專利名稱：中華草蛉幼蟲人工飼料及殺蟲化合物對草蛉幼蟲毒性影響的測定方法
技術領域：
本發明涉及中華草蛉幼蟲人工飼料及殺蟲化合物對草蛉幼蟲毒性影響的測定方法。
背景技術：
草嶺如普通草嶺(Chrysoperlacarnea Stephens)和中華草嶺(ChrysoperlasinicaTjeder)的地理分布非常廣泛，是多種糧食和經濟作物上重要的捕食性昆蟲天敵。另夕卜，由于草蛉容易在實驗室條件下規模化飼養，便宜試驗操作，因此其常作為指示性生物被用于殺蟲劑和轉基因抗蟲作物的環境風險評價。當評價殺蟲劑和轉基因抗蟲作物對非靶標生物影響時，首要的工作是研究殺蟲劑或轉基因抗蟲作物表達的外源殺蟲蛋白(以下統稱殺蟲化合物)對所選非靶標生物的直接毒性。開展這樣的試驗工作，需要發展一種可以把殺蟲化合物直接飼喂給受試生物的生物測定體系。當前，評價殺蟲化合物對草蛉成蟲(如c. carnea和C. sinica)直接毒性影響的試驗體系已經建立起來，并已成功的用于轉基因抗蟲植物環境風險評價試驗中。然而，截至目前，還沒有一種適合于評價殺蟲化合物對草蛉幼蟲直接毒性的試驗方法。因此，通過建立一種合適的草蛉幼蟲人工飼料，基于該人工飼料發展一個可以快速評價殺蟲化合物對草蛉幼蟲潛在毒性影響的試驗模型是十分必要的。
發明內容
本發明的目的是提供一種中華草蛉幼蟲人工飼料及能夠快速評價殺蟲化合物對中華草蛉潛在毒性的測定方法。本發明提供的殺蟲蛋白對中華草蛉幼蟲潛在毒性影響的測定方法，利用混入了需要檢測的殺蟲化合物的人工飼料飼喂中華草蛉幼蟲,通過中華草蛉幼蟲生長發育指標評價所述殺蟲化合物對中華草蛉幼蟲的潛在毒性，所述人工飼料含有如下有效成分
權利要求
1.殺蟲化合物對草蛉幼蟲毒性影響的測定方法，利用混入了需要檢測的殺蟲化合物的人工飼料飼喂中華草蛉幼蟲，通過中華草蛉幼蟲生長發育指標評價所述殺蟲化合物對中華草蛉幼蟲的潛在毒性，其特征在于，所述人工飼料含有如下有效成分
2.根據權利要求1所述的測定方法，其特征在于，所述有效成分的用量如下
3.根據權利要求1所述的測定方法，其特征在于，所述有效成分的用量如下
4.根據權利要求1所述的測定方法，其特征在于，所述人工飼料采用如下方法配置而成1)將煙酸、泛酸鈣、核黃素、鹽酸吡哆辛、鹽酸硫胺、葉酸、生物素、氰鈷胺素按照上述重量份配置維生素復合液，并配置蜂蜜水，4°C冰箱保存；2)將新鮮牛肉和新鮮豬肝加入重量為兩者重量和的O. 2-1. 5倍的蒸餾水，置于攪拌機中粉碎攪拌成糊狀，得到組分A，3)稱取蔗糖、酵母粉、山梨酸鉀、抗壞血酸、硫酸鏈霉素、頭孢霉素和麥胚油，然后與維生素復合液及蜂蜜水混合，把最終混合液加入組分A ；4)取雞蛋黃置于容器中，加入重量為其O. 4-1. 2倍的蒸餾水，攪拌均勻，在水浴鍋中80-90°C加熱2-4分鐘，邊加熱邊攪拌，得到組分B ；5)待組分B冷至室溫，與組分A混合物混合，使各有效組分的用量如表所示，并且水的總加入量為15-70重量份，即得所述人工飼料。
