專利名稱：一種基于瑞士乳桿菌發酵的含ace抑制肽的羊奶的制備方法
技術領域：
本發明屬于羊奶發酵技術領域，涉及一種基于瑞士乳桿菌發酵的含ACE抑制肽的羊奶的制備方法。
背景技術：
世界衛生組織(WHO)將高血壓定義為在未使用降壓藥物的情況下，非同日3次測量血壓，收縮壓> HOmmHg和/或舒張壓> 90mmHg。據2010年衛生部組織的全國居民27萬人營養與健康狀況調查資料顯示，我國60歲及以上人群高血壓的患病率為49% ，即約每2位60歲以上的人中就有I人患高血壓。近年來,兒童高血壓患病率也有所升高,根據近10年部分省市的調查結果，兒童高血壓患病率，學齡前兒童為2 4%，學齡兒童為4 9%。高血壓可引起腦卒中、心肌梗死、心力衰竭及慢性腎臟病等多種并發癥，不僅致殘、致死率高，而且嚴重消耗醫療和社會資源，給家庭和國家造成沉重負擔。目前常用降壓藥物包括鈣通道阻滯劑、血管緊張素轉換酶抑制劑(ACEI)、血管緊張素受體阻滯劑(ARB)、利尿劑、α受體阻滯劑和β受體阻滯劑六類，以及由上述藥物組成的固定配比復方制劑。ACE抑制肽是ACEI中的一類具有降血壓功能的多肽類物質，它對于血壓正常的動物或人沒有降血壓作用，具有安全性高，無毒副作用的特點。目前，研究者已分離出多種天然來源的ACE抑制肽，其中大多是利用蛋白酶水解各種食物蛋白得到。有研究發現，一些酸奶也具有降血壓功能，并有學者從中分離得到了 ACE抑制肽。羊奶以其營養豐富、易于吸收等諸多優點被譽為奶中精品。瑞士乳桿菌(Lactobacillus helveticus)是一種具有保健功效的新型酸奶生產菌種,其蛋白酶水解活力高，能夠水解乳蛋白產生多種對人體有益的生物活性肽，其產生的ACE抑制肽抑制率較聞。
發明內容
本發明解決的問題在于提供一種基于瑞士乳桿菌發酵的含ACE抑制肽的羊奶的制備方法，所制備的羊奶既具有酸羊奶的營養價值和獨特風味，還含有抑制率較高的ACE抑制肽，不僅促進了羊奶資源的開發利用，對于高血壓的防治以及高血壓患者的營養保健也有積極作用。本發明是通過以下技術方案來實現一種基于瑞士乳桿菌發酵的含ACE抑制肽的羊奶的制備方法，包括以下步驟I)將瑞士乳桿菌接種于羊奶或羊奶復原乳中，在30 40°C下恒溫厭氧發酵10 15h，得到發酵羊奶；2)按質量份數計，取步驟I)得到的發酵羊奶80 90份，與5 10份的蔗糖、
O.15 O. 5份的穩定劑及5 30的水充分混合后冷卻至10°C以下，得到混合發酵羊奶；
3)將混合發酵羊奶在2 5°C條件下密封，后熟8 10h，得到含ACE抑制肽的羊奶。所述的瑞士乳桿菌在接種之前還進行以下活化I)將瑞士乳桿菌的凍干菌粉接種于裝有滅菌羊奶復原乳的厭氧管中，充分混勻后在37°C厭氧培養10 14h，完成第一次活化；2)按體積分數計，取3 7%第一次活化的菌液，接種于裝有滅菌羊奶復原乳的厭氧管中，充分混勻后在37°C厭氧培養10 14h，完成第二次活化；3)按體積分數計，取3 7%第二次活化的菌液，接種于裝有滅菌羊奶復原乳的厭氧管中，充分混勻后在37°C厭氧培養10 14h，完成第三次活化；
