專利名稱：一種油田現場硝酸鹽還原菌的檢測方法
技術領域：
本發明屬于油田微生物檢測技術領域，特別是涉及一種油田現場硝酸鹽還原菌的 檢測方法
背景技術：
目前，在油田各項指標監測治理過程中，常常需要對微生物的數量進行檢測，對油 田水樣中的微生物數量測定可以監測和評價水質及污染情況。傳統的微生物檢測方法十分 繁瑣、費時及受環境條件限制較強，如平板菌落計數法，需要在實驗室無菌條件下進行，而 將油田現場水樣運送到實驗室，微生物數量及類型均會受到一定的影響。油田現場經常會 有大量的水樣需要進行微生物的測定，傳統的檢測方法已不能滿足實際的需要。
發明內容
本發明為解決現有技術存在的問題，提供了一種油田現場硝酸鹽還原菌的檢測方法。本發明目的是提供一種具有操作簡單，數據可靠，準確快速，便于攜帶，檢測效率 高，方便油田現場微生物檢測等特點的油田現場硝酸鹽還原菌的檢測方法。為了克服現有技術的不足，本發明油田現場硝酸鹽還原菌的檢測方法采用如下技 術方案
一種油田現場硝酸鹽還原菌的檢測方法，其特征是硝酸鹽還原菌檢測包括檢測瓶制 作和油田現場檢測；
1)硝酸鹽還原菌檢測瓶制作
(1)清洗
玻璃瓶清洗，橡膠塞和鋁箔蓋清洗，然后用清水漂清，再用蒸餾水將玻璃瓶、橡膠塞、鋁 箔蓋清洗干凈，空干殘水；
(2)培養基配制
在常溫常壓下，培養基按硝酸鹽還原菌測試瓶要求配制；
(3)封裝和滅菌
將配制的培養基用移液器裝進玻璃瓶內，蓋上橡膠塞和鋁箔蓋，再用壓蓋器將其壓緊 密封；將經加蓋封口的測試瓶用高溫蒸汽滅菌鍋在100 - 140°C條件下進行高溫滅菌10 -30分鐘；
2)油田現場硝酸鹽還原菌采用絕跡稀釋法進行檢測
檢測油田現場待測水樣中的硝酸鹽還原菌的菌數時，將待測水樣用無菌注射器逐級注 入測試瓶中稀釋培養，直到最后一個測試瓶無菌生長為止，根據稀釋的倍數計算出待測水 樣中細菌的數目。本發明油田現場硝酸鹽還原菌的檢測方法還可以采用如下技術措施
所述的油田現場硝酸鹽還原菌的檢測方法，其特點是玻璃瓶清洗是將5 - 20mL玻璃瓶、橡膠塞和鋁箔蓋清洗是在洗衣粉水中清洗1 一 3次后于清水中漂洗，再用蒸餾水清洗， 空干殘水。所述的油田現場硝酸鹽還原菌的檢測方法，其特點是培養基的重量配方為蛋白 胨0. 5 lg，牛肉粉0. 1 0. 5g,酵母粉0. 1 0. 5g，氯化鈉0. 5 lg，硝酸鉀0. 05 0. 3g,硝酸鈉0. 05 0. 3g,硝酸銨0. 05 0. 2g,礦物質鎂0. 0002 0. OOlg,鐵0. 0002 0. 0005g，蒸餾水 100mL。所述的油田現場硝酸鹽還原菌的檢測方法，其特點是封裝前，調節培養基溶液的 PH值為7 — 7. 6，將配制的培養基用移液器以4 - ISmL/瓶的量裝進洗凈的玻璃瓶內。所述的油田現場硝酸鹽還原菌的檢測方法 ，其特點是待測水樣用無菌注射器逐 級注入測試瓶中稀釋培養步驟；
