專利名稱：金耳菌絲體多糖降低血糖和血脂方面的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種金耳菌絲體多糖的新用途，尤其是金耳菌絲體多糖在降低血糖和降低血脂方面的應用。
背景技術：
糖尿病、高血脂是目前中老年人的常見病和多發病，由糖尿病和高血脂引起的誘發病嚴重危及人們的生命健康。現有西藥類降糖降血脂藥物難免有副作用，而中藥類降糖降血脂藥物則普遍藥效不夠明顯。
金耳為擔子菌綱、銀耳科中著名的食藥真菌，主要產于我國云南、貴州等地的深山中，其藥用價值雖早為人們所認識，但始終基于傳統中醫理論。如據《本草綱目》記載金耳可治“癖飲積聚，腹痛金瘡”。其性味功效為“溫中帶寒，味甘，能化痰，止痰，定喘，調氣，平肝陽”。
近年來，本發明申請人通過反復摸索和不斷實驗，完成了從金耳子實體中提取金耳子實體多糖和從發酵菌絲體中提取金耳菌絲體多糖的工作，并申請了有關提取方法的發明專利。在進一步深入研究的過程中，本發明申請人對金耳多糖藥理作用的認識有了長足的進展，發現其對降低肝膽固醇、增強免疫力、促進造血功能、抗衰老等諸多方面均有一定療效，尤其是通過實驗證實，從發酵菌絲體中提取的金耳菌絲體多糖(Polysaccharides from Temelle aurantiabla mycelium，TMP)具有顯著的降糖作用(金耳子實體多糖雖也有類似作用，但其產量低、提取困難，因此不具有商業價值，難以實際應用)。高血糖伴有高脂血癥和脂代謝異常是糖代謝紊亂的常見病理現象。為此，在研究TMP對高血糖代謝影響的同時，通過檢測血漿甘油三酯和膽固醇水平，來進一步觀察TMP對脂代謝的作用。
發明內容
鑒于以上原由，本發明的目的在于給出金耳菌絲體多糖降低血糖以及降低血脂的應用，從而為金耳在制藥領域的商業開發利用開辟廣闊的前景，使祖國醫學的“古蓮”在當今開出時代的新葩。
本發明申請人經嚴謹的研究發現并經反復實驗證實，從發酵所獲菌絲體中提取的金耳菌絲體多糖經腹腔注射途徑或口服途徑給予高血糖和/或高血脂大鼠可顯著降低其血糖和/或血脂，因此證實金耳菌絲體多糖具有作為制備降低血糖和血脂藥物的用途。尤其是，由于金耳菌絲體多糖是一種純中藥制劑，并且本身原有“調氣、平肝陽”等作用，因此與現有降糖藥物相比，不僅見效快、效果顯著，并且服用后有益無害。
圖1是分別測定給藥4、7、14、23d的血糖值變化示意圖具體實施方式
下而結合實施例對本發明的方法作進一步說明。
實施例1本實施例所用材料如下1、金耳菌絲體多糖按后附步驟A-G由實驗室發酵培養和提取制備的。
2、動物雄性SD大鼠，體重190-210g(實驗動物合格證號滬動合證字152號)。
3、藥品四氧嘧啶、降糖靈片、拜糖蘋、蒽酮、濃硫酸、氫氧化鉀、氯化鈉、正丁醇、氯仿等國產分析純試劑。
4、試劑盒葡萄糖酶法測定試劑盒、酶法血清(漿)甘油三酯試劑盒、血清(漿)酶法總膽固醇測定試劑盒。
5、儀器722型分光光度計、渦旋混合儀、高速臺式離心機、手提式高壓蒸汽消毒器、勻漿器、高速冰凍離心機、恒溫水浴鍋、旋轉式搖床、10升發酵罐。
以上金耳菌絲體多糖發酵培養和提取制備步驟為A.放罐——將培養好的發酵罐放入離心機中，離心分離，取出菌絲體，用水洗滌后甩干；B、蒸煮——在菌絲體中加入倍純水、煮沸，用離心機甩干；C.水解——將蒸煮液合并，加NaOH水解；D.離心——分離水解液，取超液；E.超濾——用0.1微米的膜微濾，再用分子量5000的膜超濾；F、濃縮——用酒精濃縮超濾液，使之沉淀；
G、結晶——濾出濃縮沉淀物，用濃酒精洗滌后烘干，得到金耳菌絲體多糖；本實施例的實驗方法為選取空腹血漿葡萄糖水平在3.5mmol/L--6.3mmol/L范圍的正常雄性SD大鼠，以檸檬酸緩沖液(pH4.6)滅菌后配制的4％alloxan注射液，按體重140mg/kg劑量一次性腹腔注射造型，72h后，選擇空腹血糖值大于10mmol/L的大鼠隨機編為6組，每組8只，組間血糖值差異小于1.11mmol/L。設陽性對照(I組)灌胃(ig.)給予生理鹽水；陽性藥物對照，分別為降糖靈治療(II組)，ig100mg/kg.d劑量降糖靈；拜糖平治療(III組)，ig.20mg/kg.d劑量拜糖平；TMP治療低、中、高三種劑量(分別為IV、V、VI組)，分別以50、100、200mg/kg.d劑量ig TMP。
