專利名稱：嗜硒zm短桿菌及其在生物紅硒制備方面的應用的制作方法
技術領域：
本發明屬生物制藥領域，特別涉及一種嗜硒ZM短桿菌及其在生物紅硒制備方面的應用。
背景技術：
硒元素是瑞典化學家Bezeliu1817年發現并予以命名。1957年Schwarz和Foltz首先證明硒是動物和人體必需微量元素。80年代我國醫學家最早應用補硒防治克山病，大骨節病取得舉世矚目的成果。大量的工作證實硒具有廣泛生物學作用，缺硒會引起一系列疾病癌癥、艾滋病、心血管疾病、肝臟和胰臟疾病、高血壓、糖尿病、貧血、克山病等。
硒所呈現出的一系列生化效應與其濃度密切相關，在硒的抗癌作用中需要較高濃度，硒化物毒性使得有效作用濃度范圍極窄。從而使硒的利用受到較大局限，致力開發高效、低毒的硒源是研究的一個課題。
發明內容
本發明旨在提供一種嗜硒ZM短桿菌，并利用其制備生物紅硒的工藝路線，所得目標產物具有很高藥理活性，又不具有硒的毒性，能治療多種疾病，安全有效。
本發明的目的是這樣實現的嗜硒ZM短桿菌保藏名稱為生孢噬纖維細菌(Sporocytophaga sp.)，保藏單位中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏日期2006年04月21日，保藏號CGMCC1694。
本發明所述嗜硒ZM短桿菌，菌體長1～2μm，運動方式滑動，菌落平薄有光澤，邊緣不整齊，半透明，格蘭氏染色陰性，對抗菌素敏感性差別很大。
針對上述嗜硒ZM短桿菌，本發明還提供了一種其在生物紅硒制備方面的應用，具體步驟可按如下順序依次進行(A)菌液制備將嗜硒ZM短桿菌接種于1.5％蛋白胨液體培養基中，于37℃培養24小時，備用；(B)生物紅硒的制備按下列順序依次進行1)于1～5％蛋白胨液體培養基50ml～1000ml中，分別加入上述菌液、4～5％的亞硒酸鈉溶液1ml～10ml，在24℃～40℃環境下培養，發酵液由淺黃色變為紅色，顯微鏡下可見紅色ZM菌滑動；2)經濃縮處理可得到以Na2SeO35H2O計20～50mg/ml的紅色菌硒。
作為一種優選方案，本發明所述A項菌液制備中蛋白胨液體培養基中含有0.1％磷酸氫二鉀K2HPO43H2O。
生物硒作為主藥用于抗癌的劑量，具有很高的藥理活性，而不具有硒的毒性。該藥在配以某些生命成分調整多種酶活性，改變肌體內環境，用生物化學或植物化學方法制成復方制劑，口服給藥，用于多種癌癥治療，并將在預防及保健事業發揮重要作用。該藥可顯著提高肌體免疫力，增強食欲，改善睡眠，增強體力，調節精神，消除抑郁，提高生活質量。對癌細胞作用逆轉為正常細胞，阻斷復發轉移，加速其凋亡。
美國科學院FNB提出成人硒的需要量為50～200μg/d，硒攝入量超過0.1.～0.2mg/kg/d始有中毒現象。硒抗癌作用需要較高硒濃度，才能充分發揮療效。市售硒制劑用于癌癥預防和治療劑量(以Se計)硒酵母片200μg/d，900～1200μg/d(0.9～1.2mg/d)硒卡拉膠4000μg/d(4mg/d)生物紅硒2000～2500μg/d(2～2.5mg/d)為此通過自然選擇得到嗜硒ZM菌用以制造生物紅硒，時間證明安全有效。以生物紅硒作為主藥之一的復方抗癌制劑，硒用量2～3mg/d，未見有毒副作用、不良反應。
下面結合附圖和實施例對本發明作進一步描述，但本發明的保護范圍不僅限于下列表述。
圖1為本發明生物紅硒紅外光譜圖。
具體實施例方式
