一種牡蠣多糖及其應用的制作方法
【專利摘要】本發明提供了一種牡蠣多糖及其應用，該多糖由牡蠣經水提醇沉法提取、分離純化而成。在仔豬上的應用表明牡蠣多糖可以促進仔豬生長，改善免疫應激仔豬的腸道健康，可在仔豬上應用于動物保健品的研制。牡蠣多糖目前未有報道具有促進仔豬生長，改善免疫應激仔豬腸道健康的作用。本發明發現牡蠣多糖能促進仔豬生長，改善免疫應激仔豬腸道健康，與現有豬的其他保健品相比，毒副小，無不良反應，且還有抗氧化、提高機體免疫力等作用，可長期使用；牡蠣原料易得，價廉，提取分離工藝簡單，生產方便，開發價值高。
【專利說明】一種牡蠣多糖及其應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬于畜牧業領域，具體涉及一種牡蠣多糖及其應用。
【背景技術】
[0002] 多糖（Polysaccharide)又叫多聚糖，是自然界中分子結構復雜且龐大的一類生 物，是由多個（10個以上到上萬個）單糖分子或單糖衍生物縮合、失水、通過糖苷鍵連接 而成的高分子化合物。從1936年至今，隨著世界各國學者逐步深入的研究，多糖的生物 活性漸漸出現在人們視野中。近年來，各國學者從各種生物體內提取并研究了大量的生 物活性多糖，人類醫學研究和動物實驗已經證實多糖具有免疫調節和抗腫瘤；抗血栓；抗 病毒；降血脂、降血糖、保肝護肝、修復組織；抗氧化和抗衰老；抗寄生蟲、抗潰瘍、抗輻射、 調節造血功能、保肝護肝、修復組織以及改善動物生產性能等一系列作用。其中多糖的免 疫調節作用是主要的功能。多糖是國際上公認的天然優良的免疫調節劑，因此又叫生物 反應調節劑（Biological response modifier, BRM)、生物活性多糖（Biological active polysaccharide, BAP)或免疫活性多糖（Immunological active polysaccharide)等。
[0003] 應激，是指動物機體受到刺激后，發生的全身適應性的反應，故又稱全身適應綜合 征，它是非特異性應答反應的總和，最早是由Hans Selye在論文"各種不同有害因素產生 的綜合征"和"機體胸腺和腎上腺對外傷和中毒的反應"中提出的，其中應激原包括環境溫 度、各種病原微生物及毒素等各種對機體有害的物質。Johnson認為，不良飼養環境中的病 原體能激活動物機體的免疫系統，產生應激反應。而動物免疫應激是指病原微生物、疫苗或 異源蛋白等抗原通過刺激動物機體，激活免疫系統，使后者產生了免疫應答，并導致動物群 體中少數動物采食量下降，生長緩慢的一種普遍現象。免疫應激在畜牧業的生產實踐中普 遍存在，誘因主要包括疫苗的使用不當，免疫程序不合理，生產環境惡劣而使病原微生物滋 生等。張建峰等曾報告了秦川牛注射口蹄疫油乳劑滅活苗后，部分牛出現精神萎靡不振，體 溫升高，采食量下降，瘤胃蠕動減弱的癥狀；劉建明等也報告過羊群在注射牛口蹄疫〇型苗 后出現精神不振，食欲減退甚至廢絕等異常癥狀，之后有母羊和小羊出現死亡的現象。上述 實例充分說明，由于疫苗的安全性不高或者個別畜禽對其反映強烈，部分畜禽在免疫后產 生應激反應，出現生長緩慢，采食量下降，體溫升高等應激癥狀，有的甚至出現個別畜禽死 亡的現象。由此可知，免疫應激已對養殖業的發展造成了一定的影響。
[0004] 腸道屏障分別由腸黏膜機械屏障、化學屏障、生物屏障和免疫屏障組成。當外來抗 原侵襲時，各個屏障通過自身的分子調控機制和生物學功能協同抵抗。動物機體和外界環 境接觸面積最大的是腸黏膜。其屏障功能由特異性免疫效應和非特異性屏障組成 [15]。特 異性免疫屏障是指由腸黏膜介導的體液和細胞免疫系統，即腸黏膜免疫系統，包括腸相關 淋巴組織、免疫效應分子、細胞因子和彌散免疫細胞。腸黏膜免疫系統既要忙碌于對營養物 質的消化吸收以維持機體的需要,又要對抗外來抗原物質的侵入,產生正確的免疫應答。