觀測給藥4d、7d，各組大鼠血漿葡萄糖及血乳酸含量。繼續觀察連續14d、23d給予100mg/kg.d劑量TMP和降糖靈后高血糖大鼠的血糖值、肝糖原含量。選取空腹血漿葡萄糖水平在3.5mmol/L-6.3mmol/L范圍的正常雄性SD大鼠，以檸檬酸緩沖液(pH4.6)滅菌后配制的4％alloxan注射液，按體重140mg/kg劑量一次性腹腔注射造型，72h后，選擇空腹血糖值大于10mmol/L的大鼠隨機編為6組，每組8只，組間血糖值差異小于1.11mmol/L。設陽性對照(I組)灌胃(ig.)給予生理鹽水；陽性藥物對照，分別為降糖靈治療(II組)，ig100mg/kg.d劑量降糖靈；拜糖平治療(III組)，ig.20mg/kg.d劑量拜糖平；TMP治療低、中、高三種劑量(分別為IV、V、VI組)，分別以50、100、200mg/kg.d劑量ig TMP。
觀測給藥4d、7d，各組大鼠血漿葡萄糖、甘油三酯、膽固醇及血乳酸含量。繼續觀察連續14d、23d給予100mg/kg.d劑量TMP和降糖靈后高血糖大鼠的血糖值、肝糖原含量。
測定給藥前后受試大鼠血漿葡萄糖含量變化，結果見表1由表1可見，TMP給藥4d、7d，與對照相比，治療組高血糖大鼠血糖均顯著降低(p＜0.05)。給藥一周后，各組血糖水平仍顯著低于對照組(p＜0.05)，可見，ig.TMP4d即能有效降低高血糖大鼠的血糖，給藥一周仍可維持效果。
表1 TMP對alloxan誘導高血糖大鼠血漿葡萄糖水平的影響組別 大鼠數劑量 血漿葡萄糖含量(mmol/L)Group NumberDoseplasma glucose content(mg/kg)0d 4d 7dI 8 生理鹽水 22.34±6.2423.71±6.1127.05±3.84II8 10022.58±5.6313.12±6.89*18.47±8.29*III 8 20 22.79±5.6015.80±5.21*20.28±3.09**IV8 50 22.89±5.1013.07±6.85*17.59±7.95*V 8 10023.10±5.7311.71±6.22**15.48±8.45**VI8 20022.68±5.2915.49±7.03*17.88±6.89*t I-II2.515 2.347t I-III 2.678 3.723t I-IV2.372 2.499t I-V 3.699 3.263t I-VI2.424 2.324df＝13 t0.05＝2.160 t0.01＝3.012；df＝14 t0.01＝2.145 t0.01＝2.977注成型鼠在分組后II、III、IV、VI組大鼠各死亡一只，結果按實際參試大鼠數進行檢驗。
連續ig.100mg/kg.d TMP、降糖靈23d，分別測定給藥4、7、14、23d的血糖值，結果見圖1如圖所示，連續治療14d，降糖靈和TMP治療組的血糖含量分別為13.06±7.57mmol/L、12.68±7.69mmol/L；經t檢驗分析，與對照組血糖水平24.60±4.58mmol/L相比，兩組大鼠的血糖降低均有顯著意義(p＜0.05)。23d三組的血糖值分別為25.12±7.09(n＝7)、12.38±6.93(n＝5)、12.96±6.37(n＝7)，兩治療組與對照相比血糖、血脂降低均有顯著意義(p＜0.05)。
實施例2本實施例使用與實施例1相同的材料，金耳菌絲體多糖發酵培養和提取制備步驟也與實施例1相同，不同之處在于本實施例測定的是給藥前后TMP對alloxan致高血糖大鼠血漿膽固醇及甘油三酯水平的影響TMP對alloxan致高血糖大鼠脂代謝的影響，見表2
