一種組織培養長穗火炬花的方法
【專利摘要】本發明涉及一種組織培養長穗火炬花的方法，摘取長穗火炬花小芽洗凈后利用芽誘導培養基進行培養，培養得到的帶芽愈傷組織放入增殖培養基中分化增殖，再進行不定芽培養及生根培養，最后通過煉苗與移栽技術獲得長穗火炬花植株。與現有技術相比，本發明通過組織培養技術，能夠提高結實率，利用選擇的芽誘導培養基、增殖培養基、壯苗培養基、生根培養基在不同的培養階段提供不同的營養成分，從而最大程度上保持原有的母本性狀，并且在煉苗與移栽步驟時的移栽成活率可以達到90％。
【專利說明】一種組織培養長穗火炬花的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及植物組培技術，尤其是涉及一種組織培養長穗火炬花的方法。
【背景技術】
[0002]長穗火炬花是百合科火炬花屬多年生草本植物。株高80~120厘米，莖直立。總狀花序著生數百朵筒狀小花，呈火炬形，花冠橘紅色，花期6~7月。喜溫暖，宜生長于疏松肥沃的沙壤土中。挺發的花莖高高擎起火炬花般的花序，壯麗可觀，適合布置多年生混合花境和在建筑物前配置，叢植于草坪之中或植于假山石旁，用作配景，也可作切花。長穗火炬花比一般火炬花花序更長，但結實率很低，分株慢，因此需要開發組培技術，提高苗木繁殖速度和苗的整齊度并保持原有的母本性狀，實現育苗工廠化，目前，長穗火炬花的組培報道尚未見。
【發明內容】
[0003]本發明的目的就是為了克服上述現有技術存在的缺陷而提供一種移栽成活率可以達到90%的組織培養長穗火炬花的方法。
[0004]本發明的目的可以通過以下技術方案來實現: [0005]一種組織培養長穗火炬花的方法，采用以下步驟:
[0006](I)芽誘導培養
[0007]摘取長穗火炬花小芽，洗凈后2h用75v/v%的乙醇浸泡30s、lwt%。升萊浸泡15min、無菌水沖洗5-6次，然后吸干表面水份，取嫩芽基部切成Icm長，接種于芽誘導培養基上，控制培養溫度為24-28°C，光照為70-100ymol/ms，進行芽誘導培養；
[0008](2)芽分化增殖
[0009]嫩芽接種于芽誘導培養基上5周后芽基部開始膨大并出現黃綠色突起，3周后可見明顯的愈傷組織繼續培養I個月，切下帶芽愈傷組織放入增殖培養中，控制培養溫度為24-28°C，光照為70-100 μ mol/ms進行增殖培養，不定芽生長迅速并無玻璃化的不良現象；
[0010](3)不定芽壯苗培養
[0011]誘導出的叢生芽每叢有2-3株可以伸長，其余處于矮化狀態，將其分成小叢或單芽后，放入壯苗培養基，控制培養溫度為24-28°C，光照為70-100 μ mol/ms進行壯苗培養，不定芽迅速伸長，20天后可以長到2-3cm ；
[0012]⑷生根培養
[0013]取2_3cm的小植株，轉接入生根培養基中，控制培養溫度為24_28 V，光照為70-100 μ mol/ms進行誘導生根，10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后長至3_4cm ；
[0014](5)煉苗與移栽
[0015]生根培養20-30天，根系長至l-2cm，選擇根系發達生長健壯的無菌苗，室內開瓶煉苗5天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后，移栽室外即可。[0016]所述的芽誘導培養基的基礎成分為蔗糖20_40g/L，瓊脂3_8g/L，營養成分為MS+6-BA1.0-5.0mg/L+NAA0.1-0.5mg/L,芽誘導培養基的 pH 值為 5.5-6。
[0017]所述的芽誘導培養基的營養成分優選MS+6-BA3mg/L+NAA0.3mg/L。
[0018]所述的增殖培養基的基礎成分為蔗糖20_40g/L，瓊脂3_8g/L，營養成分為MS+6-BA1.0-3.0mg/L+NAA0.1-0.3mg/L，增殖培養基的 pH 值為 5.5-6。
[0019]所述的增殖培養基的營養成分優選MS+6BAlmg/L+NAA0.lmg/L。
[0020]所述的壯苗培養基的基礎成分為蔗糖20_40g/L，瓊脂3_8g/L，營養成分為MS+6-BA0.5-2.0mg/L+NAA0.1-0.2mg/L，壯苗培養基的 pH 值為 5.5-6。
[0021]所述的壯苗培養基的營養成分優選MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.lmg/L。
[0022]所述的生根培養基的基礎成分為蔗糖20_40g/L，瓊脂3_8g/L，營養成分為MS+NAA0.1-0.5mg/L+IBAl.0-5.0mg/L,生根培養基的 pH 值為 5.5-6。
[0023]所述的生根培養基的營養成分優選MS+NAA0.3mg/L+IBA3.0mg/L。
