ZmHINT基因在花發育中的應用的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種ZmHINT基因在花發育中的應用。本發明公開了如下任一物質在促進植物提早開花中的應用：（1）SEQ?ID?No.2所示的蛋白；（2）SEQ?ID?No.2所示蛋白的編碼基因；（3）含有（2）所述編碼基因的重組載體、表達盒、轉基因細胞系或重組菌。本發明提供的ZmHINT基因在擬南芥中過表達能夠誘導擬南芥提前開花，說明ZmHINT基因在花發育中具有重要作用。
【專利說明】ZmH I NT基因在花發育中的應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種ZmHINT基因在花發育中的應用。
【背景技術】 [0002]組氨酸三聚體蛋白超家族是一個具有核苷酸轉移酶和水解酶活性的家族，其中，組氨酸三聚體核苷結合蛋白(Histidine triad nucleotide binding protein,HINT)是組氨酸三聚體蛋白超家族成員中分布最為廣泛的一種蛋白，該蛋白在低等植物和高等動物中均具有很高的結構和功能相似性。晶體結構研究結果表明，HINT是其他四種組氨酸三聚體蛋白超家族成員的祖先，結構和功能的保守性，預示了 HINT發揮著重要的生物學功能。目前，有研究報道了關于哺乳動物HINT在細胞凋亡、腫瘤發生、發展中發揮了重要作用。相對動物HINT的研究，植物HINT的功能研究較少，尤其是對玉米HINT的研究尚未見報道。
【發明內容】
[0003]本發明的目的是提供一種ZmHINT基因在花發育中的應用。
[0004]本發明提供了如下任一物質在促進植物提早開花中的應用:
[0005](I) SEQ ID N0.2 所示的蛋白；
[0006](2) SEQ ID N0.2所示蛋白的編碼基因；
[0007](3)含有(2)所述編碼基因的重組載體、表達盒、轉基因細胞系或重組菌。
[0008]上述應用中，所述編碼基因如SEQ ID N0.1所示。
[0009]上述任一所述的應用中，所述植物為擬南芥。
[0010]一種制備轉基因植物的方法也屬于本發明的保護范圍，包括如下步驟:將SEQ IDN0.2所示蛋白的編碼基因導入出發植物中，得到轉基因植物；與出發植物相比，轉基因植物的開花時間提前。
[0011]上述方法中，所述編碼基因是通過重組表達載體導入的，所述重組表達載體是將所述編碼基因插入出發載體PCAMBIA-1304的多克隆位點得到的。
[0012]上述任一所述的方法中，所述編碼基因如SEQ ID N0.1所示；
[0013]所述植物具體為擬南芥。
[0014]一種蛋白也屬于本發明的保護范圍，為如下(I)或(2)所示:
[0015](I)SEQ ID N0.2 所示的蛋白；
[0016](2)將SEQ ID N0.2所示的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且功能相同的蛋白質。
[0017]上述蛋白的編碼基因也屬于本發明的保護范圍。
[0018]上述編碼基因中，所述編碼基因為如下中至少一種:
[0019]I) SEQ ID N0.1 所示的 DNA 分子；
[0020]2)在嚴格條件下與I)限定的DNA分子雜交且編碼所述蛋白質的DNA分子；
[0021]3)與I)或2)限定的DNA分子具有90%以上的同一性且編碼所述蛋白質的DNA分子。
[0022]含有上述任一所述編碼基因的重組載體、表達盒、轉基因細胞系或重組菌也屬于本發明的保護范圍。
[0023]本發明提供的ZmHINT基因在擬南芥中過表達能夠誘導擬南芥提前開花，說明ZmHINT基因在花發育中具有重要作用。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0024]圖1為重組農桿菌和對照農桿菌的PCR鑒定。
[0025]圖2為不同濃度的潮霉素對轉ZmHINT基因Tl代擬南芥的篩選。
[0026]圖3為轉ZmHINT基因的T2代擬南芥以及轉空載體pCAMBIA_1304的T2代擬南芥的潮霉素抗性篩選。
[0027]圖4為轉ZmHINT基因的T2代擬南芥、轉空載體pCAMBIA_1304的T2代擬南芥以及野生型擬南芥的PCR鑒定。
[0028]圖5為擬南芥表型分析。
【具體實施方式】
[0029]下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。
[0030]下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。
[0031]GC Buffer購自寶生物工程(大連)有限公司，產品目錄號為9154。
[0032]B73 玉米自交系(Zea m`ays ssp.mays L.)在文獻 “PatrickS.Schnable,et al.The B73Maize Genome: Complexity, Diversity,and Dynamics.Science326, 1112-1115(2009) ”中公開過，公眾可從河南農業大學獲得。