5.根據權利要求1所述的測定方法，其特征在于，所述人工飼料采用如下方法配置而成 1)配置維生素復合液，其中，每IOOml水中含有煙酸O.31g，泛酸鈣1.31g，核黃素O. 15g，鹽酸吡哆辛O. 08g,鹽酸硫胺O. 08g,葉酸O. 08g,生物素O. 06g,氰鈷胺素O. 0006g,并配置40%蜂蜜水，4°C冰箱保存； 2)稱取新鮮牛肉和新鮮豬肝，加入適量蒸餾水，置于攪拌機中粉碎攪拌，得到組分A; 3)稱取蔗糖、酵母粉、山梨酸鉀、抗壞血酸、硫酸鏈霉素、頭孢霉素和麥胚油溶解于適量蒸餾水中，然后與維生素復合液及40%的蜂蜜水混合，把最終混合液加入組分A ； 4)取新鮮雞蛋一個，敲一小洞，待蛋清自然流盡，稱取一定量雞蛋黃置于IOOml小燒杯中，加入適量蒸餾水，攪拌均勻，在水浴鍋中85°C加熱3分鐘，邊加熱邊攪拌，得到組分B ; 5)待組分B冷至室溫，與組分A混合物混合，充分攪拌均勻，_20°C保存； 6)飼料提供給草蛉幼蟲前需要制成膠囊將石蠟封口膜剪成Icm方塊，拉伸3倍后，包上飼料，把封口捏緊，制成膠囊，即成所述人工飼料， 其中，以上各組分中的相對含量如下
6.根據權利要求1-5任一項所述的測定方法，其特征在于，所述中華草蛉幼蟲生長發育指標選自中華草蛉幼蟲的存活率、歷期和體重的一種或多種。
7.根據權利要求6所述的測定方法，其特征在于，該方法采用無機化合物砷酸二氫鉀36 μ g/g飼料或有機化合物雪花凝聚素I重量％飼料作為陽性對照化合物；純飼料處理作為陰性對照。
8.根據權利要求1-5任一項所述的測定方法，其特征在于，該方法包括如下步驟 1)配制所述人工飼料； 2)把需要檢測的殺蟲蛋白溶入蒸餾水，直接加入人工飼料，充分攪勻； 3)采用無機化合物砷酸二氫鉀36μ g/g飼料或有機化合物雪花凝聚素I重量％飼料作為陽性對照化合物，純飼料處理作為陰性對照； 4)將初孵中華草蛉幼蟲單頭接入飼養容器中，每個處理至少設35個重復，飼料每兩天更換一次；5)每天上午固定時點和晚上固定時點觀察草蛉生長發育情況，記錄死亡率、七天幼蟲體重和幼蟲生長歷期，直至成蟲羽化； 6)通過比較陰性對照組、處理組和陽性對照組中華草蛉幼蟲的生長發育參數測定受試殺蟲化合物對草蛉幼蟲的潛在毒性。
9.一種中華草蛉幼蟲人工飼料，其特征在于，該中華草蛉幼蟲人工飼料為權利要求1-6任一項所述的測定方法中用到的所述人工飼料。
全文摘要
本發明涉及中華草蛉幼蟲人工飼料及殺蟲化合物對草蛉幼蟲毒性影響的測定方法，該方法利用混入了需要檢測的殺蟲化合物的人工飼料飼喂中華草蛉幼蟲，通過中華草蛉幼蟲生長發育指標評價所述殺蟲化合物對中華草蛉幼蟲的潛在毒性。中華草蛉幼蟲生長發育指標可以選自中華草蛉幼蟲的生存率、歷期和體重的一種或多種。該方法采用無機化合物砷酸二氫鉀36μg/g飼料和/或有機化合物雪花凝聚素1重量％飼料作為陽性對照化合物；純飼料處理作為陰性對照。利用本發明提供的中華草蛉幼蟲人工飼料，草蛉幼蟲的生存率、幼蟲體重、生長歷期都顯示出明顯的劑量-效應關系，本發明提供的測定方法具有較高的靈敏度，適合用于評價外源殺蟲蛋白對中華草蛉的潛在毒性。
文檔編號A23K1/18GK103039720SQ20121049232
公開日2013年4月17日 申請日期2012年11月27日 優先權日2012年11月27日
發明者李云河, 胡龍, 彭于發 申請人:中國農業科學院植物保護研究所