專利名稱：天然降壓生物活性成分制備及應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種含天然降壓生物活性成份制劑的制備及應用。尤其涉及一種從免疫乳牛分泌的牛奶中制備含天然降壓生物活性成份制劑的方法及應用。
發明技術背景醫學界把高血壓分為原發性高血壓(即高血壓病)和繼發性高血壓(即癥狀性高血壓)兩大類。繼發性高血壓是指由于某些疾病引起的高血壓，高血壓僅僅是這種疾病的癥狀之一。原發性高血壓是常見病、多發病，其發病機理至今為止尚未完全探明，可能與壓力、肥胖、吸煙、高血脂、運動減少、高脂肪飲食、遺傳等有關。臨床上以動脈血壓升高為主要特征，隨著病情加重，常常使心、腦、腎等臟器受累，發生功能性或器質性改變，如高血壓性心臟病、心力衰竭、腦血管意外，腎功能衰竭等，是影響人類健康的最大元兇之一。
目前有多種降低血壓的藥物用于控制和降低血壓，包括利尿劑、β-受體阻滯劑、鈣拮抗劑、血管緊張素轉換酶抑制劑和血管緊張素II拮抗劑等五大類，這些藥物雖能有效降低血壓，但是，長期服用都有各種副作用，其中某些副作用還很嚴重，而且有些藥物價格昂貴，很多病人不能長期堅持服用，據統計，很大一部份病人，約40％的高血壓病人其血壓未能得到良好控制。高血壓病人盼望著用既能有效降低血壓，又不引發任何毒付作用的天然藥物來控制血壓。
動物實驗證明，在高敏感免疫狀態的乳牛分泌的牛奶中，存在著一種能有效降低血壓又不引發任何毒付作用的天然生物活性成份。
從免疫接種的牛奶中制備某些生物活性物質已經有很多報導，美國專利(4324782)報導了治療齲齒的方法，美國專利(4636384)報導了從高敏感免疫狀態乳牛牛奶中制備改善心血管和肺功能的生物活性物質的方法。
本發明所要解決的技術問題是，制備有效降低血壓的天然生物活性成份制劑，應用于原發性高血壓的治療。
發明內容
本發明解決上述技術問題所采用的技術方案是，選擇合適的抗原，制備多價抗原復合疫苗，免疫接種健康乳牛，并激發其進入高敏感免疫狀態，通過血清學檢測確認接種乳牛的高敏感免疫狀態后，收集其分泌的牛奶，采用超濾設備分離過濾，制備降壓活性成份，并應用于高血壓的治療。
本發明的技術特征是，只有在乳牛處于高敏感免疫狀態時乳牛分泌的牛奶中才含有較高濃度的降壓生物活性成份，普通乳牛分泌的牛奶中雖然也含有這一成份，但含量較低，因此，為了獲得較高濃度的降壓活性成份，乳牛必須被進行足夠劑量疫苗免疫接種，并通過重復的追加接種，以維持乳牛的高敏感免疫狀態。
本發明的技術特征是，用于乳牛免疫接種的抗原，可以是任何類型的抗原，只要這些抗原能引起乳牛免疫系統的應答，這些抗原包括但不限于細菌、病毒、螺旋體、衣原體、寄生蟲、孢子體、真菌等，最好的抗原組合是細菌多價抗原，復合疫苗最好由多種滅活細菌制備，不僅可以激發乳牛體內高敏感免疫狀態，還能在牛奶中產生高含量降壓生物活性成份，接種疫苗按照已知的方式制備。
本發明的技術特征是，免疫接種乳牛的方法，可以采用任何能夠激發乳牛體內免疫系統應答的方法，包括，肌肉注射、靜脈注射、乳房內注射、腹膜內注射、肛門給藥、口服等多種形式，最好的接種方式是肌肉內注射，疫苗濃度為1.time.10.sup.8 cell/ml，接種劑量每次5ml，每兩周重復追加接種一次，每次注射方式和劑量相同，共接種五次左右，以保持接種乳牛高敏感免疫狀態。
