專利名稱：一種含三七總皂苷和淫羊藿苷的藥物組合物及其用途的制作方法
技術領域：
本發明屬于天然藥物組合物，尤其涉及三七總皂苷和淫羊藿苷的組合物及其在制備治療老年性癡呆癥藥物中的用途。
背景技術：
隨著我國社會結構改變，總人口老齡化比率日益突出，老年性癡呆的發病率有逐漸增高的趨勢，但是能夠達到療效肯定、不良反應輕微、用藥方便、療程適中的藥物卻明顯缺乏。中國加入WTO后，具有我國自主知識產權的該類新藥更少，亟待研制開發具有我國獨立知識產權的，并具有我國特色的療效肯定、不良反應輕微的治療老年性癡呆高技術含量新藥。
對老年性癡呆中醫講究辨證論治，認為該病既為虛癥，又為實癥。從虛癥論治，認為由于諸臟虧損，氣血不足引起的，認為與腎腦有關。中醫認為精藏于腎，腎精不足不能生髓，“腦為髓之海”，從而引起腦海空虛。因此腎精虧虛，精奪髓枯，而髓海不足，發為腦海。從實癥論治，認為多因痰瘀，血瘀，引起腦絡阻死有關。因此治療多運用補腎填精益髓、活血化瘀的治則。
以現代醫學觀點，老年性癡呆的發病機理較復雜，一些發病環節已經得到證實。其中β淀粉樣蛋白(Aβ)肽的生成和蓄積是阿爾茨海默病發病機制的中心環節，而血管硬化等又是血管性癡呆的重要原因。其中腦組織和血管的氧化和脂質過氧化，以及雌激素水平改變與老年性癡呆發病的相關性已經獲得了共識[1，2]。
發明內容
本發明的一個目的是提供三七總皂苷和淫羊藿苷組合物，三七總皂苷和淫羊藿苷是從祖國醫學中具有活血化瘀、補腎溫陽的中藥三七和淫羊藿中提取單一的具活性的有效部位，本發明組合物組成是三七總皂苷∶淫羊藿苷的重量比值是0.01∶0.99～0.50∶0.50。相當于相應的三七∶淫羊藿兩藥材重量比值為0.01∶0.99～0.50∶0.50。
組合物與藥用賦形劑制備的制劑形式主要包括液體制劑和固體制劑。固體制劑主要包括顆粒劑、片劑、膠囊劑(含軟膠囊)、滴丸劑。液體制劑主要包括口服液體制劑和注射液體制劑。
所述制劑的給藥形式主要包括口服給藥或非腸道給藥，優選口服給藥。
本發明的另一個目的是提供該組合物在制備治療老年性癡呆癥(阿爾茨海默病和血管性癡呆)的藥物中的應用。
本發明的又一個目的是提供該組合物在制備改善老年性癡呆癥(阿爾茨海默病和血管性癡呆)藥物中的應用。
本發明的有益效果是1.該組合物基于中醫藥理論，參考循證醫學資料，選用了兩種藥材中具有活血化瘀、補腎溫陽、補益強壯之功效的有效部位組合，因此具有我國獨特的經歷了長期用藥證實的治療作用理論基礎，并能獲相得益彰的作用。
2.該組合物在制備用于治療和改善老年性癡呆(阿爾茨海默病和血管性癡呆)藥物中應用，可解決該類疾病治療中，明顯缺乏療效肯定、不良反應輕微、用藥方便的藥物的問題。
3.采用多種經典的生物評價系統，在細胞水平和基因水平證實組合物之一的淫羊藿苷經口給藥后，其代謝產物具有顯著的抗氧化作用和雌激素樣作用，可提供該組合物制備的藥物在治療上述疾病中具有多層次、多靶點作用的依據。
4.經動物藥效學實驗證明，該組合物具有以下作用(1)大鼠活血化瘀作用(調節凝血作用，抗血栓形成作用，調節血液流變學作用)。
(2)促進大鼠空間記憶作用，對D-半乳糖所致亞急性衰老合并鵝膏蕈酸損傷Meynert基底核的老年性癡呆模型大鼠學習記憶能力有顯著改善作用。
5.經拆方研究，組合物將兩種有效部位合用，比單用其中任何一種作用顯著增強，并非簡單作用疊加。該組合物的上述作用顯著強于兩種藥材的常規水煎液。本組合物毒理作用研究結果表明，兩種有效部位合用的小鼠急性毒性研究結果，與單用其中任何一種相仿，均未出現死亡和明顯的中毒癥狀。
6.本發明從三七和淫羊藿藥材中提取單一的有效部位三七總皂苷和淫羊藿苷，各達到＞50％以上，并獲得用于治療老年性癡呆的兩種有效部位最佳配比，可用于研制5類以上中藥新藥，拓展了單一藥物用途。
具體實施例方式
本發明結合實施例作進一步說明。
