專利名稱：治療高血脂癥的組合物的制作方法
技術領域：
本發明涉及治療高血脂癥的新的組合物，特別是含有阿昔莫司和普伐他汀鈉及藥用輔料的組合物。
背景技術：
隨著醫藥科學的不斷發展，人們認識到膽固醇、脂肪等含量過高是發生心血管疾病的基本病因，高血脂是發生冠心病及高血壓的主要危險因素。因此，人們開始把血脂調節藥的開發作為防治心血管疾病的重點。自20世紀80年代末起，降血脂藥物大量推出，其中他汀類藥物受到人們好評，其臨床療效之佳是其它各類調節血脂藥物所不能相比的。十多年來，幾個國際大規模冠心病防治試驗的完成，證實他汀類藥物可以降低冠心病的發病率和死亡率，而且能使已經形成的動脈粥樣硬化斑塊發展減緩，甚至減退，從而打破了冠心病不可逆轉的傳統觀念，由“他汀”引發的一場血脂革命正在全球興起。目前，醫藥界對調脂藥在防治心血管疾病方面的作用充滿信心，調脂療法將成為21世紀預防心血管疾病的主要方法。
普伐他汀(Pravastatin)是國內外進行了廣泛研究并已在多國上市的羥甲戊二酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶抑制劑，它可通過抑制肝臟中膽固醇合成的限速酶HMG-CoA的活性，使膽固醇的合成減少，它還可使低密度脂蛋白受體合成增加，增強肝臟對低密度脂蛋白的攝取，結果使血膽固醇和低密度脂蛋白水平降低，中度降低血清甘油三酯水平和增高血清高密度脂蛋白水平，由此可有效預防動脈粥樣硬化和冠心病。普伐他汀是一種研究最為廣泛的他汀類藥物，已進行了三項具有劃時代意義的臨床研究西方蘇格蘭冠心病預防研究(WOSCOPS)；膽固醇與心血管事件(CARE)的研究；長程普伐他汀在缺血性疾病中的療效研究(LIPID)，以及其他多項研究。基于上述研究的安全性數據，FDA允許本品減少有關肝功能方面的檢測。而其他的他汀類藥物必須進行多項肝功能檢測。普伐他汀是目前他汀類藥物中僅有的可用于膽固醇水平較高的或有冠心病的病人進行心臟病、中風一級和二級預防的藥物，此新制劑的開發為臨床醫生提供了一種使用高劑量他汀類藥物進行治療的選擇。基于高劑量的安全性和療效研究結果，美國FDA日前批準了Bristol-Myers Squibb公司的高劑量(80mg)普伐他汀(pravastatin)制劑(Pravachol)。因而普伐他汀是一個長期應用安全性好，不良反應極其輕微的強效降血脂藥物，它在降低血脂和預防治療冠心病和動脈粥樣硬化方面具有極其廣泛的應用前景。
阿昔莫司(Acipimox)是一種人工合成的煙酸衍生物，它完全不同于HMG-CoA還原酶抑制劑降低血脂的作用機理，通過抑制脂肪組織的分解，減少游離脂肪酸自脂肪組織釋放，從而降低甘油三酯(TG)在肝臟中的合成，并通過抑制極低密度脂蛋白(VLDL)和低密度脂蛋白(LDL)的合成，使血清中甘油三酯(TG)和總膽固醇(TC)的濃度下降。本品還可抑制肝臟脂肪酶的活性，減少高密度脂蛋白(HDL)的分解。該藥口服吸收迅速，藥后2小時內血藥濃度即達峰值，半衰期為2小時。該藥不與血漿蛋白結合，不被代謝，主要以原形經尿排出。在臨床上，阿昔莫司可有效治療高甘油三酯癥(IV型)、高膽固醇血癥(IIa型)及高甘油三酯合并高膽固醇血癥(IIb型)，是一種安全、有效、耐受性好的調血脂藥。
目前，該領域的研究趨勢是將兩種不同作用機制的調血脂藥制成復方制劑，從而使降脂作用更加全面，同時還可發揮協同作用，增強療效，減少毒副作用。
普伐他汀是目前他汀類藥物中僅有的可用于膽固醇水平較高的或有冠心病的病人進行心臟病、中風一級和二級預防的藥物；阿昔莫司可通過抑制脂肪組織的分解，顯著降低血中游離脂肪酸的水平，改善心肌能量代謝，降低缺血心肌的耗氧量，因而，我們對普伐他汀和阿昔莫司兩者伍用對不穩定型心絞痛伴高血脂患者的臨床預防療效進行了研究。
美國專利US5260305A公開了HMG-CoA還原酶抑制劑普伐他汀和煙酸及其衍生物的組合物，具體公開了規格為普伐他汀5mg、10mg、20mg、40mg和阿昔莫司750mg的組合物的制備，但沒有公開其有益效果及最佳配比的藥理實驗數據。中國專利申請CN1425374A公開了阿昔莫司和洛伐他汀組合物，公開的比例是阿昔莫司和洛伐他汀的重量比為25～50∶1，優選的比例是25∶1或37.5∶1，但沒有公開阿昔莫司和普伐他汀復方的最佳配比及相應藥理實驗數據。
中國專利申請CN01820935.1A公開了普伐他汀和煙酸肌醇酯以2∶400的重量比對Beagle犬進行的聯合給藥降低血中膽固醇含量的效果，但沒有公開普伐他汀與煙酸肌醇酯的最佳配比方面的藥理實驗數據以及普伐他汀與阿昔莫司聯合用藥的效果和相應的藥理實驗數據。