1)準備數支已經過滅菌消毒干凈的ImL醫用注射器；
2)捆綁數個測試瓶，作為一排硝酸鹽還原菌測試瓶，依次編上序號；
3)用注射器取ImL待測水樣注入第1號測試瓶，充分震蕩；另取一支注射器從第1號 測試瓶內取ImL液體注入第2號測試瓶，充分震蕩，以此類推到最后一個測試瓶；
4)將注入油田現場水樣的硝酸鹽還原菌測試瓶進行實驗室內培養，定期進行檢測讀數。本發明具有的優點和積極效果
油田現場硝酸鹽還原菌的檢測方法，由于采用了本發明全新的技術方案，與現有技術 相比，本發明油田現場硝酸鹽還原菌的檢測方法具有以下特點
(1)該油田現場硝酸鹽還原菌的檢測方法，生產過程簡單，可靠性強，經濟實用。(2)硝 酸鹽還原菌測試瓶能夠快速準確地測定硝酸鹽還原菌的菌數，使用操作簡單，便于攜帶，方 便用于油田微生物的檢測。本發明具有操作簡單，數據可靠，準確快速，便于攜帶，檢測效率高，方便油田現場 微生物檢測等優點。
具體實施例方式為能進一步了解本發明的技術內容、特點及功效，茲列舉以下實例，并詳細說明如 下
實施例1
一種油田現場硝酸鹽還原菌的檢測方法，包括檢測瓶制作和油田現場檢測，具體的操 作方法和檢測步驟為
1.硝酸鹽還原菌檢測瓶制作 (1)材料清洗
將IOmL玻璃瓶在洗衣粉水中清洗兩次，橡膠塞和鋁箔蓋在洗衣粉水中清洗一次，然后 用清水漂清至沒有泡沫，再用蒸餾水將玻璃瓶、橡膠塞、鋁箔蓋清洗干凈，空干殘水，待用。(2)培養基配制
在常溫常壓下，按NRB測試培養基配制說明配制培養基。配方為 生長因子(蛋白胨0. 5 lg，牛肉粉0. 1 0. 5g,酵母粉0. 1 0. 5g)，氯化鈉0. 5 Ig,硝酸鉀0. 05 0. 3g，硝酸鈉0. 05 0. 3g，硝酸銨0. 05 0. 2g，微量元素(礦物質鎂0. 0002 0. OOlg,鐵0. 0002 0. 0005g),蒸餾水IOOmL0調節溶液的pH值，使其達到7.0 7.6。(3)封裝和滅菌
將配制的培養基用移液器以9mL/瓶的量裝進洗凈的玻璃瓶內，蓋上橡膠塞和鋁箔蓋， 再用壓蓋器將其壓緊密封；將經加蓋封口的測試瓶用高溫蒸汽滅菌鍋在121°C條件下進行 高溫滅菌20分鐘。(4)捆綁
將密封滅菌好的瓶子待溫度降至室溫后，η個/組用寬膠帶捆綁。完成后即可帶去油 田現場進行硝酸鹽還原菌的檢測。
2.硝酸鹽還原菌檢測瓶油田現場使用
采用硝酸鹽還原菌菌數測試瓶測定待測水樣中的硝酸鹽還原菌的菌數時，按照絕跡稀 釋法原理，將待測水樣用無菌注射器逐級注入測試瓶中稀釋培養，直到最后一個測試瓶無 菌生長為止，根據稀釋的倍數計算出待測水樣中細菌的數目。具體操作采用以下的方法和 步驟
(1)準備數支已經過滅菌消毒干凈的ImL醫用注射器，備用；
(2)取上述一捆綁好η個測試瓶為一排的硝酸鹽還原菌測試瓶，并依次編上序號1、2、 3......
