一種郁金香花粉采集和貯藏的方法
【專利摘要】一種郁金香花粉采集和貯藏的方法，其特點是：在上午選擇含苞待放的大蕾期花苞，用手輕輕撥開花瓣，用鑷子采集花藥，花藥采集后放入適當大小塑料培養皿中，培養皿上蓋標明花粉采集日期、品種信息；再將采集好的花粉連同培養皿一起帶回室內，放入密閉玻璃箱中，玻璃箱底部放入干燥劑，干燥劑上方設置網狀隔板，將裝有花粉的培養皿放在網狀隔板上，經24小時后，脫水完成；最后將脫水后的花粉取出，將培養皿上蓋扣好放回干燥箱內，然后密封玻璃干燥箱，在室溫無陽光直射的條件下貯藏備用。本發明保險可靠，操作簡單，節省空間，解決了郁金香花粉在自然條件下無法較長時間保存，克服了郁金香育種過程中的花期不遇等問題。
【專利說明】一種郁金香花粉采集和貯藏的方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種花粉采集和貯藏的方法，特別是涉及一種采收和短期（30天）貯 藏郁金香花粉種質的郁金香花粉采集和貯藏的方法，屬于植物發育生物學領域。
【背景技術】
[0002] 郁金香（Tulipa)是百合科（Liliaceae)的重要的多年生球根花卉，既可以做鮮切 花，又可以做園林綠化和盆栽，用途非常廣泛。幾乎所有的郁金香品種自花授粉不結實，必 須進行人工授粉才能獲得理想的產量和高品質的種子。
[0003] 由于郁金香的自然花期非常短，平均在10天左右，所以花期不遇就成了郁金香育 種過程中遇到的最大的困難。在郁金香育種實踐中，郁金香花粉貯藏時間達到30天，就完 全可以滿足人工雜交授粉的需要。相關研究報道，植物花粉可以使用超低溫的方法貯藏，但 花粉貯藏條件要求較高、貯藏成本大。在需要使用花粉時，花粉復蘇過程較長，技術較復雜， 稍有不慎就會導致花粉褐變，使花粉蛋白酶喪失活性。使用這種方法貯藏的花粉無法做到 即取即用，使用效率較低。花粉貯藏是否成功最重要的指標是花粉活力，具有較高活力的花 粉是雜交育種工作取得成功的關鍵性前提條件。因此，怎樣在貯藏過程中延長花粉壽命，最 大限度地維持花粉活力對郁金香育種和科研具有重要意義。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的在于發明一種郁金香花粉采集和在常溫貯藏且有效維持花粉活力 的方法，以解決現有技術存在的郁金香育種過程中花期不遇的問題。
[0005] 本發明通過比較研究不同采收和貯藏條件對郁金香花粉萌發率的影響，形成包含 三個關鍵技術步驟的郁金香花粉短期高效貯藏技術。該技術操作簡單易行，節省空間，有效 維持了郁金香花粉的活力，在郁金香育種過程中具有重要的應用價值。
[0006] 本發明要實現上述目的所采用的技術方案如下。
[0007] 這種郁金香花粉采集和貯藏的方法，其特點是有以下步驟。
[0008] 1、花粉采集。
[0009] 在上午選擇含苞待放的大蕾期花苞，用手輕輕撥開花瓣，用鑷子采集花藥，花藥采 集后放入適當大小塑料培養皿中，培養皿上蓋標明花粉采集日期、品種等信息。
[0010] 最好將培養皿上蓋放在培養皿的下部，保持花粉處于敞開狀態。
[0011] 2、花粉脫水。
[0012] 將采集好的花粉連同培養皿一起帶回室內，放入長寬高分別為40CM*40CM*50CM 的密閉玻璃箱中，玻璃箱底部放入足量的干燥劑，干燥劑上方設置兩層網狀隔板，將裝有花 粉的培養皿放在網狀隔板上，經24小時后，脫水完成。
[0013] 3、花粉貯藏。
[0014] 將脫水后的花粉取出，迅速將培養皿上蓋扣好放回干燥箱內，然后密封玻璃干燥 箱。在室溫（18?25°C )，無陽光直射的條件下貯藏，備用，為確保干燥劑工作效果，要經常 檢查干燥劑，當干燥劑由藍轉變成粉色或粉紅色時，及時更換干燥劑。
