作用。中外葡萄與葡萄酒，4 :12-16
[8]Aziz A,Trotel-Aziz P，Dhuicq L，Jeandet P,Couderchet M,Vernet Gj (2006)Chitosan oligomers and copper sulfate induce grapevine defense reactionsand resistance to gray mold and downy mildew. Disease Con tr. Pest Manag.，96:1188-1194
[9]Lijavetzky D， Almagro L， Belchi-Navarro S， Martinez-Zapater JM, Bru R，Pedreno MAj (2008) Synergistic effect of methyljasmonate and cyclodextrin onstilbene biosynthesis pathway gene expression and resveratrol production inMonastrell grapevine cell cultures. BMC Res. Notes. , 1:132—135
[10]Ozone- and ethylene-induced regulation of a grapevine resveratrolsynthase promoter in transgenic tobacco. Grimming B， Schubert R， Fischer R，Hain R，Schreier PHj Betz C et al.，(1997) Acta Physiol. Planta. 19:467-474
[11]李曉東，鄭先波，閆樹堂，李紹華，(2007)水楊酸和紫外線對誘導釆后葡萄果皮內白藜蘆醇合成作用研究。果樹學報，24 :30-33
發明內容
本發明即一種誘導葡萄葉、葡萄莖及葡萄果實中芪類物質白藜蘆醇、白藜蘆醇苷、紫檀芪積累的方法，其特征在于采取方法如下
a、雙氧水誘導劑的制備直接取市售2.5%至10%的雙氧水，或取市售濃度為3%至50%雙氧水用水稀釋至過氧化氫終濃度為2. 5%至10%，在其中加入表面活性劑TritonX-100致其水溶液重量百分比終濃度為O. 01%至O. 1%作為雙氧水誘導劑備用；
b、葡萄在體材料的噴灑處理將步驟a制得的雙氧水誘導劑對葡萄樹進行噴灑，將葡萄樹地上部分以每100重量份噴灑I至10重量份液態誘導劑進行處理；上述處理時間8至24小時。C、葡萄離體材料的噴灑處理將步驟a制得的液態誘導劑按I至10重量份噴灑到20至50重量份離體葡萄葉、莖干及果實上進行處理；上述處理時間12至48小時。d、葡萄離體材料的浸泡處理取I至10重量份離體葡萄莖干、葉片、果實，將莖干之切口下端、葉之葉柄近莖端、葡萄果實之穗軸下端浸泡于10重量份步驟a制得的液態誘導劑中進行處理；上述處理時間12至48小時。上述一種誘導葡萄葉、葡萄莖及葡萄果實中芪類物質白藜蘆醇、白藜蘆醇苷、紫檀芪積累的方法，其特征在于所述雙氧水誘導劑的制備所用的水是自來水、蒸餾水、去離子水任何一種或混合。上述一種誘導葡萄葉、葡萄莖及葡萄果實中芪類物質白藜蘆醇、白藜蘆醇苷、紫檀芪積累的方法，其特征在于所述葡萄離體材料的噴灑和浸泡處理中，優選采用避光方式按所述處理時間進行處理操作。上述一種誘導葡萄葉、葡萄莖及葡萄果實中芪類物質白藜蘆醇、白藜蘆醇苷、紫檀芪積累的方法，其特征在于所述葡萄在體及離體材料的處理中，優選環境溫度范圍為16攝氏度至38攝氏度。
本發明的有益效果