發明目的本發明的目的是通過一系列科學的篩選實驗，提供一種新的治療高脂血癥的藥物組合物，其優點是作用全面和增強、毒副作用低和使用方便；通過臨床試驗，提供一種新的有效預防冠心病的藥物組合物的特定制劑。本藥物含有特定比例的阿昔莫司和普伐他汀鈉，由于兩藥作用機制不同，組成組合物后降脂作用將更加全面，并且兩藥合用有協同作用，其降脂作用明顯優于相同劑量的單方；而對于冠心病患者而言，兩藥合用可協同性的減少心絞痛的發作次數，減少由心肌缺血引起的梗死面積；此外，通過合理選擇組合物中普伐他汀鈉的用量，使組合物在有效降低血脂水平的同時又無明顯的毒副作用，同時本組合物一日只需用藥一次，用藥方便，這將大大提高患者的順應性。
發明內容
本發明的組合物由阿昔莫司和普伐他汀鈉以及藥用輔料組成，其中阿昔莫司和普伐他汀鈉的重量比為5～40∶1(普伐他汀的重量以游離酸計，下同)，優選的比例是5～10∶1，進一步優選的比例的是7.5∶1。該組合物的藥物制劑的劑型，包括片劑、膠囊、顆粒劑、丸劑、滴丸等固體制劑，可以按照本領域公知的一般制劑方法制備，阿昔莫司含量相當于在將組合物給藥時約200～750mg的日劑量，普伐他汀鈉含量相當于10～160mg的日劑量，其中優選普伐他汀鈉含量相當于20～60mg的日劑量。
根據動物實驗篩選所得到的最佳組合物比例，根據兩種藥物作用的機理，創造性地將其用于臨床高血脂伴不穩定型心絞痛患者的預防治療，通過臨床試驗發現，阿昔莫司和普伐他汀鈉緩釋制劑對臨床高血脂不穩定型心絞痛患者有著協同性的預防治療效果。普伐他汀鈉和阿昔莫司均為降血脂藥物，普伐他汀鈉可以用于高膽固醇血癥患者的一、二級預防，但普伐他汀鈉和阿昔莫司合用對于高血脂伴不穩定型心絞痛患者的協同性療效則不為人所知，其緩釋制劑的效果最佳。
本發明的組合物在制成固體制劑，如片劑或膠囊時，為達到持久的治療效果，優選地將有效量的阿昔莫司制成緩釋部分，再與有效量的普伐他汀鈉共同制成緩釋制劑，如緩釋片、緩釋膠囊等。相應地，可藥用的輔料包括稀釋劑，如淀粉、乳糖、甘露醇、預膠化淀粉、糊精、微晶纖維素；崩解劑，如羧甲基淀粉鈉、羥丙基淀粉、低取代羥丙基纖維素、羧甲基纖維素鈉；緩釋劑，如乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素-4M、羥丙基甲基纖維素-15M；優特奇RS-100、RL100、RS30D、RL30D、NE30D，以及蘇麗絲(Surelease，乙基纖維素的水分散體)粘合劑，如聚乙烯吡咯烷酮，交聯聚乙烯吡咯烷酮，潤滑劑，如硬脂酸鎂、滑石粉、微粉硅膠等。
同Kos Pharmaceuticals公司研制開發的緩釋煙酸和洛伐他汀組成的復方制劑相比，本發明藥物組合物用阿昔莫司代替煙酸，阿昔莫司適用范圍與煙酸相似，但是與煙酸相比具有如下優點①無初效反應，半衰期較長；②抗脂肪分解作用的持續時間較長，效能較強，無非酯化脂肪酸的反跳現象；③能明顯改善葡萄糖耐受性，能降低空腹血糖15％左右，不與口服降糖藥發生交互作用，故能用于糖尿病患者；④不引起尿酸代謝變化，可用于高尿酸血癥患者；⑤出現肝臟轉氨酶高者極少；⑥服藥后有面部潮紅及皮膚搔癢癥狀者僅6％左右，明顯少于服煙酸治療者，且多數在服藥幾天后逐漸自行減輕或消失，一般不影響患者繼續治療。另外，用普伐他汀取代洛伐他汀，可以極大地減小后者帶來的不良反應如肝毒性和肌毒性。
本發明的組合物通過藥理方面的研究工作，表明當采用本發明的組合物，尤其是采用優選的配比時，與單獨應用有效量的阿昔莫司或普伐他汀鈉相比，本發明的組合物給出令人吃驚的更好效果，同時毒性沒有增加，因而安全劑量范圍大，療效持續時間長，綜合效果好，使用方便。本發明的組合物可以每日1～2次給藥，優選為每日1次。
本發明中普伐他汀可以為任何一種可以藥用的鹽，即合適的普伐他汀生理可接受的鹽，包括衍生自無機的和有機的堿所形成的鹽，為鈉鹽、鈣鹽、鉀鹽、鎂鹽、鋅鹽、鐵鹽；也可以為任何一種普伐他汀可以藥用的酯，即合適的普伐他汀生理可接受的酯，包括衍生自脂肪醇、芳香醇、雜環醇所形成的酯，為甲酯、乙酯、烯丙酯、苯酯。
具體實施例方式
現通過如下實例進一步說明本發明的內容，但本發明的應用范圍不限于下列實例。
