專利名稱：用于抗棉鈴蟲性生物測定的棉葉保鮮方法
技術領域：
本發明涉及一種保鮮方法，具體涉及一種在棉花育種領域用于抗棉鈴蟲性生物測定的棉葉保鮮方法。
背景技術：
抗棉鈴蟲室內生物測定起始于轉Bt基因抗蟲棉的研發，我國自1992年范云六、郭三堆等對Bt基因進行改造、獲得具有自主知識產權的抗蟲性極強的Bt基因后，科研工作者將這些Bt基因轉入到棉花品種中進行抗蟲棉新品種的創立，從而開始了國內抗棉鈴蟲室內生物測定的研究工作。室內抗棉鈴蟲生物測定就是將測定材料轉入了 Bt等抗蟲基因的抗蟲棉頂端生長倒2 3片真葉飼喂棉鈴蟲低齡幼蟲，觀察測定材料的抗蟲效果。·
棉鈴蟲幼蟲的生物測定是能夠直觀的反應棉花各器官對于棉鈴蟲幼蟲抗蟲性表現的一種方法，其優點在于便于觀察、操作簡便、成本較低、準確性高。但是在生物測定過程中，需要解決棉花葉片的保鮮問題。中國棉花研究所馬麗華、李春華1998年報道了用于室內抗棉鈴蟲性生物測定的瓊脂培養基葉片保鮮法。雖然該方法能夠為棉葉提供充足營養，但是此方法也存在弊端。首先，瓊脂培養基表面存在水分，對于進行生物測定的棉鈴蟲幼蟲有影響；其次，培養基對環境條件要求較高，若在不潔凈的條件下培養基容易產生霉變，并對棉花葉片造成一定的污染，測試中途需要更換保鮮棉葉和培養基及轉接測試幼蟲，致使測定工作量加大，并影響試驗效果。中國專利ZL200820137401. I說明書公開了一種抗棉鈴蟲性生物測定棉葉保鮮裝置，包括盒體、盒蓋，盒體為聚丙烯塑料盒體，盒蓋為聚丙烯塑料盒蓋，盒體底部填充有一層聚氨酯人造海綿，聚氨酯人造海綿上均勻開有縫口。具體是在長14cmX寬IOcmX高6cm規格的聚丙烯盒內填聚氨酯并劃3個2cm長等距離刀口，注入20mL純凈水后插入保鮮測試棉葉，在室溫26°C和自然光周期條件下，保鮮30d。雖然該方法能達到棉葉保鮮的目的，但需要較大的專用盒體，并且聚氨酯人造海綿切口徒手操作人為性大，一致性差，增加了測定工作量。因此，為提高棉花抗蟲性室內生物測定方法的效率，需要對生測過程中的棉葉保鮮技術進行不斷改良和保鮮新方法開發。以開發出滿足測定需要、工序簡單、操作方便、一致性高、通用性強、成本經濟的棉葉保鮮方法。
發明內容
本發明目的是提供一種用于棉花品種抗蟲性室內生物測定的棉葉保鮮方法。本方法包括棉葉摘取與處理、放入培養皿、接蟲、培養皿整理、皿內培養等步驟，其具體步驟及技術要點為a.將新鮮的棉葉摘下，留取葉柄1-1. 5cm ；b.將脫脂棉用營養液濕潤后，包裹在棉葉葉柄處，并使棉球不滴水；c.將脫脂棉包裹好的棉葉正面向上放入培養皿中；
d.將待測的棉鈴蟲幼蟲接入到棉葉上；e.將PVC保鮮膜裁制成略大于培養皿的大小，將其包裹在培養皿上，使其平展，然后將培養皿蓋子蓋在已包裹好的培養皿上；f.用黑布覆在培養皿蓋上；g.在室溫下培養，直至生測。所述的營養液有效成分及濃度分別為 硝酸鉀I. 8-2. Og/L，硝酸銨I. 5-1. 8g/L、磷酸二氫鉀 O. 15-0. 2g/L、7H20 硫酸鎂 O. 3-0. 4g/L、2H20 氯化鈣 O. 3-0. 5g/L。本方法所使用的營養液能夠代替土壤給植物提供K、N、Mg、P、Ca、S、等離子螯合態營養元素，具有緩釋效應和緩沖性能，能有效的提供植物所需養分，使葉柄斷裂處的細胞在吸收水分的同時亦吸收營養液的營養元素成分，并且能夠通過擴散作用，外界的高濃度營養元素能夠進入植物體內，盡量保持葉片的鮮活能力，從而使植物能夠更具有更多的能量來保持更好的活性，達到保鮮的效果。本發明營養液為棉葉提供了足夠的水分和低濃度的大量元素，供給棉花葉片在培養期間的生理需要，保鮮效果均在一周以上。又避免了瓊脂培養基存在的易于污染的問題，在一周的保鮮期內棉葉不變色、不萎蔫、不變質腐爛，保持新鮮狀態。從而在測定期間中途不需要更換棉葉和培養基，也不需要轉接棉鈴蟲幼蟲，簡化了生測步驟，操作簡便，準確性高。同時上述營養液的配方簡單，藥品均為常見藥劑，容易購買；聚苯乙烯培養皿相比玻璃培養皿價格低、不易破碎、易于輸送；脫脂棉為醫用脫脂棉花，方便易得。從而保證了本方法的方便實用、高效經濟。