實施例1本發明三七總皂苷和淫羊藿苷的制備方法(一)稱取三七粉末(20-40目)，加10倍量70％乙醇回流提取3次，每次2小時，過濾，合并濾液，減壓濃縮至一定體積(0.33g生藥/ml)，即得上柱溶液。吸取該溶液上大孔樹脂，用7倍量75％乙醇洗脫，分段收集洗脫液。洗脫液水浴揮干，減壓濃縮，真空干燥，稱量總固體物并測定三七總皂苷含量。本批三七總皂苷含量＞80％。
(二)稱取淫羊藿干燥原料(地上部分粉碎料，包括莖葉)乙醇提取3次(1小時/次)提取液濃縮烘干，干燥物HPLC檢測，提取物淫羊藿苷含量為4.9％)。繼而分離精制如下提取液→DM130大孔樹脂吸附→蒸餾水洗脫雜質→低醇洗脫雜質→高醇洗脫有效成分→樹脂再生。60％乙醇洗脫液獲淫羊藿苷76.9％。
上述兩種制備方法提取的三七總皂苷(含量＞80％)和淫羊藿苷(含量76.9％)，以下簡稱“三七總皂苷和淫羊藿苷提取物”。
實施例2本發明組合物的最大耐受量實驗(1)材料與方法三七總皂苷和淫羊藿苷提取物參照實施例1方法獲得，以0.5％羧甲基纖維素鈉配制成懸液。藥物濃度各相當于在10g生藥中含量/ml，臨用前按照三七總皂苷∶淫羊藿苷重量比0.01∶0.99混勻成為組合物A和三七總皂苷∶淫羊藿苷重量比0.5∶0.5混勻成為組合物B。
采用最大濃度(相當于10g生藥/ml)、最大給藥容量0.4ml/10g/次灌胃給藥，一天給與小鼠組合物和兩藥材單個提取物及各兩次，間隔5～6小時，觀察給藥當天及隨后兩周內小鼠的體重和各種癥狀。
(2)結果小鼠灌胃給藥當天和次日均有拉稀便現象，給藥當天尚出現耳廓血管擴張現象，但組合物和兩藥材單個提取物之間未見差異。所有給藥組均未出現死亡，隨后兩周內未見表觀不良癥狀。
(3)結論組合物和兩藥材單個提取物小鼠灌胃給予800g生藥中相應含量/kg，除給藥當天有拉稀便現象外和耳廓血管擴張現象，未出現死亡及其它明顯毒性反應。
實施例3本發明組合物的最大耐受量實驗2
(1)材料與方法參見實施例2，供試藥物為三七總皂苷和淫羊藿苷以重量比0.1∶0.9、0.15∶0.85、0.2∶0.8、0.4∶0.6的組合物A～D。
(2)結果小鼠灌胃給藥當天和次日均有拉稀便現象，給藥當天尚出現耳廓血管擴張現象，但組合物A～D之間未見顯著差異。所有給藥組均未出現死亡，隨后兩周內未見表觀不良癥狀。
(3)結論組合物A～D小鼠灌胃給予800g生藥中相應含量/kg，除給藥當天有拉稀便現象外和耳廓血管擴張現象，未出現死亡及其它明顯毒性反應。
實施例4抗大鼠凝血酶原(PT)和部分凝血活酶(KPTT)實驗(1)材料與方法三七總皂苷和淫羊藿苷提取物參照實施例1方法獲得，并組成組合物A(三七總皂苷∶淫羊藿苷重量比0.01∶0.99)和組合物B(三七總皂苷∶淫羊藿苷重量比0.50∶0.50)。
肝素鈉注射液上海第一生化藥業有限公司 批號031101。復方丹參片杭州胡慶余堂藥業有限公司 批號031030。枸櫞酸鈉西安化學試劑廠 批號980602。PT試劑盒上海榮盛生物技術有限公司 批號20040302。KPTT試劑盒上海榮盛生物技術有限公司 批號20040223。
Sprage-Dawley大鼠，清潔級，體重180～200g，雌雄各半。
設溶劑對照蒸餾水，陽性對照復方丹參片(1g/kg，灌胃)、肝素鈉(1000u/kg，腹腔注射)，組合物A和組合物B的低劑量組(總10g生藥/kg，灌胃)和高劑量組(總20g生藥/kg，灌胃)，三七總皂苷和淫羊藿苷提取物單獨給藥組(均各為10g生藥/kg，灌胃)。
除陽性對照肝素鈉組外，其他各組連續給藥7天，期間肝素鈉組每天灌胃10ml/kg蒸餾水。末次給藥前禁飼不禁水12～16小時。并于末次給藥后1小時(肝素鈉組為結扎前30min，腹腔注射)，用烏拉坦(1g/kg)麻醉固定大鼠，打開腹腔分離下腔靜脈。用一次性注射器順利從下腔靜脈抽取1.8ml靜脈血，立即滴入硅化試管(事先注入0.2ml 3.2％枸櫞酸鈉)，輕搖試管使抗凝劑和血漿混勻。將標本于3000rpm離心5min，上清分裝于75×10mm的硅化試管，每個標本分裝四份，每份0.1ml血清。
