雞糞沼液用于防治棉花枯萎病的應用及防治方法與流程

本發明涉及棉花枯萎病的生物防治領域，具體涉及雞糞沼液用于防治棉花枯萎病的應用及防治方法。

背景技術：

棉花枯萎病是由尖孢鐮刀菌(fusariumoxysporum)引起的一種世界性病害，自1931年傳入我國，之后逐漸蔓延，于20世紀60年代達到高峰，分布廣泛，危害嚴重，重病年份造成毀種絕收。盡管之后隨著抗病品種的種植，該病得到有效控制，但隨著抗蟲棉的種植，棉花枯萎病又有回升趨勢。分析主要原因，種植規模化、集中化導致輪作困難；抗病育種年限較長、工作量大且容易喪失抗性；化學農藥很難達到棉株的維管束部位發揮作用，效果差且污染環境，不符合綠色可持續發展農業要求等。利用生物產品防治病蟲害的發生具有經濟、環境友好型等特點。隨著沼氣產品的大量使用，沼液作為有機肥的使用量逐漸增加。沼氣發酵是由種類繁多的微生物共同參與的一個復雜的生化反應。發酵后產生的沼液和沼渣中含有大量元素n、p、k；微量元素fe、zn、b等及nh3、h2s、酚類、醛、酸等多種物質，發酵產物是一種能夠改善土壤結構和生態系統的有機肥。隨著集約化養殖的大量發展，沼氣和沼渣的排放量越來越多，沼液的綜合利用在沼液處理中扮演的角色越來越重要。

目前，雞糞沼液在農業生產中主要作為改善棉花品質和產量的有機肥料，但是，雞糞沼液用于防治棉花枯萎病尚未見報道。

技術實現要素：

本發明的目的是提供雞糞沼液抑制棉花枯萎病菌的應用。

本發明的再一目的是提供雞糞沼液在棉花枯萎病防治上的應用。

本發明的再一目的是提供雞糞沼液防治棉花枯萎病的方法。

根據本發明的具體實施方式，本發明提供了雞糞沼液在棉花枯萎病防治上的應用，其中雞糞沼液可購買獲得，例如“新壯態”品牌雞糞沼液，是將雞糞經厭氧發酵所得，其主要成分為氮、磷、鉀、鈣、硼、硒、鋅、腐植酸、蛋白質、糖類、核酸、微生物代謝物等。

根據本發明的具體實施方式，向棉苗施加雞糞沼液的方法包括：滴灌80l/ha～560l/ha施加雞糞沼液，或者，噴施10～400倍稀釋的雞糞沼液。

據本發明的具體實施方式，提供了防治棉花枯萎病的方法，所述方法包括對棉苗施用雞糞沼液的步驟。

根據本發明的具體實施方式，對棉苗滴灌濃度為0.25％～1.75％的雞糞沼液稀釋液，或者，對棉苗噴施10～400倍稀釋的雞糞沼液。

根據本發明的具體實施方式，對棉苗滴灌五次雞糞沼液，或者，對棉苗噴施五次雞糞沼液。

根據本發明的具體實施方式，試驗結果表明：

1、雞糞沼液對棉花枯萎病菌具有較好的抑制效果

將雞糞沼液加入到pda培養基中，配制成不同濃度。在pda培養基中，當雞糞沼液的濃度≧0.5％時，對枯萎病菌的抑制效果顯著，最高抑制率可達100％。

2、雞糞沼液對棉花枯萎病病菌分生孢子萌發具有較好的抑制效果

在查氏培養基中加入雞糞沼液，配制成不同濃度；然后加入棉花枯萎病菌分生孢子，使分生孢子的終濃度為1×10⁶個ml^-1。25℃恒溫培養，3h后鏡檢孢子萌發情況。雞糞沼液不同濃度的處理均顯著抑制棉花枯萎病菌的孢子萌發，最高抑制率達到93.1％。

3、雞糞沼液對棉花枯萎病的防治作用

由溫室盆栽試驗結果可知，雞糞沼液對棉花枯萎病有一定的防治作用。播種后4周對照組棉花枯萎病病情指數為60.6，而雞糞沼液噴霧和灌根處理組最低病情指數分別為15.5和21.5，表明雞糞沼液的兩種使用方式均可以降低棉花枯萎病的發生。溫室試驗和病圃試驗均顯示雞糞沼液對棉花枯萎病有很好的控制作用。雞糞沼液作為雞糞的厭氧發酵物，使用后不僅可以增加土壤肥力，還可以生物防治棉花枯萎病，因此，本發明具有很大的應用前景。