[0005] 應激會使與大分子營養代謝和細胞增殖相關基因的表達量明顯下降，而與氧化應 激和免疫激活相關的基因的表達量顯著上升，刺激仔豬腸道炎性細胞因子如IL-I、IL-6、 IL-12等的過量表達，從而引起腸黏膜代謝和生理紊亂，導致腸道損傷。免疫應激會抑制仔 豬和雞的食欲；降低日增重和日采食量；肌肉組織、脂肪組織、體蛋白質和體脂肪的生長或 沉積速度降低 目前已有200多種多糖被發現具有增強免疫的功能。關于多糖的生物學活性和功能性 研究的逐漸深入，越來越多的多糖產品被開成為具有使用價值的美容和醫藥產品。通過與 淋巴細胞的相互影響發揮免疫調節作用，多糖更是成為現今免疫學研究的寵兒。
[0006] 牡販為牡販科動物長牡販（Ostrea gigas thunb)或近江牡販（Ostrea rivularis gould)等的肉。別名牡蛤《名醫別錄》，蠣蛤《神農本草經》，蠣房、蠔莆《本草圖經》，左殼《中 藥志》，蠔《本草綱目》。牡蠣生于江河流入大海處，系雜食性動物，以細小的浮游生物為食。 牡蠣在世界各國如中國、日本、美國等地都有生產，生長于沿海、河口及內灣。《民間獸醫本 草》中記載：牡蠣味咸澀，性涼。斂陰潛陽，止汗澀精。《師皇安驥集》:"味咸，微寒。下焦濕 感，汗多出，陰下濕氣，泄精，心脅痞熱用之良。"《抱犢集》："補腎，補大腸，補小腸。"《獸醫 藥性賦》："固澀軟堅散陰結。" 牡販粗多糖（Oyster polysaccharides, 0PS)是從牡販中提取出來的有效活性成分之 一。它可以通過不同的方式抑制病毒的增殖和腫瘤細胞的增長，也可以通過T淋巴細胞的 活性介導免疫應答，參與免疫反應。李志研究表明，牡蠣粗多糖中可得到OPS- I和OPS-II 兩種多糖，同時對小鼠實驗中表明其具有較好的抗氧化作用，且腹腔注射3mg/ml牡蠣粗多 糖能提高正常小鼠免疫功能，有效增加脾淋巴細胞和碳廓清潔力。其它研究表明，牡蠣粗提 液具有抗腫瘤，抗氧化衰老，抗菌抗病毒，以及提高機體免疫功能等作用。
【發明內容】
[0007] 本發明的目的在于提供一種牡蠣多糖及其應用，牡蠣多糖是從牡蠣中提取出來的 有效活性成分之一。它可以通過不同的方式抑制病毒的增殖和腫瘤細胞的增長，也可以通 過T淋巴細胞的活性介導免疫應答，參與免疫反應。
[0008] 為實現上述目的，本發明采用如下技術方案： 一種牡蠣多糖，由葡萄糖單糖組成，由牡蠣經水提醇沉法提取、分離純化而獲得。
[0009] 一種牡蠣多糖在斷奶仔豬基礎日糧中的應用。
[0010] 所述牡蠣多糖在日糧中的含量為〇· 5-1. 2%。
[0011] 未見其具有促進仔豬生長，改善免疫應激仔豬腸道健康作用的有文獻報道。
[0012] 牡蠣多糖的提取方法及其理化特性由于已經發表，故不作為專利保護。具體方法 見李志的碩士論文《牡蠣多糖的分離純化及生物學活性研究》。
[0013] 本發明的優點在于： 1、牡蠣多糖目前未有報道具有促進仔豬生長，改善免疫應激仔豬腸道健康的作用。本 發明發現牡蠣多糖能促進仔豬生長，改善免疫應激仔豬腸道健康，與現有豬的其他保健品 相比，毒副小，無不良反應，且還有抗氧化、提高機體免疫力等作用，可長期使用；2、牡蠣 原料易得，價廉，提取分離工藝簡單，生產方便，開發價值高。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0014] 圖1十二指腸(左)、空腸（中）和回腸(右）HE染色圖。