i.葡萄離體組織芪類物質誘導的有效性是解決葡萄生產廢棄物有效利用的關鍵；現有技術方案中重金屬及激素類誘導方案對離體葡萄組織誘導效果不佳；本發明的有益效果在于所使用技術方案能夠顯著且穩定誘導離體葡萄葉片、葡萄莖干及果實中白藜蘆醇、白藜蘆醇苷、紫檀芪含量升高；如圖I所示HPLC結果中，相比空白對照(圖I上)5%濃度雙氧水誘導劑按重量份I : I浸泡處理誘導紅地球葡萄7月齡離體葉片白藜蘆醇含量顯著升高14倍(圖I下)，達到263 μ g/g鮮重。ii.葡萄材料芪類物質誘導特異性是制約誘導效果的關鍵；現有技術方案對芪類物質合成途徑影響專一性不高；本發明的有益效果在于所使用技術方案對葡萄芪類物質生物合成途徑的影響具有專一性；如圖2、圖3所示RT-PCR結果中，紅地球葡萄7月齡離體葉片芪類物質合成途徑相關限速酶基因在本發明技術方案限定的誘導處理濃度范圍內，該合成途徑的相關分子表達呈現一致性顯著上調。iii.葡萄材料芪類物質誘導全面性是制約利用的關鍵；現有技術方案針對芪類物質如白藜蘆醇苷、紫檀芪的誘導特征不明；本發明的有益效果在于所使用技術方案對葡萄主要芪類物質中白藜蘆醇、白藜蘆醇苷、紫檀芪均有誘導升高效果；如圖4所示HPLC結果中，相比空白對照(圖4上)2. 5%濃度雙氧水按重量份I :1噴灑紫香無核葡萄廢棄葉片后， 導致葉片中白藜蘆醇(Res)、白藜蘆醇苷(PD)、紫檀芪(PS)含量顯著升高(圖4下)。iv.在大田操作時，材料選擇及誘導劑的使用方式決定了誘導成本；現有技術方案并未考慮到實際操作難度；本發明的有益效果在于所使用誘導方法操作簡單，僅涉及噴灑、浸泡兩種相對簡單的操作類別，有利于進行大規模誘導操作。V.由于雙氧水誘導劑具有自然分解特性，誘導操作結束后會自然分解為水和氧氣，不會對葡萄材料產生殘留蓄積性毒性，噴灑或浸泡后不用洗脫，誘導劑操作噴灑過程不會對操作人員造成人身毒害。vi.本發明還優化了離體材料的噴灑和浸泡處理采用避光方式，可避免離體材料溫度升高進而使得雙氧水誘導劑提前分解，也可避免了芪類物質在離體材料中的見光分解，增加了誘導效果。vii.本發明還優化了在體及離體材料的處理中環境溫度范圍為16攝氏度至38攝氏度。低于此溫度葡萄材料芪類物質合成途徑對誘導敏感度下降，而高于此溫度后雙氧水誘導劑分解速度增加。viii.本發明方法不需要精密儀器或自動化設備，能夠在葡萄資源豐富的鄉鎮企業進行大規模應用，既可增加葡萄品質也可增加葡萄種植廢棄物的綜合利用，由白藜蘆醇屬于典型的植保素，其含量在實施過程中升高可使葡萄樹對病原菌產生一定的抗性，減少病害所引起的損失。
圖I :高效液相法證實誘導前(上)誘導后(下)本技術方案對葡萄葉白藜蘆醇含量的影響。圖2 =RT-PCR法證實本技術方案對葡萄葉芪類物質合成上游關鍵途徑限速酶基因表達量的提升效果。圖3 =RT-PCR法證實本技術方案對葡萄葉芪類物質合成酶基因表達量的提升效果O圖4 :高效液相法證實誘導前(上)誘導后(下)本技術方案對四種主要芪類物質含量的影響。
具體實施例方式 下面，本發明將用實施例進行進一步的說明，但是它并不限于這些實施例的任何一個或類似實例。實施例I· 取市售過氧化氫濃度為50%的雙氧水，加水稀釋至過氧化氫終濃度2. 5%，加入表面活性劑Triton X-100致其重量百分比終濃度為O. 01作為液體誘導劑備用；將上述步驟制得的液態誘導劑對田間種植新梢生長期美國紅提葡萄樹進行噴灑，將葡萄樹地上部分以每100重量份噴灑10重量份液態誘導劑進行誘導處理8小時；HPLC測得果實中總芪類物質鮮重含量平均升高到I. 5倍，葉片中總芪類物質鮮重含量平均升高到3. 3倍，莖干中芪類物質鮮重含量平均升高到I. I倍。葉片芪類物質鮮重含量平均值白藜蘆醇12 yg/g，白藜蘆醇苷 42 yg/g，紫檀芪 3. 2 μ g/g。實施例2
