一種檢測柯薩奇病毒a16型rna的方法及試劑盒的制作方法

專利名稱：一種檢測柯薩奇病毒a16型rna的方法及試劑盒的制作方法
技術領域：
本發明提供一種提取純化和檢測柯薩奇病毒A16型(Coxsackievirus A16, CA16)RNA的方法，并提供一種相應的檢測CA16RNA的試劑盒。
背景技術：
實時熒光PCR技術(FQ-PCR)把PCR、分子雜交和光化學融為一體，使PCR擴增和產物分析的全過程均在單管封閉條件下進行。實時熒光PCR技術與其它檢測技術相比具有以下優勢(1)與免疫學檢測比較，其具有更高的靈敏度，從理論上講只要有一個基因拷貝就可以檢測出來。(2)根據各種病原體獨特的保守基因序列設計引物，能夠保證PCR反應的高度特異性，避免交叉反應。(3)能對病毒進行定量檢測，可反映出患者體內病原體拷貝數的 高低和復制情況。定量檢測有助于判斷病原體感染與疾病發生和發展的關系，探討藥物對病原體的作用，了解感染疾病病人用藥后病情的變化情況。這對理解發病機制和預測抗病毒治療的有效性十分關鍵。(4)可擴大檢測人群的范圍，適用于大規模的流行病調查。對如手足口病這類自然感染率極高的病原微生物尤其適用。(5 )將PCR敏感性與探針特異性相結合，在很大程度上改變了傳統PCR的缺陷，縮短了反應時間，簡化了操作步驟(6)全過程均在單管封閉條件下進行，避免了由于樣本間交叉引起的假陰性和環境污染。(7)實時檢測技術可連續不斷的檢測PCR過程中榮耀信號的變化，避免了傳統PCR的“平臺期效應”，并且模板的定量不通過終產物，而由Ct值算出，準確性和靈敏性都有提高。目前，國內已有多種基于實時熒光定量PCR技術定量檢測CA16-RNA的試劑盒應用于臨床檢測中，這些試劑盒所提供的CA16-RNA提取方法主要是酚-氯仿法和柱提取法。該類試劑盒存在很多不足之處I)檢測靈敏度低，約在lOOOcopie/ml左右；檢測范圍窄，一般在 I. 00E+03copie/ml I. 00E+07copie/ml 之間，對于臨床高值(大于 5. 00E+07copie/ml)和低值(小于I. 00E+03copie/ml)的樣本無法檢測；2)對于CA16的不同亞型存在一定的漏檢現象；3)酚-氯仿法是最經典的RNA提取方法，但是操作繁瑣，對于設備和人員操作要求高，低病毒載量的標本檢出率低，且所用試劑具有一定的毒性；柱提取方法無需高速離心，但是需頻繁更換離心管，用時長，特異性較差；4)無法有效去除樣本中的PCR抑制物(如全血、痰液等)，體系中一般沒有陽性內對照(即內標)，無法預防假陰性；5)國外試劑成本和耗材成本太高，很難在臨床廣泛開展。磁珠(免疫磁珠)法是近年發展迅速且被廣泛應用的一種核酸提取方法，其優于傳統方法的特點可以總結為以下幾點其系列試劑不含氯仿、苯酚等毒性大的有機溶劑；提取純化的核酸質量好、產量高；提取步驟更簡單，不需要離心，易于實現自動化；這些優點使其有替代其它核酸提取和純化方法的發展趨勢。但在現有技術中，并未見有磁珠法用于提取純化和檢測CA16RNA的相關報道。

發明內容
本發明的目的在于解決現有柯薩奇病毒A16型(CA16RNA)熒光定量PCR檢測試劑盒的缺陷，提供一種RNA提取得率高、檢測靈敏度高、檢測范圍寬而準確的CA16核酸熒光PCR檢測試劑盒，可以對咽拭子、糞便等未知樣本中的CA16RNA進行快速、準確檢測，檢測結果可用于CA16感染的輔助診斷。本發明用磁珠法提取樣本核酸，采用實時熒光定量PCR技術，以CA16基因組的高度保守區域為擴增靶目標，設計特異性引物及TaqMan探針，在實時熒光PCR儀上通過PCR擴增對CA16RNA進行定性檢測。本發明提供一種檢測CA16RNA的方法，其中使用磁珠法提取和純化CA16RNA。在本發明中，所述磁珠是生物科學和納米材料科學二者結合的產品。它運用納米技術對超順磁性納米顆粒的表面進行改良和修飾后，制備成超順磁性氧化硅納米磁珠；該磁珠能在微觀界面上與核酸分子特異性地識別和高效結合。