本發明的技術特征是，檢測接種乳牛是否處于高敏感免疫狀態是必需的，有很多已知的免疫學方法可以用于此測試，最好的方法是在接種前后收集血清，用接種的多價滅活細菌抗原來檢測血清中是否存在與抗原發生粘集反應的抗體，以及抗體的滴度，只有已產生高敏感免疫狀態的乳牛的牛奶才能作為原材料，來制備天然降壓生物活性成份。
本發明的技術特征是，為了保持接種乳牛的高敏感免疫狀態，定期重復追加接種是必需的，追加接種疫苗的劑量、濃度與初次接種相同，重復追加接種的周期為每兩周追加一次，在追加接種期間，仍應定期檢測接種乳牛血清中抗體滴度，以判斷其免疫狀態，一旦免疫接種乳牛出現免疫耐受現象，即應仃用該乳牛的牛奶作為原材料，為了提高接種效果，可以聯合應用多種接種方式，如在肌肉注射的同時聯合靜脈注射、乳房內注射或口服。
本發明的技術特征是，測試牛奶中天然降壓生物活性成份是必需的，測試方法是采用層析柱分離其純凈物后進行儀器分析和測試，或通過動物實驗直接測試其降血壓效果。
本發明的技術特征是，分離和純化降壓生物活性成份的方法及步驟是，收集牛奶并脫脂，凝固并去除酪旦白，用分子量為10,000的超微濾膜分離過濾并去除分子量大于10,000的旦白質，用離子交換柱捕獲分子量＜10,000帶負電荷的分子，最終用分子篩凈化分離，調PH至10.5，收集沉淀物，用冷凍干燥裝置制備干粉，其中富含天然降壓生物活性成份。
本發明的技術特征是，本發明方法制備的天然降壓生物活性物質可以幫助高血壓患者降低血壓，既適用于原發性高血壓患者，也適合繼發性高血壓患者，還適合于伴有其他疾病的高血壓患者，既可以用來治療高血壓，也可以用于預防發生高血壓，既可以單獨應用，也可以與其他具有降壓作用的成份聯合應用。
本發明的技術特征是，本發明制備的天然降壓生物活性成分可以用多種方式、劑型給患者施用，可以直接以牛奶或奶粉形式施用，也可以與各種醫藥等級的輔料混合制備各種片劑、膠囊、散劑、顆粒劑、油劑、沖劑等劑型服用，還可以作為食品添加到各種食品中去，成為治療高血壓的功能性食品，但在加工過程中溫度不能超過140°F，否則會破壞其生物活性。
本發明的有益效果是，本發明方法制備的天然降壓生物活性成份，在降壓同時無任何毒付作用，適合患者長期服用。
具體實施例方式
下面結合實施例對本發明作進一步說明實例1制備復合細菌疫苗從美國菌種培養中心(American Type Culture Collection)獲得下列菌種金黃色葡萄球菌(staphylococcus aureus，ATCC#.11631)、表皮葡萄球菌(staphylococcusepidermidis.155)、釀膿葡萄球菌1型(streptococcus pyogenes.Typel.8671)、3型(Type3.10389)、5型(type5.12347)、8型(Type8.12349)、12型(type12.11434)、14型(type14.12972)、18型(type18.12357)、22型(type22.10403)、產氣桿菌(Aerobacteraerogenes.884)、大腸桿菌(Escherichia Coli.11126)、腸炎(沙門)桿菌(Salmonellaenteritidis 13076)、綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa 7700)、肺炎桿菌(KlebsiellaPneumoniae.9590)、鼠傷寒(沙門)桿菌(Salmonella typhimurium.13311)、出血桿菌(Haemophilus typhimurium.9333)、普通變形桿菌(Proteus vulgaris 13315)、志賀痢疾桿菌(Shigella dysenteriae.13313)、肺炎雙球菌(Diplococcus pneumoniae.6303)、變異鏈球菌(Strep.sanguinis 10556)、小鏈球菌(Strep.Mitis.6249)、出血鏈球菌(Strep.Sanguinis.10556)、唾液鏈球菌(Strep.Salivarius.13419)、缺乳鏈球菌(Strep.Agalactiae.13813)。