專利名稱：瘧疾預防藥物組合物的制作方法
技術領域：
本發明涉及醫藥領域，具體涉及一種預防瘧疾的復方藥。
背景技術：
瘧疾是世界上最嚴重的蟲媒傳染病之一。目前全球仍有90多個國家、24億人生活在瘧疾流行區，每年有5億人發病，200多萬人死亡。我國近年瘧疾呈逐年上升趨勢，仍有19個省市自治區有瘧疾流行。自上世紀60年代惡性瘧原蟲對氯喹產生抗性以來，抗藥性瘧原蟲已遍布于全球所有惡性瘧流行地區，抗性程度不斷增強，且由單一抗性向多藥抗性發展。我國70年代研制出的青蒿素及其衍生物，由于其全新結構及高效、速效，在抗瘧藥研究史上樹立了新的里程碑。我國抗瘧藥的研究在世界是領先的，除青蒿素及其衍生物外，近年還研制出本芴醇、磷酸萘酚喹、復方蒿甲醚(蒿甲醚+本芴醇)、復方磷酸萘酚喹(磷酸萘酚喹+青蒿素)等新藥，但所有這些藥物都屬于治療用藥，沒有預防作用。國外在瘧疾預防藥研究上盡管做了大量工作，但真正拿出的藥物只有美軍研制的甲氟喹，雖然該藥有長效預防作用，但由于其嚴重的神經、精神毒性和抗性的迅速出現使其應用受到極大限制。我國上世紀70年代使用的瘧疾預防藥防II(周效磺胺+乙胺嘧啶)和防III(哌喹+周效磺胺)，均由于抗性的原因而失去作用。目前，全球均沒有可選擇的瘧疾預防藥。由于瘧原蟲產生抗性的速度比新藥研究的速度還快，WHO積極提倡使用復方進行瘧疾防治。本發明通過對現有的長半衰期的藥物進行科學配伍實驗，以期找到具有增效作用、預防作用、克服和延緩抗性產生的新復方，以解決目前沒有瘧疾預防藥的問題。
發明內容
本發明的目的在于以磷酸萘酚喹和本芴醇為主同時伍配其它有持效作用的組分，提供一種對瘧疾具有長效預防作用，延緩或克服藥物的抗性產生，延長藥物有效使用期限的藥物組合物。
本發明提供的一種瘧疾預防藥物組合物，包括磷酸萘酚喹、本芴醇中的一種與阿奇霉素復合。
其中，所述磷酸萘酚喹或本芴醇與阿奇霉素的復合重量比為4∶1～1∶4，較佳為1∶1～1∶2；最佳為1∶1。
上述瘧疾預防藥物組合物，還包括其它藥學上可接受的輔料，所述輔料為淀粉、羧甲基淀粉鈉、微晶纖維索、乳糖、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基纖維素、可壓性淀粉、微粉硅膠、硬脂酸鎂、交聯聚乙烯吡咯烷酮或聚乙二醇中的一種或幾種。
本發明同時提供上述藥物組合物在瘧疾預防上的應用。
本發明將萘酚喹或本芴醇與阿奇霉素按4∶1～1∶4組成復方藥，對瘧疾具有長效預防作用，在動物模型上預防可達3～4周；毒性實驗的數據顯示，本發明組合物兩組分藥組成的復方不增毒，靶器官無改變；交叉抗藥性實驗顯示復方能延緩單藥抗性產生的速度，降低抗性程度；延緩抗藥性實驗表明本發明組合物能明顯延緩抗性產生的時間，并可降低抗性程度。
圖1為萘酚喹伍用阿奇霉素正交設計實驗結果ED90相加線；圖2為本芴醇伍用阿奇霉素正交設計實驗結果ED90相加線。
具體實施例方式
為更清楚地公開，以下從幾方面敘述本發明。
本發明要提供的為以磷酸萘酚喹和本芴醇為主同時復配其它有持效作用的組分，對瘧疾具有長效預防作用的藥物組合物。本發明通過正交實驗方法尋找到了恰當的配伍組分阿奇霉素。
實驗一配伍試驗材料與方法采用正交設計組方，用4天抑制試驗測定的方法，以伯氏瘧原蟲K173株與昆明小白鼠為實驗動物模型。
