一種鹿皮膠原蛋白的提取方法
【專利摘要】本發明公開了一種提取鹿皮膠原蛋白的方法、將梅花鹿皮或馬鹿皮去毛，切成小塊，用高速組織搗碎機搗碎，用超臨界CO2萃取方法除去脂溶性成分，得到除脂后的鹿皮；向其中加入NaCl溶液，用液體泵將料液連續泵入高電壓脈沖提取裝置中，以溫度20～50℃，場強10～30KV，脈沖數5～10為參數提取，連續收集提取液，離心，棄上清，得到除雜蛋白沉淀，沉淀用蒸餾水沖洗，離心，棄水層，得除鹽后的沉淀，沉淀中加入有機酸溶液，加入蛋白酶，用液體泵將料液連續泵入高電壓脈沖提取裝置中，連續收集提取液，離心，上清液濃縮至一定體積，冷凍干燥，得白色固體的本發明產品。熱敏成份不變性，提取連續、快速，技術先進，環保高效。
【專利說明】一種鹿皮膠原蛋白的提取方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及生物醫藥領域，尤其涉及一種利用高壓脈沖電場技術從鹿皮中提取膠 原蛋白的方法。
【背景技術】
[0002] 膠原（collagen)是一種由動物細胞合成的生物高分子，廣泛存在于有機體中的 結構蛋白質，約占哺乳動物總蛋白的1/3，是皮膚、軟骨、動脈血管壁及結締組織的主要 成分，在動物體內起支持、保護、連接等多種作用。膠原蛋白具有良好的生物相容性和弱抗 原性，在保健品、藥品輔料以及生物材料等領域應用十分廣泛，常規膠原蛋白提取方法包括 酸法、堿法、熱降解法、酶法以及這些方法結合使用等，在提取過程中存在工藝周期長，工藝 步驟復雜，提取率較低等問題，Gomez - Guillen等研究了高壓處理對膠原蛋白提取過程 的影響，此外，超聲、壓力脈沖等預處理方法也被嘗試用于膠原蛋白提取。孟黃軍等人以膠 原蛋白的熱穩定性為基礎，考察了基于多級逆流固液萃取技術的魚鱗膠原蛋白提取工藝， 探討了酶促反應和膜分離耦合技術用于制備膠原蛋白多肽的可行性。王建輝等人采用酸法 和酶法從東北特產梅花鹿鹿皮中提取膠原蛋白，對其中的水分、灰分、氮含量、微量元素及 羥脯氨酸含量、分子量、氨基酸及飽濕性和吸水性進行測定，并與牛皮和豬皮的膠原進行 比較。
【發明內容】
[0003] 本發明的目的是提供一種從梅花鹿皮或馬鹿皮中提取膠原蛋白方法，采用該方法 提取梅花鹿皮或馬鹿皮中膠原蛋白具有提取周期短、提取率高等優點。
[0004] 本發明的技術方案如下： ①鹿皮前處理：取新鮮梅花鹿皮去毛、刮去油脂、洗凈，切成I. OcmX I. Ocm的小塊，用 蒸餾水洗至無血色；②脫脂：膠體磨或高速組織搗碎機搗碎鹿皮，采用超臨界C02萃取裝置 萃取1?5小時，萃取后鹿皮即為脫脂鹿皮;③去除雜蛋白：脫脂鹿皮中加入5倍?20倍 (W/V)的1%?5%NaCl溶液混勻，用液體泵將料液連續泵入高電壓脈沖提取裝置中，以溫度 20?50°C，場強10?30KV，脈沖數5?10為參數提取，連續收集提取液，離心，棄上清，得 到去除雜蛋白的沉淀；沉淀用10倍?30倍(W/V)的蒸餾水沖洗，離心，棄上清，得除鹽后的 沉淀；④膠原蛋白的提取：取上述步驟獲得的沉淀，按10倍?30倍（W/V)量加入pHl?7 的有機酸溶液，加入鹿皮重量1. 〇%?5. 0% (W/W)的蛋白酶，用液體泵將料液連續泵入高壓 電脈沖提取裝置中，以溫度20?50°C，場強10?30KV，脈沖數5?10為參數提取，連續收 集提取液，離心，上清液40°C濃縮至一定體積，冷凍干燥，得白色固體的本發明產品，本發明 具有的優點在于鹿皮膠原蛋白的提取方法較已有工藝快速、高效、提取率高，適合工業放大 生廣等優點。