每種細菌接種按照規定，采用合適的培養液，在37℃恒溫下培養48小時，觀察培養是否正常，如果細菌在培養基中生長良好，用離心機分離培養液，細菌用無菌生理鹽水沖洗五次，用60℃溫度滅活2小時，殺死所有細菌，從已滅活的細菌中采集樣本繼續在培養基中培養(37℃下培養2小時)，確認無細菌存活，收集的細菌冷凍干燥成為細菌粉，上述每種粉稱取1g，用500ml生理鹽水混懸，并反復稀釋，直至配制成濃度為2.times.10.sup.8bacterial cells/ml的溶液，(在660nm上顯示1.0光密度單位)。
實施例2用復合疫苗免疫接種乳牛選擇健康乳牛，用實施例1配制的復合細菌疫苗免疫接種乳牛，采用肌肉注射方式，在臀部肌肉注射5ml疫苗，每隔二周用相同劑量追加注射一次，共重復追加五次，在第一次注射后5天，采集接種乳牛的牛奶，采用放射免疫法測定復合抗原的抗體滴度，并與未免疫接種前采集的牛奶進行對比，發現免疫接種后復合抗原的抗體滴度增加百倍，證明接種乳牛處于高敏感免疫狀態。
實施例3制備降壓生物活性成份收集20公升免疫接種乳牛的牛奶，用脂肪分離機去脂，脫脂奶用中空纖維分離器(分子量為10,000)分離過濾牛奶，流速在自動計量器上的讀數為80，入口壓力為30psi，出口壓力為25psi，收集分離過濾液，直接送入冷凍干燥裝置，制備為干粉。
實施例4驗證降壓活性成份的降壓作用取實施例3制備的降壓生物活性成份20mg，放在自愿者的舌尖上，分別測量前后血壓值，在放置降壓成份后30分鐘左右，受試者的血壓(收縮壓)下降30％，重復試驗數次，效果相似。
實施例5驗證降壓生物活性成份臨床療效隨機選取高血壓患者10人，每天服用實施例3制備的降壓生物活性成份10g(用水沖服)連續服用12周，結果顯示，90％的病人血壓下降效果明顯，平均降壓效果達到8％～10％，無任何付作用發生。
權利要求
1.本發明涉及一種含天然降壓生物活性成份制劑的制備及應用。尤其涉及一種從免疫乳牛分泌的牛奶中制備含天然降壓生物活性成份制劑的方法及應用，其特征是，選擇合適的抗原，制備多價抗原復合疫苗，免疫接種健康乳牛，并激發其進入高敏感免疫狀態，通過血清學檢測確認接種乳牛的高敏感免疫狀態后，收集其分泌的牛奶，采用超濾設備分離過濾，制備降壓活性成份，并應用于高血壓的治療。
2.按照權利要求1所述的方法，本發明的技術特征是，只有在乳牛處于高敏感免疫狀態時乳牛分泌的牛奶中才含有較高濃度的降壓生物活性成份，普通乳牛分泌的牛奶中雖然也含有這一成份，但含量較低，因此，為了獲得較高濃度的降壓活性成份，乳牛必須被進行足夠劑量疫苗免疫接種，并通過重復的追加接種，以維持乳牛的高敏感免疫狀態。
3.按照權利要求1所述的方法，本發明的技術特征是，用于乳牛免疫接種的抗原，可以是任何類型的抗原，只要這些抗原能引起乳牛免疫系統的應答，這些抗原包括但不限于細菌、病毒、螺旋體、衣原體、寄生蟲、孢子體、真菌等，最好的抗原組合是細菌多價抗原，復合疫苗最好由多種滅活細菌制備，不僅可以激發乳牛體內高敏感免疫狀態，還能在牛奶中產生高含量降壓生物活性成份，接種疫苗按照已知的方式制備。