取市售過氧化氫濃度為28%的雙氧水，加水稀釋至過氧化氫終濃度5%，加入表面活性劑Triton X-100致其重量百分比終濃度為O. 05作為液體誘導劑備用；將上述步驟制得的液態誘導劑對田間種植開花期矢富羅莎葡萄樹進行噴灑，將葡萄樹地上部分以每100重量份噴灑5重量份液態誘導劑進行誘導處理16小時；HPLC測得果實中總芪類物質鮮重含量平均升高到3. I倍，葉片中總芪類物質鮮重含量平均升高到4倍，莖干中芪類物質鮮重含量平均升高到2倍。葉片芪類物質鮮重含量平均值白藜蘆醇15 yg/g，白藜蘆醇苷44 μ g/g，紫檀芪3. 3 μ g/g。受試株微抗霜霉病菌。實施例3
取市售過氧化氫濃度為20%的雙氧水，加水稀釋至過氧化氫終濃度10%，加入表面活性劑Triton X-100致其重量百分比終濃度為O. 1%作為液體誘導劑備用；將上述步驟制得的液態誘導劑對田間種植漿果生長期無核紫葡萄樹進行噴灑，將葡萄樹地上部分以每100重量份噴灑I重量份液態誘導劑進行誘導處理24小時；HPLC測得果實中總芪類物質鮮重含量平均升高到6倍，葉片中總芪類物質鮮重含量平均升高到16倍，莖干中芪類物質鮮重含量平均升高到5倍。葉片芪類物質鮮重含量平均值白藜蘆醇110 μ g/g,白藜蘆醇苷144Ug/g，紫檀芪12 μ g/g。受試株中抗霜霉病菌，果實微抗白腐病。實施例4
取市售過氧化氫濃度為3%的雙氧水，加入表面活性劑Triton X-100致其重量百分比終濃度為O. 02%作為液體誘導劑備用；對田間種植漿果成熟期赤霞珠葡萄樹進行噴灑，將葡萄樹地上部分以每100重量份噴灑8重量份液態誘導劑進行誘導處理10小時；HPLC測得果實中總芪類物質鮮重含量平均升高到2. 6倍，葉片中總芪類物質鮮重含量平均升高到5倍，莖干中芪類物質鮮重含量平均升高到3倍。葉片芪類物質鮮重含量平均值白藜蘆醇75 μ g/g，白藜蘆醇苷104 yg/g，紫檀芪6. 3 μ g/g。受試株微抗霜霉病菌。實施例5
取市售過氧化氫濃度為30%的雙氧水，加水稀釋至過氧化氫終濃度2. 5%，加入表面活性劑Triton X-100致其重量百分比終濃度為O. 02%作為液體誘導劑備用；對田間種植采摘期紫香無核葡萄樹進行噴灑，將葡萄樹地上部分以每100重量份噴灑10重量份液態誘導劑進行誘導處理24小時；HPLC測得果實中總芪類物質鮮重含量平均升高到3倍，葉片中總芪類物質鮮重含量平均升高到10倍，莖干中芪類物質鮮重含量平均升高到2. 6倍。葉片芪類物質鮮重含量平均值白藜蘆醇23 μ g/g,白藜蘆醇苷159 μ g/g，紫檀芪44. I μ g/g。受試株中抗霜霉病菌。實施例6
取市售過氧化氫濃度為45%的雙氧水，加水稀釋至過氧化氫終濃度3%，加入表面活性 劑Triton X-100致其重量百分比終濃度為O. 04%作為液體誘導劑備用；將上述步驟制得的液態誘導劑10重量份噴灑到50重量份的新梢生長期美國紅提葡萄離體葡萄葉、莖干及果實上進行處理，避光處理48小時，環境溫度25攝氏度；HPLC測得果實中總芪類物質鮮重含量平均升高到I. 2倍，葉片中總芪類物質鮮重含量平均升高到4倍。葉片芪類物質鮮重含量平均值白藜蘆醇14. 5 yg/g，白藜蘆醇苷51 yg/g，紫檀芪3. 8 μ g/g。實施例7
取市售過氧化氫濃度為35%的雙氧水，加水稀釋至過氧化氫終濃度6%，加入表面活性劑Triton X-100致其重量百分比終濃度為O. 05%作為液體誘導劑備用；將上述步驟制得的液態誘導劑I重量份噴灑到20重量份開花期矢富羅莎葡萄離體葡萄葉、莖干及果實上進行處理，避光處理36小時；HPLC測得果實中總芪類物質鮮重含量平均升高到I. 6倍，葉片中總芪類物質鮮重含量平均升高到2倍，莖干中芪類物質鮮重含量平均升高到I. I倍。葉片芪類物質鮮重含量平均值白藜蘆醇7. 5 yg/g，白藜蘆醇苷22 μg/g，紫檀芪1.6 μ g/g。實施例8