[0005] 具體實施例： 實施例I ①鹿皮前處理：取新鮮梅花鹿皮去毛、刮去油脂、洗凈，切成I. OcmX I. Ocm的小塊，用 4°C蒸餾水洗至無血色，浙干，取I. Okg鹿皮備用；②脫脂：取鹿皮，高速組織搗碎機搗碎，置 超臨界C02萃取釜中25MPa 40°C萃取1小時，取萃取后鹿茸0. 85kg備用；③去除雜蛋白： 取脫脂鹿皮〇. 85kg加入4. 25L 5%NaCl溶液混勻，用液體泵將料液連續泵入高電壓脈沖提 取裝置中，以溫度50°C，場強30KV，脈沖數10,供料速度，5ml/min為參數提取，連續收集提 取液，離心，棄上清得到去除雜蛋白的沉淀；沉淀用25. 5L蒸餾水沖洗，離心，棄水層，得除 鹽后的沉淀0. 70kg。④膠原蛋白的提取：取上述步驟獲得的沉淀0. 70kg，加入pH2的檸檬 酸溶液21L，加入Hg胃蛋白酶，用液體泵將料液連續泵入高壓電脈沖提取裝置中，以溫度 37°C，場強30KV，脈沖數10,供料速度5ml/min為參數提取，連續收集提取液，離心，上清液 用旋轉蒸發儀在40°C下濃縮至I. 4L，-55°C冷凍干燥，得鹿皮膠原蛋白390g。
[0006] 實施例2 ①鹿皮前處理：取新鮮梅花鹿皮去毛、刮去油脂、洗凈，切成I. OcmX I. Ocm的小塊，用 4°C蒸餾水洗至無血色，浙干，取3. Okg鹿皮備用；②脫脂：取鹿皮，膠體磨磨碎，置超臨界 C02萃取釜中30MPa 35°C萃取5小時，取萃取后鹿茸2. 5kg備用；③去除雜蛋白：取脫脂鹿 皮2. 5kg加入75L l%NaCl溶液混勻，用液體泵將料液連續泵入高電壓脈沖提取裝置中，以 溫度20°C，場強10KV，脈沖數5,供料速度，lOml/min為參數提取，連續收集提取液，離心， 棄上清得到去除雜蛋白的沉淀；沉淀用25L的蒸餾水沖洗，離心，棄水層，得除鹽后的沉淀 2. 2kg 膠原蛋白的提取：取上述步驟獲得的沉淀2. 2kg，加入pH6的蘋果酸溶液66L，加 入220g木瓜蛋白酶，用液體泵將料液連續泵入高壓電脈沖提取裝置中，以溫度50°C，場強 10KV，脈沖數5,供料速度，lOml/min為參數提取，連續收集提取液，離心，上清液用旋轉蒸 發儀在40°C下濃縮至5. OL，-55°C冷凍干燥，得鹿皮膠原蛋白1210g。
[0007] 實施例3 ①鹿皮前處理：取新鮮梅花鹿皮去毛、刮去油脂、洗凈，切成I. OcmX I. Ocm的小塊，用 4°C蒸餾水洗至無血色，浙干，取5. Okg鹿皮備用通)脫脂：取鹿皮，高速組織搗碎機搗碎，置 超臨界C02萃取釜中35MPa 40°C萃取3小時，取萃取后鹿皮4. 2kg備用；③去除雜蛋白：取 脫脂鹿皮4. 2kg加入94L 3. 0%NaCl溶液混勻，用液體泵將料液連續泵入高電壓脈沖提取裝 置中，以溫度40°C，場強15KV，脈沖數5,供料速度15ml/min為參數提取，連續收集提取液， 離心，棄上清得到去除雜蛋白的沉淀；沉淀用IOOL的蒸餾水沖洗，離心，棄水層，得除鹽后 的沉淀3. 