專利名稱：一種提高2,2′,4,4′-四溴聯苯醚回收率的破乳方法
技術領域：
本發明涉及一種破乳方法。
背景技術：
2,2'，4，4'-四溴聯苯醚是環 境中普遍檢出且生物毒性較大的一種溴代阻燃齊U。自然界中存在著能夠利用2，2'，4，4'-四溴聯苯醚為能源進行生長的微生物，同時也存在著利用其代謝產物進行生長并進一步脫毒的微生物。在測定微生物對其降解過程中，由于細菌表面的疏水性及其分泌的胞外物導致液液萃取測定回收率過程中出現嚴重的乳化現象，使得回收率過低，而對2，2'，4，4'-四溴聯苯醚的降解率是通過其回收率體現的，乳化現象的存在不能真實反應微生物對2，2'，4，4'-四溴聯苯醚的降解率。因此，有效的破乳是提高回收率的前提，是進行微生物降解2，2'，4，4'-四溴聯苯醚實驗的先決條件。
發明內容
本發明是要解決細菌降解2，2'，4，4'-四溴聯苯醚的過程中存在嚴重的乳化現象而不能真實反應細菌對2，2'，4，4'-四溴聯苯醚的降解率的問題，提供一種提高2，2'，4，4'-四溴聯苯醚回收率的破乳方法。本發明提高2，2'，4，4'-四溴聯苯醚回收率的破乳方法，按以下步驟進行一、挑取可降解2，2'，4，4'-四溴聯苯醚的細菌接種于LB液體培養基，于35°C、130r/min震蕩培養24h，得菌液；二、將菌液于12000r/min離心lOmin，收集菌體，用無機鹽液體培養基洗滌菌體3次，將洗滌后的菌體用無機鹽液體培養基稀釋，得菌懸液；三、添加10 ii L濃度為200mg/L的2，2'，4，4'-四溴聯苯醚甲醇儲備液于樣品瓶中，待儲備液中甲醇揮發完全后，向樣品瓶中加入菌懸液使2,2'，4，4'-四溴聯苯醚的濃度為100 ii g/L，得混合液；四、向混合液中加入甲醇，甲醇的體積為混合液體積的50%，然后再加入6 IOmL萃取液，于60 80°C水浴20min,再以3000r/min離心15 20min進行破乳,然后進行液液萃取，回收萃取液，應用GC-MS測定2，2'，4，4'-四溴聯苯醚回收率，即完成。與現有方法相比，本發明的方法破乳效果好，可提高2，2'，4，4'-四溴聯苯醚的回收率，回收率可達93%以上，進而真實反映細菌降解2，2'，4，4'-四溴聯苯醚的能力，提高細菌對2，2'，4，4'-四溴聯苯醚降解率的準確性，具有至關重要的應用性和科學性。本發明的操作簡單易行，也可用于其它持久性有機污染物微生物降解測定回收率過程中破乳化實驗，以期能夠最大程度上反映真實降解值。
具體實施例方式本發明技術方案不局限于以下所列舉具體實施方式
，還包括各具體實施方式
間的任意組合。
具體實施方式
一本實施方式提高2，2' AA'-四溴聯苯醚回收率的破乳方法，按以下步驟進行一、挑取可降解2，2'，4，4'-四溴聯苯醚的細菌接種于LB液體培養基，于35°C、130r/min震蕩培養24h，得菌液；二、將菌液于12000r/min離心lOmin，收集菌體，用無機鹽液體培養基洗滌菌體3次，將洗滌后的菌體用無機鹽液體培養基稀釋，得菌懸液；三、添加，4，4'-四溴聯苯醚甲醇儲備液于樣品瓶中，待儲備液中甲醇揮發完全后，向樣品瓶中加入菌懸液使2，2'，4，4'-四溴聯苯醚的濃度為IOOy g/L，得混合液；四、向混合液中加入甲醇，甲醇的體積為混合液體積的50%，然后再加入6 10mT,萃取液，于60 80°C水浴20min,再以3000r/min離心15 20min進行破乳，然后進行液液萃取，回收萃取液，應用GC-MS測定2，2'，4，4'-四溴聯苯醚回收率，即完成。
本實施方式步驟三所述2，2'，4，4'-四溴聯苯醚甲醇儲備液即為2，2'，4，4/ -四溴聯苯醚的甲醇溶液。本實施方式步驟一中每升LB液體培養基由IOg蛋白胨、5g酵母浸膏、IOg NaCl和余量的蒸餾水組成，PH為7. O。步驟二中每升無機鹽液體培養基由3. 5g Na2HPO4 2H20、lgKH2P04、0. 5g (NH4)2SO4^O. Ig MgCl2 6H20、0. 005g Ca(NO3)2 4H20 和余量的蒸餾水組成，pH為 8. O。
具體實施方式
二 本實施方式與具體實施方式
一不同的是步驟二中菌懸液在600nm處吸光值為I。其它與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
三本實施方式與具體實施方式
一或二不同的是步驟四中再加入8mL萃取液。其它與具體實施方式
一或二相同。
具體實施方式
四本實施方式與具體實施方式
一至三之一不同的是步驟四所述萃取液為正己烷。其它與具體實施方式
