專利名稱：一種新型牡丹快速繁殖培養基的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種培養基的新配方，具體的說是一種新型牡丹快速繁殖培養基(LPM)。
背景技術：
牡丹是我國特產的傳統名花，其花色艷美，氣味芬芳，具有較高的觀賞價值；根皮是貴重的中藥材，有清熱涼血、活血祛瘀和補血等作用。牡丹傳統的繁殖方式包括有性繁殖中的種子繁殖，無性繁殖中的分株繁殖、壓條繁殖、嫁接繁殖等。但這些繁殖方式時間長，而且只能在生長季節繁殖，牡丹苗體生長量小、繁殖速度慢，種苗數量不足是限制牡丹大面積擴大生產的重要瓶頸。組織培養是快速繁殖植物種苗的有效方法，篩選合適的牡丹快繁培養基是擴大生產的最有效途徑，牡丹組織培養始于1983年，之后國內外進行了大量研究，到目前為止，牡丹組培的一些關鍵環節還沒有徹底攻克，特別是牡丹專用培養基的研究沒有報道。而使用現有的MS、B5、N6、WPM培養基來培養牡丹試管苗生長困難，尤其是生根難，而且根的質量細小，移栽困難，從而大大嚴重限制了牡丹的商品化生產。
發明內容
本發明要解決的技術問題是:提供一種新型牡丹快速繁殖培養基，能夠有效的解決牡丹種苗繁殖系數低，種苗生根難，根質量細小和移栽困難的問題，可以為牡丹規模化生產提供大批量的牡丹種苗。為了實現上述目的，本發明采用的技術方案是:一種新型牡丹快速繁殖培養基，包括大量元素、微量元素、鐵鹽和有機物，
所述大量元素由 300-1200 mg/L NH4NO3^ 1400 mg/L KNO3>150 mg/L CaCl2.2H20、150mg/L MgSO4.7H20 和 400-800 mg/L KH2PO4 組成；
所述微量元素由 0.83 mg/L ΚΙ,6.2 mg/L H3BO3Ul.2 mg/L MnSO4.4Η20、8.6 mg/LZnSO4.7Η20、0.025 mg/L CuSO4.5H20 和 0.025 mg/L CoCl2.6H20 組成；
所述鐵鹽由 27.85 mg/L FeSO4.7H20 和 37.25 mg/L Na2-EDTA.2H20 組成；
所述有機物由0.5 mg/L煙酸、0.5 mg/L鹽酸批B多醇、I mg/L鹽酸硫胺素、2 mg/L甘氨酸、60-90 g/L蔗糖和6-7 g/L瓊脂組成；
所述培養基余量為蒸餾水。所述培養基的pH值為5.8。本發明帶來的有益效果為: 本發明通過對MS培養基進行大幅度的系統改良，得到的LPM培養基特別適合牡丹的組織培養，快繁的牡丹幼苗生長健壯，繁殖系數高，生根粗壯，數量多活力強，移栽成活率高達85%以上。本發明中采用KH2PO4的濃度為400-800 mg/L,優選為650 mg/L,這是因為牡丹組織培養是幼小的外植體快速生長，形成愈傷和幼苗的過程，細胞代謝加強，膜系統功能不斷完善，膜磷脂系統擴大需要大量磷酸根的供應，與MS培養基相比，較大幅度提高KH2PO4的濃度對提高牡丹組織培養過程中外植體的生活力，提高代謝活性，加快苗體生長有顯著作用。同時，與MS培養基相比，本發明亦大幅降低KNO3濃度，KNO3的濃度為1400 mg/L,主要是降低其中N03_濃度，一方面是由于N03_是液泡膜H+-ATPase的專一抑制劑，高濃度的N03_離子則抑制液泡膜H+-ATPase的活性，導致細胞質堿化作用的抑制，結果不利于細胞的生長過程；另一方面，牡丹組織對硝態氮比較敏感，高濃度的硝態氮對牡丹組織生長不利。本發明LPM培養基中NH4NO3用量為300-1200 mg/L，優選為750-1200 mg/L，這是因為牡丹組培過程中銨態氮對牡丹組織的生長十分有利，濃度過小牡丹試管苗生長慢而且細弱，但濃度過大試管苗不長甚至會死亡，因此這個濃度范圍是最合適的。本發明中MgSO4.7H20濃度為150mg/L，MnSO4.4H20濃度為11.2mg/L時牡丹幼苗生長更為健壯。本發明中鹽酸硫胺素的濃度為I mg/L，這是因為硫胺素是輔羧化酶的輔酶，低水平的硫胺素會導致輔羧化酶活性下降，糖代謝受阻，從而影響整個組織機體代謝過程。選擇鹽酸硫胺素的濃度為I mg/L，可提高輔羧化酶水平，從而提高了牡丹組培苗的糖代謝活性，有利于牡丹苗的生長。同時，也是增加牡丹組培過程中光強的加強光合作用的基礎。本發明中除去了 MS培養基中的Na2MoO4.2H20，原因是Na2MoO4.2H20是植物細胞酸性磷酸酶的專一抑制劑，牡丹細胞組織再建過程，膜系統功能加強，膜磷脂的代謝加強是膜系統重建和功能穩定的基礎，培養基中除去Na2MoO4.2H20后，能夠提高磷酸酶活性，有利于牡丹組織細胞快速分裂和細胞體積增大過程中膜系統的重建。本發明中加大培養基中的蔗糖濃度，由MS培養基中的30 g/L升高到60-90 g/L，優選為85 g/L,能夠有效的降低培養基的水勢，顯著地抑制組培苗的玻璃化和褐化現象的發生；同時調節培養基的碳氮比，保障能量的有效供應。