實例1a、阿昔莫司 200g空白丸芯 250g7％PVP溶液(溶劑為90％乙醇) 200g制備工藝將阿昔莫司過120目篩，處方量稱取，倒入下料斗中。開造粒包衣機，入風壓力0.5bar，入風溫度30℃，噴槍壓力(CYL)3bar，霧化壓力(CAP1)0.8bar，倒入空白丸芯，造粒，下料速度4rpm，蠕泵12％，轉盤轉速145rpm，噴7％PVP溶液(溶劑為90％乙醇)。造粒結束，50℃烘干，出料。
b、普伐他汀鈉(其重量以游離酸計，下) 10g空白丸芯 30g7％PVP溶液(溶劑為90％乙醇) 30g制備工藝將普伐他汀鈉過120目篩，處方量稱取，倒入下料斗中。開造粒包衣機，入風壓力0.5bar，入風溫度30℃，CYL3bar，CAP10.8bar，倒入空白丸芯，造粒，下料速度4rpm，蠕泵6％，轉盤轉速160rpm，噴7％PVP溶液(溶劑為90％乙醇)。造粒結束，45℃烘干，出料。
c、將a和b制得的小丸采用硬膠囊藥物填充機按照每兩粒膠囊中含阿昔莫司與普伐他汀鈉的重量分別為200mg和5mg進行填充，即可。
實例2a、阿昔莫司 200g乳糖 30g
羧甲基淀粉鈉30g微晶纖維素 18g6％PVP的無水乙醇溶液100g硬脂酸鎂2g制備工藝阿昔莫司過100目篩，乳糖、羧甲基淀粉鈉、微晶纖維素過80目篩，稱取處方量的阿昔莫司和乳糖、羧甲基淀粉鈉、微晶纖維素混合均勻，加入6％PVP無水乙醇溶液適量制粒，60℃干燥，16目篩整干顆粒，干顆粒中加入處方量的硬脂酸鎂。
b、普伐他汀鈉 20g羥丙基纖維素15g預膠化淀粉 10g6％PVP的無水乙醇溶液30g山榆酸甘油酯1g制備工藝普伐他汀鈉過100目篩，羥丙基纖維素、預膠化淀粉過80目篩，稱取處方量的普伐他汀鈉和羥丙基纖維素、預膠化淀粉混合均勻，加入6％PVP的無水乙醇溶液適量制粒，60℃干燥，16目篩整干顆粒，干顆粒中加入處方量的山榆酸甘油酯。
c、將上述a，b兩種組分采用雙層壓片機沖壓片即得雙層片。
實例3a、阿昔莫司200g乳糖30g羧甲基淀粉鈉30g微晶纖維素 18g6％PVP的無水乙醇溶液100g硬脂酸鎂2g制備工藝阿昔莫司過100目篩，乳糖、羧甲基淀粉鈉、微晶纖維素過80目篩，稱取處方量的阿昔莫司和乳糖、羧甲基淀粉鈉、微晶纖維素混合均勻，加入6％PVP無水乙醇溶液適量制粒，60℃干燥，16目篩整干顆粒，干顆粒中加入處方量的硬脂酸鎂。
b、普伐他汀鈉 40g羥丙基纖維素30g預膠化淀粉 20g6％PVP的無水乙醇溶液50g山榆酸甘油酯2g制備工藝普伐他汀鈉過100目篩，羥丙基纖維素、預膠化淀粉過80目篩，稱取處方量的普伐他汀鈉和羥丙基纖維素、預膠化淀粉混合均勻，加入6％PVP的無水乙醇溶液適量制粒，60℃干燥，16目篩整干顆粒，干顆粒中加入處方量的山榆酸甘油酯。
c、將上述a，b兩種組分采用雙層壓片機沖壓片即得雙層片。
實例4a、阿昔莫司300g羥丙基甲基纖維素-4M 40g微晶纖維素 30g8％PVP的無水乙醇溶液150g硬酯酸鎂2g制備工藝阿昔莫司過100目篩，羥丙基纖維素-4M、微晶纖維素過80目篩，稱取處方量的阿昔莫司和羥丙基纖維素-4M、微晶纖維素混合均勻，加入8％PVP無水乙醇溶液適量制粒，60℃干燥，16目篩整干顆粒，干顆粒中加入處方量的硬脂酸鎂。
b、普伐他汀鈉 40g乳糖20g羧甲基纖維素鈉 30g6％PVP的95％乙醇溶液50g硬酯酸鎂2g制備工藝普伐他汀鈉過100目篩，羧甲基纖維素鈉、乳糖過80目篩，稱取處方量的普伐他汀鈉和羧甲基纖維素鈉、乳糖混合均勻，加入6％PVP的95％乙醇溶液適量制粒，60℃干燥，16目篩整干顆粒，干顆粒中加入處方量的硬脂酸鎂。
c、將上述a，b兩種組分采用雙層壓片機沖壓即得雙層片。
實例5a、阿昔莫司300g空白丸芯250g7％PVP溶液(溶劑為90％乙醇) 200g制備工藝將阿昔莫司過120目篩，處方量稱取，倒入下料斗中。開造粒包衣機，入風壓力0.5bar，入風溫度30℃，CYL3bar，CAP10.8bar，倒入空白丸芯，造粒，下料速度4rpm，蠕泵12％，轉盤轉速145rpm，噴7％PVP溶液(溶劑為90％乙醇)。造粒結束，50℃烘干，出料。
b、a中制得的含阿昔莫司小丸Surelease 90g滑石粉 1g純水50g制備工藝將a中制得的含阿昔莫司小丸倒入轉盤，開造粒包衣機，入風壓力1.0bar，入風溫度30℃，CYL3bar，CAP11.5bar，蠕泵5％，轉盤轉速180rpm，噴入Surelease的純水溶液。包衣結束，50℃烘干，出料。
c、按照實例5中b的要求制得普伐他汀鈉小丸，與本例b中制得的阿昔莫司小丸采用硬膠囊藥物填充機按照每兩粒膠囊中含阿昔莫司與普伐他汀鈉的重量分別為300mg和10mg進行填充，即可。
