專利名稱：制備紅霉素衍生物的方法
技術領域：
本發明涉及制備紅霉素衍生物的方法和通過該方法制備的紅霉素衍生物的富馬酸鹽結晶。
日本專利公開No.56873/1994,Bioorg.& Med.Chem.Lett.,Vol,4,No.11,p.1347,1994,等公開了這些化合物的制備方法。
但是，這些參考文獻公開的方法具有某些缺陷，使其不適于商業上的運作，如包括的步驟多，純化用的柱層析的多次使用以及不適于大規模生產的試劑(例如碘)的使用。另外，如果這些化合物也象本發明的方法所制備的化合物那樣用作藥物或原料，它們需要具有高度的穩定性，均勻性和適應性。
因此，本發明涉及由紅霉素A[式(Ⅰ)]， 制備通式(Ⅱ)化合物富馬酸鹽 (其中R1為低級烷基，R2為低級烷基)的方法，該方法包括將紅霉素A2’位羥基乙酰化；將4”位羥基甲酰化以及進行形成半縮酮的反應，從而制得式(Ⅲ)化合物 氧化化合物(Ⅲ)11位的羥基，制得式(Ⅳ)化合物 將化合物(Ⅳ)12位的羥基烷基化，脫去2’位乙酰基和4”位甲酰基，制得通式(Ⅴ)化合物 (其中R2為低級烷基)，使化合物(Ⅴ)在堿性條件下與芐氧羰基氯反應，然后除去引入的芐氧羰基，隨后使3’位的氮原子烷基化，然后將該化合物轉化成粗晶形式的富馬酸鹽。將該粗晶用醇溶劑重結晶并用含水乙酸乙酯再次重結晶。
本發明也涉及由紅霉素A[式(Ⅰ)] 制備通式(Ⅱ)化合物富馬酸鹽 (其中R1為低級烷基，R2為低級烷基)的方法，該方法包括將紅霉素A2’位羥基乙酰化；將4”位羥基甲酰化以及進行形成半縮酮的反應，從而制得式(Ⅲ)化合物 氧化化合物(Ⅲ)11位的羥基，制得式(Ⅳ)化合物 將化合物(Ⅳ)12位的羥基烷基化，除去2’位乙酰基和4”位甲酰基，制得通式(Ⅴ)化合物 (其中R2為低級烷基)，使化合物(Ⅴ)在堿性條件下與芐氧羰基氯反應，然后除去引入的芐氧羰基，隨后使3’位的氮原子烷基化，然后將該化合物轉化成富馬酸鹽。
在上述反應中，紅霉素A2’位羥基的乙酰化，4”位羥基的甲酰化以及形成半縮酮的反應優選以“一鍋煮”的方式進行。本發明中使用的術語“一鍋煮”表示有關反應各階段的反應產物不經分離和純化，在一個步驟中進行。
12位羥基的烷基化反應和脫去2’位乙酰基與4”位甲酰基的反應也優選地以一鍋煮的方式進行。
特別優選，紅霉素A2’位羥基的乙酰化和4”位羥基的甲酰化以及形成半縮酮的反應以一鍋煮的方式進行，另外，12位羥基的烷基化和脫去2’位乙酰基與4”位甲酰基的反應也以一鍋煮的方式進行。
另一方面，本發明涉及通過以一鍋煮的方式進行的紅霉素A2’位羥基的乙酰化，4”位羥基的甲酰化以及形成半縮酮的反應，由式(Ⅰ)紅霉素A 制備式(Ⅲ)化合物 的方法。
本發明也涉及在堿性條件下由通式(Ⅴ)的化合物 (其中R2為低級烷基)與芐氧羰基氯反應制備通式(Ⅵ)的化合物 (其中R2為低級烷基，Z為芐氧羰基)的方法。
本發明也涉及通過將通式(Ⅱ)化合物的富馬酸鹽粗晶 (其中R1為低級烷基，R2為低級烷基)用醇溶劑重結晶并用含水乙酸乙酯進行另一次重結晶而純化為通式(Ⅱ)化合物的富馬酸鹽的方法 在另一方面，本發明涉及式(Ⅶ)化合物的富馬酸鹽結晶 其中化合物(Ⅶ)與富馬酸的摩爾比為2∶1并且該結晶通過用含水乙酸乙酯重結晶得到。
實施本發明的最佳方式本發明中使用的術語“低級烷基”包括具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，其特例包括甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，異丁基，仲丁基，叔丁基，戊基和己基，優選甲基，乙基，正丙基和異丙基。R1特別優選的例子是異丙基，R2特別優選的例子是甲基。
