專利名稱：一種竹子組培外植體獲取方法
技術領域：
本發明屬于植物無性繁殖技術領域，涉及一種竹子栽培外植體的獲取方法。
背景技術：
竹類植物是我國森林資源的重要組成部分，具有生長快、成材早、產量高、用途廣等特點，同時具有良好的水源涵養和水土保持功能，是經濟效益和生態效益具佳的植物。竹類植物很少開花，不易結實，所以基本不用種子育苗，而是采用無性繁殖的方法繁殖小苗。種子育苗主要有扦插繁殖和組織培養等方法。但是，扦插繁殖由于母竹利用率低，對原有竹林資源破壞較大，繁殖率低等缺陷，很難大批量生產育苗；而組培繁育對繁殖材料利用率高，對母竹成長影響極小，繁殖系數高，苗木整齊，可實現工廠化育苗，能滿足種子生產的需要。 目前，幾種主要竹子已成功利用組織培養快繁技術進行育苗和造林，所使用的外植體種類有種胚、節芽、枝條莖段等，其中枝條莖段是利用最多的外植體材料。獲取優良的外植體，是竹子組織培養成功的基礎。但是，直接從現有的老竹叢中采集枝條，存在操作不便、枝條質量參差不齊、枝條利用率低、滅菌困難和誘導成功率低，阻礙了竹子工廠化育苗的步伐。而在苗圃里營建采穗圃，有針對性和目的性地管理母竹，不但操作方便，還能很好地控制母竹生長，所得枝條質量好，滅菌容易，叢芽萌發能力強。目前采用該技術方案的相關專利和文獻未見報道。
發明內容
本發明的目的是針對現有竹子組培中獲取外植體的不足，提供一種污染率低、誘導率高、成本低及操作簡單的竹子組培外植體的獲取方法。本發明是這樣是實現的
一種竹子組培外植體獲取方法，特征在于通過在苗圃營建采穗圃，目標化、精細化管理采穗母竹，控制枝條選擇范圍，以獲取優良的竹子組培外植體，其獲取方法包括母竹種植、母竹管理、枝條選擇和修剪、莖段消毒和修剪等工序，其具體步驟如下
(1)母竹種植于2 3月選擇經過測定的優良竹叢分蔸種植于裝有基質的容器中；
(2)母竹管理定期施肥、修剪，視情況斷根；
(3)枝條選擇和修剪從母竹上剪取半木質化枝條，剪去葉子，修剪成莖段；
(4)莖段消毒和修剪先后使用洗潔精、自來水、酒精、升汞和無菌水清洗、消毒莖段，最后再次修剪莖段，獲取組培無菌外植體。以上所述的母竹種植方法是容器規格為口徑50 80cm,高50 60cm,基質成分是表土 10份、木糠3 5份、腐熟有機肥I 2份，種植株行距為0. 7 ImXO. 7 I. 3m。以上所述的母竹管理方法是8 10月把當年生的母竹于距離地面I. 3 I. Sm處截斷，分別于3 4月和6 7月給每叢母竹埋施100 200g復合肥，6 8月和翌年2 3月剪除母竹上的老枝條，當新筍生長過于旺盛時，于2 3月沿容器四周松土斷根I次。
以上所述的枝條選擇方法是每年5 11月多次剪取枝條，選擇直徑0. I 0.4cm、具有3 6個節的枝條；莖段修剪方法是每3個節剪作一個莖段，剪口分別距離兩端節
0.I 0. 3cm，剝除兩端節的竹籜，保留中間節的竹籜。以上所述的莖段消毒方法是將莖段置于容器中，先用0. 2 0. 5%的洗潔精溶液浸泡10 20min，用紗布反復擦拭莖段外表，用自來水沖洗15 30min，再用75 80%酒精溶液浸泡莖段15 20min,用無菌水清洗干凈,最后用0. I 0. 15%升萊溶液浸泡莖段8 15min,用無菌水清洗干凈。以上所述的莖段修剪方法是在超凈工作臺上，先把莖段兩端剪除，只保留長度為
1.5 3. Ocm的中間帶節芽部分，然后剝除竹籜。本發明相對于現有的技術具有以下優點
I.本發明的竹子組培外植體獲取方法，將母竹種植在容器里，種植基質是半輕型基質，同時在8 10月把當年生的母竹進行截頂矮化，易于掌握水肥條件，很好地將母竹徑粗控制在I 3cm,確保母竹下半部分具有節芽,方便剪取枝條。2.本發明的竹子組培外植體獲取方法，每年修剪母竹節上老枝條2次，促進新枝生長，延長了枝條剪取時間，一年在5 11月能夠多次剪取枝條，提高了枝條利用率。3.本發明的竹子組培外植體獲取方法，每3個節作一莖段，剝去莖段兩端節的竹籜，保留中間節的竹籜，即可防止消毒過程中污水和藥液進入準備接種莖段的竹腔內，又能很好地保護準備接種莖段的節芽不受傷害。4.本發明的竹子組培外植體獲取方法，在用洗潔精溶液浸泡時，用綿質紗布反復擦拭莖段外表面，可以徹底除掉莖段上的小刺毛，初步清除莖段表面的雜質和真菌。5.本發明的竹子組培外植體獲取方法可獲取數量多、質量好、污染率低、叢芽萌發能力強的外植體，而且操作簡單、方便，生產成本低，適用于竹子工廠化育苗。