實驗及結果1、正交設計組方實驗采用正交設計和4天抑制性實驗的方法，以相加線判斷組方后的作用類型，用統計方法計算出ED90增效指數的理論值，將組分A藥(萘酚喹或本芴醇)和B藥(配伍組分)的ED90連接稱為相加線。如組方中A藥及B藥ED90的點落在相加線周圍，且靠近相加線，為相加作用；落在相加線上且遠離此線，為拮抗作用；落在相加線下方且遠離此線，為協同或增效作用。
萘酚喹伍用阿奇霉素正交設計實驗結果見圖1。本芴醇伍用阿奇霉素正交設計實驗結果見圖2。
實驗結果表明萘酚喹與阿奇霉素配伍的劑量范圍，萘酚喹0.75-6.00mk/kg，阿奇霉素5.0-20.0mg/kg。在這個劑量范圍配伍，對鼠瘧原蟲抑制率大于70％，ED50和ED90劑量小于組分藥，表明組方對鼠瘧原蟲具有較強的作用。從圖1相加線可以看出，萘酚喹與阿奇霉素配伍，經實驗測出ED90各點均分布在相加線附近或落在相加線下方，有的點遠離相加線。根據藥物間作用類型判斷為具有增效作用。本芴醇與阿奇霉素配伍的劑量范圍，本芴醇0.63-5.00mk/kg，阿奇霉素5.0-20.0mg/kg。圖2表明，本芴醇與阿奇霉素配伍，組方藥ED90各點多數落在相加線的下方，且有的點遠離此線，作用類型為協同增效作用。
2、組方配比實驗以4天抑制實驗測出各系列劑量組的ED50和ED90，并與組分藥ED50和ED90比較，求出ED90的增效指數。增效指數大的且組方中兩個組分藥效指數最好均大于2的比為最佳組方比。
表1-3 不同比例萘酚喹與阿奇霉素配伍對鼠瘧K173株的增效作用
實驗結果表明，萘酚喹與阿奇霉素以表列比例配伍，復方ED90增效指數均大于4，僅個別比例組分單藥的增效指數小于2。綜合評價，萘酚喹和阿奇霉素配伍的合適比例范圍是4∶1至1∶4，較佳為1∶1至1∶2，最佳配比為1∶1。
表1-4 不同比例本芴醇與阿奇霉素配伍對鼠瘧K173株的增效作用
實驗結果可見，本芴醇與阿奇霉素以表列比例配伍，復方ED90增效指數均大于4，僅個別比例組分單藥的增效指數小于2；綜合評價，本芴醇和阿奇霉素配伍的合適比例范圍是4∶1至1∶4，較佳為1∶1至1∶2，最佳配比是1∶1。
實驗二鼠瘧藥效試驗本試驗以伯氏瘧原蟲K173株與小鼠體內實驗系統，采用正交設計4天抑制試驗和藥后不同時間攻蟲的方法，對萘酚喹阿奇霉素復方和本芴醇阿奇霉素復方進行系統的藥效實驗觀察。
交叉抗藥性試驗采用4天抑制實驗法，將組方最佳比及組分藥分別對高度抗氯喹株(RCQ/K173)進行敏感性測試，并用直線回歸法計算出各藥的ED50和ED90，以敏感株ED90與抗藥株ED90之比，求出抗性指數I90，以I90判斷交叉抗藥性的程度。標準是I90＜2為敏感；I90＝2-10為輕度抗性交叉；I90＝11-100為中度抗性交叉；I90＞100為重度抗性交叉。
實驗結果表明，萘酚喹與阿奇霉素配伍，其抗性指數I90為1.9。本芴醇與阿奇霉素配伍，其抗性指數I90為2.2。平行測定的氯喹抗性指數I90為163.4，詳見表2-1。本實驗結果顯示，復方可降低單藥的抗性水平，且與氯喹無交叉抗性。
表2-1萘酚喹、本芴醇、阿奇霉素及其配伍對鼠瘧抗氯喹株交叉抗性試驗結果敏感株抗氯喹株藥 物抗性指數(I90)ED90(mg/kg)ED90(mg/kg)萘阿配伍3.73 7.07 1.9本阿配伍2.38 5.24 2.2萘酚喹 3.81 10.852.9本芴醇 2.61 9.49 3.6阿奇霉素15.4720.071.3磷酸氯喹2.11 344.81 163.4抑制性預防試驗選擇萘酚喹與阿奇霉素以2∶1、1∶1和1∶2的不同比例，本芴醇與阿奇霉素以2∶1、1∶1和1∶2的不同比例，在給藥后7天、14天、21天和28天從各實驗組及對照組分別取出10只動物，腹腔攻蟲107個原蟲寄生的紅細胞。攻蟲后7-10天分別取尾血涂制薄血膜，檢瘧原蟲。比較不同比例組合物對鼠瘧原蟲的保護時間。