表2TMP對alloxan致高血糖大鼠血漿膽固醇及甘油三酯水平的影響組別大鼠數 劑量 血漿膽固醇 血漿甘油三酯(mg/kg) (mmol/L)(mmol/L)GroupNumber Dose cholesterin triglycerideI8 生理鹽水 2.079±0.5280.961±0.565II 8 100 1.984±0.47 0.456±0.108*III 8 20 1.718±0.4510.509±0.264IV 8 50 1.886±0.2990.621±0.144V8 100 1.691±0.4490.498±0.099*VI 8 200 2.195±0.3870.788±0.132t I-II0.380 2.483t I-III 1.471 2.049t I-IV0.938 1.649t I-V 1.583 2.283t I-VI0.510 0.843df＝14，t0.05＝2.146，t0.01＝2.977由表2可見，給藥一周后，TMP對alloxan誘導的高血糖大鼠血漿膽固醇含量的影響不顯著(p＞0.05)，但能使高血糖大鼠的血漿甘油三酯水平顯著下降(p＜0.05)。由試驗全過程可見，TMP治療組血糖、血脂波動幅度較小，顯示其不僅可在短時間內有效降血糖降血脂，而且長期給藥的降血糖降血脂作用也穩定并顯著。
實施例3采用以下方法制取金耳菌絲體多糖A.放罐——將培養好的發酵罐放入離心機中，離心分離，取出菌絲體，用水洗滌后甩干；B、蒸煮——在菌絲體中加入倍純水、煮沸，用離心機甩干；C.水解——將蒸煮液合并，加KOH水解；D.離心——分離水解液，取超液；E.超濾——用0.1微米的膜微濾，再用分子量5000的膜超濾；F、濃縮——用酒精濃縮超濾液，使之沉淀；
G、結晶——濾出濃縮沉淀物，用濃酒精洗滌后烘干，得到金耳菌絲體多糖；然后制成水溶液，加熱溶解，混合均勻后，分裝成10/ml/支濃度的注射液裝入藥瓶中密封，消毒制成產品。
實施例四采取實施例三同樣的方法制取金耳菌絲體多糖，按公知的制片技術和裝備制成片劑。
總之，腹腔注射50mg/kg劑量的TMP，7天可使四氧嘧啶誘導的高血糖大鼠的血糖血脂顯著降低，而不引起胰島素分泌的增加。以灌胃的給藥途徑給與高血糖大鼠50、100、200mg/kg劑量的TMP均能有效降低其血糖血脂水平，連續給藥3周可使高血糖大鼠的血糖和血脂水平穩定下降。TMP并能同時降低四氧嘧啶誘導的高血糖大鼠的血漿甘油三脂水平。由此可以證實金耳菌絲體多糖、即TMP完全可以用作制備降低血糖和降低血脂的理想藥物，此藥物既可以是注射液，也可以是口服液。
與現有降血糖降血脂藥物的藥效比較實驗可以表明，金耳菌絲體多糖藥效快，降血糖降血脂效果明顯。由于本身是一種純中藥制劑，并且原有“調氣、平肝陽”等作用，因此金耳菌絲體多糖服用后有益無害。本發明不僅為深度開發利用金耳打開了一條嶄新的途徑，而且為降低血糖降血脂提供了新的理想中藥，將帶來良好的經濟效益和社會效益。
權利要求
1.金耳菌絲體多糖在制備降低血糖的藥物中的應用。
2.金耳菌絲體多糖在制備降低血脂的藥物中的應用。
3.根據權利要求1或2所述金耳菌絲體多糖的用途，其特征在于將金耳菌絲體多糖制備成任何一種藥劑學上所說的劑型。
4.根據權利要求3所述的金耳菌絲體多糖的用途，其特征在于將金耳菌絲體多糖用作制備降低血糖或降低血脂的注射藥物。
5.根據權利要求3所述的金耳菌絲體多糖的用途，其特征在于將金耳菌絲體多糖用作制備降低血糖或降低血脂的口服藥物。
6.根據權利要求1或2所述金耳菌絲體多糖的用途，其特征在于所述金耳菌絲體多糖按以下步驟提取A.放罐——將培養好的發酵罐放入離心機中，離心分離，取出菌絲體，用水洗滌后甩干；B、蒸煮——在菌絲體中加入倍純水、煮沸，用離心機甩干；C.水解——將蒸煮液合并，加NaOH水解；D.離心——分離水解液，取超液；E.超濾——用0.1微米的膜微濾，再用分子量5000的膜超濾；F、濃縮——用酒精濃縮超濾液，使之沉淀；G、結晶——濾出濃縮沉淀物，用濃酒精洗滌后烘干，得到金耳菌絲體多糖。
全文摘要
本發明涉及一種金耳菌絲體多糖的新用途，尤其是將金耳菌絲體多糖用作制備降低血糖和降低血脂的藥物。本發明申請人經實驗研究發現，從發酵所獲菌絲體中提取的金耳菌絲體多糖經腹腔注射途徑或口服途徑給予高血糖大鼠可顯著降低其血糖和血脂，因此證實金耳菌絲體多糖具有作為制備降低血糖和血脂藥物的用途。本發明不僅為深度開發利用金耳打開了一條嶄新的途徑，而且可以為降低血糖和降低血脂提供新的理想中藥。
文檔編號A61P3/00GK1623557SQ20031010653
公開日2005年6月8日 申請日期2003年12月5日 優先權日2003年12月5日
發明者俞建國, 瞿偉菁, 張志才 申請人:江蘇河海科技工程集團有限公司, 華東師范大學