按試劑盒說明測定PT及KPTT，每個指標測兩份復管取均值。比較給藥組和對照組的差異。
(2)統計學處理PT和KPTT測得數據以秒單位和溶劑對照進行t檢驗(3)結果大鼠用相當于20g總生藥中含量/kg的組合物A和組合物B連續灌胃，9天后均能延長KPTT(P＜0.05)，但不能延長PT(P＞0.05)；用相當于總生藥10g/kg的組合物A和組合物B或各10g生藥/kg單一提取物連續灌胃，9天后均不能延長大鼠PT和KPTT(P＞0.05)。詳細結果參見表1表1 三七總皂苷和淫羊藿苷組合物抗大鼠凝血酶原(PT)和部分凝血活酶(KPTT)作用組別 劑量 動物數 PT(秒) KPTT(秒)溶劑對照10ml/kg 10 18.1±1.5 28.6±2.6肝素鈉 1000u/kg 10 23.3±5.5 111.2±44.3**三七總皂苷 10g生藥/kg 10 18.9±1.7 31.6±4.9淫羊藿苷10g生藥/kg 10 18.3±1.3 30.2±4.6組合物A 10g生藥/kg 10 18.7±2.2 31.8±5.7組合物A 20g生藥/kg 10 20.2±3.7 39.3±4.0*組合物B 10g生藥/kg 10 18.6±1.4 30.4±5.7組合物B 20g生藥/kg 10 19.2±3.1 36.7±2.8*復方丹參片 1g生藥/kg10 19.5±1.9 34.4±6.4*P＜0.05，**P＜0.01與溶劑對照相比(4)結論大鼠用相當于20g總生藥中含量/kg的組合物A和組合物B連續灌胃9天，能抑制內源性凝血活酶(P＜0.05)，比單用其中任何一種作用顯著增強；對外源性凝血酶原沒有顯著性抑制作用(P＞0.05)。
實施例5抗大鼠凝血酶原(PT)和部分凝血活酶(KPTT)實驗2(1)材料與方法參見實施例4，供試藥物為三七總皂苷和淫羊藿苷以重量比0.1∶0.9、0.15∶0.85、0.2∶0.8、0.4∶0.6的組合物A～D。
設溶劑對照蒸餾水，陽性對照復方丹參片(1g/kg，灌胃)、肝素鈉(1000u/kg，腹腔注射)，組合物A～D的低劑量組(總10g生藥/kg，灌胃)和高劑量組(總20g生藥/kg，灌胃)。
(2)結果大鼠用相當于20g總生藥中含量/kg的組合物A～D連續灌胃，9天后均能延長KPTT(P＜0.05)，但不能延長PT(P＞0.05)；用相當于總生藥10g/kg的組合物A～D連續灌胃，9天后均不能延長大鼠PT和KPTT(P＞0.05)。詳細結果參見表2表2 三七總皂苷和淫羊藿苷組合物抗大鼠凝血酶原(PT)和部分凝血活酶(KPTT)作用組別 劑量 動物數 PT(秒) KPTT(秒)溶劑對照 10ml/kg 10 18.3±1.4 27.6±2.0肝素鈉 1000u/kg 10 22.6±4.7 109.2±40.3**組合物A 10g生藥/kg 10 18.6±1.4 30.4±5.7組合物A 20g生藥/kg 10 18.9±3.3 37.6±2.1*組合物B 10g生藥/kg 10 18.5±2.7 32.8±6.1組合物B 20g生藥/kg 10 20.7±2.3 38.4±2.9*組合物C 10g生藥/kg 10 17.9±1.8 31.2±3.6組合物C 20g生藥/kg 10 20.1±3.7 38.8±2.3*組合物D 10g生藥/kg 10 18.7±2.0 31.6±2.7組合物D 20g生藥/kg 10 19.8±2.8 35.9±2.0*復方丹參片 1g生藥/kg10 19.9±1.5 34.3±4.7*P＜0.05，**P＜0.01與溶劑對照相比(3)結論大鼠用相當于20g總生藥中含量/kg的組合物A～D連續灌胃9天，能抑制內源性凝血活酶(P＜0.05)；對外源性凝血酶原沒有顯著性抑制作用(P＞0.05)。