它利用氧化硅納米微球的超順磁性，在Chaotropic鹽(鹽酸胍、異硫氰酸胍等)和外加磁場的作用下,能將血液、動物組織、食品、病原微生物等樣本中的DNA和RNA分離出來，可應用于臨床疾病診斷、輸血安全、法醫 學鑒定、環境微生物檢測、食品安全檢測、分子生物學研究等多種領域。在本發明中，所述磁珠可經商購獲取。在優選的情況下，本發明結合使用磁珠法和實時熒光PCR技術提取純化和檢測CA16RNA。具體的，在一個實施方式中，本發明所述方法包括如下步驟，步驟A，裂解病毒每支離心管加入含磁珠的RNA提取溶液和待測樣本，混勻后離心；CA16陰性對照和CA16陽性對照參照與待測樣本相同的方法作RNA提取和純化處理；步驟B，磁珠吸附核酸每管加入含4-羥乙基哌嗪乙磺酸和氯化鈉的RNA提取溶液II，混勻后靜置；步驟C，去除雜質經離心后將離心管置于磁珠分離器上進行磁珠分離，再緩慢將溶液吸出；步驟D，洗滌每管加入含曲拉通和氯化鈉的RNA提取溶液III和含礦物油的RNA提取溶液IV，混勻后離心，將離心管再置于磁珠分離器上進行磁珠分離，靜置分層后將液體吸出丟棄；步驟E，RNA洗脫加入含Tris-HCl和EDTA的RNA洗脫液將離心管壁上的磁珠洗脫到管底，混勻并靜置后將離心管再次置于磁珠分離器上，然后將從磁珠上洗脫下來的RNA吸至新的滅菌離心管中；步驟F，熒光PCR分析將洗脫磁珠后的待測樣本RNA、CA16陰性對照、CA16陽性對照中均加入含PCR反應緩沖液、脫氧核糖核苷三磷酸、引物、探針的PCR反應液和含mMLV酶和H-Taq DNA聚合酶的CA16酶混合液，在熒光定量PCR擴增儀上進行PCR反應，并分析結果。本發明還提供一種檢測CA16RNA的試劑盒，包括含磁珠的RNA提取溶液、和含用于靶多核苷酸擴增的上游引物CA16-F、下游引物CA16-R和用于靶多核苷酸檢測的探針CA16-P的PCR反應液；其中，上游引物CA16-F的堿基序列為5 ' -GCCCTAGAGAAAAGGATGAACAACT-3 ';下游引物 CA16-R 的堿基序列為 5 ' -CAAGTGACTTGCCTGTTCCTGG-3 ；探針CA16-P 的堿基序列為 5’ FAM-CATGCAGTTCAAGAGCAAACACCGTATTGA-BHQ13’。在本發明的試劑盒中，發明人尋找出CA16基因組的保守序列而設計出用于靶多核苷酸擴增和檢測的引物和探針序列，為CA16RNA的實時熒光PCR檢測提供了保障。在本發明所述試劑盒中，優選的是，所述試劑盒中還包括內標，所述內標即為一段長為88堿基對的人工合成DNA序列插入pUC18T載體的重組體，即質粒，其堿基序列為5’_GCCAATACGACAAATCACCTTGGTCCTCTGTCATCCAGACTTCGCACGTCACGTATTCGAGGAGGTGCAATCTCAATTATGTCATCAG-3，。
在本發明一個具體實施方式
中，所述試劑盒中包括如下組分，①RNA提取溶液I :包含十二烷基硫酸鈉、曲拉通、異硫氰酸胍和100 400 μ g/ml的磁珠RNA提取溶液II 含4-羥乙基哌嗪乙磺酸和氯化鈉RNA提取溶液III :含曲拉通和氯化鈉RNA提取溶液IV :含礦物油RNA洗脫液含Tris-HCl和EDTA ;⑥內標如上所述的可選擇使用的內標； PCR反應液包括5XPCR反應緩沖液，脫氧核糖核苷三磷酸，用于靶多核苷酸擴增的上、下游引物CA16-F與CA16-R，用于靶多核苷酸檢測的探針CA16-P，用于內標擴增和檢測的上、下游引物IC-F與IC-R和探針IC-P '⑧CA16酶混合液含mMLV酶和H-TaqDNA聚合酶；(D CA16陽性對照標定已知濃度的慢病毒，其濃度為I. 00 5. 00E+05copie/ml ;和⑩CA16陰性對照滅菌生理鹽水。在本發明的上述試劑盒中，用于靶多核苷酸擴增的上、下游引物CA16-F與CA16-R和用于靶多核苷酸檢測的探針CA16-P的序列是本發明的核心；而用于內標擴增的上、下游引物IC-F與IC-R和用于內標檢測的探針IC-P均可以據內標的堿基序列而任意選擇。在本發明中，例如，上游引物IC-F為5’ -GCCAATACGACAAATCACCTTGGTC-3’ ；下游引物 IC-R 為5’ -CTGATGACATAATTGAGATTGCACC-3’ ；探針 IC-P 為5’ HEX-TGTCATCCAGACTTCGCACGTCACGTAT-BHQ13’。·