實例6a、阿昔莫司300g空白丸芯300g7％PVP溶液(溶劑為90％乙醇) 200g制備工藝將阿昔莫司過120目篩，處方量稱取，倒入下料斗中。開造粒包衣機，入風壓力0.5bar，入風溫度30℃，CYL3bar，CAP10.8bar，倒入空白丸芯，造粒，下料速度4rpm，蠕泵12％，轉盤轉速145rpm，噴入7％PVP溶液(溶劑為90％乙醇)。造粒結束，50℃烘干，出料。
b、a中制得的含阿昔莫司小丸乙基纖維素 40g硬脂酸 70g聚乙二醇-6000 6g滑石粉 12g95％乙醇 1000g制備工藝將a中制得的含阿昔莫司小丸倒入下料斗中。開造粒包衣機，入風溫度30℃，入風壓力0.5bar，入風溫度30℃，CYL3bar，CAP1 1.0bar，蠕泵6％，轉盤轉速175rpm，噴入乙基纖維素、硬脂酸和聚乙二醇-6000的95％乙醇溶液。包衣結束，50℃烘干，出料。
c、普伐他汀鈉 10g空白丸芯 30g7％PVP溶液(溶劑為90％乙醇) 30g制備工藝將普伐他汀鈉過120目篩，處方量稱取，倒入下料斗中，開造粒包衣機，入風壓力0.5bar，入風溫度30℃，CYL3bar，CAP10.8bar，倒入空白丸芯，造粒。下料速度4rpm，蠕泵12％，轉盤轉速120rpm，噴入7％PVP溶液(溶劑為90％乙醇)。造粒結束，45℃烘干，出料。
d、將b與c制得的小丸采用硬膠囊藥物填充機按照每兩粒膠囊中含阿昔莫司與普伐他汀鈉的重量分別為300mg和5mg進行填充，即可。
實例7a、阿昔莫司 400g甘露醇10g乳糖 40g微晶纖維素20g6％PVP的95％乙醇溶液 120g
硬酯酸鎂2g制備工藝阿昔莫司過100目篩，甘露醇、乳糖、微晶纖維素過80目篩，稱取處方量的阿昔莫司和甘露醇、乳糖、微晶纖維素混合均勻，加入6％PVP的95％乙醇溶液適量制粒，60℃干燥，16目篩整干顆粒，干顆粒中加入處方量的硬脂酸鎂。
b、普伐他汀鈉 10g預膠化淀粉 50g甘露醇 50g乳糖40g6％PVP的95％乙醇溶液100g微粉硅膠5g制備工藝普伐他汀鈉過100目篩，預膠化淀粉、甘露醇、乳糖過80目篩，稱取處方量的普伐他汀鈉和預膠化淀粉、甘露醇、乳糖混合均勻，加入6％PVP的95％乙醇溶液適量制粒，60℃干燥，16目篩整干顆粒，干顆粒中加入處方量的硬脂酸鎂。
c、將上述a，b兩種組分采用雙層壓片機沖壓即得雙層片。
實例8a、阿昔莫司400g乳糖30g羥丙基甲基纖維素-15M20g8％PVP的95％乙醇溶液150g山榆酸甘油酯2g制備工藝阿昔莫司過100目篩，乳糖、羥丙基甲基纖維素-15M過80目篩，稱取處方量的阿昔莫司和乳糖、羥丙基甲基纖維素-15M混合均勻，加入8％PVP的95％乙醇溶液適量制粒，60℃干燥，16目篩整干顆粒，干顆粒中加入處方量的山榆酸甘油酯。
b、普伐他汀鈉 20g羥丙基纖維素25g
糊精 20g6％PVP的95％乙醇溶液 50g滑石粉2g制備工藝普伐他汀鈉過100目篩，羥丙基纖維素、糊精過80目篩，稱取處方量的普伐他汀鈉和羥丙基纖維素、糊精混合均勻，加入6％PVP的95％乙醇溶液適量制粒，60℃干燥，16目篩整干顆粒，干顆粒中加入處方量的滑石粉。
c、將上述a，b兩種組分采用雙層壓片機沖壓即得雙層片。
實例9阿昔莫司和普伐他汀鈉復方治療大鼠高血脂癥的復方篩選摘要本試驗的目的在于通過篩選來確定毒性低、作用強、使用方便的阿昔莫司和普伐他汀鈉復方制劑的組成。采用高脂飼料誘發大鼠高脂血癥模型，給模型大鼠連續灌服阿昔莫司(100～400mg/kg)和(或)普伐他汀鈉(5～60mg/kg)14天。結果發現，阿昔莫司和普伐他汀鈉伍用對高脂飼料所致的大鼠高脂血癥有明顯的治療作用，降脂效果與兩種藥物的劑量相關，阿昔莫司200mg/kg和普伐他汀鈉20mg/kg、阿昔莫司200mg/kg和普伐他汀鈉40mg/kg及阿昔莫司300mg/kg和普伐他汀鈉40mg/kg聯合用藥組效果顯著，可顯著降低大鼠血清總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇水平，顯著升高高密度脂蛋白膽固醇水平，并對上述指標均表現出協同作用。其中阿昔莫司300mg/kg和普伐他汀鈉40mg/kg聯合用藥組效果最顯著，優選阿昔莫司300mg/kg和普伐他汀鈉40mg/kg組成的復方。在本實驗劑量范圍內，聯合用藥組對與肝毒性和肌毒性相關的血清酶活性無明顯影響。
1 試驗目的通過篩選確定阿昔莫司和普伐他汀鈉復方制劑的組成，以達到復方制劑毒副作用低、作用全面、效果增強、使用方便之目的。