實驗結果表明，兩組合物以2∶1比例配伍，有二周的完全保護，第三、四周為部分保護。兩組合物以1∶2比例配伍，一周完全保護，四周部分保護。兩組合物以1∶1比例配伍，四周的保護率為90-100％，見表2-2。由此可見，兩組合物以1∶1比例配伍，其預防效果優于其它比例。
表2-2不同比例的組合物對鼠瘧K173株預防效果比較陽性數/總數(只)萘(本)∶阿 第一周 第二周 第三周 第四周萘∶阿2∶1 0/100/10 2/10 4/101∶1 0/100/10 0/10 0/101∶2 0/103/10 5/10 5/10本∶阿2∶1 0/100/10 3/10 3/101∶1 0/100/10 0/10 1/101∶2 0/103/10 4/10 4/10延緩抗藥性試驗采用藥物劑量遞增培育抗性的方法。每7天傳一代，每代設兩個劑量組，D3-D5每天灌胃給藥一次，D7每只小鼠取尾血涂制薄血膜，常規染色后鏡檢瘧原蟲。選高劑量組原蟲寄生率在2％以上的小鼠作為轉種下一代的供血鼠。培育開始劑量為各藥的ED90，以后視原蟲寄生率情況酌情增加藥物劑量，其中一組維持上一代劑量，另一組增加藥物劑量。在培育過程中，每5代用4天抑制實驗測出各藥的ED90，并與親代的ED90比較，求出抗性指數I90。以原蟲從敏感到出現輕度抗性計算藥物產生抗性的時間；以抗性指數I90的大小判斷藥物的抗性水平。其標準是I90＜2為敏感；2-10為輕度抗性；10-100為中度抗性；＞100為重度抗性。
實驗結果見表2-3，從表中可以看出培育到40代時，阿奇霉素、萘酚喹、本芴醇的抗性指數I90分別為28.9、28.6和205。而萘阿組合和本阿組合的抗性指數分別為7.4和7.8。表明本組合物能明顯延緩抗性產生的時間，并可降低抗性程度。
表2-3 萘酚喹、本芴醇與阿奇霉素配伍延緩抗藥性試驗結果藥物 代數 天數ED90I90阿奇霉素20140177.711.540280447.528.9萘酚喹 2014075.0 19.740280108.828.6本芴醇 20140100 4040280500 205萘阿組方201406.6 1.84028027.6 7.4本阿組方201404.7 1.64028023.4 7.8通過本組實驗可以表明萘酚喹阿奇霉素組合物以及本芴醇阿奇霉素組合物具有增效作用，兩藥配伍的最佳配比為1∶1。兩組合物在鼠瘧模型上有4周的長效預防作用，且與氯喹無交叉抗藥性。萘酚喹阿奇霉素組合物與本芴醇阿奇霉素組合物，能延緩單藥抗性產生的速度，降低抗性程度。由此可見，本組合物是一個有前途的瘧疾預防復方。
實驗三毒性試驗本發明依據新藥注冊的要求，進行了組合物的單次給藥和重復給藥的毒性試驗。
單次給藥的急性毒性試驗以小鼠為模型，通過口服給藥，做了組分單藥的口服試驗。動物均給藥一次，連續觀察14天，記錄中毒表現及死亡情況，用Bliss法計算半數致死劑量(LD50)，結果見表3-1，根據毒性分級標準屬低毒級。用Finney氏公式進行混合毒性的測定，根據該公式理論LD50/實測LD50的比值如在0.5-2.6之間為毒性相加，比值＜0.4為拮抗，比值＞2.7為增毒。萘酚喹阿奇霉素組合物理論LD50/實測LD50＝0.63，毒性為輕度相加。本芴醇阿奇霉素組合物理論LD50/實測LD50＝0.83，毒性為輕度相加。
