一種大環內酯類化合物的制備方法與作為農業殺菌劑的應用的制作方法
【專利摘要】一種大環內酯類化合物的制備方法與作為農業殺菌劑的應用，制備時先在菌種培養基中對真菌Cochliobolus?lunatus(TA26-46)進行菌種培養，再在發酵培養基中對上述真菌進行發酵培養；將所得發酵物以甲醇浸泡，減壓濃縮后得甲醇粗提物；將甲醇粗提物懸浮于水中，經乙酸乙酯萃取減壓濃縮后得乙酸乙酯相浸膏；對乙酸乙酯相浸膏進行色譜分離，得到上述十四元二羥基苯甲酸大環內酯類化合物。本發明提供一種農業殺菌劑，其特征在于以式I十四元二羥基苯甲酸大環內酯類化合物或其鹽作為有效成分，用于防治致病疫霉菌Phytophthora?infestans和霜霉病菌Plasrnopara?viticola引起的農業病害。
【專利說明】一種大環內酯類化合物的制備方法與作為農業殺菌劑的應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種十四元二羥基苯甲酸大環內酯類化合物的制備方法與作為農業殺菌劑的應用。
【背景技術】
[0002]真菌病原病害是嚴重危害農業生產的自然災害之一，對農業生產造成巨大損失，全世界的農作物由此平均每年減少產量約500Mt。真菌病原病害不僅可以引起農作物產量的減少，而且還嚴重威脅到農產品的質量安全及其國際貿易。例如，由致病疫霉菌Phytophthora infestans引起的晚疫病是危害馬鈴薯生產的最嚴重的病害,在我國馬鈴薯種植地均有發生，使得馬鈴薯產量嚴重降低；而霜霉病菌Plasmopara viticola是葡萄生產中的重要病害，近年來嚴重蔓延，造成病葉焦枯早落，影響長勢、品質和產量。更為嚴重的是，這兩種農業致病菌對其他農作物也造成嚴重損害，如番茄、黃瓜、甘蔗、大豆等。殺菌劑的使用是防治農業病害的一種經濟有效的方法，目前的殺菌劑種類主要有三唑類、酰胺類、嘧啶胺類、甲氧基丙烯酸酯類等。然而，殺菌劑的過度使用也帶來一系列問題，如殺菌劑毒性對人類的危害，以及抗藥性導致的殺菌劑殘留增加及病害再猖獗等，因此急需開發高效、低毒、低殘留和環境友好型殺菌劑。海洋高鹽、高壓、低溫、寡營養、低光照等特殊環境使海洋微生物能夠產生大量結構 新穎、活性獨特的次級代謝產物，其中有些化合物具有殺菌活性；且海洋微生物可以大規模發酵，不受資源限制，為開發農業殺菌劑提供了重要來源。目前尚未見從海洋微生物中開發成功的針對農業病原真菌的殺菌劑。
【發明內容】
[0003]本發明的目的在于提供一種來源于海洋真菌的十四元二羥基苯甲酸大環內酯類化合物的制備方法與作為農業殺菌劑的應用，它能滿足現有技術的上述需求。菌種保藏信息:保藏單位名稱:中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；保藏單位地址:北京市朝陽區北辰西路I號院3號，中國科學院微生物研究所；保藏日期:2014年01月09日；保藏編號:CGMCC8698 ;分類命名:Cochliobolus lunatus。
[0004]一種式I結構的十四元二羥基苯甲酸大環內酯類化合物或其鹽:
[0005]
【權利要求】
1.一種式I結構的十四元二羥基苯甲酸大環內酯類化合物的制備方法，其特征在于包括以下步驟:先在菌種培養基中對真菌Cochliobolus lunatus (TA26-46)進行菌種培養，再在發酵培養基中對上述真菌進行發酵培養；將所得發酵物以甲醇浸泡2-6次，減壓濃縮后得甲醇粗提物；將甲醇粗提物懸浮于水中，經乙酸乙酯萃取減壓濃縮后得乙酸乙酯相浸膏；對乙酸乙酯相浸膏進行色譜分離，得到式I化合物；其中式I化合物結構為:
2.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于所述的菌種培養基含有葡萄糖0.1 % -5.0 %、酵母膏 0.01 % -2 %、蛋白胨 0.01 % -2 %、瓊脂 0.1 % -3.0 %、粗海鹽0.05% _5%，其余為水，上述百分含量均為重量百分比；培養溫度為5-45°C，培養時間為3-15 天。
3.如權利要求1-2任一項所述的制備方法，其特征在于所述的發酵培養基為大米固體培養基，每1000mL的錐形瓶中，加入大米50-200g、粗海鹽0.l_5g、蛋白胨0.l_2g、水50-200mL，培養溫度為5_45°C，培養時間為7_40天。
4.如權利要求1-3任一項所述的制備方法，其特征在于所述的正相硅膠柱色譜分離中采用的固定相為200~300目硅膠，流動相為0-100%的乙酸乙酯-石油醚以及0-100%的甲醇-乙酸乙酯混合溶劑；所述的高效液相色譜分離中采用的色譜柱為ODS C18柱Kromasil, 7 μ m，150 X 7.8mm,流動相為45% -65%的甲醇-水混合溶劑；上述混合溶劑百分比均為體積百分比。
5.—種農業殺菌劑，其特征在于包括權利要求1制備的式I化合物或其鹽作為有效成分。
6.權利要求1制備的式I化合物或其鹽在防治致病疫霉菌Phytophthorainfestans和霜霉病菌Plasmopara viticola引起的農業病害中的應用。
【文檔編號】A01N43/22GK103865963SQ201410102959
【公開日】2014年6月18日 申請日期:2014年3月13日 優先權日:2014年3月13日
【發明者】王長云, 邵長倫, 劉慶艾, 顧玉誠 申請人:中國海洋大學