[0024]與現有技術相比，本發明通過組織培養技術，能夠提高結實率，利用選擇的芽誘導培養基、增殖培養基、壯苗培養基、生根培養基在不同的培養階段提供不同的營養成分，從而最大程度上保持原有的母本性狀，并且在煉苗與移栽步驟時的移栽成活率可以達到90%。
【具體實施方式】
[0025]下面結合具體實施例對本發明進行詳細說明。
[0026]實施例1
[0027]—種組織培養長穗火炬花的方法，采用以下步驟:
[0028](I)芽誘導培養:摘取長穗火炬花小芽，用自來水沖洗2h后于超凈工作臺上，用75%的乙醇浸泡30s, 1%。升萊浸泡15min,無菌水沖洗5_6次,無菌濾紙吸干表面水份,取嫩芽基部切成Icm長，接種于芽誘導培養基上，該培養基的基礎成分為蔗糖20g/L，瓊脂3g/L，營養成分為MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.lmg/L, pH值為5.5，控制培養溫度為24°C，光照為100 μ mol/ms,進行芽誘導培養；
[0029](2)芽分化增殖:嫩芽接種于芽誘導培養基上5周后芽基部開始膨大，出現黃綠色突起，3周后可見明顯的愈傷組織，培養I個月，切下帶芽愈傷組織放入增殖培養中，該培養基的基礎成分為蔗糖20g/L，瓊脂3g/L，營養成分為MS+6-BAlmg/L-+NAA0.lmg/L, pH值為5.5，控制培養溫度為24°C，光照為100 μ mol/ms，進行增殖培養，基部愈傷組織比較多，但不影響不定芽的增殖，不定芽生長迅速并無玻璃化等不良現象，在該培養中生長發育良好;
[0030](3)不定芽壯苗培養:誘導出的叢生芽每叢只有2-3株可以伸長，其余處于矮化狀態，分成小叢或單芽后，放入壯苗培養基中，該培養基的基礎成分為蔗糖20g/L，瓊脂3g/L,營養成分為MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.lmg/L, pH值為5.5，控制培養溫度為24°C，光照為100 μ mol/ms,不定芽迅速伸長,20天后可以長到2_3cm ；
[0031](4)生根培養:取2-3cm的小植株，轉接入生根培養基中，該培養基的基礎成分為蔗糖20g/L，瓊脂3g/L，營養成分為MS+NAA0.lmg/L+IBAl.0mg/L,控制培養溫度為24°C，光照為100 μ mol/ms進行誘導生根。10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后可以長至3_4cm ；
[0032](5)煉苗與移栽:生根培養20天左右，根系長至l_2cm時，選擇根系發達生長健壯的無菌苗，室內開瓶煉苗5天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后，即可移栽室外，給予肥水管理，移栽成活率為90%。
[0033]實施例2
[0034]一種組織培養長穗火炬花的方法，采用以下步驟:
[0035](1)芽誘導培養:摘取長穗火炬花小芽，用自來水沖洗2h后于超凈工作臺上，用75%的乙醇浸泡30s, 1%。升萊浸泡15min,無菌水沖洗5_6次,無菌濾紙吸干表面水份,取嫩芽基部切成Icm長，接種于芽誘導培養基上，該培養基的基礎成分為蔗糖25g/L，瓊脂4g/L,營養成分為MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L, pH值為5.7，控制培養溫度為25°C，光照為90 μ mol/ms,進行芽誘導培養:
[0036](2)芽分化增殖:嫩芽接種于芽誘導培養基上5周后芽基部開始膨大，出現黃綠色突起，3周后可見明顯的愈傷組織，培養I個月，切下帶芽愈傷組織放入增殖培養中，該培養基的基礎成分為蔗糖25g/L，瓊脂4g/L，營養成分為MS+6-BA2mg/L-+NAA0.2mg/L, pH值為
5.7，控制培養溫度為25°C，光照為90 μ mol/ms，進行增殖培養，基部愈傷組織比較多，但不影響不定芽的增殖，不定芽生長迅速并無玻璃化等不良現象，在該培養中生長發育良好；
[0037](3)不定芽壯苗培養:誘導出的叢生芽每叢只有2-3株可以伸長，其余處于矮化狀態，分成小叢或單芽后，放入壯苗培養基中，該培養基的基礎成分為蔗糖25g/L，瓊脂4g/L,營養成分為MS+6-BAlmg/L+NAA0.lmg/L, pH值為5.7，控制培養溫度為25 V (，光照為90 μ mol/ms,不定芽迅速伸長,20天后可以長到2_3cm ；
