一種貴州半蒴苣苔的組織培養快速繁殖方法
【專利摘要】一種貴州半蒴苣苔的組織培養快速繁殖方法，包括如下步驟：取貴州半蒴苣苔頂芽作為外植體進行消毒；將消毒后的外植體置于MS基本培養基中誘導得到叢生芽；將所述叢生芽置于MS壯苗培養基中進行壯苗培養得到健壯植株；將所述健壯植株置于MS生根培養基中培養得到完整的帶根苗；取完整的帶根苗進行煉苗后移植于石灰巖土壤生長一個半月，再移栽至大田。采用本發明所述方法得到的種苗健壯、成活率高，可在短期內提供大量貴州半蒴苣苔的優質種苗，對貴州半蒴苣苔資源保護和可持續利用具有重要價值。
【專利說明】一種貴州半蒴苣苔的組織培養快速繁殖方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種植物繁殖方法，特別是一種貴州半蒴苣苔組織培養快速繁殖方 法。
【背景技術】
[0002] 貴州半蒴苣苔，為苦苣苔科植物貴州半蒴苣苔(ZfeffiiAoea carahriei ra_r. pawciflerris W. T. Wang & Z. Y. Li)。多年生草本。莖上升，無毛，不分枝或分枝，花期8- 10月，果期10-12月。分布于我國廣西、廣東、福建、湖南等省。生于山谷林下石上，海拔 250-1500m。全草入藥，微酸、澀，涼。清熱解毒。用于治療癰、燙傷、跌打損傷、刀傷出血，腹 水。
[0003] 貴州半蒴苣苔花色褐紫色或淡綠色，具有較高的園林觀賞和一定的藥用價值，一 般生于山谷林下石上或陰處，林緣溝旁或巖石上、溝邊石縫中，石灰巖山地陰濕處，對環境 要求比較苛刻，加之近年來環境資源遭到嚴重破壞，使貴州半蒴苣苔植株數量大大減少。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的是采用生物技術組織培養方法，有效快速地提高貴州半蒴苣苔種苗 的繁殖速度和質量，在短期內就能提供大量貴州半蒴苣苔的優質種苗。
[0005] 本發明采取的技術方案是： 1、一種組織培養快速繁殖方法，其特征在于該方法包括以下步驟： (1) 外植體的選擇與消毒：取貴州半蒴苣苔頂芽作為外植體，依次用2%洗潔精水溶液 浸泡5-10min、線狀自來水沖洗10-15min、添加了 2-3滴吐溫-20的100 mlO. 1%升汞消毒 7-9min、無菌水沖洗3-5次，最后用滅菌濾紙吸去表面水分，剪成長約lcm長的外植體，其中 無菌水為經高壓滅菌的蒸餾水， (2) 頂芽分化獲得叢生芽培養：將步驟（1)得到的外植體接種到MS培養基中，在培養 溫度為23-26°C，光照強度15001ux，光照時間為10-12小時/天的條件下培養25-30天，頂 芽分化后獲得叢生芽，其中MS培養基中含0. 5-1. 5mg/L的6-BA、0. 5-1. Omg/L的NAA(萘乙 酸）、25-30g/L蔗糖和4. 0-4. 5g/L的瓊脂，培養基的pH值為5. 8， (3) 叢生芽繼代培養：將步驟（2)中得到的試管苗不定芽置于MS增殖培養基中，在培養 溫度23-26°C，光照強度15001ux，光照時間為10-12小時/天的條件下培養20-25天得到完 整的健壯植株，其中MS壯苗培養基中含1. 0-2. Omg/L的6-BA(芐氨基腺嘌呤)、0. 5-1. Omg/ L的ΝΑΑ、0· 5-L 0mg/L KT (激動素），25-30g/L蔗糖和4. 0-4. 5g/L的瓊脂，培養基的pH值 為 5.8， (4) 叢生芽生根培養：將步驟（3)中得到的健壯植株置于MS生根培養基中，在培養溫 度23-26°C，光照強度15001UX，光照時間為10-12小時/天的條件下培養25-30天得到帶 根的完整植株，其中MS生根培養基中含1. 0-1. 5mg/L的IAA (吲哚乙酸)、0. 5 mg/L的ABT (生根粉)、25-30g/L蔗糖和4. 0-4. 5g/L的瓊脂，培養基的pH值為5. 8， (5)煉苗與移栽：步驟（4)獲得帶根的完整植株后，在室溫為25°C的室內散射光照射 2-4天，打開瓶蓋，在瓶中加入少量自來水，煉苗2-4天，表面角質形成后將苗取出，洗凈根 部培養基，立即移栽到通風良好且弱光石灰巖土壤中，在石灰巖土壤中生長一個半月后移 栽大田。