取市售過氧化氫濃度為10%的雙氧水，加入表面活性劑Triton X-100致其重量百分比終濃度為O. 8%作為液體誘導劑按5重量份噴灑到30重量份漿果生長期無核紫葡萄離體葡萄葉、莖干及果實上進行處理，避光處理12小時，環境溫度16攝氏度；HPLC測得果實中總芪類物質鮮重含量平均升高到3倍，葉片中總芪類物質鮮重含量平均升高到4倍，莖干中芪類物質鮮重含量平均升高到2倍。葉片芪類物質鮮重含量平均值白藜蘆醇27. 5 μ g/g,白藜蘆醇苷36 yg/g，紫檀芪3 μ g/g。受試果實微抗白腐病。實施例9
取市售過氧化氫濃度為15%的雙氧水，加水稀釋至過氧化氫終濃度7. 5 %，加入表面活性劑Triton X-100致其重量百分比終濃度為0. 1%作為液體誘導劑備用；將上述步驟制得的液態誘導劑10重量份噴灑到20重量份成熟期赤霞珠葡萄離體葡萄葉、莖干及果實上進行處理，避光處理18小時；HPLC測得果實中總芪類物質鮮重含量平均升高到I. 2倍，葉片中總芪類物質鮮重含量平均升高到2. 5倍，莖干中芪類物質鮮重含量平均升高到I. I倍。葉片芪類物質鮮重含量平均值白藜蘆醇37. 5 yg/g，白藜蘆醇苷52 yg/g，紫檀芪3. I μ g/g°實施例10取市售過氧化氫濃度為3%的雙氧水，加水稀釋至過氧化氫終濃度2. 5%，加入表面活性劑Triton X-100致其重量百分比終濃度為O. 02%作為液體誘導劑備用；將上述步驟制得的液態誘導劑8重量份噴灑到24重量份采摘期紫香無核葡萄離體葡萄葉、莖干及果實上進行處理，避光處理24小時，環境溫度36攝氏度；HPLC測得果實中總芪類物質鮮重含量平均升高到2. 2倍，葉片中總芪類物質鮮重含量平均升高到5. 5倍，莖干中芪類物質鮮重含量平均升高到3倍。葉片芪類物質鮮重含量平均值白藜蘆醇12. 7 μ g/g，白藜蘆醇苷70. 4 μ g/g，紫檀苗 7. 5 μ g/g。實施例11
取市售過氧化氫濃度為45%的雙氧水，加水稀釋至過氧化氫終濃度3%，加入表面活性劑Triton X-100致其重量百分比終濃度為O. 01 %作為液體誘導劑備用；取I重量份新梢生長期美國紅提葡萄離體莖干、葉片、果實，將莖干之切口下端、葉之葉柄近莖端、葡萄果實之穗軸下端浸泡于10重量份上述液體誘導劑中，避光處理48小時；HPLC測得果實中總芪 類物質鮮重含量平均升高到8倍，葉片中總芪類物質鮮重含量平均升高到5倍。葉片芪類物質鮮重含量平均值白藜蘆醇29 μ g/g，白藜蘆醇苷102 yg/g，紫檀芪7. 6 μ g/g。實施例12
取市售過氧化氫濃度為28%的雙氧水，加水稀釋至過氧化氫終濃度5%，加入表面活性劑Triton X-100致其重量百分比終濃度為O. 02 %作為液體誘導劑備用；取10重量份開花期矢富羅莎葡萄離體莖干、葉片、果實，將莖干之切口下端、葉之葉柄近莖端、葡萄果實之穗軸下端浸泡于10重量份上述液體誘導劑中，避光處理24小時；HPLC測得果實中總芪類物質鮮重含量平均升高到12倍，葉片中總芪類物質鮮重含量平均升高到6倍，莖干中芪類物質鮮重含量平均升高到3倍。葉片芪類物質鮮重含量平均值白藜蘆醇113 μ g/g,白藜蘆醇苷99 yg/g，紫檀芪4. 2 μ g/g。受試株中抗白腐病。實施例13
取5重量份漿果生長期無核紫葡萄離體莖干、葉片、果實，將莖干之切口下端、葉之葉柄近莖端、葡萄果實之穗軸下端浸泡于10重量份含表面活性劑Triton X-100重量百分比終濃度為O. 02%的市售過氧化氫濃度為2. 5%的雙氧水中，避光處理12小時；HPLC測得果實中總芪類物質鮮重含量平均升高到4倍，葉片中總芪類物質鮮重含量平均升高到6倍，莖干中芪類物質鮮重含量平均升高到3倍。葉片芪類物質鮮重含量平均值白藜蘆醇42 yg/g，白藜蘆醇苷55 μ g/g,紫檀芪4. 5 μ g/g。實施例14