[0038](4)生根培養:取2-3cm的小植株，轉接入生根培養基中，該培養基的基礎成分為蔗糖25g/L，瓊脂4g/L，營養成分為MS+NAA0.2mg/L+IBA2.0mg/L,控制培養溫度為24°C，光照為100 μ mol/ms進行誘導生根。10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后可以長至3_4cm ；
[0039](5)煉苗與移栽:生根培養25天左右，根系長至l_2cm時，選擇根系發達生長健壯的無菌苗，室內開瓶煉苗5天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后，即可移栽室外，給予肥水管理，移栽成活率為90%。
[0040]實施例3
[0041]一種組織培養長穗火炬花的方法，采用以下步驟:
[0042](1)芽誘導培養:摘取長穗火炬花小芽，用自來水沖洗2h后于超凈工作臺上，用75%的乙醇浸泡30s, 1%。升萊浸泡15min,無菌水沖洗5_6次,無菌濾紙吸干表面水份,取嫩芽基部切成Icm長，接種于芽誘導培養基上，該培養基的基礎成分為蔗糖30g/L，瓊脂6g/L,營養成分為MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L, pH值為5.8，控制培養溫度為25°C，光照為80 μ mol/ms,進行芽誘導培養；
[0043](2)芽分化增殖:嫩芽接種于芽誘導培養基上5周后芽基部開始膨大，出現黃綠色突起，3周后可見明顯的愈傷組織，培養I個月，切下帶芽愈傷組織放入增殖培養中，該培養基的基礎成分為蔗糖30g/L，瓊脂6g/L，營養成分為MS+6-BA2mg/L-+NAA0.2mg/L, pH值為
5.8，控制培養溫度為25°C，光照為80 μ mol/ms，進行增殖培養，基部愈傷組織比較多，但不影響不定芽的增殖，不定芽生長迅速并無玻璃化等不良現象，在該培養中生長發育良好；[0044](3)不定芽壯苗培養:誘導出的叢生芽每叢只有2-3株可以伸長，其余處于矮化狀態，分成小叢或單芽后，放入壯苗培養基中，該培養基的基礎成分為蔗糖30g/L，瓊脂6g/L，營養成分為MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.lmg/L, pH值為5.8，控制培養溫度為25°C，光照為80 μ mol/ms,不定芽迅速伸長,20天后可以長到2_3cm ；
[0045](4)生根培養:取2-3cm的小植株，轉接入生根培養基中，該培養基的基礎成分為蔗糖30g/L，瓊脂6g/L，營養成分為MS+NAA0.3mg/L+IBA3.0mg/L,控制培養溫度為25°C，光照為80 μ mol/ms進行誘導生根。10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后可以長至3-4cm，并且根系粗壯，須根眾多，生根率為100% ；
[0046](5)煉苗與移栽:生根培養25天左右，根系長至l_2cm時，選擇根系發達生長健壯的無菌苗，室內開瓶煉苗5天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后，即可移栽室外，給予肥水管理，移栽成活率為90%。
[0047]實施例4
[0048]一種組織培養長穗火炬花的方法，采用以下步驟:
[0049](I)芽誘導培養:摘取長穗火炬花小芽，用自來水沖洗2h后于超凈工作臺上，用75%的乙醇浸泡30s, I %。升萊浸泡15min,無菌水沖洗5_6次,無菌濾紙吸干表面水份,取嫩芽基部切成Icm長，接種于芽誘導培養基上，該培養基的基礎成分為蔗糖40g/L，瓊脂8g/L,營養成分為MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L, pH值為6，控制培養溫度為28 V，光照為70 μ mol/ms,進行芽誘導培養；
[0050](2)芽分化增殖:嫩芽接種于芽誘導培養基上5周后芽基部開始膨大，出現黃綠色突起，3周后可見明顯的愈傷組織，培養I個月，切下帶芽愈傷組織放入增殖培養中，該培養基的基礎成分為蔗糖40g/L，瓊脂8g/L，營養成分為MS+6-BA3mg/L-+NAA0.3mg/L，pH值為6，控制培養溫度為28°C，光照為70ymol/mS，進行增殖培養，基部愈傷組織比較多，但不影響不定芽的增殖，不定芽生長迅速并無玻璃化等不良現象，在該培養中生長發育良好；
[0051](3)不定芽壯苗培養:誘導出的叢生芽每叢只有2-3株可以伸長，其余處于矮化狀態，分成小叢或單芽后，放入壯苗培養基中，該培養基的基礎成分為蔗糖40g/L，瓊脂Sg/L,營養成分為MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L, pH值為5.5，控制培養溫度為28°C，光照為70 μ mol/ms,不定芽迅速伸長,20天后可以長到2_3cm ；