[0015] 與現有技術相比，本發明的有益效果是。
[0016] 本發明的貯藏方法有效地保持了郁金香花粉活力，對于郁金香的育種、種質保 存、科學研究等方面具有重要的有益效果，具體表現如下。
[0017] (1)解決了郁金香雜交育種過程中遇到的花期不遇的問題，為新品種選育提供了 充足的花粉來源。
[0018] (2)為沒有長期貯藏花粉條件的單位和野外場所，提供了一種可靠的短時間花粉 貯藏方法，然后運回具有長期貯藏條件的單位進行長期貯藏，保障了從花粉采集到調運過 程中花粉的安全性，為郁金香種質保存提供了一條新的途徑。
[0019] (3)本貯藏方法投資小，操作簡單，能在很小的空間里貯藏大量的花粉，并可借鑒 用于保存其它種質資源，有著廣泛的實用價值。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0020] 圖 Ia -圖 Ie 為藏濕度對 Pax、Lle de france、Cantata、Bellona 和 princeps 5個郁金香品種的花粉萌發率的影響。
[0021] 圖2a和圖2b為顯微鏡觀察郁金香花粉萌發情況，其中圖2a不適合雜交育種的花 粉萌發情況，圖2b適合用于雜交育種的花粉萌發情況。
[0022] 圖3為郁金香花粉采集和貯藏的流程示意圖。 具體實施方案
[0023] 下面結合具體實例對本發明的技術方案做詳細介紹。
[0024] 實施例1。
[0025] ( -）實驗方法。
[0026] 1、花粉米集：本專利以 Pax、Lie de france、Cantata、Bellona 和 princeps 5 個 郁金香品種為研究材料，采集含苞待放的大蕾期花苞，輕輕撥開花瓣，用鑷子收集花藥，采 用培養皿扣蓋和不扣蓋兩種采集方式，按不同的濕度保存花粉，并定期進行檢測。
[0027] 2、花粉處理方法。
[0028] (1)花粉扣蓋和不扣蓋處理：在上午選擇含苞待放的大蕾期花苞，用手輕輕撥開 花瓣，用鑷子采集尚未散粉的花藥。花藥采集后分成兩份，分別放入直徑6厘米的塑料培養 皿中。培養皿上蓋標明花粉采集日期、品種等信息，然后將其中一份培養皿上蓋放在培養皿 的下部，保持花粉處于敞開狀態，另一份培養皿上蓋直接扣上，保持密封狀態。供試花粉全 都采集完畢后，帶回室內，放入干燥箱中（干燥箱預先放入硅膠干燥劑，吸濕后干燥劑由藍 色變成粉紅色，此時更換新的干燥劑)，干燥箱放置于室溫（18°C?25°C )無直射光的條件 下貯藏。經24小時后檢測花粉活力（0天)，以后每隔5天檢測一次，即從貯藏之日起第0 天、5天、10天、15天、20天、25天、30天進行測定。
[0029] (2)花粉貯藏濕度的梯度處理：在上午選擇含苞待放的大蕾期花苞，用手輕輕撥 開花瓣，用鑷子采集尚未散粉的花藥。花藥采集后放入直徑6厘米的塑料培養皿中。培養 皿上蓋標明花粉采集日期、品種等信息，然后將培養皿上蓋放在培養皿的下部，保持花粉處 于敞開狀態。在實驗室進行花粉活力檢測（〇天)，然后把花粉平均分成4份，分別置于空氣 相對濕度30 %、50 %、70 %、90 %的密閉人工氣候箱中，在黑暗、室溫（18 °C?25 °C )條件下 貯藏，分別于第1天、5天、10天、15天、20天、25天測定花粉萌發率。
[0030] (3)花粉活力測定：本試驗采用固體培養基培養花粉。培養基的配方為：蔗糖100 g/L、瓊脂5g/L、生物酸0. 02 g/L、PH值為5. 8。用棉簽將花粉均勻地點播在培養基上，在常 溫條件下培養24h。在顯微鏡下觀察花粉的萌發情況。花粉萌發率為已萌發的花粉數除以 單個視野總觀測的花粉數乘以100 %，每個處理設3次重復(觀測3個視野)。