具體實施例方式下面結合具體實施例對本發明作進一步的詳細說明，一種新型牡丹快速繁殖培養基，包括大量元素、微量元素、鐵鹽和有機物，
所述大量元素由 300-1200 mg/L NH4NO3'1400 mg/L KNO3>150 mg/L CaCl2.2H20、150mg/L MgSO4.7H20 和 400-800 mg/L KH2PO4 組成，KH2PO4 的濃度優選為 650 mg/L, NH4NO3 的濃度優選為750-1200 mg/L ；
所述微量元素由 0.83 mg/L KI,6.2 mg/L H3BO3Ul.2 mg/L MnSO4.4Η20、8.6 mg/LZnSO4.7Η20、0.025 mg/L CuSO4.5Η20 和 0.025 mg/L CoCl2.6H20 組成；
所述鐵鹽由 27.85 mg/L FeSO4.7H20 和 37.25 mg/L Na2-EDTA.2H20 組成；
所述有機物由0.5 mg/L煙酸、0.5 mg/L鹽酸批B多醇、I mg/L鹽酸硫胺素、2 mg/L甘氨酸、60-90 g/L蔗糖和6-7 g/L瓊脂組成，蔗糖濃度優選為85 g/L ；
所述培養基余量為蒸餾水。所述培養基的pH值為5.8。其用于牡丹組織培養的具體步驟為:
采集牡丹植株的腋芽、嫩葉和葉柄作為外植體，用75%酒精浸泡10秒，在0.1%升汞消毒10分鐘，再用無菌水清洗5次后，將外植體放在LPM培養基上(培養基中加入KT 0.1-0.5mg/L, BA 0.2-0.8 mg/L, GA 0-0.4 mg/L)進行無菌培養。培養接種2-3周后，外植體基部周圍逐漸愈傷組化，4-5周后，由愈傷組織分化出叢生芽。將叢生芽切割，在LPM培養基上(培養基中加入KT 0.1-0.5 mg/L, BA 0.2-0.8 mg/L，GA 0-0.4 mg/L)進行培養，經1_2個月，又產生愈傷組織及叢生芽。將新長出的叢生芽轉移到LPM培養基上(培養基中加入KT 0.2-0.8 mg/L，GA
0.2-0.8 mg/L)，培養I個月左右，將伸長的芽從基部切下放入50-200 mg/L IBA的溶液中處理2-3小時，然后再轉入含5 g/L活性炭的LPM培養基中，經25-35天，形成良好的根系，生根率達90%以上，效果明顯。當試管苗誘導出2-3條根，并長到3-4cm時可移栽。移栽前，在陽光充足處打開瓶蓋通風煉苗3-5天，取出植株后，用40°C溫水沖去瓊脂，移栽到中性土壤中。先用燒杯覆蓋，一周后逐步揭開燒杯通風鍛煉，澆水逐漸減少，兩周后小苗即可正常生長。移栽后60天存活率達85%以上。
權利要求
1.一種新型牡丹快速繁殖培養基，包括大量元素、微量元素、鐵鹽和有機物，其特征在于:所述大量元素由 300-1200 mg/L NH4NO3^ 1400 mg/L KNO3>150 mg/L CaCl2.2H20、150mg/L MgSO4.7H20 和 400-800 mg/L KH2PO4 組成； 所述微量元素由 0.83 mg/L ΚΙ,6.2 mg/L H3BO3Ul.2 mg/L MnSO4.4Η20、8.6 mg/LZnSO4.7Η20、0.025 mg/L CuSO4.5H20 和 0.025 mg/L CoCl2.6H20 組成；所述鐵鹽由 27.85 mg/L FeSO4.7H20 和 37.25 mg/L Na2-EDTA.2H20 組成； 所述有機物由0.5 mg/L煙酸、0.5 mg/L鹽酸批B多醇、I mg/L鹽酸硫胺素、2 mg/L甘氨酸、60-90 g/L蔗糖和6-7 g/L瓊脂組成； 所述培養基余量為蒸餾水。
2.如權利要求1所述的一種新型牡丹快速繁殖培養基，其特征在于:所述培養基的PH值 為5.8。
全文摘要
一種新型牡丹快速繁殖培養基，涉及一種培養基的新配方，該培養基由大量元素、微量元素、鐵鹽、有機物和蒸餾水組成，是在傳統MS培養基的基礎上大幅度改良而成，得到的新型牡丹快速繁殖培養基(LPM)特別適合牡丹的組織培養，快繁的牡丹幼苗生長健壯，繁殖系數高，生根粗壯，數量多活力強，移栽成活率高達85%以上。
文檔編號A01H4/00GK103168688SQ201310095518
公開日2013年6月26日 申請日期2013年3月25日 優先權日2013年3月25日
發明者史國安, 高雙成, 施江, 王世華, 李玉龍 申請人:河南科技大學