一至三之一相同。
具體實施方式
五本實施方式與具體實施方式
一至四之一不同的是步驟四中于70°C水浴20min。其它與具體實施方式
一至四之一相同。
具體實施方式
六本實施方式提高2，2'，4，4'-四溴聯苯醚回收率的破乳方法，按以下步驟進行一、挑取可降解2，2'，4，4'-四溴聯苯醚的細菌接種于LB液體培養基，于35°C、130r/min震蕩培養24h，得菌液；二、將菌液于12000r/min離心lOmin，收集菌體，用無機鹽液體培養基洗滌菌體3次，將洗滌后的菌體用無機鹽液體培養基稀釋，得菌懸液；三、添加，4，4'-四溴聯苯醚甲醇儲備液于樣品瓶中，待儲備液中甲醇揮發完全后，向樣品瓶中加入菌懸液使2，2'，4，4'-四溴聯苯醚的濃度為IOOy g/L，得混合液；四、向混合液中加入甲醇，甲醇的體積為混合液體積的50%，然后再加入IOmL正己燒,于60°C水浴20min,再以3000r/min離心20min進行破乳,然后進行液液萃取，回收正己烷，應用GC-MS測定2，2'，4，4'-四溴聯苯醚回收率，即完成。本實施方式步驟一中可降解2,2' AA'-四溴聯苯醚的細菌為Burkholderiaxenovorans LB400，購買自百靈威科技有限公司，編號為DSMZ NO. 17367。本實施方式2，2'，4，4'-四溴聯苯醚的回收率為95. 6%。為驗證本實施方式對2，2'，4，4'-四溴聯苯醚的回收效果，同時使用NaCl法、水浴法和超聲法進行破乳并回收2，2'，4，4'-四溴聯苯醚。2，2'，4，4'-四溴聯苯醚回收率分別為=NaCl法6.9%，水浴法73. 1%，超聲法68.8%。實驗結果表明本實施方式方法可提高2，2'，4，4'-四溴聯苯醚的回收率，進而真實反映細菌降解2，2'，4，4'-四溴聯苯醚的能力，提高細菌對2，2'，4，4'-四溴聯苯醚降解率的準確性 ，具有至關重要的應用性和科學性。
權利要求
1.一種提高2，2'，4，4'-四溴聯苯醚回收率的破乳方法，其特征在于提高2，2'，4，4/ -四溴聯苯醚回收率的破乳方法，按以下步驟進行一、挑取可降解2，2'，4，4'-四溴聯苯醚的細菌接種于LB液體培養基，于35°C、130r/min震蕩培養24h，得菌液；二、將菌液于12000r/min離心lOmin，收集菌體，用無機鹽液體培養基洗滌菌體3次，將洗滌后的菌體用無機鹽液體培養基稀釋，得菌懸液；三、添加IOy L濃度為200mg/L的2，2'，4，4'-四溴聯苯醚甲醇儲備液于樣品瓶中，待儲備液中甲醇揮發完全后，向樣品瓶中加入菌懸液使2,2'，4，4'-四溴聯苯醚的濃度為IOOii g/L，得混合液；四、向混合液中加入甲醇，甲醇的體積為混合液體積的50%,然后再加入6 IOmL萃取液,于60 80°C水浴20min,再以3000r/min離心15 20min進行破乳,然后進行液液萃取，回收萃取液,應用GC-MS測定2,2'，4，4'-四溴聯苯醚回收率，即完成。
2.根據權利要求I所述的一種提高2，2'，4，4'-四溴聯苯醚回收率的破乳方法，其特征在于步驟二中菌懸液在600nm處吸光值為I。
3.根據權利要求I或2所述的一種提高2，2'，4，4'-四溴聯苯醚回收率的破乳方法，其特征在于步驟四中再加入SmL萃取液。
4.根據權利要求3所述的一種提高2，2'，4，4'-四溴聯苯醚回收率的破乳方法，其特征在于步驟四所述萃取液為正己烷。
5.根據權利要求4所述的一種提高2，2'，4，4'-四溴聯苯醚回收率的破乳方法，其特征在于步驟四中于70°C水浴20min。
全文摘要
一種提高2，2′，4，4′-四溴聯苯醚回收率的破乳方法，涉及一種破乳方法。是要解決細菌降解2，2′，4，4′-四溴聯苯醚的過程中存在嚴重的乳化現象而不能真實反應細菌對2，2′，4，4′-四溴聯苯醚的降解率的問題。方法挑取可降解2，2′，4，4′-四溴聯苯醚的細菌接種于LB液體培養基，培養得菌液；離心收集菌體，用無機鹽液體培養基稀釋得菌懸液；待儲備液中甲醇揮發完全后加入菌懸液，得混合液；向混合液中加入甲醇、萃取液，水浴離心進行破乳，萃取，回收萃取液，測定回收率，即完成。本發明的方法破乳效果好，2，2′，4，4′-四溴聯苯醚的回收率可達93％以上。用于2，2′，4，4′-四溴聯苯醚的降解率測定。
文檔編號C12Q1/02GK102732594SQ20121025670
公開日2012年10月17日 申請日期2012年7月24日 優先權日2012年7月24日
發明者關健飛, 劉翔, 宋北, 楊雪辰, 王繼華, 辛佳 申請人:哈爾濱師范大學