在哺乳動物體內硒功能主要是通過各種硒酶和硒蛋白(Selenoproteins)實現。體內的硒主要以硒代半胱氨酸(Se-Cys)與蛋白組成。金屬硫蛋白的排列CYS-X-CYS，半胱氨酸-其他氨基酸-半胱氨酸，令人驚奇的是半胱氨酸的位置以及近旁的絲氨酸和堿性氨基酸位置，從微生物到人的進化過程中全無改變的保存了下來。這種相似性提示由微生物產出菌硒的生物利用度和安全性，要優于其他人工合成的硒化合物。
通過大量自然選擇及純培養，分離得到可以利用化學能的ZM短桿菌，對硒元素具有特殊選擇吸收、利用能力，稱為嗜硒的ZM短桿菌。對硒承受力為耐受硒量較大的酵母菌的兩千倍以上。
嗜硒的ZM短桿菌，菌體長1～2μm，運動方式滑動，菌落平薄有光澤，邊緣不整齊，半透明，格蘭氏染色陰性，對抗菌素敏感性差別很大，無抑菌作用，能分解瓊脂及利用纖維素。吸收硒后菌體變紅、縮小。
實施例1一種嗜硒ZM短桿菌，該嗜硒ZM短桿菌為噬纖維菌屬(Cytophaga)的短桿菌，保藏菌名稱為生孢噬纖維細菌(Sporocytophaga sp.)，保藏單位中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏日期2006年04月21日，保藏號CGMCC1694。所述嗜硒ZM短桿菌，菌體長1～2μm，運動方式滑動，菌落平薄有光澤，邊緣不整齊，半透明，格蘭氏染色陰性，對抗菌素敏感性差別很大。
利用載體攜帶目的基因，靶向高效表達是基因治療成功的關鍵。篩選出對人體無毒副作用、與硒具有高度親和力，能利用化學能的菌種作為載體，硒結合到菌體上形成硒蛋白，并在靶器官腫瘤細胞表達，實現對腫瘤組織的特異性殺傷。
本發明經大量篩選工作，得到嗜硒ZM短桿菌，菌體無色，菌體長1～2μm，寬0.4～0.6μm，運動方式靈活，菌落平薄有光澤，邊緣不整齊，耐干燥，對抗菌素敏感性差別很大，無抑菌作用。
上述的嗜硒ZM短桿菌在生物紅硒制備方面的應用，可按如下順序依次進行(A)菌液制備將嗜硒ZM菌接種于1.5％蛋白胨液體培養基中，于37℃培養24小時，備用。
(B)硒的制備按下列順序依次進行1)于1％蛋白胨液體培養基50ml中，分別加入上述菌液、4％的亞硒酸鈉溶液1ml，在24℃環境下培養，發酵液由淺黃色變為紅色，顯微鏡下可見紅色ZM菌滑動；2)經濃縮處理可得到20mg/ml(以Na2SeO3 5H2O計)的紅色菌硒。每個菌體都像一個盛硒的袋子，內里裝著紅色生物硒，為此也稱為生物紅硒，產量極高，十分罕見。
嗜硒ZM菌可在硒濃度為2％～4％的培養基中繁殖發酵，由于發酵液濃度高，一般微生物無法生存，因此制備過程中不會染雜菌。
上述A項菌液制備中蛋白胨液體培養基中含有0.1％磷酸氫二鉀K2HPO43H2O。
實施例2如實施例1所述嗜硒ZM短桿菌在生物紅硒制備方面的應用，可按如下順序依次進行(A)菌液制備將嗜硒ZM菌接種于1.5％蛋白胨液體培養基中，于37℃培養24小時，備用。
(B)生物紅硒的制備按下列順序依次進行1)于1～2％蛋白胨液體培養基1000ml中，分別加入上述菌液、5％的亞硒酸鈉溶液10ml，在40℃環境下培養，發酵液由淺黃色變為紅色，顯微鏡下可見紅色ZM菌滑動；2)經濃縮處理可得到50mg/ml(以Na2SeO35H2O計)的紅色菌硒。
上述A項菌液制備中蛋白胨液體培養基中含有0.1％磷酸氫二鉀K2HPO43H2O。
以生物硒作為主藥制成的復方制劑(長壽飲)治療腫瘤的療效1)單獨使用手術患者(包括淋巴轉移1/2)，如及時給藥(手術后一、二月內)可阻斷轉移、復發，可達痊愈(五年以上生存)。無手術機會晚期患者，用藥2～3月，可見腫瘤不同程度穩定、縮小、消失。帶瘤生存或部分治愈(三年以上生存者不鮮見)。