實施例6三七總皂苷和淫羊藿苷提取物抗大鼠血栓形成試驗(下腔靜脈結扎法)(1)材料與方法三七總皂苷和淫羊藿苷提取物參照實施例1方法獲得，組合物制備與實施例3同，批號040330，藥物濃度4g生藥/ml。
肝素鈉注射液上海第一生化藥業有限公司 批號031101。烏拉糖曹揚第二中學化工廠 批號19971022。
Sprage-Dawley大鼠，清潔級，體重220～240g，雌雄各半。
設溶劑對照蒸餾水，陽性對照肝素鈉(1000u/kg，腹腔注射)、三七總皂苷組、淫羊藿苷組(各折合生藥量10g/kg，灌胃)、三七總皂苷和淫羊藿苷組合物按0.01∶0.99組合物(組合物A)和0.50∶0.50(組合物B)低劑量組(折合總生藥量10g/kg，灌胃)、高劑量組(折合總生藥量20g/kg，灌胃)。
除陽性對照外，其他各組連續給藥7天，期間陽性組灌胃10ml/kg蒸餾水。末次給藥前禁飼不禁水12～14h。末次給藥后1h(陽性對照為結扎前30分鐘，腹腔注射)，用烏拉坦(1g/kg)麻醉固定大鼠，于腹中線切開皮膚及肌肉約3cm打開腹腔，找到下腔靜脈并分離，于左腎靜脈下方用7號粗絲線結扎下腔靜脈，縫合腹壁。2h后重新打開腹壁，用止血鉗夾住結扎下方2cm處下腔靜脈(髂靜脈分支處附近)，并用止血鉗夾住2cm段內主要靜脈分支。縱行切開該段靜脈，濾紙條吸盡管腔內血液，觀察有無血栓形成。如有則取出用濾紙吸盡血液稱重。比較用藥組和對照組間差異。
(2)統計學處理對血栓重量進行組間t檢驗。
(3)結果大鼠用組合物A和組合物B的低劑量組和高劑量組連續灌胃(折合總生藥量10g/kg、20g/kg)7天后，均能顯著抑制血栓的形成(P＜0.05，P＜0.01)，結果參見表3。
表3 三七總皂苷和淫羊藿苷組合物抗大鼠血栓形成作用組別 劑量 動物數 血栓重量(mg)溶劑對照 10ml/kg 103.50±1.22三七總皂苷 10g生藥/kg101.69±0.63*淫羊藿苷 10g生藥/kg102.28±0.67組合物A 10g生藥/kg101.47±0.98*組合物A 20g生藥/kg100.64±0.52**組合物B 10g生藥/kg101.97±0.78*組合物B 20g生藥/kg100.82±0.57**肝素鈉 1000u/kg 100****P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001與溶劑對照相比
(4)結論大鼠用組合物A和組合物B低劑量組(均折合總生藥量10g/kg)和高劑量組(均折合總生藥量20g/kg)連續灌胃7天，對下腔靜脈結扎引起的血栓形成有顯著抑制作用(P＜0.05，P＜0.01)，比單用其中任何一種作用顯著增強。
實施例7三七總皂苷和淫羊藿苷提取物抗大鼠血栓形成試驗2(下腔靜脈結扎法)(1)材料與方法參見實施例6，供試藥物為三七總皂苷和淫羊藿苷以重量比0.1∶0.9、0.15∶0.85、0.2∶0.8、0.4∶0.6的組合物A～D。
設溶劑對照蒸餾水，陽性對照肝素鈉(1000u/kg，腹腔注射)、三七總皂苷和淫羊藿苷組合物A～D低劑量組(折合總生藥量10g/kg，灌胃)、高劑量組(折合總生藥量20g/kg，灌胃)。
(3)結果大鼠用組合物A～D的低劑量組和高劑量組連續灌胃(折合總生藥量10g/kg、20g/kg)7天后，均能顯著抑制血栓的形成(P＜0.05，P＜0.01)，結果參見表4。
表4 三七總皂苷和淫羊藿苷組合物抗大鼠血栓形成作用組別劑量 動物數 血栓重量(mg)溶劑對照10ml/kg 103.89±1.42組合物A 10g生藥/kg101.45±0.59*組合物A 10g生藥/kg102.09±0.62組合物B 10g生藥/kg101.50±0.66*組合物B 20g生藥/kg100.68±0.57**組合物C 10g生藥/kg102.08±0.80組合物C 20g生藥/kg101.33±0.72*組合物D 10g生藥/kg100.69±0.46**組合物D 20g生藥/kg100.78±0.49**肝素鈉 1000u/kg 100****P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001與溶劑對照相比(4)結論大鼠用組合物A～D低劑量組(均折合總生藥量10g/kg)和高劑量組(均折合總生藥量20g/kg)連續灌胃7天，對下腔靜脈結扎引起的血栓形成有顯著抑制作用(P＜0.05，P＜0.01)。