完成第三次活化后，按體積分數計，取3 7%第二次活化的菌液接種于羊奶或羊奶復原乳中。所述的羊奶復原乳為羊奶粉與水以10 20 :100的質量比溶解于水中。所述的羊奶或羊奶復原乳中還添加了酪蛋白，以提高發酵羊奶的凝固性以及ACE抑制肽的抑制率；以質量比計，酪蛋白添加量為O. 5^0. 9%。所述穩定劑為果膠、羧甲基纖維素鈉、藻酸丙二醇酯中的一種或兩種。所述含ACE抑制肽的羊奶中瑞士乳桿菌的活菌數大于108cfu/mL。所述含ACE抑制肽的羊奶中ACE抑制肽抑制率為65 90%。所述制備的含ACE抑制肽的羊奶在制備預防高血壓或高血壓輔助治療的飲品中應用。與現有技術相比，本發明具有以下有益的技術效果本發明提供的基于瑞士乳桿菌發酵的含ACE抑制肽的羊奶的制備方法，采用以瑞士乳桿菌單菌株發酵的方式制備羊奶飲品，方法簡便易行，不僅除去了羊奶中的膻味，還保留了羊奶中豐富的營養物質，凝乳細膩，易于吸收；所制備的發酵羊奶中保加利亞乳桿菌活菌數大于108cfu/mL，可提供包括調節胃腸道菌群平衡、增強免疫力、降低膽固醇等一系列的益生作用。進一步的，還在發酵過程中添加酪蛋白，提高了發酵羊奶中ACE抑制肽的抑制率，還增加了發酵乳中蛋白質和氨基酸的含量；而為了保證羊奶發酵過程中產生的ACE抑制肽具有較高抑制率，在發酵結束后還添加了蔗糖與穩定劑。本發明提供的基于瑞士乳桿菌發酵的含ACE抑制肽的羊奶的制備方法，所制得的發酵羊奶中ACE抑制肽抑制率可達到75 90%，堅持長期飲用，可以有效地預防高血壓的發病，同時也可用于高血壓患者的輔助治療，可應用與制備預防高血壓或高血壓輔助治療的飲品中。
具體實施例方式下面結合具體的實施例對本發明做進一步的詳細說明，所述是對本發明的解釋而不是限定。實施例I基于瑞士乳桿菌發酵的含ACE抑制肽的羊奶的制備方法，包括以下步驟I)取O. 4g瑞士乳桿菌的凍干菌粉接種于裝有IOmL滅菌羊奶復原乳的厭氧管中，充分混勻后在37°C培養12h，完成第一次活化；取5%上述第一次活化的菌液，按上述操作方法進行第二次、第三次活化，共活化3次，即得到活化好的菌種。2)將IOmL濃度為1%的酪蛋白溶液添加到90mL鮮羊奶中并混合均勻，過濾凈化后在90°C滅菌15min，冷卻至40±3°C后，接入5mL活化好的瑞士乳桿菌，在37°C恒溫厭氧發酵12h，得到發酵羊奶。3)以質量份數計，將5. 7份的蔗糖、O. 3份的果膠用10份的水溶解，在65°C巴氏殺菌20min后冷卻至40±3°C，再加入到84份的發酵羊奶中，混合均勻后迅速冷卻至I (TC以下，再在4 C冰箱后熟8 IOh,即制成廣品。所得產品中瑞士乳桿菌活菌數為5. 87X 108cfu/mL，其中的ACE抑制肽抑制率為88. 36%ο
ACE抑制肽抑制率的檢測方法為紫外分光光度法用含有O. 3mol/L NaCl 的 O. lmol/L 硼酸鹽緩沖液(ρΗ8· 3)將 HHL (Hip-His-Leu)配成5mmol/L的溶液。在IOmL試管中分別加入200 μ L的5mmol/L Hip-His-Leu溶液和80 μ L的發酵乳上清液，于37°C下保溫5min后，再加入20 μ L ACE溶液(溶解于蒸餾水中，活力為O. lU/mL)，混勻后在37°C下保溫30min進行反應，之后加入250 μ L lmol/L HCl終止反應，再加入I. 5mL醋酸乙酯，經15s振蕩混勻后，靜置5min，用移液管吸取I. OmL的醋酸乙酯層，于120°C烘干30min,再加入I. OmL蒸懼水,混勻后在228nm處測定吸光度。在上述條件下，抑制50%的ACE活性(IC50)為樣品的一個活性單位。ACE 抑制率=[(B-A) / (B-C) ] X 100%式中A——含有發酵乳乳清(或溶于蒸餾水的多肽溶液)和ACE溶液的吸光度；B—不含發酵乳乳清(或溶于蒸餾水的多肽溶液)樣品，但含有ACE溶液的吸光度；C—為含脫脂乳乳清(或蒸餾水)，但不含ACE溶液的吸光度。實施例2基于瑞士乳桿菌發酵的含ACE抑制肽的羊奶的制備方法，包括以下步驟I)取O. 4g瑞士乳桿菌的凍干菌粉接種于裝有IOmL滅菌羊奶復原乳的厭氧管中，充分混勻后在37°C培養12h，完成第一次活化；取5%上述第一次活化的菌種，按上述操作方法進行第二次活化，共活化3次，即得到活化好的菌種。