·
在上述試劑盒中，更為優選的是，①RNA提取溶液I :由十二烷基硫酸鈉O. 2 I. 0%(質量/體積)、曲拉通I. O 4. 0%(體積/體積),異硫氰酸胍O. 2 I. Omol/L和100 400 μ g/ml的磁珠組成。②RNA提取溶液II :包括4-羥乙基哌嗪乙磺酸100 300mmol/L、氯化鈉100 300mmol/L，溶液II的pH值為6. 5±0· 2 RNA提取溶液III :含曲拉通O. I
I.0%(體積/體積)和氯化鈉100 300mmol/Lo⑤RNA洗脫液含Tris-HClO. 8 I. 2mol/L 和 EDTA0. I I. Omol/L PCR 反應液:包括 5XPCR 反應緩沖液 10 μ 1,0. 2mmol/L 脫氧核糖核苷三磷酸，O. 2 O. 4μ mol/L的用于靶多核苷酸擴增的上、下游引物CA16-F與CA16-R，0. 2 0.4 μ mol/L的用于靶多核苷酸檢測的探針CA16_P，0. I 0. 2 μ mol/L的用于內標擴增的上、下游引物IC-F與IC-R，0. 05 0. 2 μ mol/L的用于內標檢測的探針IC-P ；⑧CA16酶混合液包括mMLV酶10 150U/ μ I和I 10U/ μ I的H-Taq DNA聚合酶。本發明在對CA16所有已知基因型的基因組序列進行比對的基礎上，在CA16的最保守區域設計了兩對引物和探針，經定量PCR優化，篩選出了擴增效果最好的一對引物和探針，可檢測出CA16所有已知基因型，但不能檢測出非CA16病原體，說明本發明試劑盒具有很好的特異性。本發明對CA16-RNA的提取方法進行了比較和優化，選擇了吸附效果好、易于純化的磁珠法提取RNA，可以獲得高純度和高得率的核酸，大大提高了檢測靈敏度、準確度和穩定性，檢測靈敏度(檢測下限)可達200COpie/ml，檢測范圍為2. 0E+02 2.0E+08copies/ml。另外，在本發明的一種優選實施方式中，在樣本提取過程中增加了內標，利用內標監控RNA提取和PCR反應過程，監控反應體系是否有效，防止樣本檢測假陰性。本發明中，在熒光PCR擴增結束后，經儀器自帶軟件自動分析樣本的Ct值，可為靈敏、早期診斷柯薩奇病毒A16型感染提供可靠的實驗證據。


圖IA示出了本發明提供的一個CA16陽性對照和一個CA16陰性對照其本身的擴增曲線圖；圖IB示出了本發明提供的一個加在CA16陽性對照中的內標和一個加在CA16陰性對照中的內標的內標擴增曲線圖；圖2A示出了本發明提供的十個CA16陽性樣本的擴增曲線圖；圖2B示出了本發明提供的十個CA16近似病原體(分別為腸道病毒71型、流感病毒、EB病毒、巨細胞病毒、腺病毒、肺炎支原體、解脲脲原體、結核桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌)的擴增曲線圖。