附圖說明

圖1為生長速率法測定雞糞沼液對棉花枯萎病菌的抑菌效果圖，其中，a為對照；b、c、d表示雞糞沼液的體積分數為1.0％、4.0％、10％的處理。

圖2雞糞沼液葉面噴施防治棉花枯萎病效果圖，其中，a：空白對照；b：濃度為1.75％的雞糞沼液灌根處理。

圖3雞糞沼液灌根處理防治棉花枯萎病效果圖，其中，a：空白對照；b：10倍雞糞沼液稀釋液葉面噴施處理。

具體實施方式

實施例1：生長速率法檢測雞糞沼液對棉花枯萎病病原菌菌絲生長的抑制作用

按照植物病害研究法常用的生長速率測定法，測定棉花枯萎病病原菌的生物活性：用直徑5mm打孔器取菌落邊緣生長旺盛的病原菌，放在雞糞沼液處理的pda平板上面，以培養基內加等量的無菌水作為對照，每個處理重復5次，置于25℃恒溫培養，用十字交叉法測定每個菌落的菌落直徑，取其平均值，求出抑制菌絲生長率：

抑制菌絲生長率＝(對照菌落直徑-處理菌落直徑)/(對照菌落直徑-5)×100％

表1雞糞沼液對棉花枯萎病病原菌菌絲生長的抑制作用

表1顯示了雞糞沼液對棉花枯萎病病原菌絲生長的抑制作用，最高抑制率可達100％。圖1為生長速率法測定雞糞沼液對棉花枯萎病菌的抑菌效果圖，實施結果表明：雞糞沼液對棉花枯萎病病原菌菌絲生長具有很好的抑制作用，隨著雞糞沼液濃度的增加，抑制率呈上升趨勢；當雞糞沼液濃度≧0.50％時，達到顯著水平，當雞糞沼液濃度達到10.00％時，抑菌率達到100％。

實施例2凹玻片法檢測雞糞沼液對棉花枯萎病病原菌分生孢子萌發的抑制作用

將棉花枯萎病菌分生孢子懸浮液用滅菌的紗布雙重過濾、稀釋，配制成濃度為1×10⁶個ml^-1，分生孢子懸浮液備用。將一定量的雞糞沼液和200微升的孢子懸浮液用czapek液體培養基容至1.5ml，充分混勻，使雞糞沼液的濃度分別為0.25％、0.500％、1.00％、2.00％、3.00％、4.00％、5.00％、7.00％、10.00％，每個濃度重復三次。吸取20微升上述混合液于凹玻片凹槽中，將凹玻片放入加有保濕紗布的培養皿中，25℃恒溫培養，3h后鏡檢孢子萌發情況，每個處理3個重復，每個重復5個視野，計算孢子萌發率，以czapek液體培養基作為對照，計算抑制率。

表2雞糞沼液對棉花枯萎病病原菌分生孢子萌發的抑制作用

表2顯示雞糞沼液對棉花枯萎病病原菌分生孢子萌發的影響，不同濃度的雞糞沼液均能抑制孢子萌發，且效果顯著，隨著雞糞沼液濃度的增加，抑制效果呈增加趨勢，最高抑制率為93.1％。

實施例3雞糞沼液對棉花枯萎病的防治效果

采用基質接種法，將棉花枯萎病菌的玉米沙粒培養物，以0.6％的質量比拌入無菌的生沙壤土中充分混合均勻，分裝到直徑6cm、高10cm的無地紙缽中；用55～60℃溫水浸泡冀棉11種子12h，每缽8粒均勻播種，覆蓋滅菌沙土約2cm厚。出苗后留苗5株，每個處理24個缽，每6個缽為一個重復，4次重復，隨機排列。雞糞沼液灌根處理和葉面噴施處理分開擺放。其中灌根試驗設置7個不同濃度(見表3)，播種后即刻進行灌根處理，每缽用15.0ml的雞糞沼液稀釋液灌根，每4天灌根一次，共5次，對照為相應的清水處理，其他時間正常管理；葉面噴施設置6個不同濃度(見表4)，于子葉展開后進行，每缽噴施4.0ml雞糞沼液稀釋液，每4天噴施一次，共5次，對照為相應的清水處理，其他時間正常管理。溫室溫度控制在22℃-28℃，按5級分級標準進行病害的分級調查，計算病株率、病情指數和防治效果。

病情指數＝[σ(各級病株數×相應病級)/(調查總株數×4)]×100

表3溫室環境條件下雞糞沼液灌根對棉花枯萎病菌的抑制作用

表3顯示了在溫室環境條件下雞糞沼液灌根對棉花枯萎病菌的抑制作用，如表3所示，結果表明在溫室環境條件下，雞糞沼液灌根對棉花枯萎病具有顯著控制作用，1.75％雞糞沼液灌根5次，對棉花枯萎病的防治效果達64.5％(圖2)。

表4溫室環境條件下噴施雞糞沼液對棉花枯萎病菌的抑制作用

表4顯示了在溫室條件下噴施雞糞沼液對棉花枯萎病菌的抑制作用，如表4所示，結果表明在溫室條件下，噴施雞糞沼液對棉花枯萎病具有很好的防治作用，當稀釋倍數為50倍時，對棉花枯萎病的防效達51.1％；當雞糞沼液的稀釋10倍時，對棉花枯萎病的防治效果達68.8％(圖3)。