專利名稱：解淀粉芽孢桿菌及其用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種解淀粉芽孢桿菌及其用途，屬于微生物領域。
背景技術：
四甲基吡嗪又叫川芎嗪(Ligustrazine，縮寫為TTMP)，其藥理作用主要有擴張血管；輕度降壓；改善組織微循環，提高組織血液灌注；抑制血小板粘附聚集和血栓形成；抑制平滑肌細胞和成纖維細胞增生；調節脂質代謝、抗脂質過氧化；有一定的調解免疫的作用；抗組織纖維化，對肺纖維化和肝纖維化有一定的治療作用。而吡嗪類化合物(在白酒中 的含量300(T6000ug/L)是中國傳統固態發酵白酒特有的風味成分，也是酒體中的健康因子。因此，提高白酒中四甲基吡嗪的含量可以有利于人體健康。若能從釀酒環境中選育出代謝四甲基吡嗪的功能菌株，對白酒業來說具有重大的現實意義。目前報道顯示解淀粉芽孢桿菌可產α-淀粉酶、β -I, 3-1，4_葡聚糖酶、蛋白酶等多種酶類，已廣泛用于酶制劑生產[1_3]。一些研究表明，解淀粉芽孢桿菌還能產生抗菌蛋白、iturin (伊枯草菌素)、surfactin (表面活性素)、fengycin (芬莽素)和bacillomycin (桿菌霉素)等抗菌物質，抗菌譜廣，特別是對于霉菌有較好的抑制作用[4_8]，而對于產吡嗪類化合物的解淀粉芽孢桿菌還未見報道。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供一株解淀粉芽孢桿菌Bacillusamyloliquefaciens JNC-002,該菌株于2012年4月6日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏號為CGMCC No. 5740，保藏地址北京市朝陽區北辰西路I號院3號中國科學院微生物研究所，郵編100101。進一步的，解淀粉芽孢桿菌的16S rDNA序列如SEQ ID No. 3所示。進一步的，該菌株的細菌學特征如下菌體呈桿狀，長度2 3 μ m，直徑O. 6^0. 8 μ m,無莢膜，中生芽孢；菌落呈奶油色、不透明、菌落邊緣粗糙擴散；生理生化特征為革蘭氏陽性，過氧化氫酶陽性，卵黃反應陰性，吲哚反應陽性，可水解明膠、淀粉、酪蛋白，利用檸檬酸鹽、銨鹽、丙二酸，硝酸鹽還原陽性，以阿拉伯糖、木糖、甘露醇代替葡萄糖可產酸。本發明還提供了解淀粉芽孢桿菌的培養方法，將解淀粉芽孢桿菌接種到成分為蔗糖80 120g/L，豆餅粉25 40g/L、酵母膏3 5g/L、磷酸氫二銨25 60g/L，pH7. 0^7. 5的培養基中，35 37°C溫度下，18(T200rpm培養96 120h。進一步的，所述培養基成分為蔗糖100g/L，豆餅粉40g/L，酵母膏5g/L、磷酸氫二銨 40g/L，pH7.5。本發明還提供了解淀粉芽孢桿菌在生產四甲基吡嗪中的用途。本發明還提供了解淀粉芽孢桿菌在釀酒中的用途。本發明還提供了解淀粉芽孢桿菌的培養方法在生產四甲基吡嗪中的用途。
本發明還提供了解淀粉芽孢桿菌的培養方法在釀酒中的用途。本發明的菌株是從四川劍南春(集團)有限責任公司的酒曲中分離獲得。本發明的有益效果在于本發明首次發現一株高產四甲基吡嗪的解淀粉芽孢桿菌。該菌株產四甲基吡嗪的能力可達到約2. 4g/L，為四甲基吡嗪的生產提供了新的選擇，為生物制藥提供了寶貴的菌種資源，具有極大的應用應用價值。本發明解淀粉芽孢桿菌是從酒曲中分離出來的，可用于生產白酒，提高酒體中四甲基吡嗪的含量，為增強酒體典型風味特征提供了新途徑。本發明提供的解淀粉芽孢桿菌Bacillus amyloliquefaciens,于2012年2月I日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏號為CGMCCNo.5740。
圖I、初篩得到各菌株的產四甲基吡嗪的能力。圖2、氮源優化實驗結果。圖3、本發明解淀粉芽孢桿菌的菌體形態，顯微鏡放大倍數為100倍。