本發明制備方法的例子如下圖所示(反應途徑1)。反應途徑1-1 (其中R2為低級烷基，Z為芐氧羰基)反應途徑1-2 純化的化合物(Ⅱ)的富馬酸鹽(其中R1為低級烷基，R2為低級烷基，Z為芐氧羰基)
這樣，紅霉素A[式(Ⅰ)化合物]的2’位羥基在堿的存在下被乙酰化，之后4”位的羥基被甲酰化，然后進行形成半縮酮的反應，從而得到了式(Ⅲ)化合物。反應的三個階段，即，乙酰化，甲酰化和半縮酮的形成，優選地以一鍋煮的方式進行。
第一步反應乙酰化中使用的堿的例子包括無機堿和有機堿如胺；優選的例子為有機堿如吡啶，三乙胺，二異丙基乙基胺，吡咯烷，哌啶，嗎啉，二乙胺和二異丙胺，更優選吡啶。優選使用的溶劑是對反應的三個階段，即，乙酰化、甲酰化和形成半縮酮惰性的溶劑，例如乙酸乙酯，丙酮，二氯甲烷和氯仿，更優選乙酸乙酯和丙酮，最優選乙酸乙酯。乙酰化試劑的例子包括乙酸酐，乙酰氯和乙酸鈉，優選乙酸酐和乙酰氯，最優選乙酸酐。優選的反應溫度為約0℃到約50℃，更優選室溫上下。反應時間一般為約30分鐘到3小時，優選1小時到2小時。
第二步反應甲酰化中使用的甲酰化試劑的優選實例包括甲酸-乙酸酐和甲酸鈉-乙酰氯，更優選甲酸-乙酸酐。可使用的堿的例子包括無機堿和有機堿如胺，優選吡啶，三乙胺，二異丙基乙胺，吡咯烷，哌啶，嗎啉，二乙胺和二異丙胺，其中更優選吡啶。但是，應當注意，如果乙酰化和甲酰化連續進行，第一步反應使用的堿可用于第二步反應，因此不需要使用另外的堿。甲酰化的反應溫度優選地為約-40℃到約5℃，更優選-20℃到0℃，反應時間一般為約1小時到約1天，優選約5小時到約12小時。
第三步形成半縮酮的反應在酸性條件下進行。術語“酸性條件”表示在反應系統中存在酸。酸可以是有機酸，優選羧酸如乙酸或甲酸，更優選乙酸。如果以一鍋煮的方式進行反應的三個階段，乙酸或甲酸由反應的前面的階段帶入反應系統，由此，第三步所要進行的反應將在不加入酸的情況下進行。第三階段優選的反應溫度為室溫到約60℃，更優選40℃到50℃。反應時間一般為約1小時到約1天，優選約2小時到約12小時。
將所得到的式(Ⅲ)化合物進行氧化反應以氧化11位羥基。氧化劑的例子包括有機氧化劑如二甲亞砜和Dess-Martin Periodinane試劑以及金屬氧化劑如四氧化釕，優選的例子包括二甲亞砜-二環己基碳化二亞胺和二甲亞砜-三氟乙酸酐，特別優選二甲亞砜-三氟乙酸酐，可使用任何對反應惰性的溶劑；如果使用二甲亞砜-三氟乙酸酐作為氧化劑，優選使用含鹵素的溶劑如氯仿和二氯甲烷作為溶劑，更優選二氯甲烷。氧化反應的溫度優選約-60℃到約0℃，更優選約-20℃到約-10℃。反應時間通常為約30分鐘到約5小時，優選1小時到2小時。
所得到的式(Ⅳ)化合物在堿性條件與下烷基化試劑反應，使12位羥基烷基化。隨后，脫去2’和4”位的保護基。在這種情況下，烷基化和脫去保護基的反應優選地以一鍋煮的方式進行。
用于第一階段烷基反應化的烷基化試劑例如鹵代烷，甲基苯磺酸烷基酯和亞胺酸烷基酯，優選甲基苯磺酸烷基酯和鹵代烷，這些烷基化試劑中烷基部分特別優選甲基。甲基化試劑的特例包括碘甲烷和甲基苯磺酸甲酯，優選甲基苯磺酸甲酯。可使用的堿的例子包括金屬氫化物，金屬氫氧化物和金屬烷氧化物，優選金屬氫化物，特別優選氫化鈉。可使用任何對反應惰性的溶劑，優選極性非質子溶劑，更優選二甲基咪唑烷酮，二甲基甲酰胺，二甲基乙酰胺，四氫呋喃和乙腈，特別優選二甲基咪唑烷酮和二甲基甲酰胺。優選的反應溫度為約0℃到約60℃，更優選0℃到30℃。反應時間一般為約1小時到約12小時，優選2小時到8小時。