實施例8淫羊藿苷大鼠灌胃后體內代謝產物測定及其代謝產物體外抗氧化作用取Sprage-Dawley大鼠8只，經18h空腹(禁食不禁水)后灌胃給予淫羊藿120mg/kg，予給藥后240min尾靜脈取血，同時收集0-96h的尿液和糞便，作生物樣品預處理，并以毛細管電泳法測定血清，尿液和糞便中代謝產物，并以液-質聯用(LC-MS)技術分析確證結構。結果顯示，尿液與糞便中幾乎未見淫羊藿苷，但是可見淫羊藿素與去甲淫羊藿素。
體外抗氧化活性通過Photochem抗氧化測定儀測定。采用水溶性物質抗氧化能力測定法(ACW法)，先用維生素C為標準制作標準曲線，淫羊藿苷、及其體內代謝產物淫羊藿素與去甲淫羊藿素用工作液溶解后使最終實驗量分別為6nmol、0.6nmol、0.6nmol，并進行抗氧化活性測定。實驗結果以維生素C當量表示，結果參見表5。
表5 淫羊藿苷及其代謝產物的體外抗氧化活性樣品遲滯時間 抗氧化當量 x 標準差 相對標準差(nmol維生素C) (S.D.)R.S.D(％)13.10.28淫羊藿苷15.10.32 0.30 0.021 7.0(6nmol)14.50.317.9 0.17淫羊藿素8.2 0.17 0.17 0.006 3.5(0.6nmol)7.6 0.1636.90.77去甲淫羊藿素38.10.80 0.84 0.091 10.8(0.6nmol)44.90.94參見
圖1，采用PHOTOCHEM化學發光法獲得抗氧化能力標準光發射曲線，樣品具有較強的抗氧化能力，可消除較多的自由基，從而使發光強度減小、信號減弱、出現時間變遲。圖中內標氨基苯二酰肼(1)，淫羊藿素0.6nmol、淫羊藿苷6.0nmol，、去甲淫羊藿素0.6nmol(2-4)的曲線。
結果顯示，標準曲線線性關系良好，回歸方程為Y＝47.86×-0.16(R2＝0.9990)。以維生素C為標準物質與遲滯時間做標準曲線，其他測定樣品的信號通過標準取消的轉換，轉變為維生素C當量，定量比較如下去甲淫羊藿素的抗氧化能力最強，(相當于1.400nmol維生素C/nmol)，淫羊藿素其次(相當于0.289nmol維生素C/nmol)，淫羊藿苷最弱(相當于0.051nmol維生素C/nmol)，結果見表6。
表6 采用PHOTOCHEM化學發光法獲得水系統中樣品抗氧化活性抗氧化劑nmol維生素C/nmol樣品淫羊藿苷0.051±0.003淫羊藿素0.289±0.009去甲淫羊藿素1.400±0.146結果提示，淫羊藿苷經口給藥后，其主要代謝產物淫羊藿素與去甲淫羊藿素具有顯著的抗氧化活性，目前認為腦組織和血管的氧化和脂質過氧化與老年性癡呆發生發展有關，藥物抗氧化作用與防治老年性癡呆有關[2]，由此可在口服后產生抗老年性癡呆作用。
實施例9淫羊藿苷大鼠灌胃后體內代謝產物雌激素樣活性測定雌激素樣活性通過人乳腺癌細胞MCF-7體外增殖法測定。將常規培養的MCF-7細胞經胰蛋白酶消化后分置24孔細胞培養版中，貼壁48h后換用實驗用培養基，預培養48h，加入不同濃度的受試物和陽性藥雌二醇(17-β-estradiol，E2)，繼續培養6天，并于結束前加入噻唑藍(MTT)，繼續培養4h，用酶標儀在570nm波長處比色，吸光度與活細胞數成反比。
參見圖2，淫羊藿苷、淫羊藿素、去甲淫羊藿素對雌激素敏感型MCF-7/BUS細胞的促增殖作用。1nM雌二醇設為100％，結果均為相對于1nM雌二醇的相對增殖率。表述為平均值±標準差，數據統計用t-檢驗(*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001與溶劑二甲基亞砜相比)。
