專利名稱：防治番茄黃化曲葉病毒病的生防菌株bf6及其應用的制作方法
技術領域：
本發明屬于農業微生物領域，涉及防治番茄黃化曲葉病毒病的生防菌株BF6及其應用。
背景技術：
番爺黃化曲葉病毒病由雙生病毒科(Geminiviridae)菜豆金色花葉病毒屬(Begomovirus)的番茄黃化曲葉病毒(TYLCV)引起。TYLCV最早于1939年在以色列約旦河一帶被發現，并于1964年被正式命名。在之后的30年間，該病毒迅速擴散到中東、地中海沿岸、非洲、歐洲、美洲、亞洲以及澳大利亞等眾多國家和地區。與其他病毒病相比，番茄黃化曲葉病毒病具有變異速度快 、擴展迅速、危害性強、治療難度大的特點，被稱為植物的“癌癥”，是番爺生產上的一種毀滅性病害。自20世紀90年代起，在我國云南、廣西、廣東、海南等地的煙草、番茄和南瓜等多種作物上相繼發生。近年來，該病在我國已逐步由南向北急速蔓延。現在除湖南，青海，黑龍江，甘肅等少數省份沒有發現該病毒病外，其余各地均有發生，給當地番茄生產造成了極其嚴重的損失。據不完全統計，目前我國番茄黃化曲葉病毒病的年發生面積超過6.7萬hm2，經濟損失超過20億元。生產中主要采用農業措施和化學防治等方法加以防治，成本高、效果不夠理想，甚至給環境來負面影響。培育抗病品雖然是防治番茄黃化曲葉病毒病的最好途徑，但是由于番茄黃化曲葉病毒病的抗性遺傳較復雜，加上具有商業價值的抗性材料有限，很難選育出抗性穩定的育種品系。而且現有抗病品種大部分具有地域性，不容易大范圍推廣。綜上所述，開發新的、更為高效和安全的微生物制劑控制番茄黃化曲葉病毒病的發生是提高社會生產總量的需要，同時更是農業安全及可持續發展的需要。
發明內容
本發明的目的是針對現有技術的上述不足，提供防治番茄黃化曲葉病毒病的生防菌株BF6。本發明的另一目的是提供該菌株制備的菌劑。本發明的又一目的是提供該菌株的應用。本發明的目的可通過如下技術方案實現:一種防治番茄黃化曲葉病毒病生防菌株BF6，經鑒定該菌屬于假單胞菌(Pseudomonas sp.),2013年I月31日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心,菌種保藏號為CGMCC N0.7238。用所述的防治番茄黃化曲葉病毒病生防菌株BF6制備的生防菌劑。所述的生防菌劑的制備方法:將所述的防治番茄黃化曲葉病毒病生防菌株BF6在LB培養液中30°C 200rpm振蕩培養24h，然后6000rpm離心lOmin，用滅菌水進行稀釋制成菌劑，成品菌劑中活菌總濃度為IX IO9-1X 101(lCFU/mL。
當然，利用所述的防治番茄黃化曲葉病毒病生防菌株BF6制備生防菌劑并不限于以上方法。凡是能夠大量培養BF6，且保持其抗番茄黃化曲葉病毒活性的方法均可用于制備本發明請求保護的生防菌劑。所述生防菌株BF6在防治番茄黃化曲葉病毒病及增產方面的應用。所述生防菌劑在防治番茄黃化曲葉病毒病及增產方面的應用。有益效果:本發明是專門針對番茄黃化曲葉病毒病開發的生防制劑。由于是生物制劑，完全沒有因化學農藥的使用所帶來的一系列問題，因而有利于番茄的綠色無公害生產，農民可以不用或減少其他化學農藥的用量，這不僅可為農民節省開支，而且減少化學藥劑的殘留，利國利民。溫室實驗表明:假單胞菌BF6防治番茄黃化曲葉病毒病效果顯著，可以達59.51%。同時大田試驗結果顯示，生防菌劑BF6能夠顯著降低番茄黃化曲葉病毒病的病害嚴重度，防效在50.79%-53.72%之間，該菌劑對番茄的增產效果在28%以上。生物樣品保藏信息BF6,假單胞菌Pseudomonas sp.,于2013年I月31日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址為北京市朝陽區北辰西路I號院3號中國科學院微生物研究所，菌種保藏號為CGMCC N0.7238。
具體實施例方式實施例1篩選方法:假單胞菌BF6由揚州市高郵市高郵鎮番茄大棚內番茄根圍土分離得至|J。用軟毛刷輕輕刷取附著在番茄根表的土壤，稱取3g加入27ml滅菌的0.85%NaCl中，180rmp搖床振蕩0.5h，靜置5min，得到10_1稀釋液，吸取上清液0.1mL依次稀釋，取10_4、10_5、10_6三個梯度的稀釋液各0.1mL涂于LB平板上，28° C培養48h，挑取單菌落接種到新鮮LB固體培養基，經反復轉接得到純化菌株。將純化后的菌株用40%甘油保存于-70° C超低溫冰箱中。鑒定方法:通過形態特征，生理生化實驗和16S rDNA序列分析對該菌株進行鑒定。形態學特征:革蘭氏陰性桿菌，不產芽孢，菌落光滑，無莢膜，有端鞭毛。主要生理生化特征: 表I
權利要求
1.一種防治番茄黃化曲葉病毒病生防菌株BF6，經鑒定該菌屬于假單胞菌(Pseudomonas sp.),2013年I月31日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心,菌種保藏號為CGMCC N0.7238。
2.用權利要求1所述的防治番茄黃化曲葉病毒病生防菌株BF6制備的生防菌劑。
3.權利要求2所述的生防菌劑的制備方法，其特征在于: 將權利要求1所述的防治番茄黃化曲葉病毒病生防菌株BF6在LB培養液中300C 200rpm振蕩培養24h，然后6000rpm離心lOmin，用滅菌水進行稀釋制成菌劑，成品菌劑中活菌總濃度為I X IO9-1 X 101QCFU/mL。
4.權利要求1所述生防菌株BF6在防治番茄黃化曲葉病毒病及增產方面的應用。
5.權利要求2所述生防菌劑在防治番茄黃化曲葉病毒病及增產方面的應用。
全文摘要
本發明屬于農業微生物領域，涉及防治番茄黃化曲葉病毒病的生防菌株BF6及其應用。生防菌株BF6，經鑒定該菌屬于假單胞菌(Pseudomonas sp.)，2013年1月27日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，菌種保藏號為CGMCC NO.7238。該菌株防治番茄黃化曲葉病毒病效果顯著，可以達59.51%。同時大田試驗結果顯示，生防菌劑BF6能夠顯著降低番茄黃化曲葉病毒病的病害嚴重度，防效在50.79%-53.72%之間，該菌劑對番茄的增產效果在28%以上。因此，該菌株及尤其制備的菌劑可在防治番茄黃化曲葉病毒病及增產方面應用。
文檔編號A01P1/00GK103215203SQ20131009748
公開日2013年7月24日 申請日期2013年3月25日 優先權日2013年3月25日
發明者劉紅霞, 郭堅華, 丁雪玲 申請人:南京農業大學