第二階段反應脫去保護基按普通脫去乙酰基和甲酰基的方法進行，優選在堿性條件下進行。可使用的堿的例子包括無機堿如碳酸氫鈉和碳酸鉀，更優選碳酸氫鈉。可使用任何對反應惰性的溶劑，優選醇溶劑，更優選甲醇和乙醇。反應溫度優選約40℃到約80℃，更優選50℃到60℃。反應時間一般為約1小時到約12小時，優選3小時到8小時。
如果烷基化和脫保護反應以一鍋煮的方式進行，第一階段反應烷基化可使用過量的堿，即，2當量或更多，優選約2當量；堿所產生的堿性可排除第二階段反應中另外加入堿的必要。如果需要，各階段之間的溶劑可非強制性地更換，例如用第二階段反應的溶劑補充第一階段反應的溶劑。
堿性條件下使由此制得的通式(Ⅴ)化合物與過量芐氧羰基氯反應以使該化合物轉化成通式(Ⅵ)化合物；然后，通過常規方法脫去引入的芐氧羰基，由此通式(Ⅵ)化合物被轉化為通式(Ⅷ)化合物，接著，將其在堿性條件下與烷基化試劑反應，使其轉化成通式(Ⅱ)化合物，使用常規方法使其轉化成富馬酸鹽。由芐氧羰基化，脫芐氧羰基，烷基化和向富馬酸鹽的轉化組成的反應系列中，各階段產物無需純化直至形成通式(Ⅱ)化合物的富馬酸鹽。
用于第一階段的芐氧羰基化試劑的優選例子為芐氧羰基氯。可使用的堿的例子包括無機堿如碳酸氫鈉和碳酸鉀，優選碳酸鉀。可使用任何對反應惰性的溶劑，但優選基于芳香烴類的溶劑，更優選甲苯等，反應溫度優選為約30℃到約80℃，更優選45℃到70℃，特別優選約60℃左右的溫度。反應時間通常為約2小時到約12小時，優選4小時到8小時。應當注意，相對于通式(Ⅴ)化合物，必須使用過量的芐氧羰基化試劑，優選9-15倍當量，更優選10-12倍當量。
第二階段反應芐氧羰基的脫去按普通的脫保護方法進行。脫保護方法的例子為催化氫化，其中優選地使用鈀-碳催化劑。氫的來源典型地為氫氣，但也可使用甲酸銨。如果使用氫氣作為氫的來源，催化氫化可在加壓的條件下進行，壓力范圍優選約2到5個大氣壓，更優選3到4個大氣壓。可使用任何對反應惰性的溶劑，但優選醇溶劑等，更優選甲醇，乙醇等。反應溫度為約0℃到約50℃，優選約10℃到約30℃，更優選室溫及其附近的溫度。反應時間的范圍為約30分鐘到約3小時，優選1小時到2小時。如果甲酸銨用作氫的來源，可使用任何對反應惰性的溶劑，但優選醇溶劑等，更優選甲醇，乙醇等。反應溫度優選地為約50℃到約100℃，更優選60℃到90℃。反應時間一般為約30分鐘到約3小時，優選1小時到2小時。
用于第三階段的烷基化反應烷基化試劑的例子包括鹵代烷和甲基苯磺酸烷基酯，優選鹵代烷。這些烷基化試劑的烷基部分特別優選異丙基。異丙基化試劑的優選例子包括異丙基碘。可使用的堿的例子包括有機堿如胺，以及無機堿；優選例包括二異丙基乙胺，三乙胺，嗎啉，哌啶，吡咯烷和吡啶，特別優選三乙胺。可使用任何對反應惰性的溶劑，但優選極性非質子溶劑，醇溶劑等，更優選二甲基咪唑烷酮，二甲基甲酰胺，二甲基乙酰胺，乙腈，四氫呋喃，甲醇，乙醇等，其中特別優選二甲基咪唑烷酮，二甲基甲酰胺和乙腈。反應溫度優選為約50℃到約100℃，更優選60℃到80℃。反應時間一般為約3小時到約10天，優選5小時到10小時。
第四階段反應富馬酸鹽的轉化按普通的形成鹽的方法進行。溶劑優選使用醇溶劑，醚溶劑如四氫呋喃，丙酮等，更優選甲醇，乙醇，異丙醇等。反應溫度優選為約-20℃到約50℃，更優選約-15℃到約室溫。反應時間一般為約1小時到6小時，優選地為3小時到4小時。
