一種uva調控槲蕨柚皮苷含量的方法
【技術領域】
[0001 ]本發明屬于植物栽培領域，具體設及一種調控搬藤抽皮巧含量的方法。
【背景技術】
[0002] 搬藤(化ynaria roosii)是中型附生藤類，其根狀莖W骨碎補入藥，并且作為骨碎 補的唯一正品收載于《中國藥典》中，具有補腎堅骨、續傷止痛的功效。2001年中國中醫科學 院在多年臨床的基礎上提取搬藤中的有效成分總黃酬成功研制了中藥強骨膠囊，該藥填補 了我國治療骨質疏松癥狀尚無中藥二類新藥的空白。目前我國對骨碎補藥材的需求量很 大，但搬藤原材料仍全部來源于野外資源的采挖，不僅浪費大量的人力財力，還對生態環境 造成了不可逆的破壞，所W搬藤的人工栽培和工廠化規模生產亟待研究和推廣，運也是我 國中藥現代化的必然趨勢。
[0003] 大量的試驗及臨床應用常把抽皮巧和新北美圣草巧兩種有效成分的含量作為搬 藤(骨碎補)藥材的質量標準。兩者均為黃酬類化合物，抽皮巧可用于防治屯、腦血管疾病、鎮 痛、清熱及消炎;新北美圣草巧可用于治療骨質疏松。由此可見，在補腎健骨方面，主要是新 北美圣草巧發揮顯著效用。本研究組通過對人工栽培3年生搬藤進行品質分析發現:其新北 美圣草巧的含量不足0.1%，運嚴重限制了人工栽培搬藤作為骨碎補藥材使用的生產實踐。
[0004] 已有研究表明，紫外福射對植物細胞內黃酬類次生代謝產物的合成和積累有一定 的調控作用，但很少將其應用于生產實踐中。本發明首次利用LED光源UVA對人工栽培搬藤 進行福射處理，用W調控搬藤中黃酬類成分一抽皮巧的含量，并將其轉化為療效更為顯著 的成分一新北美圣草巧。國內外尚未有相關研究人員或生產企業對搬藤中抽皮巧的含量進 行調控。
【發明內容】
[0005] 為了解決上述問題，本發明提供一種UVA調控搬藤抽皮巧含量的方法。
[0006] -方面，本發明一種UVA調控搬藤抽皮巧含量的方法，其為利用80-320KJ/m2的福 射劑量福射搬藤植株，調控搬藤抽皮巧向新北美圣草巧轉化，優選地，福射劑量為160KJ/ O m O
[0007] 其中，所述的UVA優選為L邸光源UVA。
[000引其中，所述的L抓光源UVA的波長優選為365nm，功率優選為30-50W，光源距離植株 優選 8-15cm。
[0009] 其中，所述搬藤植株為3-5年生搬藤。
[0010] 另一方面，本發明提供一種提高搬藤新北美圣草巧含量的方法，其為用UVA福射搬 藤植株，UVA的福射劑量為80-320KJ/m 2，優選地，福射劑量為160KJ/m2。
[0011] 其中，所述的UVA優選為L邸光源UVA。
[0012] 其中，所述的L抓光源UVA的波長優選為365nm，功率優選為30-50W，光源距離植株 優選 8-15cm。
[0013] 其中，所述搬藤植株為3-5年生搬藤。
[0014] 與未用本發明方法處理的對照組相比，處理組抽皮巧的含量降低了 56%，而新北 美圣草巧的含量升高了 5.4倍，并且兩成分的總量與對照無顯著差異。本發明方法有效地調 控了搬藤抽皮巧向藥用價值更高的新北美圣草巧的轉化。該發明經濟實用、簡便易行，可W 將此應用于人工栽培搬藤有效成分的調控中，進而促進人工栽培搬藤作為骨碎補藥材的生 產實踐，緩解生態壓力，并推動我國傳統中藥骨碎補的大規模開發利用和推廣，加快中藥現 代化的實施進程。
【具體實施方式】
[0015] W下實施例用于說明本發明，但不用來限制本發明的范圍。
[0016] 實驗材料
[0017] 植物材料:溫室中人工繁殖栽培的=年生搬藤植株；
[0018] 光源:L邸光源-UVA，波長365nm，功率40W，光源距離植株IOcm;
[0019] 儀器與設備:培養架、粉碎機、自動磨樣機、超低溫保存冰箱、超聲波清洗儀、冷凍 干燥機、干燥器、離屯、機、安捷倫高效液相色譜儀(DAD檢測器)等。
[0020] 試劑:色譜級甲醇、超純水、抽皮巧標準品、新北美標準品等。
