專利名稱：一種富硒、富鉻鐵皮石斛原球莖的培養方法
技術領域：
本發明涉及鐵皮石斛原球莖的培養方法，具體涉及一種富硒、富鉻鐵皮石斛原球莖的培養方法。
背景技術：
硒是人體和動物的一種必需微量元素，與機體健康密切相關，是一種強抗氧化劑，能將有毒的過氧化物還原為無害的物質，能分解過氧化氫，對細胞和組織有保護作用，使之免受過氧化物的損害，對細胞膜和細胞器(線粒體、微粒體、溶酶體)膜具有特殊的保護作用。早在上世紀50年代初，鉻就被認為在糖代謝中能起到一定作用，當時被稱為“葡萄糖耐量因子”。從體外和動物實驗中發現，鉻能改善胰島素抵抗，促使胰島素發揮最大的生物效應。動物實驗和臨床都證明，缺鉻可引發糖尿病，而補充足夠的鉻，可使糖尿病癥狀減輕、血糖控制平穩、減少降糖藥用量。有專家指出，糖尿病患者普遍缺鉻，因此，補鉻對防治糖尿病有利。據統計，我國主要作物中含硒量低于0.05 μ g/g的縣有785個，即約有2/3地區屬國際上公認的缺硒地區，約72%的人口需要科學補硒；目前我國20歲以上的糖尿病患者達2000萬以上，糖耐量低減病人不低于3000萬，而且還在不斷攀升，世界衛生組織預測，到2025年中國糖尿病人數將達5000萬。這就使富硒、富鉻產品形成了一個巨大的潛在市場。目前，國內一些發達城市的消費群體，尤其是南方一些城市正掀起一股補硒、補鉻的熱潮，尤其是對富硒、富鉻食品、保健品特別親睞。硒、鉻 不能通過人體合成，必需通過膳食攝入，而我國傳統的飲食結構中硒、鉻含量低，并不能滿足人體需求。營養學家推薦，正常人體硒攝入量為60 200 μ g/d，鉻為50 200 μ g/d。硒、鉻的低水平攝入對人體健康有著潛在的威脅，要保證人體健康，防治有關疾病，就應該有充足的硒、鉻攝入。植物是人類和動物獲取硒、鉻的主要來源。研究發現，有機化合物的營養作用要大于無機 化合物，植物來源要優于動物來源。目前，獲取有機硒、鉻的途徑主要是依靠植物轉化技術來實現，利用植物的生物轉化提高有機硒、鉻的含量，從而進入食物鏈供人和動物食用是目前的主要富硒技術。雖然硒、鉻保健功效顯著，但自然界中大多以無機態存在，攝入會產生一些副作用，而一般動植物食品中，有機硒、鉻的含量甚微，難以滿足人體需求，因此生物富集已成為人類對微量元素硒、鉻開發利用的重要手段。鐵皮石斛(Dendrobium candidum)是傳統名貴中草藥，唐代醫學經典《道藏》將其列為“中華九大仙草之首”，自唐宋以來，一直被列為皇室貢品。鐵皮石斛具有獨特的藥用價值，以其莖入藥，屬補益藥中的補陰藥，具有益胃生津、滋陰清熱之功效。含有豐富的石斛多糖，可增強機體免疫力、抗疲勞；鐵皮石斛對脾胃病中常見的致病菌幽門螺桿菌有較好的抑制作用，能促進胃液的分泌，促進胃排空助消化；鐵皮石斛有較好的護肝利膽作用，是治療各種肝膽病的要藥；鐵皮石斛能夠強筋健骨、潤滑關節、抵御風濕；鐵皮石斛可增強胰島素活性，顯著降低血糖水平；鐵皮石斛具有較強的抗腫瘤活性，還能減輕放、化療的副作用，提高生存質量，延長生存時間。此外，鐵皮石斛還有滋陰養目、滋養肌膚、抗衰老之功效。最近，鐵皮石斛原球莖正在進行新資源食品的申報，這必將使石斛市場進一步加溫。近年來，已經相繼開發出眾多的富硒、富鉻產品，如富硒玉米、富硒水果、富硒酵母、富硒黑木耳、富硒鐵皮石斛；富鉻酵母、富鉻黑小麥、富鉻蟲草等，不同生物生長條件不同，其微量元素富集培養方式也各不相同。鐵皮石斛本身具有栽培難度高，生長緩慢等特點，而硒、鉻元素對其生長又存在一些正面、及負面影響，所以目前研究較少，尤其是鐵皮石斛原球莖富硒、富鉻的研究，目前尚無報道。
發明內容