具體實施例方式實施例I。一種用于抗棉鈴蟲性生物測定的棉葉保鮮方法，包括棉葉摘取與處理、放入培養皿、接蟲、培養皿整理、皿內培養等步驟，具體步驟及技術要點為a.將新鮮的棉葉摘下，留取葉柄1-1. 5cm ；b.將2_3cm的脫脂棉用營養液濕潤，將其包裹在棉葉葉柄處，并使棉球不滴水；c.將脫脂棉包裹好的棉葉正面向上放入培養皿中；d.將待測的棉鈴蟲幼蟲接入到棉葉上；e.將PVC保鮮膜裁制成略大于培養皿的大小，將其包裹在培養皿上，使其平展，然后將培養皿蓋子蓋在已包裹好的培養皿上；f.用黑布覆在培養皿蓋上；g.在室溫下培養，直至生測。所述的營養液有效成分及濃度分別為硝酸鉀I. 9g/L、硝酸銨I. 65g/L、磷酸二氫鉀O. 17g/L、7H20硫酸鎂O. 37g/L、2H20氯化鈣O. 44g/L。這些成份均為化學實驗室常用試劑。所述的培養皿為聚苯乙烯培養皿。實施例2。本實施例與實施例I的區別為，所述的營養液有效成分及濃度分別為硝酸鉀
2.Og/L，硝酸銨 I. 8g/L、磷酸二氫鉀 O. 15g/L、7H20 硫酸鎂 O. 4g/L、2H20 氯化鈣 O. 35g/L。
上述兩個實施例的保鮮方法，所使用的PVC保鮮膜粘性適宜，保鮮膜包裹后可以減少葉片水分的快速散失，并且初孵幼蟲呼吸弱，皿內的空氣足夠初孵幼蟲呼吸。黑布覆在培養皿蓋上可使棉鈴中幼蟲在相對弱光的環境中安靜取食，從而不會爬離逃逸。該方法在非抗蟲棉材料的對照試驗中棉鈴蟲幼蟲平均死亡率均低于5%，從而證明了該方法對棉鈴蟲幼蟲的安全性。項目組通過生物測定和ELISA (酶聯免疫法)相結合 的方法對Bt棉花的抗蟲性進行了綜合的評價，研究表明，生測結果和ELISA檢測Bt毒蛋白的結果呈現高度一致。
權利要求
1.一種用于抗棉鈴蟲性生物測定的棉葉保鮮方法，包括棉葉摘取與處理、放入培養皿、接蟲、培養皿整理、皿內培養等步驟，其特征在于本方法具體步驟及技術要點為 a.將新鮮的棉葉摘下，留取葉柄I I.5cm ； b.將脫脂棉用營養液濕潤后，包裹在棉葉葉柄處，并使棉球不滴水； c.將脫脂棉包裹好的棉葉正面向上放入培養皿中； d.將待測的棉鈴蟲幼蟲接入到棉葉上； e.將PVC保鮮膜裁制成略大于培養皿的大小，將其包裹在培養皿上，使其平展，然后將培養皿蓋子蓋在已包裹好的培養皿上； f.用黑布覆在培養皿蓋上； g.在室溫下培養，直至生測。
2.如權利要求I所述的棉葉保鮮方法，其特征在于所述的營養液有效成分及濃度分別為硝酸鉀1.8-2. Og/L，硝酸銨1.5-1.8g/L、磷酸二氫鉀O. 15-0. 2g/L、7H20硫酸鎂.O.3-0. 4g/L、2H20 氯化鈣 O. 3-0. 5g/L。
3.如權利要求I所述的棉葉保鮮方法，其特征在于所述的營養液有效成分及濃度分別為硝酸鉀I. 9g/L、硝酸銨I. 65g/L、磷酸二氫鉀O. 17g/L、7H20硫酸鎂O. 37g/L、2H20氯化鈣.O.44g/L。
4.如權利要求I所述的棉葉保鮮方法，其特征在于所述的培養皿為聚苯乙烯培養皿。
全文摘要
一種用于抗棉鈴蟲性生物測定的棉葉保鮮方法。包括棉葉摘取與處理、放入培養皿、接蟲、培養皿整理、皿內培養等步驟，具體是用經營養液浸濕的脫酯棉將棉葉包裹后，放入聚苯乙烯培養皿，接蟲后遮蓋培養，直至進行生測而不需要更換棉葉和重新接蟲，棉葉保鮮效果可達一周以上。
文檔編號A01N3/00GK102939955SQ20121048797
公開日2013年2月27日 申請日期2012年11月15日 優先權日2012年11月15日
發明者丁瑞豐, 李號賓, 劉建, 徐遙, 李海強, 王冬梅, 田立文 申請人:新疆農業科學院植物保護研究所