2 受試藥物
2.1 煙酸衍生物藥品名稱阿昔莫司(Acipimox)批號0301002純度大于99.7％生產單位魯南制藥股份有限公司保存條件陰涼干燥處保存，有效期1年半。
配制方法臨用前用1％羧甲基纖維素鈉(CMC)混勻，配成試驗所需濃度。
2.2 他汀類藥物藥品名稱普伐他汀(pravastatin)鈉批號030202純度大于99.0％生產單位百時美施貴寶公司保存條件陰涼干燥處保存，有效期2年。
配制方法臨用前用1％CMC混勻，配成試驗所需濃度。
3 動物3.1 品系和來源Wistar大鼠，軍事醫學科學院醫學實驗動物中心繁殖，實驗動物質量許可證號為醫動字D01-3039。
3.2 體重和性別年齡9周～10周，體重180-220g，雄性。
3.3 飼養條件動物實驗室空氣定時排風、光照良好，常溫。每籠飼養5只動物，飼以本公司實驗動物中心專門為大鼠配制的膨化飼料，自由飲水。動物實驗條件合格證號為醫動字D01-2051。試驗開始前，觀察動物進食、活動及糞便等1周，選擇健康動物進入試驗。
4 大鼠高脂血癥模型制備[1]大鼠高脂血癥模型采用高脂飼料致高脂血癥法。高脂飼料配方如下基礎飼料86.3％、膽固醇3％、豬油10％、甲基硫氧嘧啶0.2％、豬膽鹽0.5％，保證各成分混合均勻。連續2周。給藥期間隔天給予高脂飼料。
5 阿昔莫司和普伐他汀鈉對正常大鼠血脂水平的影響5.1 劑量設置依據臨床上阿昔莫司的劑量為250mg/次(按人體重60kg計算，上述劑量為4.2mg/kg)，2～3次/日，每日量最大不超過1200mg[2]。按體表面積為單位的劑量等效原則推算，上述人常用劑量換算成大鼠劑量約為50mg/kg/day。再結合文獻報道[3]，將本試驗中阿昔莫司的劑量設定為100、200、300、400mg/kg。
臨床上普伐他汀的劑量為20mg/次(按人體重60kg計算，上述劑量為0.34mg/kg)，1次/日，按體表面積為單位的劑量等效原則推算，上述人常用劑量換算成大鼠劑量約為1.70mg/kg。文獻報道，在高脂飼料導致的兔高脂血癥模型上普伐他汀10mg/kg能使血清中膽固醇水平顯著降低，并顯著改善高膽固醇喂養兔的血管內皮功能失調[4]。將本試驗中普伐他汀鈉的劑量設定為5、10、20、30和60mg/kg。
5.2 組別設置依據上述劑量設置，按血清總膽固醇水平均衡原則，將正常動物隨機分為(1)正常對照組；(2)阿昔莫司100mg/kg組；(3)阿昔莫司200mg/kg組；(4)阿昔莫司300mg/kg組；(5)阿昔莫司400mg/kg組；(6)普伐他汀鈉5.0mg/kg組；(7)普伐他汀鈉10mg/kg組；(8)普伐他汀鈉20mg/kg組；(9)普伐他汀鈉40mg/kg組；(10)普伐他汀鈉60mg/kg組；(11)阿昔莫司200mg/kg和普伐他汀鈉10mg/kg組；(12)阿昔莫司200mg/kg和普伐他汀鈉20mg/kg組；(13)阿昔莫司200mg/kg和普伐他汀鈉40mg/kg組；(14)阿昔莫司300mg/kg和普伐他汀鈉10mg/kg組；(15)阿昔莫司300mg/kg和普伐他汀鈉20mg/kg組；(16)阿昔莫司300mg/kg和普伐他汀鈉40mg/kg組；(17)阿昔莫司400mg/kg和普伐他汀鈉10mg/kg組；(18)阿昔莫司400mg/kg和普伐他汀鈉20mg/kg組。每組10只。
5.3 給藥臨床擬用的給藥途徑為口服，故本試驗采用灌胃法給藥，連續灌胃4天。灌胃均在動物進食后進行。每天1次。給藥體積為0.3ml/100g體重。
5.4 檢測指標血清化學指標包括總膽固醇(TC)、丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、肌酸激酶(CK)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-L)。其中丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、肌酸激酶(CK)檢測試劑采用北京中生生物工程高技術公司產品，用SABA/18全自動生化分析儀測定；其余試劑采用日本羅氏試劑公司產品，用日立7020自動生化分析儀測定。測定方法參照試劑說明書取血樣前禁食16小時。
6 阿昔莫司和普伐他汀鈉對高脂血癥大鼠血脂水平的影響6.1 劑量設置依據同5.1正常大鼠實驗。