參見圖3，淫羊藿素、去甲淫羊藿素對雌激素敏感型MCF-7/BUS細胞PR、PS2基因mRNA表達的影響。組別分別是(a.溶劑對照；b.1nM 17-β雌二醇；c.0.1μM淫羊藿素；d.1μM淫羊藿素；e.10μM淫羊藿素；f.1μM淫羊藿素+雌激素受體拮抗劑100nM ICI 182，780；g.1μM淫羊藿素；h.1μM淫羊藿素+100nM ICI 182，780；i.1nM 17-β雌二醇+100nM ICI 182，780).圖3A、圖3B分別為RT-PCR方法檢測到的PR、PS2 mRNA水平，β-actin為內標，結果所示為PR、PS2相對于β-actin的相對值。
結果顯示，與溶劑組相比，10-9mol/L E2引起MCF-7細胞的顯著增殖(P＜0.01)；10-8-10-10mol/L淫羊藿素與去甲淫羊藿素也均可引起MCF-7細胞的顯著增殖(P＜0.05或P＜0.01)；同樣濃度范圍內淫羊藿苷的促細胞增殖作用不顯著(P＞0.148)。
結果提示，淫羊藿苷經口給藥后，其主要代謝產物淫羊藿素與去甲淫羊藿素呈現顯著雌激素樣活性，目前認為雌激素樣活性作用與防治老年性癡呆有關[1]，由此可在服用淫羊藿苷后產生抗老年性癡呆作用。
實施例10三七總皂苷和淫羊藿苷對老年性癡呆大鼠模型學習記憶能力影響(1)材料與方法三七總皂苷和淫羊藿苷提取物制備與實施例1同，并組成組合物A(三七總皂苷∶淫羊藿苷重量比0.01∶0.99)和組合物B(三七總皂苷∶淫羊藿苷重量比0.50∶0.50)，濃度相當于總10g生藥中含量/ml。喜德鎮片由瑞士山德士藥廠和天津華津制藥廠合作生產，批號021085。D-半乳糖由上海華舜生物工程有限公司提供；鵝膏蕈氨酸(IBO)由Sigma公司提供。
Sprage-Dawley大鼠，清潔級，體重220～240g，雌雄各半。
將大鼠隨機分為5組設溶劑對照每天腹腔注射(ip)蒸餾水6周后，腦內雙側Meynert基底核注射生理鹽水。老年性癡呆模型組每天腹腔注射D-半乳糖50mg//kg6周，同時腦內雙側Meynert基底核注射IBO。陽性對照喜德鎮片(0.36mg//kg，腹腔注射)，組合物A和組合物B分低劑量組(均折合疊加生藥量10g/kg，灌胃)和高劑量組(均折合疊加生藥量20g/kg，灌胃)，三七總皂苷和淫羊藿苷單獨給藥組(均各為10g生藥/kg，灌胃)。造模方法均同癡呆模型組。溶劑對照組和模型組每天給予生理鹽水5ml/kg灌胃，陽性對照組給予喜德鎮片，實驗組給予組合物A和B的低、高劑量。參照大鼠立體定位解剖圖譜[4，5]，每側Meynert基底核緩慢注射1μm生理鹽水或生理鹽水溶解的IBO(1μm含IBO 5μg)。
(2)跳臺試驗于末次給藥后1小時，將大鼠放入跳臺儀中開始實驗。
將動物放入反應箱內適應環境3min，然后立即通以30v的交流電。動物受到電擊，其正常反應是跳回平臺，以躲避傷害性刺激。多數動物可能再次或多次跳至銅柵上，受到電擊又迅速跳回平臺上，如此訓練5min，記錄大鼠第一次跳下平臺的潛伏期以及5min的錯誤次數，以此作為學習成績。24后重作測驗，記錄潛伏期及3min內的錯誤次數，作為記憶保持成績。
(3)統計方法數據用均數±SD表示，各組間用t檢驗進行比較。