4.按照權利要求1所述的方法，本發明的技術特征是，免疫接種乳牛的方法，可以采用任何能夠激發乳牛體內免疫系統應答的方法，包括，肌肉注射、靜脈注射、乳房內注射、腹膜內注射、肛門給藥、口服等多種形式，最好的接種方式是肌肉內注射，疫苗濃度為1.time.10.sup.8 cell/ml，接種劑量每次5ml，每兩周重復追加接種一次，每次注射方式和劑量相同，共接種五次左右，以保持接種乳牛高敏感免疫狀態。
5.按照權利要求1所述的方法，本發明的技術特征是，檢測接種乳牛是否處于高敏感免疫狀態是必需的，有很多已知的免疫學方法可以用于此測試，最好的方法是在接種前后收集血清，用接種的多價滅活細菌抗原來檢測血清中是否存在與抗原發生粘集反應的抗體，以及抗體的滴度，只有已產生高敏感免疫狀態的乳牛的牛奶才能作為原材料，來制備天然降壓生物活性成份。
6.按照權利要求1所述的方法，本發明的技術特征是，測試牛奶中天然降壓生物活性成份是必需的，測試方法是采用層析柱分離其純凈物后進行儀器分析和測試，或通過動物實驗直接測試其降血壓效果。
7.按照權利要求1所述的方法，本發明的技術特征是，分離和純化降壓生物活性成份的方法及步驟是，收集牛奶并脫脂，凝固并去除酪旦白，用分子量為10,000的超微濾膜分離過濾并去除分子量大于10,000的旦白質，用離子交換柱捕獲分子量＜10,000帶負電荷的分子，最終用分子篩凈化分離，調PH至10.5，收集沉淀物，用冷凍干燥裝置制備干粉，其中富含天然降壓生物活性成份。
8.按照權利要求1所述的方法，本發明的技術特征是，為了保持接種乳牛的高敏感免疫狀態，定期重復追加接種是必需的，追加接種疫苗的劑量、濃度與初次接種相同，重復追加接種的周期為每兩周追加一次，在追加接種期間，仍應定期檢測接種乳牛血清中抗體滴度，以判斷其免疫狀態，一旦免疫接種乳牛出現免疫耐受現象，即應仃用該乳牛的牛奶作為原材料，為了提高接種效果，可以聯合應用多種接種方式，如在肌肉注射的同時聯合靜脈注射、乳房內注射或口服。
9.按照權利要求1所述的方法，本發明的技術特征是，本發明制備的天然降壓生物活性成分可以用多種方式、劑型給患者施用，可以直接以牛奶或奶粉形式施用，也可以與各種醫藥等級的輔料混合制備各種片劑、膠囊、散劑、顆粒劑、油劑、沖劑等劑型服用，還可以作為食品添加到各種食品中去，成為治療高血壓的功能性食品，但在加工過程中溫度不能超過140°F，否則會破壞其生物活性。
10.按照權利要求1所述的方法，本發明的技術特征是，本發明方法制備的天然降壓生物活性物質可以幫助高血壓患者降低血壓，既適用于原發性高血壓患者，也適合繼發性高血壓患者，還適合于伴有其他疾病的高血壓患者，既可以用來治療高血壓，也可以用于預防發生高血壓，既可以單獨應用，也可以與其他具有降壓作用的成份聯合應用。
全文摘要
本發明涉及一種含天然降壓生物活性成分制劑的制備及應用，尤其涉及一種從免疫乳牛分泌的牛奶中制備含天然降壓生物活性成分制劑的方法及應用，其特征是，選擇合適的抗原，制備多價抗原復合疫苗，免疫接種健康乳牛，并激發其進入高敏感免疫狀態，通過血清學檢測確認接種乳牛的高敏感免疫狀態后，收集其分泌的牛奶，采用超濾設備分離過濾，制備降壓活性成分，并應用于高血壓的治療。
文檔編號A61K35/20GK1557337SQ200410015848
公開日2004年12月29日 申請日期2004年1月15日 優先權日2004年1月15日
發明者高春平 申請人:高春平