6.2 組別設置依據上述劑量設置，按血清總膽固醇水平均衡原則，將模型大鼠隨機分為(1)正常對照組；(2)模型對照組；(3)阿昔莫司100mg/kg組；(4)阿昔莫司200mg/kg組；(5)阿昔莫司300mg/kg組；(6)阿昔莫司400mg/kg組；(7)普伐他汀鈉5.0mg/kg組；(8)普伐他汀鈉10mg/kg組；(9)普伐他汀鈉20mg/kg組；(10)普伐他汀鈉40mg/kg組；(11)普伐他汀鈉60mg/kg組；(12)阿昔莫司200mg/kg和普伐他汀鈉10mg/kg組；(13)阿昔莫司200mg/kg和普伐他汀鈉20mg/kg組；(14)阿昔莫司200mg/kg和普伐他汀鈉40mg/kg組；(15)阿昔莫司300mg/kg和普伐他汀鈉10mg/kg組；(16)阿昔莫司300mg/kg和普伐他汀鈉20mg/kg組；(17)阿昔莫司300mg/kg和普伐他汀鈉40mg/kg組；(18)阿昔莫司400mg/kg和普伐他汀鈉10mg/kg組；(19)阿昔莫司400mg/kg和普伐他汀鈉20mg/kg組。每組10只。
6.3 給藥臨床擬用的給藥途徑為口服，故本試驗采用灌胃法給藥，連續灌胃14天。灌胃均在動物進食后進行。每天1次。給藥體積為0.3ml/100g體重。
6.4 檢測指標同5.4正常大鼠實驗。
7 阿昔莫司和普伐他汀鈉復方不同組分相互影響試驗7.1 組別設置從療效較顯著的阿昔莫司和普伐他汀鈉劑量組中，確定阿昔莫司和普伐他汀鈉復方的劑量(1)正常對照組；(2)模型對照組；(3)阿昔莫司200mg/kg；(4)阿昔莫司300mg/kg；(5)普伐他汀鈉20mg/kg；(6)普伐他汀鈉40mg/kg；(7)阿昔莫司200mg/kg和普伐他汀鈉20mg/kg組復方組；(8)阿昔莫司200mg/kg和普伐他汀鈉40mg/kg組復方組；(9)阿昔莫司300mg/kg和普伐他汀鈉20mg/kg組復方組。每組10只。分組前測定血清總膽固醇水平，按均衡原則隨機分組。每組10只。
7.2 給藥和檢測指標同前述5.3和5.4。
8 試驗結果8.1 阿昔莫司和普伐他汀鈉對正常大鼠血脂水平的影響正常大鼠給藥4天后，阿昔莫司、普伐他汀鈉和聯合用藥組的總膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇均有所降低，高密度脂蛋白膽固醇水平升高，給藥后血清甘油三酯略有下降，但無統計學差異，見表1。
表1 阿昔莫司和普伐他汀鈉及復方對正常大鼠血脂的影響
注與正常對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.018.2 阿昔莫司和普伐他汀鈉對模型大鼠血脂水平的影響大鼠飼以高脂飼料14天后分組給藥。阿昔莫司的劑量范圍為100～400mg/kg，普伐他汀鈉的劑量范圍為5.0～60mg/kg，組成聯合用藥組。給藥14天后，與模型對照組比較，阿昔莫司和普伐他汀鈉各劑量組血清總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇均有不同程度的下降，高密度脂蛋白膽固醇水平均有所升高，見表2。
與模型對照組相比，阿昔莫司200mg/kg和普伐他汀鈉20mg/kg、阿昔莫司200mg/kg和普伐他汀鈉40mg/kg及阿昔莫司300mg/kg和普伐他汀鈉40mg/kg三個聯合用藥組大鼠的血清總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇水平均顯著降低，高密度脂蛋白膽固醇水平均顯著升高。與相同劑量的阿昔莫司或普伐他汀鈉單方組比較，上述三個聯合用藥組血清總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇水平均顯著降低，高密度脂蛋白膽固醇水平均顯著升高，并對上述指標均表現出協同作用。其中以阿昔莫司300mg/kg和普伐他汀鈉20mg/kg聯合用藥組效果最為顯著。
表2 阿昔莫司和普伐他汀鈉及復方對模型大鼠血脂的影響
注與正常對照組比較，###P＜0.001；與模型對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.0018.3 阿昔莫司和普伐他汀鈉對高血脂模型大鼠血清酶活性的影響本實驗通過測定用藥14天后高血脂模型大鼠血清中丙氨酸氨基轉移酶和肌酸激酶的水平，來評價阿昔莫司和普伐他汀鈉及復方對模型大鼠肝臟功能和骨骼肌組織的影響。結果表明，與模型對照組相比，阿昔莫司各劑量(100～400mg/kg)組模型大鼠血清丙氨酸氨基轉移酶和肌酸激酶水平均無顯著差異(P＞0.05)；普伐他汀鈉各劑量(5.0～60mg/kg)組模型大鼠血清中上述指標亦未見顯著差異(P＞0.05)，普伐他汀鈉和阿昔莫司各聯合用藥組大鼠血清丙氨酸氨基轉移酶和血清肌酸激酶均無明顯變化(P＞0.05)，見表3。