結果見表7表7 三七總皂苷和淫羊藿苷組合物對老年性癡呆大鼠模型學習記憶能力影響(n＝10)組別 治療劑量 學習能力 記憶能力潛伏期(秒)錯誤次數(次)潛伏期(秒)錯誤次數(次)溶劑對照 生理鹽水5ml/kg63.3±8.9 1.7±0.8 159.9±18.2 1.2±0.5模型組生理鹽水5ml/kg133.2±22.3**4.9±1.2**89.3±24.4*3.3±0.9**三七總皂苷10g生藥/kg106.6±17.6 3.1±0.8 121.0±23.8#2.6±0.9淫羊藿苷 10g生藥/kg92.5±11.3#2.9±1.0#127.0±19.5#1.9±1.0組合物A 10g生藥/kg63.4±9.8 2.7±0.7 138.7±25.2#1.5±0.5#組合物A 20g生藥/kg60.8±16.7##2.4±0.8#156.3±16.3##1.2±0.6##組合物B 10g生藥/kg60.4±7.2 2.1±0.4#142.7±22.7#1.4±0.6#組合物B 20g生藥/kg60.8±16.7##2.4±0.8#156.3±14.9##1.2±0.4##喜德鎮片 0.36mg//kg89.3±18.7##3.2±1.1#126.5±28.6#1.8±0.8#與溶劑組相比，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組相比，#P＜0.01，##P＜0.01。
(4)結論大鼠灌胃相當于總生藥10g/kg、20g/kg的三七總皂苷和淫羊藿苷組合物A和組合物B，在學習能力測試中，能顯著延長老年性癡呆大鼠跳臺期潛伏期并顯著降低錯誤次數(P＜0.05)，(P＜0.01)；在記憶能力測試中，也能顯著延長老年性癡呆大鼠跳臺期潛伏期并顯著降低錯誤次數，上述作用比單用其中任何一種作用顯著增強。
實施例11三七總皂苷和淫羊藿苷對老年性癡呆大鼠模型學習記憶能力影響2(1)材料與方法參見實施例10，供試藥物為三七總皂苷和淫羊藿苷以重量比0.1∶0.9、0.15∶0.85、0.2∶0.8、0.4∶0.6的組合物A～D。
設溶劑對照(生理鹽水5ml/kg，灌胃)、陽性對照組(喜德鎮片0.36mg//kg，腹腔注射)，組合物A～D低劑量組(均折合疊加生藥量10g/kg，灌胃)和高劑量組(均折合疊加生藥量20g/kg，灌胃)。造模方法均同癡呆模型組。
結果見表8表8 三七總皂苷和淫羊藿苷組合物對老年性癡呆大鼠模型學習記憶能力影響(n＝10)組別 治療劑量 學習能力記憶能力潛伏期(秒)錯誤次數(次)潛伏期(秒)錯誤次數(次)溶劑對照 生理鹽水5ml/kg 62.9±8.1 1.9±0.7 150.9±19.2 1.5±0.4模型組 生理鹽水5ml/kg 130.7±24.4**5.1±1.2**87.9±25.6*3.5±0.6**組合物A 10g生藥/kg 100.5±12.6 3.1±0.8 123.0±22.9#2.7±0.7組合物A 20g生藥/kg 90.5±11.7#2.3±1.4#130.0±18.6#1.8±1.1組合物B 10g生藥/kg 64.3±7.5 2.8±0.9 140.7±24.6#1.4±0.3#組合物B 20g生藥/kg 61.6±12.8##2.5±0.7#155.7±16.0##1.3±0.8##組合物C 10g生藥/kg 60.9±5.7 2.3±0.5#140.8±21.9#1.4±0.4#組合物C 20g生藥/kg 62.0±17.2##2.5±0.7#150.1±10.7##1.5±0.7##組合物D 10g生藥/kg 60.9±10.0 2.2±0.7#144.6±21.5#1.4±0.7#組合物D 20g生藥/kg 61.3±15.9##2.9±0.8#150.3±12.99##1.3±0.5##喜德鎮片 0.36mg//kg 90.1±16.3##3.1±1.4#127.5±25.0#1.8±0.7#與溶劑組相比，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組相比，#P＜0.01，##P＜0.01。
(4)結論大鼠灌胃相當于總生藥10g/kg、20g/kg的三七總皂苷和淫羊藿苷組合物A～D，在學習能力測試中，能顯著延長老年性癡呆大鼠跳臺期潛伏期并顯著降低錯誤次數(P＜0.05)，(P＜0.01)；在記憶能力測試中，也能顯著延長老年性癡呆大鼠跳臺期潛伏期并顯著降低錯誤次數。