具體實施例方式以下僅為本發明的優選實施方式，本發明的保護范圍并不局限于此，任何本領域的技術人員在本發明公開的技術范圍內，可很容易進行的改變或變化都涵蓋在本發明的保 護范圍之內。因此，本發明的保護范圍應以權利要求書的保護范圍為準。實施例I本實施例提供一種柯薩奇病毒A16型核酸檢測試劑盒(檢測CA16RNA的試劑盒)，它包括如下組分①RNA提取溶液I :由十二烷基硫酸鈉O. 2 I. 0% (質量/體積)、曲拉通I. O 4. 0% (體積/體積)，異硫氰酸胍O. 2 I. Omol/L和100 400 μ g/ml的磁珠組成；②RNA提取溶液II :包括4-羥乙基哌嗪乙磺酸100 300mmol/L、氯化鈉100 300mmol/L，溶液 II pH 值為 6. 5±0· 2 ;③RNA提取溶液III 曲拉通O. I L 0% (體積/體積)、氯化鈉100 300mmol/L ；④RNA提取溶液IV :礦物油；⑤RNA 洗脫液:Tris-HClO. 8 I. 2mol/L、EDTA0. I I. Omol/L ；⑥內標(陽性內對照)一段長為88堿基對的人工合成DNA序列插入pUC18T載體的重組體，即質粒，濃度為I. 00E+03 I. 00E+06copies/ml ;其堿基序列為5， -GCCAATACGACAAATCACCTTGGTCCTCTGTCATCCAGACTTCGCACGTCACGTATTCGAGGAGGTGCAATCTCAATTATGTCATCAG-3，⑦PC R反應液5XPCR反應緩沖液10μ I (購買mMLV酶時附帶的)，0. 2mmol/L脫氧核糖核苷三磷酸，0. 2 0. 4 μ mol/L的用于靶多核苷酸擴增的上、下游引物CA16-F與CA16-R，0. 2 0.4 μ mol/L的用于靶多核苷酸檢測的探針CA16_P，0. I 0. 2 μ mol/L的用于內標擴增的上、下游引物IC-F與IC-R，0. 05 0. 2 μ mol/L的用于內標檢測的探針IC-P，所述用于靶多核苷酸擴增和檢測的上下游引物及探針，其堿基序列分別為上游引物CA16-F :5' -GCCCTAGAGAAAAGGATGAACAACT-3'；下游引物CA16-R :5' -CAAGTGACTTGCCTGTTCCTGG-3'；探針CAl6-P :5，FAM-CATGCAGTTCAAGAGCAAACACCGTATTGA-BHQ13，；針對88堿基的序列設計了非競爭性內標的引物及探針，其堿基序列分別為上游引物IC-F :5’ -GCCAATACGACAAATCACCTTGGTC-3’ ；下游引物IC-R :5’ -CTGATGACATAATTGAGATTGCACC-3’ ；探針IC-P :5’ HEX-TGTCATCCAGACTTCGCACGTCACGTAT-BHQ13’ ；⑧CA16 酶混合液mMLV 酶 10 150U/ μ 1，I 10U/ μ I H-Taq DNA 聚合酶；
⑨CA16陽性對照標定已知濃度的慢病毒，其濃度為I. 00 5. 00E+05copie/ml。⑩CA16陰性對照滅菌生理鹽水。從附圖1A、1B可以看出，CA16陽性對照本身有S型擴增曲線，可明顯判為陽性；而CA16陰性對照本身擴增曲線平直，與閾值線無交點，沒有Ct值(No Ct)，可明顯判為陰性。加入CA16陽性對照中的內標和加入CA16陰性對照中的內標的內標擴增曲線均為S型，可明顯判為陽性。說明本試劑盒陰、陽性對照和內標可以監測提取過程和反應體系，避免假陰
性結果。實施例2本實施例提供上述實施例I所述試劑盒用于檢測咽拭子等未知樣本中CA16-RNA的操作步驟
一、試劑準備I)按比例取相應量的RNA提取溶液I (200μ I Iml/人份)及內標(I μ I/人份)充分混勻成RNA提取溶液Ι-mix，瞬時離心后備用。2)根據待測樣本、CA16陰性對照、CA16陽性對照的數量，按比例取相應量的PCR反應液(43 μ I/人份)及CA16酶混合液(2 μ I/人份)，充分混勻成PCR-mix，瞬時離心后備用。