[0031] (二）結果與分析。
[0032] 1、不同花粉采集方式對郁金香花粉萌發率的影響。
[0033] 從表1可以看出，不同花粉采集方式對郁金香花粉貯藏后萌發率的影響非常顯 著。經過24小時后，采用扣蓋的方法采集的花粉活力約為采用敞開狀態采集的花粉活力的 一半，貯藏5天后萌發率從0天的24. 5%-30. 5%下降到5%以下，已經不能在育種中應 用。貯藏10天后，花粉完全失去活力。相反，采用沒有扣蓋的方法采集的花粉活力經貯藏 后一直保持較高的萌發率，花粉貯藏30天后，花粉的萌發率依然可達20%左右，Pax品種 花粉的萌發率達到30. 6%，完全能夠滿足育種的要求。
[0034] 2、不同貯藏濕度對郁金香花粉萌發率的影響。
[0035] 在不同貯藏濕度下花粉萌發率存在很大差異（圖Ia-圖le)，在高濕度條件下 花粉迅速失去活力，隨著濕度的降低，花粉維持活力的時間也越長。如相對濕度90%時，室 溫貯藏5天后，花粉就失去了育種的價值（圖2a);當相對濕度30%時，室溫貯藏25天后，各 試驗品種的花粉萌發率仍然高于5% (圖2b)，可以在育種上使用。
[0036] 采集方法和貯藏濕度都與花粉活力保持時間有密切的聯系，采花粉時立刻扣上培 養皿的上蓋，嚴重降低了花粉的萌發率；低濕度條件有利于郁金香花粉的保存。
[0037] 根據以上結論提出本發明郁金香花粉采集和貯藏的流程示意（圖3):選擇含苞待 放的大蕾期花苞，用手輕輕撥開花瓣，用鑷子采集尚未散粉的花藥。采集的郁金香花藥放入 塑料培養皿內，培養皿上蓋標明花粉采集日期、品種等信息，然后將培養皿上蓋放在培養皿 的下部，保持花粉處于敞開狀態。放入裝有足量干燥劑的玻璃干燥箱中，脫水24小時后，扣 上培養皿的上蓋，在溫度18?25°C，無陽光直射的室內保存，即用即取。
[0038] 本發明給出的這種貯藏方法保險可靠，操作簡單，節省空間，解決了郁金香花粉在 自然條件下無法較長時間保存，克服了郁金香育種過程中的花期不遇等問題。
[0039] 表1不同花粉采集方式對郁金香花粉貯藏后萌發率的影響
【權利要求】
1. 一種郁金香花粉采集和貯藏的方法，其特征在于有以下步驟： 1) 花粉采集： 在上午選擇含苞待放的大蕾期花苞，用手輕輕撥開花瓣，用鑷子采集花藥，花藥采集后 放入適當大小塑料培養皿中，培養皿上蓋標明花粉采集日期、品種信息； 2) 花粉脫水： 將采集好的花粉連同培養皿一起帶回室內，放入密閉玻璃箱中，玻璃箱底部放入干燥 齊U，干燥劑上方設置網狀隔板，將裝有花粉的培養皿放在網狀隔板上，經24小時后，脫水完 成； 3) 花粉貯藏： 將脫水后的花粉取出，迅速將培養皿上蓋扣好放回干燥箱內，然后密封玻璃干燥箱，在 室溫（18?25°C )，無陽光直射的條件下貯藏，備用，為確保干燥劑工作效果，要經常檢查干 燥劑，當干燥劑由藍轉變成粉色或粉紅色時，及時更換干燥劑。
2. 根據權利要求1所述郁金香花粉采集和貯藏的方法，其特征在于步驟1花粉采集時 將培養皿上蓋放在培養皿的下部，保持花粉處于敞開狀態。
3. 根據權利要求1所述郁金香花粉采集和貯藏的方法，其特征在于步驟2花粉脫水時 的玻璃箱底部放入足量的干燥劑，干燥劑上方設置兩層網狀隔板。
4. 根據權利要求1所述郁金香花粉采集和貯藏的方法，其特征在于步驟3花粉貯藏時 花粉的貯藏濕度不應大于30%。
【文檔編號】A01D91/04GK104322216SQ201310579879
【公開日】2015年2月4日 申請日期:2013年11月19日 優先權日:2013年11月19日
【發明者】屈連偉, 李生龍, 岳銘鑒, 趙興華, 李洋, 裴新輝, 張艷秋, 崔楠楠, 崔玥晗, 吳海紅 申請人:遼寧省農業科學院園藝分院