實施例12膠囊制劑及其輔料的一個實例組成 三七總皂苷 30mg淫養藿苷 150mg藥用淀粉 適量制備方法
取三七總皂苷和淫養藿苷干浸膏細粉(80-100目)加入適量淀粉，混合均勻。按以下工藝流程填充取2號空心膠囊→排列→校正方向→膠囊帽、體分開→藥物填入→殘品剔除→膠囊帽、體結合→成品(粒重250mg)。
可以根據藥劑學允許的制劑方法，制備液體制劑和固體制劑。固體制劑主要包括顆粒劑、片劑、膠囊、軟膠丸、軟膠囊、滴丸劑、栓劑。液體制劑主要包括口服液體制劑和注射液體制劑。
無需進一步詳細闡述，相信采用前面所公開的內容，本領域技術人員可最大限度地應用。因此，前面的優選具體實施方案應被理解為僅是舉例說明，而非以任何方式限制本發明的范圍。
本發明涉及的部分參考文獻1.楊華，等雌激素與阿爾茨海默病 中國臨床康復 2004；8(1)148-150。
2.盛樹力老年性癡呆的藥物治療和藥物作用靶位 2003；5(6)402-404。
3.潘竟鏘，等中藥對D-半乳糖誘導病理模型作用的研究進展 廣東醫藥 2001；11(5)1-5。
4.Riekkinen PJR，et alThe effects of THA on scopolamine and basalislesioninduced EEG slowing[J].Brain Res Bull，1991，26(4)623-637.
5.Riekkinen PJR，et alComparison of the effects of acute and chronicibotenic and quisqualic acid nucleus basalis leioning[J].Brain Res Bull，1991，27(2)199-126.
權利要求
1.一種含三七總皂苷和淫羊藿苷的組合物，三七總皂苷和淫羊藿苷是從中藥三七和淫羊藿中提取單一的具活性的有效部位，其特征是組合物的組成為三七總皂苷∶淫羊藿苷的重量比值是0.01∶0.99～0.50∶0.50。
2.根據權利要求1所述的含三七總皂苷和淫羊藿苷的組合物，其特征是組合物可與藥用賦形劑制備成藥物制劑。
3.根據權利要求2所述的藥物制劑，其特征是制劑形式主要包括液體制劑和固體制劑。
4.根據權利要求3所述的藥物制劑，其特征是固體制劑主要包括顆粒劑、片劑、膠囊、軟膠丸、滴丸劑、栓劑。
5.根據權利要求3所述的藥物制劑，其特征是液體制劑主要包括口服液體制劑和注射液體制劑。
6.根據權利要求4所述的藥物制劑，其特征是所述制劑的給藥形式主要包括口服給藥或非腸道給藥。
7.根據權利要求1-6所述的一種含三七總皂苷和淫羊藿苷的組合物的用途，其特征是該組合物在制備治療老年性癡呆癥(阿爾茨海默病和血管性癡呆)的藥物中的應用。
8.根據權利要求1-6所述的一種含三七總皂苷和淫羊藿苷的組合物的用途，其特征是該組合物在制備改善老年性癡呆癥(阿爾茨海默病和血管性癡呆)藥物中的應用。
全文摘要
本發明提供一種含三七總皂苷和淫羊藿苷的藥物組合物，該組合物組成是三七總皂苷∶淫羊藿苷的重量比值是0.01∶0.99～0.50∶0.50。組合物與藥用賦形劑可制備成主要包括液體和固體的藥物制劑。本發明提供的組合物可在制備治療和改善老年性癡呆癥(阿爾茨海默病和血管性癡呆)的藥物中的應用。本發明的組合物將兩種有效部位合用，作用比單用其中任何一種顯著增強，也顯著強于兩種藥材的常規水煎液。本發明從三七和淫羊藿藥材中提取單一的有效部位三七總皂苷和淫羊藿苷，各達到＞50％以上，并獲得用于治療老年性癡呆的兩種有效部位最佳配比，可用于研制5類以上中藥新藥，拓展了單一藥物用途。
文檔編號A61K9/00GK1626103SQ20041005369
公開日2005年6月15日 申請日期2004年8月10日 優先權日2004年8月10日
發明者樓宜嘉, 王志強, 肖幸豐, 吳洪海, 劉健 申請人:浙江大學