[0052](4)生根培養:取2-3cm的小植株，轉接入生根培養基中，該培養基的基礎成分為40g/L，瓊脂8g/L，營養成分為MS+NAA0.5mg/L+IBA5.0mg/L,控制培養溫度為28 V，光照為70 μ mol/ms進行誘導生根。10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后可以長至3_4cm ；
[0053](5)煉苗與移栽:生根培養30天左右，根系長至l-2cm時，選擇根系發達生長健壯的無菌苗，室內開瓶煉苗5天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后，即可移栽室外，給予肥水管理，移栽成活率為90%。
【權利要求】
1.一種組織培養長穗火炬花的方法，其特征在于，該方法采用以下步驟: (1)芽誘導培養 摘取長穗火炬花小芽，洗凈后2h用75v/v%的乙醇浸泡30s、lwt%。升萊浸泡15min、無菌水沖洗5-6次，然后吸干表面水份，取嫩芽基部切成Icm長，接種于芽誘導培養基上，控制培養溫度為24-28°C，光照為70-100 μ mol/ms，進行芽誘導培養； (2)芽分化增殖 嫩芽接種于芽誘導培養基上5周后芽基部開始膨大并出現黃綠色突起，3周后可見明顯的愈傷組織繼續培養I個月，切下帶芽愈傷組織放入增殖培養中，控制培養溫度為24-28°C，光照為70-100 μ mol/ms進行增殖培養，不定芽生長迅速并無玻璃化的不良現象； 3)不定芽壯苗培養 誘導出的叢生芽每叢有2-3株可以伸長，其余處于矮化狀態，將其分成小叢或單芽后，放入壯苗培養基，控制培養溫度為24-28°C，光照為70-100 μ mol/ms進行壯苗培養，不定芽迅速伸長，20天后可以長到2-3cm; 4)生根培養 取2-3cm的小植株，轉接入生根培養基中，控制培養溫度為24-28 °C，光照為70-100 μ mol/ms進行誘導生根，10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后長至3_4cm ； (5)煉苗與移栽 生根培養20-30天，根系長至l-2cm，選擇`根系發達生長健壯的無菌苗，室內開瓶煉苗5天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后，移栽室外即可。
2.根據權利要求1所述的一種組織培養長穗火炬花的方法，其特征在于，所述的芽誘導培養基的基礎成分為蔗糖20-40g/L，瓊脂3-8g/L，營養成分為MS+6-BA1.0-5.0mg/L+NAA0.1-0.5mg/L,芽誘導培養基的pH值為5.5-6。
3.根據權利要求2所述的一種組織培養長穗火炬花的方法，其特征在于，所述的芽誘導培養基的營養成分優選MS+6-BA3mg/L+NAA0.3mg/L。
4.根據權利要求1所述的一種組織培養長穗火炬花的方法，其特征在于，所述的增殖培養基的基礎成分為蔗糖20-40g/L，瓊脂3-8g/L，營養成分為MS+6-BA1.0-3.0mg/L+NAA0.1-0.3mg/L，增殖培養基的 pH 值為 5.5-6。
5.根據權利要求4所述的一種組織培養長穗火炬花的方法，其特征在于，所述的增殖培養基的營養成分優選MS+6BAlmg/L+NAA0.lmg/L。
6.根據權利要求1所述的一種組織培養長穗火炬花的方法，其特征在于，所述的壯苗培養基的基礎成分為蔗糖20-40g/L，瓊脂3-8g/L，營養成分為MS+6-BA0.5-2.0mg/L+NAA0.1-0.2mg/L,壯苗培養基的 pH 值為 5.5-6。
7.根據權利要求6所述的一種組織培養長穗火炬花的方法，其特征在于，所述的壯苗培養基的營養成分優選MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.lmg/L。
8.根據權利要求1所述的一種組織培養長穗火炬花的方法，其特征在于，所述的生根培養基的基礎成分為蔗糖20-40g/L，瓊脂3-8g/L，營養成分為MS+NAA0.1-0.5mg/L+IBA1.0-5.0mg/L,生根培養基的 pH 值為 5.5-6。
9.根據權利要求8所述的一種組織培養長穗火炬花的方法，其特征在于，所述的生根培養基的營養成分優選MS+N`AA0.3mg/L+IBA3.0mg/L。
【文檔編號】A01H4/00GK103766219SQ201410024946
【公開日】2014年5月7日 申請日期:2014年1月20日 優先權日:2014年1月20日
【發明者】黃建榮, 申瑞雪, 陳建華, 沈勤 申請人:上海上房園藝有限公司, 上海上房園林植物研究所有限公司