【具體實施方式】
[0015] 下面結合實施例對本發明進行詳細說明： 實施例1牡蠣多糖的提取與純化 利用水提醇沉法提取牡蠣粗多糖，在單因素分析（提取時間、料液比、提取溫度）的 基礎上進行正交分析，優化提取條件。正交試驗結果顯示，多糖提取的最佳工藝為溫度為 90°C，料液比為1 :80,時間為3 h。采用苯酚一硫酸法測得牡蠣粗多糖總糖含量為72. 43%。 牡蠣粗多糖經除蛋白、透析、DEAE-52離子交換柱和Sephadex G-100凝膠層析柱，得到 OPSII和OPSIIb兩種多糖組分。紫外光譜分析（UV)顯示，在260 m和280 nil 1均無核酸 和蛋白質吸收峰。高效液相色譜（HPLC)法檢測OPSIIb，有一個吸收峰，說明OPSIIb為均一 多糖，可對其進行組成和結構分析。OPSIIb通過高效液相色譜（HPLC)、氣相色譜（GC)、紅外 光譜（IR)、薄層色譜（TLC)和其他物理化學分析方法初步鑒定多糖的理化性質，結果表明 OPSIIb具有多糖的特征吸收峰而且OPSIIb是由葡萄糖一種組分組成。
[0016] 實施例2牡蠣粗多糖對斷奶仔豬生長性能的影響 1材料和方法 1. 1材料 LPS (大腸桿菌血清型 055 :B5，Sigma 公司），ELISA 試劑盒（Cusabio Biotech Co. , LTD) ； Trizol Prime Script? RT reagent Kit Perfect Real Time (TaKaRa Biotechnology Co. , Ltd),突光試劑盒(北京百泰克生物技術有限公司），瓊脂糖。
[0017] 試驗動物與設計 選取體重相近的30頭日齡在（28±l)d的斷奶杜洛克X長白X大白三元已閹割公仔 豬，隨機分為空白對照組（A組)，應激對照組（B組)，牡蠣粗多糖高（C組)、中（D組)、低劑量 (E組）組，每組6個重復，每個重復1頭豬。空白對照組和免疫應激組飼喂基礎日糧，牡蠣 粗多糖高、中、低劑量組分別飼喂含有I. 2%、0. 8%、0. 5%牡蠣粗多糖的基礎日糧，飼喂周期 為30d。試驗前12h斷水斷料，試驗各組腹腔注射100μ g/kg BW LPS，空白對照組注射等量 生理鹽水。于注射3h后采血，剖檢。
[0018] 測定方法 (1) 生長性能指標 始重：試驗期第一天所稱的重量（kg) 末重：結束試驗當天所稱的重量（kg) 平均日增重（ADG):(末重-始重）（g)/試驗天數（d) 平均日采食量(ADFI):全期采食量（g) /試驗天數（d) 料肉比（F/G):飼料消耗（kg) /增重（kg) (2) 數據統計分析 采用SPSS13. 0統計軟件Compare Means中的單因素方差分析，用LSD和S-N-K進行方 差異顯著性分析，結果采用平均值土標準差（Mean土S.D)表示。本試驗各實施例數據都按 如上統計方法進行分析。
[0019] 結果分析 2. 1仔豬生長性能 表1仔豬生長性能結果
【權利要求】
1. 一種牡蠣多糖，其特征在于：所述牡蠣多糖由葡萄糖單糖組成，由牡蠣經水提醇沉 法提取、分離純化而獲得。
2. -種如權利要求1所述的一種牡蠣多糖在斷奶仔豬基礎日糧中的應用。
3. 根據權利要求2所述的一種牡蠣多糖在斷奶仔豬基礎日糧中的應用，其特征在于： 所述牡蠣多糖在日糧中的含量為〇. 5-1. 2%。
【文檔編號】A23K1/16GK104311694SQ201410576493
【公開日】2015年1月28日 申請日期:2014年10月24日 優先權日:2014年10月24日
【發明者】黃志堅, 殷光文, 江和基, 陳騰騰, 羅剛, 李志
申請人:福建農林大學