[0021 ]實驗方法
[0022] 應用L邸光源UVA連續福射搬藤植株一定劑量后取樣，測定其根狀莖中抽皮巧和新 北美圣草巧的含量變化情況。
[0023] 福射劑量:80KJ/m2、160KJ/m2、320KJ/m2。
[0024] 對照:未經紫外福射的同批次搬藤植株。
[0025] 液相色譜條件：W十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；W純乙臘、0.1 %甲酸水為流 動相，檢測波長為280nm。
[0026] 有效成分提取方法:取福射處理后的搬藤植株，去掉葉片和根，只留根狀莖。用刷 子刷去泥±，洗凈后放入自動磨樣機中研磨成粉末，將粉末裝入EP管中，迅速轉入液氮中速 凍，然后放入冷凍干燥機內進行干燥，徹底干燥后取搬藤根狀莖干粉20mg，精密稱定，置于 1.5ml離屯、管中，加80%甲醇ImL，超聲提取30min，4°C過夜，再次超聲提取30min，離屯、，將上 清液轉移到新的離屯、管中，4°C離屯、（10000轉/min)3次，每次lOmin，即得搬藤有效成分提取 液。
[0027] 抽皮巧標準品配制：取抽皮巧對照品3.2mg，精密稱定，加甲醇55化L制成IOM mo 1 的抽皮巧標準品溶液。
[0028] 抽皮巧標準曲線的繪制：分別配制1.875M mol、3.75M mol、7.5M mol、15M mol和 30M mol的抽皮巧標準品溶液，按照W上色譜條件進樣，繪制標準曲線并進行回歸計算，得 出標準曲線為:y = 805.71x+838.59，R2 = 0.9981。
[0029] 新北美圣草巧標準品配制：取新北美圣草巧標準品Img，精密稱定，加甲醇167.化L 制成1 OMmo 1濃度的標準品溶液。
[0030] 新北美圣草巧標準曲線的繪制：分別配制0.38M mol、0.75M mol、1.5M mol、3M mol、6M mol的新北美圣草巧標準品溶液，按照W上色譜條件進樣，繪制標準曲線并進行回 歸計算，得出標準曲線為:y = 870.70x巧54.22，R2 = 0.9962。
[0031 ]實施例1 80KJ/m2的UVA福射搬藤對抽皮巧和新北美圣草巧含量的影響
[0032] 取6株長勢一致的3年生搬藤植株，其中3株作為對照，另3株置于LED光源UVA下進 行福射，當福射劑量累積至80KJ/V時停止處理。利用HPLC分析兩種主效成分抽皮巧和新北 美圣草巧的含量，進樣量為40yL。得到色譜圖，分析搬藤中抽皮巧和新北美圣草巧的含量。
[0033] 表 1
[0035] 經SPSS分析，L抓光源UVA 80KJ/V的福射劑量處理后，搬藤中的抽皮巧、新北美圣 草巧及兩成分的總含量與對照相比均沒有顯著差異。經SPSS分析，L抓光源UVA 80KJ/V的 福射劑量處理后，搬藤中的抽皮巧及兩成分的總含量與對照相比沒有顯著差異，而新北美 圣草巧的含量顯著升高。
[0036] 實施例2 160KJ/m2的UVA福射搬藤對抽皮巧和新北美圣草巧含量的影響
[0037] 取6株長勢一致的3年生搬藤植株，其中3株作為對照，另3株置于LED光源UVA下進 行福射，當福射劑量累積至160KJ/V時停止處理。利用HPLC分析兩種主效成分抽皮巧和新 北美圣草巧的含量，進樣量為40yL。得到色譜圖，分析搬藤中抽皮巧和北美圣草巧的含量。 [00；3引 表2
[0040]經SPSS分析，L抓光源UVA 160KJ/m2的福射劑量處理后，搬藤中的抽皮巧含量下 降，新北美圣草巧極顯著上升，為對照的5.4倍，并且兩成分的總含量與對照相比均沒有顯 著差異。由此可見，L抓光源UVA 160KJ/V的福射劑量極顯著調控了抽皮巧向新北美圣草巧 的轉化。
[0041 ]實施例3 320KJ/m2的UVA福射搬藤對抽皮巧和新北美圣草巧含量的影響