2)將14g羊奶粉和20mL濃度為1%的酪蛋白溶液添加到80mL水中并混合均勻，在90°C滅菌15min，冷卻至40±3°C后，接入7mL活化好的瑞士乳桿菌，在40°C恒溫厭氧發酵10h，得到發酵羊奶。3)以質量份數計，將7份的蔗糖、O. 2份的羧甲基纖維素鈉用7. 8份的水溶解，在650C巴氏殺菌20min后冷卻至40 ± 3°C，再加入到85份的發酵羊奶中，混合均勻后迅速冷卻至10°C以下，再在4°C冰箱后熟8 10h，即制成產品。所得產品中瑞士乳桿菌活菌數為4. 75X 108cfu/mL，其中的ACE抑制肽抑制率為85. 73%。實施例3基于瑞士乳桿菌發酵的含ACE抑制肽的羊奶的制備方法，包括以下步驟
I)取O. 4g瑞士乳桿菌的凍干菌粉接種于裝有IOmL滅菌羊奶復原乳的厭氧管中，充分混勻后在37°C培養12h，完成第一次活化；取5%上述第一次活化的菌種，按上述操作方法進行第二次活化，共活化3次，即得到活化好的菌種。2)將14g羊奶粉和50mL濃度為1%的酪蛋白溶液添加到50mL水中并混合均勻，在90°C滅菌15min，冷卻至40±3°C后，接入7mL活化好的瑞士乳桿菌，在35°C恒溫厭氧發酵14h，得到發酵羊奶。3)以質量份數計，將5份的蔗糖、O. 3份的藻酸丙二醇酯用6. 7份的水溶解，在650C巴氏殺菌20min后冷卻至40 ± 3°C，再加入到88份的發酵羊奶中，混合均勻后迅速冷卻至10°C以下，再在4°C冰箱后熟8 10h，即制成產品。所得產品中瑞士乳桿菌活菌數為4. 68X 108cfu/mL，其中的ACE抑制肽抑制率為83. 17%。
實施例4基于瑞士乳桿菌發酵的含ACE抑制肽的羊奶的制備方法，包括以下步驟I)取O. 4g瑞士乳桿菌的凍干菌粉接種于裝有IOmL滅菌羊奶復原乳的厭氧管中，充分混勻后在37°C培養12h，完成第一次活化；取5%上述第一次活化的菌液，按上述操作方法進行第二次、第三次活化，共活化3次，即得到活化好的菌種。2)將20mL濃度為1%的酪蛋白溶液添加到80mL鮮羊奶中并混合均勻，過濾凈化后在90°C滅菌15min，冷卻至40±3°C后，接入7mL活化好的瑞士乳桿菌，在37°C恒溫厭氧發酵llh，得到發酵羊奶。3)以質量份數計，將7份的蔗糖、O. 2份的羧甲基纖維素鈉用10. 8份的水溶解，在650C巴氏殺菌20min后冷卻至40 ± 3°C，再加入到82份的發酵羊奶中，混合均勻后迅速冷卻至10°C以下，再在4°C冰箱后熟8 10h，即制成產品。所得產品中瑞士乳桿菌活菌數為5. 66X 108cfu/mL，其中的ACE抑制肽抑制率為85. 44%ο實施例5基于瑞士乳桿菌發酵的含ACE抑制肽的羊奶的制備方法，包括以下步驟I)取O. 4g瑞士乳桿菌的凍干菌粉接種于裝有IOmL滅菌羊奶復原乳的厭氧管中，充分混勻后在37°C培養12h，完成第一次活化；取5%上述第一次活化的菌液，按上述操作方法進行第二次、第三次活化，共活化3次，即得到活化好的菌種。2)將20mL濃度為1%的酪蛋白溶液添加到80mL鮮羊奶中并混合均勻，過濾凈化后在90°C滅菌15min，冷卻至40±3°C后，接入7mL活化好的瑞士乳桿菌，在35°C恒溫厭氧發酵14h，得到發酵羊奶。3)以質量份數計，將5份的蔗糖、O. I份的羧甲基纖維素鈉、O. I份的果膠用7.8份的水溶解，在65°C巴氏殺菌20min后冷卻至40 ±3°C，再加入到87份的發酵羊奶中，混合均勻后迅速冷卻至10°C以下，再在4°C冰箱后熟8 10h，即制成產品。所得產品中瑞士乳桿菌活菌數為4. 42X 108cfu/mL，其中的ACE抑制肽抑制率為79. 80%ο所制備的發酵羊奶堅持長期飲用，可以有效地預防高血壓的發病，同時也可用于高血壓患者的輔助治療，可應用于制備預防高血壓或高血壓輔助治療的飲品中。