2)聯合用藥與放化療聯合使用，可減輕對骨髓粒系的毒性反應，腎毒性，胃腸反應等，增加肌體對放化療的耐受性，提高療效。
本品為廣譜抗癌藥，未發現不良反應和耐藥性選擇嗜硒ZM菌經生物發酵制得產量高、毒性低、療效好的生物紅硒，是一種理想的硒源，可制成原料藥，亦可制成單方或復方制劑，治療多種疾病。
作為原料藥硒對人體健康有著重要作用，長壽老人血硒比正常高出3倍，硒與癌癥、艾滋病等40多種疾病有關，且有良好預防和治療作用，生物硒可作為單味藥使用或作為原料藥開發。
作為復方制劑以生物紅硒作為主藥，配以某些生命成分調整多種酶系統，改變肌體內環境，用生物化學或植物化學方法制成復方制劑(口服給藥)，用于多種癌癥(廣譜)治療，收到理想療效，未發現不良反應和耐藥性。
對癌癥治療可顯著提高肌體免疫力，縮小腫塊，消除抑郁調節精神，明顯緩解晚期癌癥病人劇痛。對癌細胞作用逆轉癌細胞為正常細胞，阻斷復發轉移，加速其凋亡。
推測生物紅硒類藥物對艾滋病、自身免疫系統疾病也會有很好的療效。
權利要求
1.一種嗜硒ZM短桿菌，其特征在于該嗜硒ZM短桿菌保藏名稱為生孢噬纖維細菌(Sporocytophaga sp.)，保藏單位中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏日期2006年04月21日，保藏號CGMCC1694。
2.根據權利要求1所述的嗜硒ZM短桿菌，其特征在于所述嗜硒ZM短桿菌，菌體長1～2μm，運動方式滑動，菌落平薄有光澤，邊緣不整齊，半透明，格蘭氏染色陰性，對抗菌素敏感性差別很大，無抑菌作用。
3.根據權利要求1或2所述的嗜硒ZM短桿菌在生物紅硒制備方面的應用，其特征在于按如下順序依次進行(A)菌液制備將嗜硒ZM短桿菌接種于1.5％蛋白胨液體培養基中，于37℃培養24小時，備用；(B)生物紅硒的制備按下列順序依次進行1)于1～5％蛋白胨液體培養基50ml～1000ml中，分別加入上述菌液、4～5％的亞硒酸鈉溶液1ml～10ml，在24℃～40℃環境下培養，發酵液由淺黃色變為紅色，顯微鏡下可見紅色ZM菌滑動；2)經濃縮處理可得到以Na2SeO35H2O計20～50mg/ml的紅色菌硒。
4.根據權利要求3所述的嗜硒ZM短桿菌在生物紅硒制備方面的應用，其特征在于所述A項菌液制備中蛋白胨液體培養基中含有0.1％磷酸氫二鉀K2HPO43H2O。
全文摘要
本發明公開一種嗜硒ZM短桿菌及其在制備生物紅硒方面的應用，該嗜硒ZM短桿菌保藏名稱為生孢噬纖維細菌(Sporocytophagasp.)，保藏日期2006年04月21日，保藏號CGMCC1694。上述短桿菌在制備生物紅硒時，可采用下列步驟(A)菌液制備將嗜硒ZM菌接種于培養基中，備用。(B)生物紅硒的制備按下列順序依次進行1)于培養基中，分別加入上述菌液、亞硒酸鈉溶液進行培養，發酵液由淺黃色變為紅色，顯微鏡下可見紅色ZM菌滑動；2)經濃縮處理可得到紅色菌硒。本發明所得目標產物無毒，具有很高藥理活性，能治療多種疾病。它必將有效地參與癌癥，艾滋病等重大疾患的攻克，并發揮其巨大威力。
文檔編號C12P1/04GK1995328SQ200610087448
公開日2007年7月11日 申請日期2006年6月12日 優先權日2006年6月12日
發明者張敏, 劉曉濤 申請人:張敏