專利名稱：雞新城疫、雞傳染性支氣管炎(h120、h52)二聯凍干疫苗耐熱凍干保護劑及制備工藝的制作方法
技術領域：
本發明涉及生物制品的冷凍干燥技術，保藏輔助劑及其制造方法。
背景技術：
我國目前常用的獸醫生物制品保護劑主要為5％蔗糖脫脂牛奶和5-10％蔗糖，1.5-3％明膠，制品要求低溫保存(-15℃以下)，2-8℃條件的保存期僅3-9個月，在常溫下必須盡快用完。這就為獸醫生物制品的保存、運輸、使用等帶來許多困難和不便，同時由于必需低溫保存造成能源消耗及儲存成本大。
目前，國際上發達的國家獸醫生物凍干制品幾乎全部是2-8℃保存24個月以上。但未見方法的詳細報道。中國專利CN1176827A“一種動物用凍干活疫苗的制造方法”提出采用以聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纖維素鈉，羅望子膠，谷氨酸鈉，海藻糖等為主要基質凍干保護劑的配方配制成的凍干保護劑，采用與之相適應的凍干曲線與新城疫疫苗病毒抗原制成雞新城疫凍干活疫苗的方法，該苗在2-8℃條件下可長期保存。
發明內容
本發明的目的是提供一種雞新城疫、雞傳染性支氣管炎(H120、H52)二聯干疫苗耐熱凍干保護劑及制備工藝，降低保護條件，延長使用期并降低使用成本。
雞新城疫、雞傳染性支氣管炎(H120、H52)二聯凍干疫苗，包括常用的明膠、蔗糖，其特征是耐熱凍干保護劑的組份配比是明膠2％、糊精6％、牛血清白蛋白1-2％、蔗糖5-6％、PVP(K90)3％、酪蛋白胨1-2％、山梨醇2％、谷氨酸鈉1％、Vc 0.2-0.3％；制劑中為干物質組份，百分比剩余份均為蒸餾水。
上述疫苗的耐熱凍干保護劑的制備工藝，按組份、比例混合，其特征是對保護劑的有效組份分別處理除菌對可高壓滅菌的明膠、糊精、蔗糖、PVP(K90)、酪蛋白胨；按制劑比例溶于蒸餾水中，116℃滅菌30-40分鐘；將不耐高溫的組份牛血清白蛋白、山梨醇、谷氨酸鈉、Vc也按制劑比例溶于蒸餾水中用孔徑0.22μm濾膜過濾除菌；分別完成除菌后把兩種成分混合，即為凍干耐熱保護劑，使用時按1∶1比例加入病毒抗原液中，分裝后進行冷凍干燥。
本發明的制備工藝制備的制劑在2-8℃條件下可保存24個月以上，能達到《中華人民共和國獸醫生物制品質量標準》中規定的各項指標。
具體實施例方式
雞新城疫、雞傳染性支氣管炎(H120、H52)二聯凍干疫苗耐熱凍干保護劑，包括常用的明膠、蔗糖，其特征是耐熱凍干保護劑的組份配比是明膠2％、糊精6％、牛血清白蛋白1-2％、蔗糖5-6％、PVP(K90)3％、酪蛋白胨1-2％、山梨醇2％、谷氨酸鈉1％、Vc 0.2-0.3％；制劑中為干物質組份，百分比剩余份均為蒸餾水。
雞新城疫、雞傳染性支氣管炎(H120、H52)二聯凍干疫苗耐熱凍干保護劑的制備工藝，包括將上述耐熱凍干保護劑的干物質組份按比例混合，其特征是對保護劑的有效組份進行除菌處理對可高壓滅菌的明膠、糊精、蔗糖、PVP(90)、酪蛋白胨，按各自比例溶于蒸餾水中，116℃滅菌30-40分鐘；將不耐高溫的組份山梨醇、牛血清白蛋白、谷氨酸鈉、Vc，也按比例溶于蒸餾水中用孔徑0.22μm的濾膜過濾除菌；分別完成除菌后把兩種成分混合，即為凍干耐熱保護劑，使用時按1∶1比例加入病毒抗原液中，分裝后進行冷凍干燥。
技術參數及檢測方法1.產品的物理性狀、無菌檢驗、支原體檢驗、外源病毒檢驗、特異性檢驗、安全檢驗、剩余水分測定和真空度測定按《中華人民共和國獸醫生物制品規程》的方法及標準進行。
2.凍干周期不超過48h。
3.保護劑的毒性試驗禽類疫苗按產品當中含保護劑量的10倍量，對7日齡健康雛雞分別進行滴鼻、點眼、飲水及皮下注射各20只，觀察20d，雛雞全部健活；無任何不良反應。