二、RNA提取操作I)裂解病毒每管加入200μ I Iml RNA提取溶液l_mix，然后加入100 μ I Iml待測樣本(如咽拭子)，蓋上管蓋，震蕩混勻10秒鐘，瞬時離心；CA16陰性對照和CA16陽性對照參照與待測樣本相同方法作RNA提取和純化處理；2)磁珠吸附核酸每管加入50 400 μ I RNA提取溶液II，震蕩混勻10秒鐘后，室溫靜置10 30分鐘；3)去除雜質瞬時離心后，將離心管置于磁珠分離器上進行磁珠分離，2 5分鐘后緩慢將溶液吸出；4)洗滌每管加入400 μ I Iml RNA提取溶液III和100 500 μ I RNA提取溶液IV，震蕩混勻3 7秒鐘，瞬時離心后將離心管再次置于分離器上進行磁珠分離；5) 2 5分鐘后，上清液分為兩層，將吸頭插入離心管底部，從底部開始緩慢將液體完全吸出丟棄，靜置I 3分鐘后，將管底殘余液體完全吸出丟棄；6)加入10 IOOul RNA洗脫液，將離心管壁上磁珠洗脫到管底，吸打混勻3 4次，室溫靜置5 30分鐘后將離心管再次置于分離器上2 5分鐘，然后將從磁珠上洗脫下來的RNA吸至新的I. 5ml滅菌離心管中；7)每個反應管加入45 μ I的PCR-mix，吸取已經洗脫磁珠后的待測樣本RNA、CA16陰性對照、CA16陽性對照各5 μ I加入PCR-mix中，蓋好管蓋。三、熒光PCR反應與結果分析(在熒光定量PCR擴增儀上進行)I)將PCR反應管放入擴增儀樣品槽，按對應順序設置待測樣本名稱。2)突光檢測通道選擇選擇FAM通道(Reportere:FAM, Quencher:None)檢測 CA16 ；選擇 HEX 或 VIC 通道(Reporter:VIC, Quencher:None)檢測內標。3)熒光定量PCR反應條件見表I :表I
權利要求
1.一種檢測柯薩奇病毒A16型RNA的方法,其中使用磁珠法提取和純化柯薩奇病毒A16 型(CA16) RNA。
2.根據權利要求I所述的方法，其特征在于，結合使用磁珠法和實時熒光PCR技術提取純化和檢測CA16RNA。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟 步驟A，裂解病毒每支離心管加入含磁珠的RNA提取溶液和待測樣本，混勻后離心；CA16陰性對照和CA16陽性對照參照與待測樣本相同的方法作RNA提取和純化處理； 步驟B，磁珠吸附核酸每管加入含4-羥乙基哌嗪乙磺酸和氯化鈉的RNA提取溶液II，混勻后靜置； 步驟C，去除雜質經離心后將離心管置于磁珠分離器上進行磁珠分離，再緩慢將溶液吸出； 步驟D，洗滌每管加入含曲拉通和氯化鈉的RNA提取溶液III和含礦物油的RNA提取溶液IV，混勻后離心，將離心管再置于磁珠分離器上進行磁珠分離，靜置分層后將液體吸出丟棄； 步驟E，RNA洗脫加入含Tris-HCl和EDTA的RNA洗脫液將離心管壁上的磁珠洗脫到管底，混勻并靜置后將離心管再次置于磁珠分離器上，然后將從磁珠上洗脫下來的RNA吸至新的滅菌離心管中； 步驟F，熒光PCR分析將洗脫磁珠后的待測樣本RNA、CA16陰性對照、CA16陽性對照中均加入含PCR反應緩沖液、脫氧核糖核苷三磷酸、引物、探針的PCR反應液和含mMLV酶和H-Taq DNA聚合酶的CA16酶混合液，在熒光定量PCR擴增儀上進行PCR反應，并分析結果。
4.一種檢測CA16RNA的試劑盒，包括含磁珠的RNA提取溶液、和含用于靶多核苷酸擴增的上游引物CA16-F、下游引物CA16-R和用于靶多核苷酸檢測的探針CA16-P的PCR反應液；其中，上游引物CA16-F的堿基序列為Y -GCCCTAGAGAAAAGGATGAACAACT-3';下游引物CA16-R 的堿基序列為 5' -CAAGTGACTTGCCTGTTCCTGG-3 ;探針 CA16-P 的堿基序列為 5’ FAM-CATGCAGTTCAAGAGCAAACACCGTATTGA-BHQ13 ’。
5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中還包括內標，即為一段長為88堿基對的人工合成DNA序列插入pUC18T載體的重組體，即質粒，其堿基序列為5’ -GCCAATACGACAAATCACCTTGGTCCTCTGTCATCCAGACTTCGCACGTCACGTATTCGAGGAGGTGCAATCTCAATTATGTCATCAG-3，。