如果需要可將上述得到通式(Ⅱ)化合物的富馬酸鹽純化。優選的純化技術為重結晶。重結晶溶劑的例子包括非強制性地含水的酯溶劑、醇溶劑、醚溶劑及其混合物等，優選的例子包括乙醇、甲醇和異丙醇的混合溶劑和乙酸乙酯和水的混合溶劑；這些溶劑中，更優選甲醇和異丙醇的混合物，乙酸乙酯和水的混合物。在這些混合溶劑系統中，甲醇與異丙醇的比例可為約10∶90到約50∶50，優選約20∶80到約30∶70，乙酸乙酯與水的比例可為約99.5∶0.5到97∶3，優選99∶1到98∶2，更優選的值為約98.5∶1.5。
使用單一的或與水混合的乙酸乙酯作為溶劑進行重結晶時，得到不同于日本專利公開No.56873/1994描述的用甲醇和異丙醇的混合物重結晶得到的產物(晶形A)的結晶(晶形C和D)。這些結晶的粉末X射線衍射和熱分析(DSC)數據顯示于本申請所附的圖中(
圖1-6)。
在從甲醇和異丙醇的混合物中重結晶得到的結晶(晶形A)中，式(Ⅶ)化合物與富馬酸的摩爾比為2∶1，使用單獨的或與水混合的乙酸乙酯重結晶得到的結晶為其中式(Ⅶ)化合物與富馬酸的摩爾比為1∶1的晶形C或其中式(Ⅶ)化合物與富馬酸的摩爾比為2∶1的晶形D。
在這些晶形中，已發現使用乙酸乙酯和水作為溶劑由通過，例如，用甲醇和異丙醇的混合物重結晶的方法粗純化的式(Ⅶ)化合物富馬酸鹽(例如，晶形A)重結晶得到的晶形D具有更高的質量，例如當用作藥物或其原料時，它比其他晶形具有更高的穩定性。
為了得到晶形D，使用乙酸乙酯和水的混合物的重結晶優選地按下述方式進行首先，在接近室溫的溫度下，將部分純化的式(Ⅶ)化合物的富馬酸鹽溶于或懸浮于乙酸乙酯，加入水后，將該溶液或該懸浮液冷卻至約-10℃到約-20℃。
下面提供的實施例是為了進一步說明本發明，而不以任何方式限制本發明。在下列敘述中，僅標1H-NMR特征峰數據。實施例1半縮酮形式[式(Ⅲ)化合物]的合成將紅霉素A(20.0g,0.027mol)溶于乙酸酐(3.34g,0.033mol)，吡啶(3.45g,0.044mol)和乙酸乙酯(80ml)，將該溶液在室溫下攪拌1小時。然后，在冰(0℃)冷卻下在該溶液中滴加甲酸(11.29g,0.245mol)和乙酸酐(12.52g,0.123mol)，將該混合物在冰冷卻下攪拌3小時。然后，將該混合物逐步升溫至室溫并放置過夜。
將該混合物在40-50℃加熱約2小時。將該混合物降至室溫后，將其溶于乙酸乙酯(120ml)并將該溶液用冰水(60ml×2)洗滌。將乙酸乙酯層用碳酸氫鈉飽和水溶液(120ml)和固體碳酸氫鈉(8g或更多)中和。將乙酸乙酯層分離，用水(40ml×3)和飽和鹽水(40ml)洗滌，用無水硫酸鈉干燥過夜。
過濾后真空濃縮濾液。將殘留物用己烷(136ml)回流約30分鐘，然后冷卻。加入乙酸乙酯(24ml)后，攪拌下冷卻至0℃。將所得結晶分離并用己烷(20ml)洗滌，得到白色結晶狀標題化合物(15.8g,74％)。m.p.:200-208℃(乙酸乙酯-己烷)1H-NMR (CDCl3):0.89(3H,t,13-CH2CH3),2.05(3H,s,2′-OCOCH3),2.27(6H,s,3′-N(CH3)2),3.36(3H,s,3″-OCH3),3.83(1H,s,11-CH(OH)),8.20(1H,s,4″-OCHO).實施例2氧化形式[式(Ⅳ)化合物]的合成將一部分實施例1制備的化合物(10.0g,0.013mol)和二甲亞砜(2.64g,0.032mol)溶于二氯甲烷(50ml)。用冰-氯化鈉將反應系統冷卻至-20℃，在-10℃或更低的溫度下在反應混合物中滴加三氟乙酸酐(3.36g,0.016mol)，將其攪拌20分鐘。另外，使反應系統保持在-20℃，在-10℃或更低的溫度下滴加三乙胺(3.49g,0.034mol)并繼續攪拌20分鐘。加入碳酸氫鈉飽和水溶液(50ml)后，將混合物攪拌20分鐘。用水(50ml×3)洗滌后，用無水硫酸鈉干燥過夜。