4.病毒含量測定及標準
(1)測定方法A.將疫苗用生理鹽水稀釋至1羽份/0.5mL，分別裝入2支試管內，每管1mL。第1管加入等量的雞新城疫抗血清，第2管加入等量的雞傳染性支氣管炎抗血清。在室溫下中和1h，此時病毒含量為1羽份/0.1mL，即10-1。第1管繼續10倍系列稀釋，測定雞傳染性支氣管炎部分。第2管繼續10倍系列稀釋，測定雞新城疫部分，其方法同雞傳染性支氣管炎及雞新城疫凍干苗。
B.將疫苗用生理鹽水按實含組織量稀釋至500倍，分別裝入兩支試管中，每管1mL，第1管加入等量的雞新城疫抗血清，第2管加入等量雞傳染性支氣管炎抗血清。此時即為10-3，在室溫下中和1h后再作10倍系列稀釋，其它方法同上。
(2)達到標準一.雞新城疫弱毒凍干苗的標準A、凍干后病毒損失率小于0.4個滴度。
B.凍干后每羽份病毒含量≥106.7EID50。
C.凍干后的產品放37℃保存10d及30d進行病毒含量測定，病毒含量下降率前者在1個滴度之內，后者在2個滴度之內。
D.凍干后產品放25℃保存30d，病毒含量下降率在0.6個滴度之內。
E.產品放2-8℃保存24個月，每羽份病毒含量≥106.17EID50。
二.雞傳染性支氣管炎凍干苗的標準A、凍干后病毒損失率小于0.4個滴度。
B.凍干后H52每羽份病毒含量≥104.5EID50。
C.產品放37℃保存10d及30d，病毒含量下降率分別為1個至2個滴度之內。
D.產品放25℃保存30d，病毒含量下降率不超過1個滴度。
E.產品放2-8℃保存24個月，H52每羽份病毒含量≥103.5EID50。
權利要求
1.一種雞新城疫、雞傳染性支氣管炎(H120、H52)二聯凍干疫苗耐熱凍干保護劑，包括常用的明膠、蔗糖、脫脂奶粉，其特征是耐熱凍干保護劑的組份配比是明膠2％、糊精6％、牛血清白蛋白1-2％、蔗糖5-6％、PVP(K90)3％、酪蛋白胨1-2％、山梨醇2％、谷氨酸鈉1％、Vc 0.2-0.3％；制劑中為干物質組份，百分比剩余份均為蒸餾水。
2.制備權利要求1所述的雞新城疫、雞傳染性支氣管炎(H120、H52)二聯凍干疫苗耐熱凍干保護劑的工藝，包括將上述耐熱凍干保護劑的干物質組份按比例混合，其特征是對保護劑的有效組份進行除菌處理對可高壓滅菌的明膠、糊精、蔗糖、PVP(90)、酪蛋白胨，按各自比例溶于蒸餾水中，116℃滅菌30-40分鐘；將不耐高溫的組份山梨醇、牛血清白蛋白、谷氨酸鈉、Vc，也按比例溶于蒸餾水中用孔徑0.22μm的濾膜過濾除菌；分別完成除菌后把兩種成分混合，即為凍干耐熱保護劑，使用時按1∶1比例加入病毒抗原液中，分裝后進行冷凍干燥。
全文摘要
雞新城疫、雞傳染性支氣管炎(H120、H52)二聯凍干疫苗耐熱凍干保護劑及制備工藝，其特征是制備工藝對保護劑的有效組份分別進行除菌處理對可高壓滅菌的按制劑比例溶于蒸餾水中，116℃滅菌30－40分鐘；將不耐高溫的組份也按制劑比例溶于蒸餾水中用孔徑0.22μm濾膜過濾除菌；再將兩種成分混合，即為凍干耐熱保護劑，使用時按1∶1比例加入病毒抗原液中，分裝后進行冷凍干燥。產品在2－8℃保存24個月，仍保持凍干后的外形，病毒含量均超過國家獸醫生物制品規程的標準。本發明是一種低成本、長效制品及制備方法，為獸醫生物制品使用解決了長久以來運輸、儲存的高成本問題。
文檔編號A61K39/295GK1528458SQ20041002958
公開日2004年9月15日 申請日期2001年12月21日 優先權日2001年12月21日
發明者衛廣森, 王文成, 張萬林 申請人:衛廣森