6kg 膠原蛋白的提取：取上述步驟獲得的沉淀3. 6kg，加入pH5的檸檬酸溶液 72L，加入180g胃蛋白酶，用液體泵將料液連續泵入高壓電脈沖提取裝置中，以溫度40°C， 場強15KV，脈沖數5,供料速度15ml/min為參數提取，連續收集提取液，離心，上清液用旋轉 蒸發儀在40°C濃縮至7L，-55°C冷凍干燥，得鹿皮膠原蛋白2006g。
[0008] 實施例4 ①鹿皮前處理：取新鮮梅花鹿皮去毛、刮去油脂、洗凈，切成I. OcmX I. Ocm的小塊，用 4°C蒸餾水洗至無血色，浙干，取IOkg鹿皮備用；②脫脂：取鹿皮，高速組織搗碎機搗碎，置 超臨界C02萃取釜中30MPa 40°C萃取5小時，取萃取后鹿皮8. 5kg備用；③去除雜蛋白： 取脫脂鹿皮8. 5kg加入170L 3. 0%NaCl溶液混勻，用液體泵將料液連續泵入高電壓脈沖提 取裝置中，以溫度35°C，場強20KV，脈沖數6,供料速度30ml/min為參數提取，連續收集提 取液，離心，棄上清得到去除雜蛋白的沉淀；沉淀用200L的蒸餾水沖洗，離心，棄水層，得除 鹽后的沉淀7. 3kg ;?膠原蛋白的提取：取上述步驟獲得的沉淀7. 3kg，加入pH4的酒石酸 溶液145L，加入365g胃蛋白酶，用液體泵將料液連續泵入高壓電脈沖提取裝置中，以溫度 35°C，場強20KV，脈沖數6,供料速度30ml/min為參數提取，連續收集提取液，離心，上清液 用旋轉蒸發儀在40°C濃縮至15L，-55°C冷凍干燥，得鹿皮膠原蛋白4021g。
【權利要求】
1. 從鹿皮中提取高活性膠原蛋白，其特征在于：采用高電壓脈沖提取技術提取膠原蛋 白。
2. 根據權利要求1所述的一種鹿皮膠原蛋白提取技術，其特征在于通過以下制備方 法：包括鹿皮清洗、切塊，搗碎，除去脂肪，除去雜蛋白，調節pH值，加入蛋白酶，運用高電壓 脈沖技術提取，離心，提取液濃縮，凍干等一系列步驟。
3. 根據權利要求2所述的制備方法，搗碎過程可以用膠體磨，組織搗碎機；除去脂肪過 程是用超臨界C02萃取裝置來進行的；雜蛋白的去除是用1%?5%NaCl溶液在高電壓脈沖 裝置中進行的；pH值的調節可以是檸檬酸、酒石酸、蘋果酸等有機酸溶液；加入的蛋白酶可 以是胃蛋白酶、木瓜蛋白酶等蛋白酶，高電壓脈沖裝置可以是自制的簡易裝置，也可以是購 買的成套設備。
4. 根據權利要求3所述的制備方法，1%?5%NaCl溶液的用量為5?30倍（W/V)的 鹿皮原料；PH的調節范圍在2?7之間，有機酸溶液的用量為10?30倍(W/V)的鹿皮原 料，蛋白酶的用量為鹿皮原料量的2. 0%?10% (W/W)。
5. 根據權利要求3所述的制備方法，高電壓脈沖技術參數為溫度控制在20?50°C，場 強控制在10?30KV，脈沖數控制在5?10,供料速度控制在5-30ml/min。
【文檔編號】C12P21/06GK104313090SQ201410465783
【公開日】2015年1月28日 申請日期:2014年9月15日 優先權日:2014年9月15日
【發明者】王全凱, 李慶杰, 王蓮萍, 胡太超, 博士儒, 陶珊 申請人:王全凱