6.根據權利要求4或5所述的試劑盒，其特征在于，試劑盒中包括如下組分， ①RNA提取溶液I:包含十二烷基硫酸鈉、曲拉通、異硫氰酸胍和100 400 μ g/ml的磁珠； ②RNA提取溶液II:含4-羥乙基哌嗪乙磺酸和氯化鈉； ③RNA提取溶液III:含曲拉通和氯化鈉； ④RNA提取溶液IV:含礦物油； ⑤RNA洗脫液含Tris-HCl和EDTA； ⑥內標如上所述的可選擇使用的內標； ⑦PCR反應液包括5X PCR反應緩沖液，脫氧核糖核苷三磷酸，用于靶多核苷酸擴增的上、下游引物CA16-F與CA16-R，用于靶多核苷酸檢測的探針CA16-P，用于內標擴增和檢測的上、下游引物IC-F與IC-R和探針IC-P ； ⑧CA16酶混合液含mMLV酶和H-TaqDNA聚合酶； ⑨CA16陽性對照標定已知濃度的慢病毒，其濃度為I.OO 5. 00E+05copie/ml ； ⑩CA16陰性對照滅菌生理鹽水。
7.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，在試劑盒中， ①RNA提取溶液I:由十二烷基硫酸鈉O. 2 I. 0% (質量/體積)、曲拉通I. O 4. 0%(體積/體積)，異硫氰酸胍O. 2 I. Omol/L和100 400 μ g/ml的磁珠組成。
8.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，在試劑盒中， ②RNA提取溶液II:包括4-羥乙基哌嗪乙磺酸100 300mmol/L、氯化鈉100 300mmol/L，溶液 II 的 pH 值為 6. 5±0· 2 ; ③RNA提取溶液III:含曲拉通O. I I. 0% (體積/體積)和氯化鈉100 300mmol/L。
9.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，在試劑盒中，⑤ RNA 洗脫液含 Tris-HCl O. 8 I. 2mol/L 和 EDTA0. I I. Omol/L ； ⑦PCR反應液包括5XPCR反應緩沖液10μ 1，O. 2mmol/L脫氧核糖核苷三磷酸，O. 2 O. 4ymol/L的用于靶多核苷酸擴增的上、下游引物CA16-F與CA16_R，0. 2 O. 4ymol/L的用于靶多核苷酸檢測的探針CA16-P，0. I O. 2μπι01/1的用于內標擴增的上、下游引物IC-F與IC-R,0. 05 O. 2ymol/L的用于內標檢測的探針IC-P ； ⑧CA16酶混合液包括mMLV酶10 150U/ μ I和I IOU/ μ I的H-Taq DNA聚合酶。
全文摘要
本發明提供一種提取純化和檢測CA16RNA(柯薩奇病毒A16型RNA)的方法，并提供一種相應的檢測CA16RNA的試劑盒。本發明提供的試劑盒中包括含磁珠的RNA提取溶液、和含用于靶多核苷酸擴增的上游引物CA16-F、下游引物CA16-R和用于靶多核苷酸檢測的探針CA16-P的PCR反應液。本發明提供的試劑盒可檢測出CA16RNA所有已知基因型，但不能檢測出非CA16病原體，說明本發明試劑盒具有很好的特異性；另外，本發明選擇了吸附效果好、易于純化的磁珠法提取RNA，可以獲得高純度和高得率的核酸，大大提高了檢測靈敏度、準確度和穩定性，其檢測下限即靈敏度可達200copie/ml，檢測范圍(試劑盒的定量線性范圍)為2.00E+02～2.00E+08copies/ml。
文檔編號C12Q1/68GK102816867SQ20121031601
公開日2012年12月12日 申請日期2012年8月30日 優先權日2012年8月30日
發明者戴立忠, 鄧中平, 黃河 申請人:湖南圣湘生物科技有限公司