具體實施例方式本發明的解淀粉芽抱桿菌Bacillus amyloliquefaciens JNC-002菌株于2012年4月6日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏號為CGMCCNo. 5740，保藏地址北京市朝陽區北辰西路I號院3號中國科學院微生物研究所，郵編100101。進一步的，解淀粉芽孢桿菌的16S rDNA序列如SEQ ID No. 3所示。進一步的，該菌株的細菌學特征如下菌體呈桿狀，長度2 3 μ m，直徑O. 6^0. 8 μ m,無莢膜，中生芽孢；菌落呈奶油色、不透明、菌落邊緣粗糙擴散；生理生化特征為革蘭氏陽性，過氧化氫酶陽性，卵黃反應陰性，吲哚反應陽性，可水解明膠、淀粉、酪蛋白，利用檸檬酸鹽、銨鹽、丙二酸，硝酸鹽還原陽性，以阿拉伯糖、木糖、甘露醇代替葡萄糖可產酸。具體的，解淀粉芽孢桿菌的培養方法將解淀粉芽孢桿菌接種到成分為蔗糖8(Tl20g/L，豆餅粉25 40g/L、酵母膏3 5g/L、磷酸氫二銨25 60g/L，pH7. 0^7. 5的培養基中，35 37°C溫度下，18(T200rpm 培養 96 120h。進一步的，所述培養基成分為蔗糖100g/L，豆餅粉40g/L，酵母膏5g/L、磷酸氫二銨 40g/L，pH7.5。本發明還提供了解淀粉芽孢桿菌在生產四甲基吡嗪中的用途。本發明還提供了解淀粉芽孢桿菌在釀酒中的用途。本發明還提供了解淀粉芽孢桿菌的培養方法在生產四甲基吡嗪中的用途。本發明還提供了解淀粉芽孢桿菌的培養方法在釀酒中的用途。本發明的菌株是從四川劍南春(集團)有限責任公司的酒曲中分離獲得。本發明解淀粉芽孢桿菌產四甲基吡嗪能力可以達到2. (Γ2. 4g/L，是一株高產四甲基吡嗪的新菌株，可用于四甲基吡嗪的生產。本發明解淀粉芽孢桿菌是從酒曲中分離出來的，可用于生產白酒，提高酒體中四甲基吡嗪的含量，為增強酒體典型風味特征提供了新途徑。同時，本發明解淀粉芽孢桿菌也為生物制藥提供了寶貴的菌種資源，具有極大的應用價值。實施例I菌株篩選I、菌株的初篩材料四川劍南春(集團)有限責任公司使用的酒曲培養基酪蛋白20.0g，氯化銨l.Og，牛肉膏1.(^，氯化鎂5.(^，瓊脂20.(^，蒸餾水定容至IOOOmL, pH 7. O實驗方法無菌條件下取10克酒曲于裝有90mL無菌水并放有玻珠的25mL三角瓶中，置搖床上室溫振蕩30分鐘。取菌液按10倍的梯度稀釋到10_6，取各稀釋度菌液ImL放入無菌平皿中，倒入滅菌后冷卻至50°C的培養基，混勻，待凝固后放入37°C培養箱培養5 7天，按其是否產透明圈及透明圈內外直徑比值對菌株進行初篩。微生物學認為能夠降解酪蛋白的細菌，能產吡嗪類物質。菌體降解酪蛋白時，因利用酪蛋白而會在菌體周圍形成一個透明圈。因為微生物菌落本身大小有差異，所以根據透明圈外直徑與內直徑的比值來篩選，能比較直觀的說明微生物降解酪蛋白的能力，進而反映出微生物產吡嗪類物質的能力。初篩得到的菌株經形態觀察發現菌株基本都是芽孢桿菌屬。表I初篩得到菌株的透明圈比值
權利要求
1.解淀粉芽孢桿菌Bacillusamyloliquefaciens JNC-002，保藏號為 CGMCC No. 5740。
2.根據權利要求I所述的解淀粉芽孢桿菌，其特征在于其16SrDNA序列如SEQ IDNo. 3所示。
3.根據權利要求I或2所述的解淀粉芽孢桿菌，其特征在于該菌株的細菌學特征如下菌體呈桿狀，長度2 3 μ m,直徑O. 6^0. 8 μ m,無莢膜，中生芽孢；菌落呈奶油色、不透明、菌落邊緣粗糙擴散；生理生化特征為 革蘭氏陽性，過氧化氫酶陽性，卵黃反應陰性，吲哚反應陽性，可水解明膠、淀粉、酪蛋白，利用檸檬酸鹽、銨鹽、丙二酸，硝酸鹽還原陽性，以阿拉伯糖、木糖、甘露醇代替葡萄糖可產酸。
4.解淀粉芽孢桿菌的培養方法，其特征在于將解淀粉芽孢桿菌接種到成分為蔗糖8(Tl20g/L，豆餅粉25 40g/L、酵母膏3 5g/L、磷酸氫二銨25 60g/L，pH7. 0^7. 5的培養基中，35 37°C溫度下，18(T200rpm 培養 96 120h。
5.根據權利要求4所述的解淀粉芽孢桿菌的培養方法，其特征在于所述培養基成分為鹿糖100g/L,豆餅粉40g/L,酵母膏5g/L、磷酸氫二銨40g/L, pH7. 5。
6.權利要求f3任一項所述的解淀粉芽孢桿菌在生產四甲基吡嗪中的用途。
7.權利要求f3任一項所述的解淀粉芽孢桿菌在釀酒中的用途。
8.權利要求4或5所述的解淀粉芽孢桿菌的培養方法在生產四甲基吡嗪中的用途。
9.權利要求4或5所述的解淀粉芽孢桿菌的培養方法在釀酒中的用途。
全文摘要
本發明涉及一株解淀粉芽孢桿菌及其用途，屬于微生物領域。本發明提供的解淀粉芽孢桿菌Bacillus amyloliquefaciens JNC-002及其用途，該菌株的保藏號為CGMCC No.5740，是從四川劍南春(集團)有限責任公司的酒曲中分離得到的。本發明解淀粉芽孢桿菌產四甲基吡嗪能力可以達到2.4g/L，可用于四甲基吡嗪的生產。
文檔編號C12R1/07GK102766592SQ201210277040
公開日2012年11月7日 申請日期2012年8月6日 優先權日2012年8月6日
發明者劉孟華, 唐清蘭, 徐占成, 徐姿靜, 樊科權, 焦小川 申請人:四川綿竹劍南春酒廠有限公司