表3-1.小鼠急性毒性試驗結果組 別LD50(mg/kg)萘阿組合物1865(1718.0-2024.0)萘酚喹679.5(614.6-751.3)阿奇霉素 4372(3913.0-4884.7)本阿組合 4555(3729.3-4988.5)本芴醇＞10000本發明還進行了復方與組分單藥對大鼠和Beagle犬的長期毒性試驗。大鼠120只，分為6組，每組20只，雌雄各半。Beagle犬24只，每組6只，雌雄各半，連續口服給藥14天。末次給藥后24h，各組動物活殺1/2，進行血液、血生化、病理等檢查，確定中毒劑量及靶器官。其余1/2繼續觀察28天后活殺，進行同樣的指標檢測，以了解毒性反應是否可逆。結果表明，大鼠的中毒劑量為160MKD，安全劑量為40MKD；犬的中毒劑量為80MKD，安全劑量為10MKD。毒性的靶器官為肝臟，敏感指標為血清AST、ALT、ALP。毒性反應是可逆的。用大鼠所做的復方與組分單藥的長期毒性試驗顯示，復方不增毒，靶器官無改變。
本發明的瘧疾預防藥物組合物，還可以在萘酚喹與阿奇霉素或本芴醇與阿奇霉素組合時加入其它藥學上可接受的輔料，如淀粉、羧甲基淀粉鈉、微晶纖維素、乳糖、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基纖維素、可壓性淀粉、微粉硅膠、硬脂酸鎂、交聯聚乙烯吡咯烷酮或聚乙二醇等，用已知的方法制成各種可以接受的劑型，如常規片劑、膠囊、分散片、顆粒劑等常規制劑，也可以制成緩釋和控釋劑型，在此不一一例舉。
權利要求
1.一種瘧疾預防藥物組合物，包括磷酸萘酚喹、本芴醇中的一種與阿奇霉素復合。
2.根據權利要求1所述的瘧疾預防藥物組合物，其特征在于，所述磷酸萘酚喹或本芴醇與阿奇霉素的復合重量比為4∶1～1∶4。
3.根據權利要求1所述的瘧疾預防藥物組合物，其特征在于，所述磷酸萘酚喹或本芴醇與阿奇霉素的復合重量比較佳為1∶1～1∶2。
4.根據權利要求1所述的瘧疾預防藥物組合物，其特征在于，所述磷酸萘酚喹或本芴醇與阿奇霉素的復合重量比最佳為1∶1。
5.根據權利要求1至4任一所述的瘧疾預防藥物組合物，其特征在于，還包括其它藥學上可接受的輔料。
6.根據權利要求5所述的瘧疾預防藥物組合物，其特征在于，所述輔料為淀粉、羧甲基淀粉鈉、微晶纖維素、乳糖、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基纖維素、可壓性淀粉、微粉硅膠、硬脂酸鎂、交聯聚乙烯吡咯烷酮或聚乙二醇中的一種或幾種。
7.權利要求1至5任一所述的藥物組合物在瘧疾預防上的應用。
全文摘要
本發明公開一種瘧疾預防藥物組合物，包括磷酸萘酚喹、本芴醇中的一種與阿奇霉素復合，其中，所述磷酸萘酚喹或本芴醇與阿奇霉素的復合重量比為4∶1～1∶4，較為1∶1～1∶2；最佳為1∶1。本發明以磷酸萘酚喹和本芴醇為主同時伍配有持效作用的組分阿奇霉素，為一種對瘧疾具有長效預防作用，延緩或克服藥物的抗性產生，延長藥物有效使用期限的藥物組合物。
文檔編號A61P33/06GK1555808SQ200310110318
公開日2004年12月22日 申請日期2003年12月30日 優先權日2003年12月30日
發明者王京燕, 李國福, 王洪權, 丁建新, 張敏, 紀曉光, 趙京花, 趙艷紅, 竇媛媛, 貝祝春, 馬宏安 申請人:中國人民解放軍軍事醫學科學院微生物流行病研究所, 中國人民解放軍軍事醫學科學院微生物