表3 阿昔莫司和普伐他汀鈉及復方對模型大鼠血清丙氨酸氨基轉移酶和肌酸激酶的影響
8.4 阿昔莫司和普伐他汀鈉復方中不同組分相互影響試驗高血脂模型大鼠連續給藥14天后，與相同劑量的單方相比，阿昔莫司和普伐他汀鈉聯合用藥組均能明顯降低模型大鼠血清中總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇水平以及明顯升高高密度脂蛋白膽固醇水平，見表4。
綜合分析，與模型對照組相比，阿昔莫司200mg/kg和普伐他汀鈉20mg/kg、阿昔莫司200mg/kg和普伐他汀鈉40mg/kg及阿昔莫司300mg/kg和普伐他汀鈉40mg/kg聯合用藥組效果顯著，可顯著降低大鼠血清總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇水平，顯著升高高密度脂蛋白膽固醇水平。與相同劑量的阿昔莫司或普伐他汀鈉單方組比較，上述三個聯合用藥組血清總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇水平均顯著降低，高密度脂蛋白膽固醇水平均顯著升高，三個聯合用藥組對上述指標均表現出協同作用。其中阿昔莫司300mg/kg和普伐他汀鈉40mg/kg聯合用藥組效果最顯著，因此優選阿昔莫司300mg/kg和普伐他汀鈉40mg/kg組成的復方。
表4 阿昔莫司和普伐他汀鈉復方中不同組分治療大鼠高脂血癥的效果
注與正常對照組比較，###P＜0.001，##P＜0.01，#P＜0.05與模型對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001與阿昔莫司200mg/kg組比較，！！！P＜0.001，！！P＜0.01與普伐他汀鈉20mg/kg組比較，@P＜0.05 ，@@P＜0.01，@@@P＜0.001與阿昔莫司300mg/kg組比較，^^^P＜0.001
與普伐他汀鈉40mg/kg組比較，&&&P＜0.001，&P＜0.059 結論阿昔莫司和普伐他汀鈉伍用對高脂飼料所致的大鼠高脂血癥有明顯的治療作用，降脂效果與兩種藥物的劑量相關，阿昔莫司200mg/kg和普伐他汀鈉20mg/kg、阿昔莫司200mg/kg和普伐他汀鈉40mg/kg及阿昔莫司300mg/kg和普伐他汀鈉40mg/kg聯合用藥組效果顯著，可顯著降低大鼠血清總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇水平，顯著升高高密度脂蛋白膽固醇水平，并對上述指標均表現出協同作用。其中阿昔莫司300mg/kg和普伐他汀鈉40mg/kg聯合用藥組效果最顯著，優選阿昔莫司300mg/kg和普伐他汀鈉40mg/kg組成的復方。在本實驗劑量范圍內，聯合用藥組對血清酶活性無明顯影響，初步表明對肝和橫紋肌無明顯的毒性作用。此外，目前阿昔莫司單方的臨床用法為3次/日，本實驗證明，阿昔莫司1次/日仍有顯著的降血脂作用，且毒性小，這為阿昔莫司和普伐他汀鈉組成復方后一日僅用藥1次提供了可靠的實驗依據，這必將大大方便患者服用，提高患者的順應性。
實例10.不同釋放時間的阿昔莫司和普伐他汀鈉復方對臨床高血脂患者不穩定型心絞痛預防治療效果1 試驗目的將動物試驗篩選所確定的阿昔莫司和普伐他汀鈉復方制劑(重量比為7.5∶1)，用于高血脂伴不穩定型心絞痛患者，以觀察其預防治療效果。
2 受試藥物2.1 藥品名稱阿昔莫司(Acipimox)批號0301002純度大于99.7％生產單位魯南制藥股份有限公司保存條件陰涼干燥處保存，有效期1年半。
2.2 藥品名稱普伐他汀(pravastatin)鈉批號030202純度大于99.0％
生產單位百時美施貴寶公司2.3 藥品名稱阿昔莫司(Acipimox)普伐他汀(pravastatin)鈉普通片，每片含阿昔莫司220mg，普伐他汀鈉30mg。
批號0304002生產單位魯南制藥股份有限公司保存條件陰涼干燥處保存，有效期1年半。
2.4 藥品名稱阿昔莫司(Acipimox)普伐他汀(pravastatin)鈉緩釋片，每片含阿昔莫司220mg，普伐他汀鈉30mg。
批號0305001生產單位魯南制藥股份有限公司保存條件陰涼干燥處保存，有效期1年半。