具體實施例方式通過下面給出的具體實施例，可以進一步清楚地了解本發明，但它們不是對本發明的限定。實施例I :青皮竹組培外植體獲取
于2月中旬選擇經過測定的優良的青皮竹叢分蔸種植于裝有基質的容器中，容器規格為口徑50cm，高60cm，容器里的基質成分是表土 10份、木糠3份、腐熟有機肥I份，竹叢種植株行距為0. 7mX0. 7m。種植6個月后將母竹在距離地面I. 3nTl. 5m處截斷，給每叢母竹埋施10(Tl20g復合肥，6月和翌年2月剪除母竹上的老枝條，當新筍生長過于旺盛時，在容器四周松土斷根I次。每年在5 11月從母竹上多次剪取半木質化枝條，選擇直徑為0. ro. 3cm、具有:T6個節的枝條，剪去葉子。將每3個節剪作一個莖段，剪口分別距離兩端節0. ro. 3cm，剝除兩端節的竹籜，保留中間節的竹籜。將莖段置于容器中，先用0. 2%的洗潔精溶液浸泡20min，用紗布反復擦拭莖段外表，用自來水沖洗15min，再用75%酒精溶液浸泡莖段20min，用無菌水清洗干凈，最后用0. 1%升汞溶液浸泡莖段15min，用無菌水清洗干凈。將消毒后的莖段放在超凈工作臺上，先把莖段兩端剪除，只保留長度為I. 5 2. Ocm的中間帶節芽部分，然后剝除竹籜，最終得到了竹子組培的外植體。實施例2 :吊絲竹組培外植體獲取于3月上旬選擇經過測定的優良的吊絲竹叢分蔸種植于裝有基質的容器中，容器規格為口徑80cm，高50cm，容器里的基質成分是表土 10份、木糠5份、腐熟有機肥2份，竹叢種植株行距為I. OmX I. 3m。當年9月上旬將母竹在距離地面I. 5nTl. 8m處截斷，在6月給每叢母竹埋施10(T200g復合肥，7月和翌年3月剪除母竹上的老枝條，當新筍生長過于旺盛時，在3月沿容器四周松土斷根I次。每年在5 11月多次從母竹上剪取半木質化枝條，選擇直徑為0. 2^0. 4cm、具有4飛個節的枝條，剪去葉子。將每3個節剪作一個莖段，剪口分別距離兩端節0. ro. 3cm，剝除兩端節的竹籜，保留中間節的竹籜。將莖段置于容器中，先用0. 5%的洗潔精溶液浸泡l Omin，用紗布反復擦拭莖段外表，用自來水沖洗30min，再用80%酒精溶液浸泡莖段15min，用無菌水清洗干凈，最后用0. 15%升汞溶液浸泡莖段8min，用無菌水清洗干凈。將消毒后的莖段放在超凈工作臺上，先把莖段兩端剪除，只保留長度為2. 0
3.Ocm的中間帶節芽部分，然后剝除竹籜，最終得到了竹子組培的外植體。實施例3 :粉單竹組培外植體獲取
于3月中旬選擇經過測定的優良的粉單位竹叢分蔸種植于裝有基質的容器中，容器規格為口徑70cm，高55cm，容器里的基質成分是表土 10份、木糠4份、腐熟有機肥I份，竹叢種植株行距為0. 8mX I. Om。種植7個月后將母竹在距離地面I. 3nTl. 5m處截斷，在3月給每叢母竹埋施10(T200g復合肥，8月和翌年3月剪除母竹上的老枝條，當新筍生長過于旺盛時，在2月沿容器四周松土斷根I次。每年在5 11月多次從母竹上剪取半木質化枝條，選擇直徑為0. ^0. 3cm、具有3飛個節的枝條，剪去葉子。將每3個節剪作一個莖段，剪口分別距離兩端節0. ro. 3cm，剝除兩端節的竹籜，保留中間節的竹籜。將莖段置于容器中，先用0. 4%的洗潔精溶液浸泡15min，用紗布反復擦拭莖段外表，用自來水沖洗20min，再用78%酒精溶液浸泡莖段18min，用無菌水清洗干凈，最后用0. 1%升汞溶液浸泡莖段15min，用無菌水清洗干凈。將消毒后的莖段放在超凈工作臺上，先把莖段兩端剪除，只保留長度為2. 0 2. 5cm的中間帶節芽部分，然后剝除竹籜，，最終得到了竹子組培的外植體。實施例4 :花吊絲竹組培外植體獲取