[0006] 采用生物技術組織培養技術，不僅可以有效快速地提高貴州半蒴苣苔種苗的繁殖 速度和質量，且采用本發明所述方法得到的種苗健壯、成活率高，對貴州半蒴苣苔資源保護 和可持續利用具有重要價值。
【具體實施方式】
[0007] 下面結合實施例對本發明的技術方案進一步說明。
[0008] -種貴州半蒴苣苔組織培養快速繁殖方法，包括以下步驟： (1) 外植體的選擇與消毒：取貴州半蒴苣苔頂芽作為外植體，依次用2%洗潔精水溶液 浸泡5-10min、線狀自來水沖洗10-20min、添加了 2-3滴吐溫-20的100 mlO. 1%升汞消毒 7-9min、無菌水沖洗3-5次，最后用滅菌濾紙吸去表面水分，剪成長約lcm長的外植體，其中 無菌水為經高壓滅菌的蒸餾水， (2) 頂芽分化獲得叢生芽快速繁殖：將步驟（1)得到的外植體接種到MS培養基中，在 培養溫度為23-26°C，光照強度15001ux，光照時間為10-12h/d的條件下培養25-30天，頂 芽分化后獲得大量叢生芽，其中MS培養基中含0. 5-1. 5mg/L的6-BA、0. 5-1. Omg/L的NAA、 25-30g/L蔗糖和4. 0-4. 5g/L的瓊脂，培養基的pH值為5. 8,數據分析發現6-BA，NAA對貴 州半蒴苣苔叢生芽增殖倍率具有顯著影響，根據生長率指標確定的最適培養基激素濃度為 1. 5 mg/L的6-BA和0. 5mg/L的NAA，此時貴州半蒴苣苔頂芽分化倍率為5. 72。
[0009] 表1不同激素對頂芽分化效果的影響
【權利要求】
1. 一種貴州半蒴苣苔組織培養快速繁殖方法，其特征在于該方法包括以下步驟： (1) 外植體的選擇與消毒：取貴州半蒴苣苔頂芽作為外植體，依次用2%洗潔精水溶 液浸泡5-10min、線狀自來水沖洗10-20min、添加2-3滴吐溫-20的100 mlO. 1%升汞消毒 7-9min、無菌水沖洗3-5次，最后用滅菌濾紙吸去表面水分，剪成長約lcm長的外植體； (2) 頂芽分化獲得叢生芽培養：將步驟（1)得到的外植體接種到MS培養基中，在培養溫 度為23-26°C、光照強度15001UX、光照時間為10-12小時/天的條件下培養25-30天，頂芽 分化后獲得叢生芽，其中MS培養基中含0. 5-1. 5mg/L的6-BA、0. 5-1. Omg/L的NAA、25-30g/ L蔗糖和4. 0-4. 5g/L的瓊脂，培養基的pH值為5. 8 ; (3) 叢生芽壯苗繼代培養：將步驟（2)中得到的試管苗不定芽置于MS增殖培養基中，在 培養溫度23-26°C、光照強度15001ux、光照時間為10-12小時/天的條件下培養20-25天 得到完整的健壯植株，其中MS壯苗培養基中含1. 0-2. Omg/L的6-BA、0. 5-1. Omg/L的NAA、 0· 5-1. Omg/L KT，25-30g/L 蔗糖和 4. 0-4. 5g/L 的瓊脂，培養基的 pH 值為 5. 8 ; (4) 叢生芽生根培養：將步驟（3)中得到的健壯植株置于MS生根培養基中，在培養溫 度23-26°C、光照強度15001UX、光照時間為10-12小時/天的條件下培養25-30天得到帶 根的完整植株，其中MS生根培養基中含1. 0-1. 5mg/L的IAA、0. 5 mg/L的ABT、25-30g/L蔗 糖和4. 0-4. 5g/L的瓊脂，培養基的pH值為5. 8 ; (5) 煉苗與移栽：步驟（4)獲得帶根的完整植株后，在室溫為25°C的室內散射光照射 2-4天，打開瓶蓋，在瓶中加入少量自來水，煉苗2-4天，表面角質形成后將苗取出，洗凈根 部培養基，立即移栽到通風良好且弱光石灰巖土壤中，在石灰巖土壤中生長一個半月后移 栽大田。
2. 如權利要求1所述的貴州半蒴苣苔組織培養快速繁殖方法，其特征在于：所述無菌 水為經高壓滅菌的蒸餾水。
【文檔編號】A01H4/00GK104041412SQ201410251602
【公開日】2014年9月17日 申請日期:2014年6月9日 優先權日:2014年6月9日
【發明者】李翠, 張占江, 韋坤華, 李林軒, 韋瑩, 王一諾, 王曉峰 申請人:廣西壯族自治區藥用植物園