真空濃縮二氯甲烷后，將己烷(100ml)加入糖漿狀殘留物中，將其攪拌加熱形成溶液。溶液冷卻后，加入二氯甲烷(2.5ml)并將該混合物在室溫下攪拌2.5小時。過濾回收結晶，用2.5％二氯甲烷-己烷(30ml)洗滌，得到白色結晶狀標題化合物(6.49g,65％)。m.p.:186-188(二氯甲烷-己烷)1H-NMR(CDCl3):0.90(3H,t,13-CH2CH3),2.04(3H,s,2′-OCOCH3,2.26(6H,s,3′-N(CH3)2),3.33(3H,s,3″-OCH3),4.53(1H,d,1′-H),4.84(1H,d,1″-H),4.97(1H,dd,13-H),8.21(1H,s,4″-OCHO).13C-NMR(CDCl3):208.4(11-CO).實施例3脫保護形式[式(Ⅴ)化合物(R2甲基)]的合成在二甲基甲酰胺(30ml)中加入60％氫化鈉(1.02g,0.026mol)；在該混合物中加入實施例2制備的化合物(10.0g,0.13mol)并將所得混合物攪拌30分鐘。滴入甲基苯磺酸甲酯(2.38g,0.013mol)后，將該混合物首先在0-5℃攪拌1小時，然后在15-20℃攪拌1.5小時。加入甲醇(60ml)，將該混合物在60℃加熱5小時。將如此加熱的混合物放置過夜。
將所有混合物真空濃縮，攪拌下將濃縮液滴入40℃溫水(150ml)中，分離出沉淀。在40℃下，將沉淀在40℃溫水(150ml)中繼續攪拌30分鐘以分離沉淀。將沉淀在50℃干燥4小時，得到脫保護形式粗品(7.9g,85％)。
將脫保護形式粗品溶于丙酮(12.6ml)，加入10％氨水(5.9ml)以結晶。為了相分離和洗滌，將該混合物首先在15-25℃下攪拌1小時，然后，在-5到-10℃下攪拌1小時。分離，洗滌，在50℃下干燥3小時后，得到標題化合物淺黃色結晶(5.5g,59％)。m.p.:168-174(氨水-丙酮)1H-NMR(CDCl3):0.85(3H,t,13-CH2CH3),1.68(3H,s,8-CH3),2.28(6H,s,3′-N(CH3)2),3.06(3H,s,12-OCH3),3.34(3H,s,3″-OCH3),4.37(1H,d,1′-H),4.97(1H,d,1″-H),5.63(1H,dd,13-H).實施例4芐氧羰基化物[式(Ⅵ)化合物(R2甲基)]的合成在甲苯(55ml)中，加入實施例3制備的化合物(5.5g,0.0076mol)和固體碳酸氫鈉(9.5g,0.113mol)。隨后，在70-80℃攪拌下加入芐氧羰基氯(18.0g,0.106mol)并將該混合物在相同的溫度下加熱4小時。然后，將液體反應混合物在室溫下放置過夜。
在液體反應混合物中加入吡啶(4.02g,0.05mol)，將其攪拌30分鐘。隨后，加入碳酸氫鈉飽和水溶液(38.5ml)并將該混合物攪拌10分，然后加入乙酸乙酯(38.5ml)，攪拌該混合物，相分離，用水洗滌有機層。將有機層進一步用飽和食鹽水(38.5ml)洗滌并用無水硫酸鈉干燥。