于2月下旬選擇經過測定的優良的花吊絲竹叢分蔸種植于裝有基質的容器中，容器規格為口徑60cm，高55cm，容器里的基質成分是表土 10份、木糠3份、腐熟有機肥2份，竹叢種植株行距為0. 8mX I. 3m。10月把當年生的母竹在距離地面I. 5nTl. 8m處截斷，在7月給每叢母竹埋施10(T200g復合肥，7月和翌年3月剪除母竹上的老枝條，當新筍生長過于旺盛時，在2月沿容器四周松土斷根I次。每年在5 11月多次從母竹上剪取半木質化枝條，選擇直徑為0. ro. 4cm、具有4飛個節的枝條，剪去葉子。將每3個節剪作一個莖段，剪口分別距離兩端節0. ro. 3cm，剝除兩端節的竹籜，保留中間節的竹籜。將莖段置于容器中，先用0. 3%的洗潔精溶液浸泡20min，用紗布反復擦拭莖段外表，用自來水沖洗15min，再用76%酒精溶液浸泡莖段20min，用無菌水清洗干凈，最后用0. 12%升汞溶液浸泡莖段lOmin，用無菌水清洗干凈。將消毒后的莖段放在超凈工作臺上，先把莖段兩端剪除，只保留長度為
2.0 3. Ocm的中間帶節芽部分，然后剝除竹籜，最終得到了竹子組培的外植體。
權利要求
1.一種竹子組培外植體獲取方法，通過在苗圃營建采穗圃，目標化、精細化管理采穗母竹，控制枝條選擇范圍，以獲取優良的竹子組培外植體，其獲取方法包括母竹種植、母竹管理、枝條選擇和修剪、莖段消毒和修剪等工序，其具體步驟如下(1)母竹種植于2 3月選擇經過測定的優良竹叢分蔸種植于裝有基質的容器中；(2)母竹管理定期施肥、修剪，視情況斷根控；(3)枝條選擇和修剪從母竹上剪取半木質化枝條，剪去葉子，修剪成莖段；(4)莖段消毒和修剪先后使用洗潔精、自來水、酒精、升汞和無菌水清洗、消毒莖段，最后再次修剪莖段，獲取組培外植體。
2.根椐權利要求I所述的一種竹子組培外植體獲取方法，其特征在于所述的母竹種植方法是容器規格為口徑50 80cm，高50 60cm，基質成分是表土 10份、木糠3 5份、 腐熟有機肥I 2份，種植株行距為O. 7 ImXO. 7 I. 3m。
3.根椐權利要求I所述的一種竹子組培外植體獲取方法，其特征在于所述的母竹管理方法是8 10月把當年生的母竹于距離地面I. 3 I. Sm處截斷，分別于3 4月和6 7月給每叢母竹埋施100 200g復合肥，6 8月和翌年2 3月剪除母竹上的老枝條，當新筍生長過于旺盛時，于2 3月沿容器四周松土斷根I次。
4.根椐權利要求I所述的一種竹子組培外植體獲取方法，其特征在于所述的枝條選擇方法是每年5 11月多次剪取枝條，選擇直徑O. I O. 4cm、具有3 6個節的枝條；莖段修剪方法是每3個節剪作一個莖段，剪口分別距離兩端節O. I O. 3cm，剝除兩端節的竹籜，保留中間節的竹籜。
5.根椐權利要求I所述的一種竹子組培外植體獲取方法，其特征在于所述的莖段消毒方法是將莖段置于容器中，先用O. 2 O. 5%的洗潔精溶液浸泡10 20min，用紗布反復擦拭莖段外表，用自來水沖洗15 30min，再用75 80%酒精溶液浸泡莖段15 20min， 用無菌水清洗干凈，最后用O. I O. 15%升汞溶液浸泡莖段8 15min，用無菌水清洗干凈。
6.根椐權利要求I所述的一種竹子組培外植體獲取方法，其特征在于所述的莖段修剪方法是在超凈工作臺上，先把莖段兩端剪除，只保留長度為I. 5 3. Ocm的中間帶節芽部分，然后剝除竹籜。
全文摘要
本發明公開了一種竹子組培外植體的獲取方法，包括選擇經過測定的優良竹叢分蔸種植于容器中，8～10月把當年生的母竹于距離地面1.3～1.8m處截斷，定期施肥、修剪，視情況斷根控制生長，每年5～11月多次從母竹上剪取半木質化枝條，剪去葉子，修剪成莖段，使用洗潔精、自來水、酒精、升汞和無菌水清洗、消毒莖段，最后再次修剪莖段，獲得用于竹子組織培養的無菌外植體。本發明可獲取數量多、質量好、污染率低、叢芽萌發能力強的外植體，而且操作簡單、方便，生產成本低，適用于青皮竹、粉擔竹和花吊絲竹的工廠化育苗，具有較好的經濟效益、社會效益和生態效益。
文檔編號A01G1/00GK102972176SQ20121049692
公開日2013年3月20日 申請日期2012年11月29日 優先權日2012年11月29日
發明者郝海坤, 黃大勇, 黃開勇, 陳琴, 黃志玲, 李立杰, 徐振國 申請人:廣西壯族自治區林業科學研究院