(3)用上述準備好的注射器取ImL待測水樣并注入到1號測試瓶中，充分震蕩50下；
(4)另取一支無菌注射器從震蕩后的1號測試瓶內取出ImL液體注入到2號測試瓶內， 充分震蕩50下，以此類推到最后一個測試瓶中；
(5)將注入現場水樣的硝酸鹽還原菌測試瓶帶回到實驗室中進行規定溫度的培養，定 期進行檢測讀數。
權利要求
一種油田現場硝酸鹽還原菌的檢測方法，其特征是硝酸鹽還原菌檢測包括檢測瓶制作和油田現場檢測；1)硝酸鹽還原菌檢測瓶制作(1)清洗玻璃瓶清洗，橡膠塞和鋁箔蓋清洗，然后用清水漂清，再用蒸餾水將玻璃瓶、橡膠塞、鋁箔蓋清洗干凈，空干殘水；(2)培養基配制在常溫常壓下，培養基按硝酸鹽還原菌測試瓶要求配制； (3)封裝和滅菌將配制的培養基用移液器裝進玻璃瓶內，蓋上橡膠塞和鋁箔蓋，再用壓蓋器將其壓緊密封；將經加蓋封口的測試瓶用高溫蒸汽滅菌鍋在100－140℃條件下進行高溫滅菌10－30分鐘；2)油田現場硝酸鹽還原菌采用絕跡稀釋法進行檢測檢測油田現場待測水樣中的硝酸鹽還原菌的菌數時，將待測水樣用無菌注射器逐級注入測試瓶中稀釋培養，直到最后一個測試瓶無菌生長為止，根據稀釋的倍數計算出待測水樣中細菌的數目。
2.按照權利要求1所述的的油田現場硝酸鹽還原菌的檢測方法，其特征是玻璃瓶清 洗是將5 - 20mL玻璃瓶、橡膠塞和鋁箔蓋清洗是在洗衣粉水中清洗1 一 3次后于清水中漂 洗，再用蒸餾水清洗，空干殘水。
3.按照權利要求1所述的的油田現場硝酸鹽還原菌的檢測方法，其特征是培養基的 重量配方為蛋白胨0.5 lg，牛肉粉0. 1 0. 5g,酵母粉0. 1 0. 5g，氯化鈉0. 5 lg，硝 酸鉀0. 05 0. 3g，硝酸鈉0. 05 0. 3g，硝酸銨0. 05 0. 2g，礦物質鎂0. 0002 0. OOlg, 鐵 0. 0002 0. 0005g,蒸溜水 100mL。
4.按照權利要求1所述的的油田現場硝酸鹽還原菌的檢測方法，其特征是封裝前，調 節培養基溶液的PH值為7 — 7. 6，將配制的培養基用移液器以4 - ISmL/瓶的量裝進洗凈 的玻璃瓶內。
5.按照權利要求1所述的的油田現場硝酸鹽還原菌的檢測方法，其特征是待測水樣 用無菌注射器逐級注入測試瓶中稀釋培養步驟；(1)準備數支已經過滅菌消毒干凈的ImL醫用注射器；(2)捆綁數個測試瓶，作為一排硝酸鹽還原菌測試瓶，依次編上序號；(3)用注射器取ImL待測水樣注入第1號測試瓶，充分震蕩；另取一支注射器從第1號 測試瓶內取ImL液體注入第2號測試瓶，充分震蕩，以此類推到最后一個測試瓶；(4)將注入油田現場水樣的硝酸鹽還原菌測試瓶進行實驗室內培養，定期進行檢測讀數。
全文摘要
本發明涉及一種油田現場硝酸鹽還原菌的檢測方法。本發明屬于油田微生物檢測技術領域。一種油田現場硝酸鹽還原菌的檢測方法，1)硝酸鹽還原菌檢測瓶制作(1)玻璃瓶清洗，橡膠塞和鋁箔蓋清洗，然后用清水漂清，再用蒸餾水清洗，空干殘水；(2)培養基按NRB測試要求配制；(3)封裝和滅菌，將培養基裝進玻璃瓶，蓋上橡膠塞和鋁箔蓋壓緊密封；用高溫蒸汽在100－140℃條件下進行高溫滅菌10－30分鐘；2)油田現場硝酸鹽還原菌采用絕跡稀釋法檢測將待測水樣用無菌注射器逐級注入測試瓶中稀釋培養，直到最后一個測試瓶無菌生長為止，計算待測水樣中細菌的數目。本發明具有操作簡單，數據可靠，準確快速，便于攜帶，檢測效率高等優點。
文檔編號C12Q1/12GK101948905SQ201010278200
公開日2011年1月19日 申請日期2010年9月10日 優先權日2010年9月10日
發明者張心平, 胡欣 申請人:天津億利科石油技術發展有限公司