權利要求
1.一種基于瑞士乳桿菌發酵的含ACE抑制肽的羊奶的制備方法，其特征在于，包括以下步驟 1)將瑞士乳桿菌接種于羊奶或羊奶復原乳中，在30 40°C下恒溫厭氧發酵10 15h，得到發酵羊奶； 2)按質量份數計，取步驟I)得到的發酵羊奶80 90份，與5 10份的蔗糖、O.15 O.5份的穩定劑及5 30的水充分混合后冷卻至10°C以下，得到混合發酵羊奶； 3)將混合發酵羊奶在2 5°C條件下密封，后熟8 10h，得到含ACE抑制肽的羊奶。
2.如權利要求I所述的基于瑞士乳桿菌發酵的含ACE抑制肽的羊奶的制備方法，其特征在于，所述的瑞士乳桿菌在接種之前還進行以下活化 1)將瑞士乳桿菌的凍干菌粉接種于裝有滅菌羊奶復原乳的厭氧管中，充分混勻后在37°C厭氧培養10 14h，完成第一次活化； 2)按體積分數計，取3 7%第一次活化的菌液，接種于裝有滅菌羊奶復原乳的厭氧管中，充分混勻后在37°C厭氧培養10 14h，完成第二次活化； 3)按體積分數計，取3 7%第二次活化的菌液，接種于裝有滅菌羊奶復原乳的厭氧管中，充分混勻后在37°C厭氧培養10 14h，完成第三次活化； 完成第三次活化后，按體積分數計，取3 7%第二次活化的菌液接種于羊奶或羊奶復原乳中。
3.如權利要求I所述的基于瑞士乳桿菌發酵的含ACE抑制肽的羊奶的制備方法，其特征在于，所述的羊奶復原乳為羊奶粉與水以10 20 :100的質量比溶解于水中。
4.如權利要求I所述的基于瑞士乳桿菌發酵的含ACE抑制肽的羊奶的制備方法，其特征在于，所述的羊奶或羊奶復原乳中還添加了酪蛋白，以提高ACE抑制肽的抑制率；以質量比計，酪蛋白添加量為O. I O. 5%。
5.如權利要求I所述的基于瑞士乳桿菌發酵的含ACE抑制肽的羊奶的制備方法，其特征在于，所述穩定劑為果膠、羧甲基纖維素鈉、藻酸丙二醇酯中的一種或兩種。
6.如權利要求I所述的基于瑞士乳桿菌發酵的含ACE抑制肽的羊奶的制備方法，其特征在于，所述含ACE抑制肽的羊奶中瑞士乳桿菌的活菌數大于108cfu/mL。
7.如權利要求I所述的基于瑞士乳桿菌發酵的含ACE抑制肽的羊奶的制備方法，其特征在于，所述含ACE抑制肽的羊奶中ACE抑制肽的抑制率為65 90%。
8.權利要求I所述制備的含ACE抑制肽的羊奶在制備預防高血壓或高血壓輔助治療的飲品中應用。
全文摘要
本發明公開了一種基于瑞士乳桿菌發酵的含ACE抑制肽的羊奶的制備方法，將瑞士乳桿菌接種于羊奶或羊奶復原乳中，在30～40℃下恒溫厭氧發酵10～15h，得到發酵羊奶；將發酵羊奶80～90份，與5～10份的蔗糖、0.15～0.5份的穩定劑及5～30的水充分混合后冷卻至10℃以下，得到混合發酵羊奶；將混合發酵羊奶在2～5℃條件下密封，后熟8～10h，得到含ACE抑制肽的羊奶。所制備的羊奶既具有酸羊奶的營養價值和獨特風味，還含有抑制率較高的ACE抑制肽，不僅促進了羊奶資源的開發利用，對于高血壓的防治以及高血壓患者的營養保健也有積極作用。
文檔編號A23C9/123GK102960444SQ20121047079
公開日2013年3月13日 申請日期2012年11月19日 優先權日2012年11月19日
發明者陳合, 吉喆, 舒國偉 申請人:陜西科技大學