本發明的目的是克服上述技術的不足，而提供一種培養周期短、無污染、富集能力強、易于大規模生產的富硒、富鉻鐵皮石斛原球莖的培養方法。本發明的目的是通過如下技術方案來完成的。這種富硒、富鉻鐵皮石斛原球莖的培養方法，包括以鐵皮石 斛種子、莖尖或根尖為外植體進行原球莖的誘導、原球莖增殖培養，該方法具體步驟如下:(一)、原球莖的誘導培養(I)、種子為外植體的原球莖誘導培養:其培養基組成是在每IL的1/2MS培養基中含椰子汁IOOmL，蔗糖30g，瓊脂8g，pH5.6 5.8 ;選取成熟未開裂的鐵皮石斛蒴果，自來水沖洗表面污潰5min,無菌條件下,用75%的酒精消毒5 IOmin,然后用0.1 0.5%的升萊溶液消毒15 20min,最后用無菌水沖洗4 5次,并用無菌濾紙吸干水分；無菌條件下，用消過毒的刀片將果實剖開，用鑷子夾起一半果實，于培養瓶口輕輕抖動，將種子均勻播撒在1/2MS培養基表面；于251:，1500 20001ux光照強度，光照時間I 16h/d的條件下培養;(2)、莖尖或根尖為外植體的原球莖誘導培養:其誘導培養基組成是在每IL的1/2MS培養基中含椰子汁IOOmL,蔗糖30g，瓊脂8g，pH5.6 5.8 ;選取生長健壯的鐵皮石斛無菌苗，用無菌刀小心切取莖尖和根尖的分生組織，分別接入誘導培養基，于25°C，1500 20001ux光照強度,光照時間I 16h/d的條件下培養；(二)、原球莖的增殖培養:其增殖培養基組成是在每IL的1/2MS培養基中含椰子汁 1OOmL, NAA0.2mg, KTl.0mg,鹿糖 30g,亞硒酸鈉 0.3mg,三氯化鉻 0.35mg,瓊脂 8g,pH5.6 5.8 ;選取誘導培養30 40d、種胚萌發、芝麻粒大小的原球莖，將其轉接于增殖培養基中，每瓶約10顆；于25°C，1500 20001ux光照強度，光照時間I 16h/d的條件下培養。本發明的有益效果為:1、鐵皮石斛原球莖作為富硒、富鉻載體，整個過程均在溫室條件下進行，不受地區、季節及氣候限制，無污染，適合工廠化大規模生產；2、培養過程工藝簡單、易操作、周期短、后續投資少；3、鐵皮石斛原球莖增殖能力強、產量高、對微量元素富集率高(干品中有機硒2 5mg/kg，有機鉻4 6mg/kg) ;4、以鐵皮石斛原球莖為富集載體，將鐵皮石斛保健功效與微量元素硒、鉻的生理功能有機結合，使人們在服用鐵皮石斛的同時補充硒、鉻。
具體實施例方式下面通過具體實施方式
對本發明作進一步闡述，實施例將幫助更好地理解本發明，但本發明并不僅僅局限于下述實施例。—:溶液配制(I)大量元素母液:大量元素母液(5種):硝酸銨33g，硝酸鉀38g，氯化鈣8.Sg,七水硫酸鎂7.4g，磷酸氫二鉀3.4g，分別用蒸餾水配成IL溶液。(2)微量元素母液(I種):碘化鉀0.166g,高猛酸鉀4.46g,硫酸銅1.72g,氯化鈷
0.005g，硫酸錳4.46g，硫酸鋅1.72g，硼酸1.24g，蒸餾水配成IL溶液。(3)有機母液(I種):肌醇20g，煙酸0.lg，鹽酸吡哆醇0.lg，鹽酸硫胺素0.02g,甘氨酸0.4g，配成IL溶液。(4)鐵鹽 母液(I種):七水硫酸亞鐵5.56g，EDTA7.46g，用蒸餾水配成IL溶液。二:培養基配制(I) 1/2MS培養基:大量元素母液(5種)各5mL/L，微量元素母液10mL/L，有機母液10mL/L,鐵鹽母液10mL/L。(2)種子為外植體的原球莖誘導培養基:1/2MS培養基，椰子汁100mL/L，蔗糖30g/L，瓊脂 8g/L，pH5.6 5.8。(3)莖尖或根尖為外植體的原球莖誘導培養:1/2MS培養基，椰子汁100mL/L，蔗糖30g/L，瓊脂 8g/L，ρΗ5.6 5.8。(4)原球莖增殖培養基:1/2MS 培養基，椰子汁 100mL/L，NAA0.2mg/L, KTl.0mg/L,蔗糖30g/L，亞硒酸鈉200g/L，三氯化鉻180g/L，瓊脂8g/L，pH5.6 5.8。