取市售過氧化氫濃度為12 %的雙氧水，加水稀釋至過氧化氫終濃度6 %，加入表面活性劑Triton X-100致其重量百分比終濃度為0. 02 %作為液體誘導劑備用；取8重量份成熟期赤霞珠葡萄離體莖干、葉片、果實，將莖干之切口下端、葉之葉柄近莖端、葡萄果實之穗軸下端浸泡于10重量份上述液體誘導劑中，避光處理36小時，環境溫度38攝氏度；HPLC測得果實中總芪類物質鮮重含量平均升高到2倍，葉片中總芪類物質鮮重含量平均升高到6倍，莖干中芪類物質鮮重含量平均升高到2倍。葉片芪類物質鮮重含量平均值白藜蘆醇90μ g/g，白藜蘆醇苷124 μ g/g,紫檀芪74 μ g/g。實施例15
取市售過氧化氫濃度為20%的雙氧水，加水稀釋至過氧化氫終濃度10%，加入表面活性劑Triton X-IOO致其重量百分比終濃度為O. 01 %作為液體誘導劑備用；取2重量份采摘期紫香無核葡萄離體莖干、葉片、果實，將莖干之切口下端、葉之葉柄近莖端、葡萄果實之穗軸下端浸泡于10重量份上述液體誘導劑中，避光處理16小時,環境溫度30攝氏度；HPLC測得果實中總芪類物質鮮重含量平均升高到3. 2倍，葉片中總芪類物質鮮重含量平均升高到8倍，莖干中芪類物質鮮重含量平均 升高到6倍。葉片芪類物質鮮重含量平均值白藜蘆醇18. 4 μ g/g,白藜蘆醇苷127. 2 μ g/g,紫檀苗35 μ g/g。
權利要求
1.一種誘導葡萄葉、葡萄莖及葡萄果實中芪類物質白藜蘆醇、白藜蘆醇苷、紫檀芪積累的方法，其特征在于采取方法如下 a、雙氧水誘導劑的制備取市售濃度為3%至50%雙氧水，用水稀釋至過氧化氫終濃度為2. 5%至10%，或直接取市售2. 5%至10%雙氧水加入表面活性劑Triton X-100致其重量百分比終濃度為O. 01%至O. 1%作為雙氧水誘導劑備用； b、葡萄在體材料的噴灑處理將步驟a制得的雙氧水誘導劑對葡萄樹進行噴灑，將葡萄樹地上部分以每100重量份噴灑I至10重量份液態誘導劑進行處理；上述處理時間8至24小時； C、葡萄離體材料的噴灑處理將步驟a制得的液態誘導劑按I至10重量份噴灑到20至50重量份離體葡萄葉、莖干及果實上進行處理；上述處理時間12至48小時； d、葡萄離體材料的浸泡處理取I至10重量份離體葡萄莖干、葉片、果實，將莖干之切口下端、葉之葉柄近莖端、葡萄果實之穗軸下端浸泡于10重量份步驟a制得的液態誘導劑中進行處理；上述處理時間12至48小吋。
2.根據權利要求I所述的ー種誘導葡萄葉、葡萄莖及葡萄果實中芪類物質白藜蘆醇、白藜蘆醇苷、紫檀芪積累的方法，其特征在于所述雙氧水誘導劑的制備步驟所用的水是自來水、蒸餾水、去離子水任何ー種或混合。
3.根據權利要求I所述的ー種誘導葡萄葉、葡萄莖及葡萄果實中芪類物質白藜蘆醇、白藜蘆醇苷、紫檀芪積累的方法，其特征在于所述葡萄離體材料的噴灑和浸泡處理步驟中，優選采用避光方式按所述處理時間進行處理操作。
4.根據權利要求I所述的ー種誘導葡萄葉、葡萄莖及葡萄果實中芪類物質白藜蘆醇、白藜蘆醇苷、紫檀芪積累的方法，其特征在于所述葡萄在體及離體材料的處理中，優選環境溫度范圍為16攝氏度至38攝氏度。
全文摘要
本發明涉及一種誘導葡萄葉、葡萄莖及葡萄果實中茋類物質白藜蘆醇、白藜蘆醇苷、紫檀茋積累的方法，包括雙氧水誘導劑的制備、葡萄在體與離體材料的噴灑處理、以及葡萄離體材料的浸泡處理的相關方法。本發明技術方案能夠有效、特異、全面的誘導上述材料中茋類物質含量升高，且具有操作簡單、安全，便于在葡萄資源豐富的鄉鎮企業進行大規模應用的特點。本發明既可增加葡萄品質也可增加葡萄種植廢棄物的綜合利用，還可使葡萄樹對病原菌產生一定的抗性，減少病害所引起的損失。
文檔編號A01G7/06GK102835263SQ20121038045
公開日2012年12月26日 申請日期2012年10月9日 優先權日2012年10月9日
發明者張波, 王曉琴, 鄭秋生, 楊曉燕, 田春芳, 劉景磊, 顏歡 申請人:張波, 王曉琴