[0042] 取6株長勢一致的3年生搬藤植株，其中3株作為對照，另3株置于LED光源UVA下進 行福射，當福射劑量累積至320KJ/V時停止處理。利用HPLC分析兩種主效成分抽皮巧和新 北美圣草巧的含量，進樣量為40化。得到色譜圖，分析搬藤中抽皮巧和新北美圣草巧的含 量。
[0043] 表 3
[0046] 經SPSS分析，L抓光源UVA 320KJ/m2的福射劑量處理后，搬藤中的抽皮巧含量下 降，新北美圣草巧顯著上升，為對照的5.0倍，并且兩成分的總含量與對照相比均沒有顯著 差異。由此可見，L邸光源UVA 320KJ/m2的福射劑量同樣調控了抽皮巧向新北美圣草巧的轉 化。
[0047] 綜上:L抓光源UVA 80KJ/m2的福射劑量處理后，搬藤中新北美圣草巧的含量顯著 上升；160KJ/V的福射劑量處理后，搬藤中的抽皮巧含量下降，新北美圣草巧極顯著上升， 為對照的5.4倍，并且兩成分的總含量與對照相比沒有顯著差異;320KJ/V的福射劑量處理 后，搬藤中的抽皮巧含量下降，新北美圣草巧顯著上升，為對照的5.0倍，并且兩成分的總含 量與對照相比均沒有顯著差異。由此可見，L抓光源160KJ/V的UVA福射最大效率地調控了 搬藤抽皮巧向藥用價值更高的新北美圣草巧的轉化。
[004引 W上所述僅是本發明的優選實施方式，應當指出，對于本技術領域的普通技術人 員來說，在不脫離本發明技術原理的前提下，還可W做出若干改進和潤飾，運些改進和潤飾 也應視為本發明的保護范圍。
【主權項】
1. 一種UVA調控槲蕨柚皮苷含量的方法，其特征在于，利用80-320KJ/V的輻射劑量輻射 槲蕨植株，調控槲蕨柚皮苷向新北美圣草苷轉化。2. 如權利要求1所述的UVA調控槲蕨柚皮苷含量的方法，其特征在于，所述的UVA為LED 光源UVA。3. 如權利要求2所述的UVA調控槲蕨柚皮苷含量的方法，其特征在于，所述的LED光源 UVA的波長為365nm，功率30-50W，光源距離植株8-15cm〇4. 如權利要求1所述的UVA調控槲蕨柚皮苷含量的方法，其特征在于，所述槲蕨植株為 3-5年生槲蕨。5. 如權利要求1所述的U V A調控槲蕨柚皮苷含量的方法，其特征在于，輻射劑量為 160KJ/m2。6. -種提高槲蕨新北美圣草苷含量的方法，其特征在于，用UVA輻射槲蕨植株，UVA的輻 射劑量為80_320KJ/m 2。7. 如權利要求6所述的提高槲蕨新北美圣草苷含量的方法，其特征在于，所述的UVA為 LED 光源 UVA。8. 如權利要求7所述的提高槲蕨新北美圣草苷含量的方法，其特征在于，所述的LED光 源UVA的波長為365nm，功率30-50W，光源距離植株8-15cm〇9. 如權利要求6所述的提高槲蕨新北美圣草苷含量的方法，其特征在于，所述槲蕨植株 為3-5年生槲蕨。10. 如權利要求6所述的提高槲蕨新北美圣草苷含量的方法，其特征在于，輻射劑量為 160KJ/m2。
【專利摘要】本發明公開了一種UVA調控槲蕨柚皮苷含量的方法，利用80-320KJ/m2的輻射劑量輻射槲蕨植株，調控槲蕨柚皮苷向新北美圣草苷轉化。與未用本發明方法處理的對照組相比，處理組柚皮苷的含量降低了56％，而新北美圣草苷的含量升高了5.4倍，并且兩成分的總量與對照無顯著差異。本發明方法有效地調控了槲蕨柚皮苷向藥用價值更高的新北美圣草苷的轉化。該發明經濟實用、簡便易行，可以將此應用于人工栽培槲蕨有效成分的調控中，進而促進人工栽培槲蕨作為骨碎補藥材的生產實踐，緩解生態壓力，并推動我國傳統中藥骨碎補的大規模開發利用和推廣，加快中藥現代化的實施進程。
【IPC分類】A01G7/04
【公開號】CN105660215
【申請號】CN201610151150
【發明人】石雷, 黃鳳杰, 李楊, 李 東, 姚然, 王頔, 楊華
【申請人】中國科學院植物研究所
【公開日】2016年6月15日
【申請日】2016年3月16日