3 受試患者選擇臨床確診的各型高血脂伴不穩定型心絞痛的患者。
4.給藥方案將所有受試患者按照心肌缺血事件發生頻率和心肌梗死面積均衡的原則，隨機分為安慰劑對照組、阿昔莫司組、普伐他汀鈉組、阿昔莫司普伐他汀普通片組和阿昔莫司普伐他汀緩釋片組。劑量設置依據，根據動物實驗所得到的普伐他汀鈉和阿昔莫司組合物的最佳比例以及兩種藥物臨床的常用劑量，將給藥劑量設定為，普伐他汀鈉30mg，阿昔莫司220mg，每晚頓服。
5.檢測指標心絞痛發作頻率，血清乳酸脫氫酶(LDH)活性。
6.試驗結果高血脂伴不穩定型心絞痛的患者在用藥前的一周內測定心絞痛的發作頻率和血清乳酸脫氫酶的活性，隨機分組后，給予相應的藥物治療，在給藥后的第16周再次測定心絞痛的發作頻率和血清乳酸脫氫酶活性。結果如下
注*與安慰劑組相比較，P＜0.05，***與安慰劑組相比較，P＜0.001#與阿昔莫司組相比較，P＜0.05，###與阿昔莫司組相比較，P＜0.001&與普伐他汀組相比較，P＜0.05，&&與普伐他汀鈉組相比較，P＜0.017.結論阿昔莫司220mg和普伐他汀鈉30mg伍用對臨床高血脂伴不穩定型心絞痛患者具有協同性的預防治療效果。而其中緩釋片的效果最為理想。
參考文獻[1]徐叔云，卞如濂，陳修主編.藥理學實驗方法學(第三版)，人民衛生出版社出版，2002年1月，1201-1202[2]OLBETAM(acipimox)說明書(Pharmacia，New Zealand)[3]Al-Shurbaji A，et al.The effect of Acipimox on triacylglycerol metabolism inrat.Scand J Clin Lab Invest，1990，50(2)203-208[4]張彤，徐成斌等，普伐他汀和西立伐他汀對高膽固醇喂養兔的血管內皮功能的影響，中國病理生理雜志，2000；16(12)1324-132權利要求
1.一種治療高血脂癥組合物，其特征在于所述的組合物包括a)第一個活性成分，它是阿昔莫司(Acipimox)；b)第二個活性成分，它選自普伐他汀(Pravastatin)、或其可藥用的鹽、酯或溶劑化物；c)一種或多種其它可藥用的活性成分或者非活性成分。
2.按照權利要求1所述的組合物，其特征在于所述的普伐他汀可以藥用的鹽為合適的普伐他汀生理可接受的鹽，包括衍生自無機的和有機的堿所形成的鹽，為鈉鹽、鈣鹽、鉀鹽、鎂鹽、鋅鹽、鐵鹽。
3.按照權利要求1所述的組合物，其特征在于所述的普伐他汀可以藥用的酯為合適的普伐他汀生理可接受的酯，包括衍生自脂肪醇、芳香醇、雜環醇所形成的酯，為甲酯、乙酯、烯丙酯、苯酯。
4.按照權利要求1～2所述的組合物，其特征是第二個活性成分為普伐他汀鈉。
5.按照權利要求1所述的組合物，其特征是阿昔莫司和普伐他汀鈉(以游離酸計，下同)的重量比是(5～40)∶1。
6.按照權利要求1所述的組合物，其特征是阿昔莫司和普伐他汀鈉的重量比是(5～10)∶1。
7.按照權利要求1所述的組合物，其特征是阿昔莫司和普伐他汀鈉的重量比是7.5∶1
8.按照權利要求1～7所述的組合物制成的醫療用制劑。
9.按照權利要求8所述的醫療用制劑為片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑、滴丸。
10.按照權利要求1～9所述的組合物，用于制備治療冠心病的藥物。
11.按照權利要求1～9所述的組合物，添加其它活性成分用于制備冠心病的藥物。
12.按照權利要求1～9所述的組合物，用于制備治療高血脂伴不穩定型心絞痛的藥物。
13.按照權利要求1～9所述的組合物，添加其它活性成分用于制備高血脂伴不穩定型心絞痛的藥物。
全文摘要
本發明提供一種新的治療高脂血癥的藥物組合物，其特征是含有有效量的阿昔莫司(Acipimox)和普伐他汀(Pravastatin)鈉(以游離酸計)重量比為5～40∶1，優選重量比為5～10∶1，進一步優選重量比為7.5∶1。其降脂作用明顯優于相同劑量的單方，表明兩藥合用有協同作用，同時又無明顯的毒性作用。上述組合物對預防治療高血脂伴不穩定型心絞痛取得了意外的顯著效果，明顯優于相同劑量的單方，協同作用明顯。是冠心病患者的理想選擇。
文檔編號A61K31/4965GK1692907SQ20041004823
公開日2005年11月9日 申請日期2004年6月16日 優先權日2004年5月8日
發明者趙志全 申請人:魯南制藥集團股份有限公司