將全部混合物真空濃縮。在殘留物中加入乙腈(27.5ml)，將所得溶液用己烷(187ml×5)洗滌以相分離。將乙腈層真空濃縮。在殘留物中加入甲醇(13.5ml)，將該混合物首先在15-25℃攪拌1小時，然后在0℃或更低的溫度下攪拌1小時。過濾回收沉淀出的結晶，將其在50℃下干燥3小時，得到標題化合的白色結晶(4.0g,54％)。m.p.:122-126℃(甲醇)1H-NMR(CDCl3):0.96(3H,t,13-CH2CH3),1.68(3H,s,8-CH3),3.03-3.37(3H,d,3″-OCH3),3.06(3H,s,12-OCH3),5.03-5.21(4H,m,CH2C6H5x2),5.63(1H,dd,13-H),7.28-7.34(10H,m,2′-OCOCH2C6H5,3′-NOCOCH2C6H5).實施例5脫芐氧羰基化物[式(Ⅷ)化合物(R2甲基)]的合成在甲醇(36.8ml)中，加入實施例4制備的化合物(4.0g,0.004mol)，10％鈀-碳(0.4g)和甲酸銨(1.03g)，加熱回流1小時。濾除鈀-碳，然后真空蒸除甲醇。將殘留物溶于乙酸乙酯(40ml)并用碳酸氫鈉飽和水溶液(16ml)洗滌該溶液；相分離。將所得有機層首先用水(16ml×2)，然后用飽和鹽水(16ml)洗滌，用無水硫酸鈉干燥。濾除無水硫酸鈉以后，真空濃縮有機層，得到脫芐氧羰基化物白色結晶狀粗品(2.0g,69％)。m.p.:187-190℃(懸浮在己烷中純化后)1H-NMR (CDCl3):0.95(3H,t,13-CH2CH3),1.68(3H,s,8-CH3),2.47(3H,s,3＇-NHCH3),3.06(3H,s,12-OCH3),3.21(1H,dd,2″-H),3.33(3H,s,3″-OCH3),4.37(1H,d,1＇-H),4.96(1H,d,1″-H), 5.61-5.65(1H,dd,13-H).實施例6富馬酸鹽[式(Ⅶ)化合物富馬酸鹽]的合成在二甲基咪唑烷酮(35ml)中，加入實施例5制備的化合物(10g,0.014mol)，異丙基碘(23.8g,0.14mol)和三乙胺(16.95g,0.17mol)形成溶液，將其在70-75℃加熱7-8小時，并放置過夜。用乙酸乙酯(200ml)和2.5％氨水(75ml)萃取及洗滌后，將該溶液用水洗(150ml×2)，然后用飽和鹽水洗滌，用無水硫酸鈉干燥。真空濃縮乙酸乙酯后，將殘留物和富馬酸(0.84g,0.0073mol)溶于甲醇(250mol)。攪拌下，將異丙醇(75ml)慢慢滴入該溶液得到富馬酸鹽的形式。將含富馬酸鹽化物的液體反應混合物首先在室溫下攪拌1小時，然后在0℃下攪拌1小時，最后在-15℃下攪拌1小時，隨后真空過濾，得到標題化合物白色結晶(7.9g,69％)。m.p.:194-197℃(甲醇-異丙醇)1H-NMR(CDCl3+DMSO-d6):O.94(3H,t,13-CH2CH3),1.73(3H,s,8-CH3),3.05(3H,s,12-OCH3),3.08(lH,dd,4″-H),3.35(3H,s,8″-OCH3),4.43(1H,d,1′-H),4.96(1H,d,1″-H),5.60-5.63(1H,dd,13-H),6.78(1H,s,1/2(=CH-COOH)2).實施例7富馬酸鹽[式(Ⅶ)化合物富馬酸鹽]的部分純化將實施例6中制備的化合物(10.0g,0.0123mol)溶于甲醇(25ml)，向該溶液中慢慢滴加異丙醇(75ml)。將液體反應混合物首先在室溫下攪拌1小時，然后在0℃攪拌1小時，最后在-15℃攪拌1小時，完成結晶。真空過濾得到標題化合物的部分純化產物白色結晶(9.25g,92.5％)。