三:鐵皮石斛原球莖誘導及增殖方法取成熟未開裂的鐵皮石斛蒴果，自來水沖洗表面污潰5min，無菌條件下，用75%的酒精消毒5 IOmin,然后用0.1 0.5%的升萊溶液消毒15 20min,最后用無菌水沖洗4 5次，并用無菌濾紙吸干水分。無菌條件下，用消過毒的刀片將果實剖開，用鑷子夾起一半果實，于培養瓶口輕輕抖動，將種子均勻播撒在1/2MS培養基表面。于25°C，1500 20001ux光照強度,光照時間I 16h/d的條件下培養。選取誘導培養30 40d、種胚萌發、芝麻粒大小的原球莖，將其轉接于增殖培養基中，每瓶約10顆。于25°C，1500 20001UX光照強度，光照時間I 16h/d的條件下培養50 60d后可收獲。以上所述僅為本發明的較佳實施例，并不用以限制本發明，凡在本發明的原理和原則之內所做的任何修改、等同替換、改進等，均應包在本發明的保護范圍之內。
權利要求
1.一種富硒、富鉻鐵皮石斛原球莖的培養方法，其特征在于:包括以鐵皮石斛種子、莖尖或根尖為外植體進行原球莖的誘導、原球莖增殖培養，該方法具體步驟如下: (一)、原球莖的誘導培養 (1)、種子為外植體的原球莖誘導培養:其培養基組成是在每IL的1/2MS培養基中含椰子汁lOOmL，蔗糖30g，瓊脂8g，pH5.6 5.8 ;選取成熟未開裂的鐵皮石斛蒴果，自來水沖洗表面污潰5min,無菌條件下,用75%的酒精消毒5 IOmin,然后用0.1 0.5%的升萊溶液消毒15 20min,最后用無菌水沖洗4 5次,并用無菌濾紙吸干水分；無菌條件下，用消過毒的刀片將果實剖開，用鑷子夾起一半果實，于培養瓶口輕輕抖動，將種子均勻播撒在1/2MS培養基表面；于25°C，1500 20001ux光照強度，光照時間1 16h/d的條件下培養； (2)、莖尖或根尖為外植體的原球莖誘導培養:其誘導培養基組成是在每1L的1/2MS培養基中含椰子汁1OOmL,蔗糖30g，瓊脂8g，pH5.6 5.8 ;選取生長健壯的鐵皮石斛無菌苗，用無菌刀小心切取莖尖和根尖的分生組織，分別接入誘導培養基，于25°C，1500 20001ux光照強度，光照時間1 16h/d的條件下培養； (二)、原球莖的增殖培養:其增殖培養基組成是在每IL的1/2MS培養基中含椰子汁1OOmL, NAA0.2mg, KTl.0mg,鹿糖 30g,亞硒酸鈉 0.3mg,三氯化鉻 0.35mg,瓊脂 8g, pH5.6 .5.8 ;選取誘導培養30 40d、種胚萌發、芝麻粒大小的原球莖，將其轉接于增殖培養基中，每瓶約10顆；于25°C，1500 20001ux光照強度，光照時間1 16h/d的條件下培養。
全文摘要
本發明公開了一種富硒、富鉻鐵皮石斛原球莖的培養方法，包括以鐵皮石斛種子、莖尖或根尖為外植體進行原球莖的誘導、原球莖增殖培養，其增殖培養基組成是在每1L的1/2MS培養基中含椰子汁100mL，NAA0.2mg，KT1.0mg，蔗糖30g，亞硒酸鈉0.3mg，三氯化鉻0.35mg，瓊脂8g，pH5.6～5.8；選取誘導培養30～40d、種胚萌發、芝麻粒大小的原球莖，將其轉接于增殖培養基中，每瓶約10顆；于25℃，1500～2000lux光照強度，光照時間1～16h/d的條件下培養。本發明的有益效果為1、整個過程均在溫室條件下進行，不受地區、季節及氣候限制，無污染；2、培養過程工藝簡單、易操作、周期短、后續投資少；3、鐵皮石斛原球莖增殖能力強、產量高、對微量元素富集率高。
文檔編號A01H4/00GK103168691SQ20131010656
公開日2013年6月26日 申請日期2013年3月28日 優先權日2013年3月28日
發明者楊善巖, 王升貴, 狄志鴻, 李海龍 申請人:浙江亞林生物科技股份有限公司