[0033]擬南芥(Arabidopsisthaliana)哥倫比亞型(Columbia-0)在文獻“Xiao Luoj XiBai，Xiaoli Sun, Dan Zhu，Baohui Liu, Wei Jij Hua Caij Lei Cao，Jing Wuj Mengran Hu，XinLiu,Lili Tang and Yanming Zhu.Expression of wild soybean WRKY20in Arabidopsisenhances drought tolerance and regulates ABA signaling.Journal of ExperimentalBotany.2013.”中公開過，公眾可從河南農業大學獲得。
[0034]MS鹽購自美國Sigma公司，貨號為M5524-50L。
[0035]MS鹽溶液按照如下方法配制:該溶液由溶劑和溶質組成；溶質為MS鹽，蔗糖和Silwet L-77，溶劑為蒸餾水。MS鹽在MS鹽溶液中的濃度為2.15g/L，Silwet L-77在MS鹽溶液中的濃度為200iil/L，蔗糖在MS鹽溶液中的濃度為5g/100ml，調pH=5.8。
[0036]YEP液體培養基按照如下方法制備:
[0037]牛肉膏5.0g/L,蛋白胨5.0g/L,酵母提取物1.0g/L,蔗糖5.0g/L,MgSO4 ? 7H200.5g/L，余量為水，調pH=7.0后滅菌保存。
[0038]根癌農桿菌(Agrobacteriumtumefaciens)GV3101 在文獻“Wei Tang, RonSederoff, Ross Whetten.Regeneration of transgenic loblolly pine (Pinustaeda L.) from zygotic embryos transformed with Agrobacterium tumefaciens.Planta (2001) 213:981-989.”中公開過，公眾可從河南農業大學獲得。
[0039]pMD18-T Simple載體購自寶生物工程(大連)有限公司，產品目錄號為6011。[0040]載體pCAMBIA-1304 在文獻 “Ruchi Pandey, Avinash Mishra, G.K.Garg.Plantpromoter driven heterologous expression of HMff glutenin gene(s)subunit inE.col1.Mol Biol Rep (2008) 35:153 - 162.”中公開過，公眾可從河南農業大學獲得。
[0041]實施例1、ZmHINT基因過表達載體及重組農桿菌的構建
[0042]一、引物設計
[0043](一)根據ZmHINT基因編碼區全長cDNA序列，設計并合成如下引物:
[0044]
【權利要求】
1.如下任一物質在促進植物提早開花中的應用: (1)SEQ ID N0.2所示的蛋白； (2)SEQ ID N0.2所示蛋白的編碼基因； (3)含有(2)所述編碼基因的重組載體、表達盒、轉基因細胞系或重組菌。
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于:所述編碼基因如SEQID N0.1所示。
3.根據權利要求1或2所述的應用，其特征在于:所述植物為擬南芥。
4.一種制備轉基因植物的方法，包括如下步驟:將SEQ ID N0.2所示蛋白的編碼基因導入出發植物中，得到轉基因植物；與出發植物相比，轉基因植物的開花時間提前。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于:所述編碼基因是通過重組表達載體導入的，所述重組表達載體是將所述編碼基因插入出發載體PCAMBIA-1304的多克隆位點得到的。
6.根據權利要求4或5所述的方法，其特征在于:所述編碼基因如SEQID N0.1所示； 所述植物具體為擬南芥。
7.一種蛋白，為如下(I)或(2)所示:
(1)SEQ ID N0.2所示的蛋白； (2)將SEQID N0.2所示的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且功能相同的蛋白質。
8.權利要求7所述蛋白的編碼基因。
9.根據權利要求8所述的編碼基因，其特征在于:所述編碼基因為如下中至少一種: 1)SEQ ID N0.1所示的DNA分子； 2)在嚴格條件下與I)限定的DNA分子雜交且編碼權利要求7所述蛋白質的DNA分子； 3)與I)或2)限定的DNA分子具有90%以上的同一性且編碼權利要求7所述蛋白質的DNA分子。
10.含有權利要求8或9所述編碼基因的重組載體、表達盒、轉基因細胞系或重組菌。
【文檔編號】C12N5/10GK103695436SQ201310651445
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2013年12月5日 優先權日:2013年12月5日
【發明者】吳劉記, 陳彥惠, 祖小峰, 唐海濤, 王順喜 申請人:河南農業大學