m.p.:194-197℃(甲醇-異丙醇)1H-NMR(CDCl3+DMSO-d6):0.94(3H,t,13-CH2CH3),1.73(3H,s,8-CH3),3.05(3H,s,12-OCH3),3.08(1H,dd,4″-H),3.35(3H,s,8″-OCH3),4.43(1H,d,1′-H),4.96(1H,d,1″-H),5.60-5.63(1H,dd,13-H),6.78(1H,s,1/2(=CH-COOH)2).實施例8富馬酸鹽[式(Ⅶ)化合物富馬酸鹽]的精制室溫下，將實施例7得到的部分純化的富馬酸鹽(10g,0.123mol)溶于乙酸乙酯(100ml)。滴入水(1.5ml)后，將該溶液首先在室溫下攪拌1小時，然后在0℃攪拌1小時，最后在-10℃攪拌4小時。真空過濾得到標題化合物的精制產物白色結晶(9.04g,90.4％)。m.p.:199-200(1.5％水-乙酸乙酯)1H-NMR(CDCl3+DMSO-d6):0.94(3H,t,13-CH2CH3),1.73(3H,s,8-CH3),3.05(3H,s,12-OCH3),3.08(1H,dd,4″-H),3.35(3H,s,8″-OCH3),4.43(1H,d,1′-H),4.96(1H,d,1″-H),5.60-5.63(1H,dd,13-H),6.78(1H,s,1/2(=CH-COOH)2).實施例9富馬酸鹽[式(Ⅶ)化合物富馬酸鹽]的合成在甲苯(55ml)中，加入實施例3得到的化合物(9.5g,0.013mol)和固體碳酸氫鈉(16.4g,0.195mol)。攪拌下，在70℃或更高的溫度下滴加芐氧羰基氯(31.1g,0.183mol)，將該混合物在相同的溫度下加熱4小時，隨后在室溫下放置過夜。
在液體反應混合物中加入吡啶(6.94g,0.086mol)，然后將其攪拌30分鐘。加入碳酸氫鈉飽和水溶液(66.5ml)后，將該混合物攪拌10分鐘并加入乙酸乙酯(66.5ml)。將所得液體混合物攪拌，分出有機層，將有機層用水和飽和鹽水(66.5ml)洗滌，用無水硫酸鈉干燥。
將全部混合物真空濃縮并將殘留物溶于甲醇(128ml)。在該溶液中，加入10％鈀-碳(1.28g)，在氫氣氛中，在加壓下(3-4個大氣壓)室溫攪拌1小時。濾除鈀-碳后，真空蒸除甲醇。將殘留物溶于乙酸乙酯(120ml)，用碳酸氫鈉飽和水溶液(50ml)洗滌，相分離。將所得有機層用水(50ml×2)然后用飽和鹽水(50ml)洗滌，用無水硫酸鈉干燥。濾除無水硫酸鈉后，真空濃縮乙酸乙酯，得到油狀脫芐氧羰基化物[式(Ⅷ)化合物(R2甲基)]。
無需純化，將脫芐氧羰基化物與異丙基碘(20.0g,0.118mol)和三乙胺(13.2g,0.131mol)一起溶于二甲基咪唑烷酮，將該溶液在70-75℃加熱7-8小時，隨后放置過夜。用乙酸乙酯(100ml)和2.5％氨水(50ml)萃取和洗滌后，將該溶液用水(50ml×2)和飽和鹽水(50ml)洗滌，用無水硫酸鈉干燥。真空濃縮乙酸乙酯后，將殘留物和富馬酸(0.76g,0.0066mol)溶于甲醇(25.0ml)，攪拌下慢慢滴加異丙醇(75.0ml)以形成結晶。將該溶液在室溫下攪拌1小時，在0℃下攪拌1小時，在-15℃攪拌1小時。真空過濾并干燥，得到標題化合物白色結晶(6.5g,60.0％)。m.p.:194-197℃(甲醇-異丙醇)1H-NMR(CDCl3+DMSO-d6):0.94(3H,t,13-CH2CH3),1.73(3H,s,8-CH3),3.05(3H,s,12-OCH3),3.08(1H,dd,4″-H),3.35(3H,s,8″-OCH3),4.43(1H,d,1′-H),4.96(1H,d,1″-H),5.60-5.63(1H,dd,13-H),6.78(1H,s,1/2(=CH-COOH)2).實施例10式(Ⅶ)化合物富馬酸鹽結晶的穩定性試驗下面試驗與晶形有關的式(Ⅶ)化合物富馬酸鹽結晶的穩定性差異。用于試驗的結晶為通過用甲醇-異丙醇重結晶式(Ⅶ)化合物富馬酸鹽而制備的晶形A和通過用單一的或與水混合的乙酸乙酯重結晶制備的晶形C和D。
將各晶體精確地稱重并在充滿80℃熱空氣的恒溫室中進行加速試驗。在給定的時間間隔將每個結晶樣品取出恒溫室并將其全部溶于50％乙腈，得到約1mg/ml濃度。在2ml該溶液中加入2ml內標溶液(由100mg對苯甲酸環己基酯溶于2ml50％乙腈組成)，然后，將混合物的總量調至10ml，取其中100μl在下文所述的條件下進行HPLC分析，通過樣品與內標峰面積的比例測定各結晶的百分保留值。HPLC條件儀 器Multi-Solvent Feed System M600(Waters,Inc.):Multi-Functional Detector Model 490(Waters.Inc.)；Full-AutoSample Processon M712(Waters,Inc.,)；Data Module Model740(Waters,Inc.)；Temperature Control Module(Waters,Inc.)；Column Heater Module(Waters,Inc.)柱YMC A-212,C8(Y.M.C.Co.,Ltd)洗脫液50％乙腈+低頻試劑PIC B-5(Waters.Inc.)流速1ml/min測定波長205nm柱溫40℃內標對苯甲酸環己基酯結果顯示于圖7，試驗條件下，晶形A第70天的保留率為約60％，而晶形C和D甚至在第70天時，保留率仍有80％。實施例11濕潤條件下式(Ⅶ)化合物富馬酸鹽結晶的穩定性試驗下面試驗與晶形有關的式(Ⅶ)化合富富馬酸鹽結晶在濕潤條件下的穩定性。試驗方法和條件與實施例10相同，只是加速試驗在溫度為80℃，由氯化鈉飽和水溶液保持相對濕度為75％的干燥器中進行。
結果顯示于圖8，從它我們可看到，在濕潤條件下，晶形A和D比晶形C更穩定。
上述兩個試驗結果說明晶形D比其他晶形更穩定。
本發明的工業實用性本發明的方法具有下列優點(1)僅通過重結晶就可完成得到純形式的最終產物所需的各階段反應的純化；(2)紅霉素A2’位羥基乙酰化和4”位羥基甲酰化以及形成半縮酮的反應可以一鍋煮的方式進行，另外，12位羥基的烷基化反應，以及2’位乙酰基和4”位甲酰基的消去反應也可以一鍋煮的方式進行。因此，本發明的方法也以比在先技術的方法步驟少的方式得到目的化合物，因而，在商業上具有實際的利益。
另外，本發明的方法可得到比以前得到的用作藥物或其原料的結晶質量更高，如穩定性更高的式(Ⅱ)化合物富馬酸鹽晶形。
權利要求
1．純化通式(Ⅱ)化合物富馬酸鹽的方法 式(Ⅱ)中R1為低級烷基，R2為低級烷基，其特征在于將式(Ⅱ)化合物富馬酸鹽粗結晶用醇溶劑重結晶并用含水乙酸乙酯再次重結晶。
2．根據權利要求1的方法，其中R1為異丙基，R2為甲基。
全文摘要
純化通式(Ⅱ)化合物富馬酸鹽的方法,其中R
文檔編號A61K31/70GK1314358SQ01101218
公開日2001年9月26日 申請日期1996年8月5日 優先權日1995年8月3日
發明者三浦裕, 川崎安重, 大石和弘 申請人:中外制藥株式會社