治療陰道及宮頸炎的中藥組合物及制備方法和質量標準的制作方法

專利名稱：治療陰道及宮頸炎的中藥組合物及制備方法和質量標準的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種藥物組合物及該組合物的制備方法和質量標準，特別涉及一種用于治療陰道及宮頸炎的中藥組合物，同時涉及該組合物氣霧劑的制備方法和質量標準。
背景技術：
陰道及宮頸炎為婦科的常見疾病，約占婦科門診患者總數的40～50％，多由淋菌、沙眼衣原體及一般化膿性菌等病原體進入損傷部位(產后、刮宮、人流術及一些宮頸損傷，或不潔性交等)而發生感染，如若不能得到有效的治療，遷延日久，病勢加重，可對婦女的健康產生不良的后果，一則進而引起子宮內膜炎，甚至盆腔炎；二是宮頸糜爛(宮頸糜爛是慢性宮頸炎的一種形式)常可引起不孕癥；三是宮頸糜爛每易形成的宮頸癌變。對宮頸糜爛的發病與治療研究，是國內外醫藥界關注的重要課題。
對于陰道及宮頸炎的主要治療方法有物理療法、藥物治療及手術治療。其中物理療法中外治法包括電熨、冷凍、激光、紅外線等，中藥外治法主要有宮頸敷藥法、陰道灌洗法，本發明所提供的中藥組合物的氣霧劑改變了以往中藥外用的諸多不便，具有劑量小、分布均勻、奏效快、無局部用藥的刺激性、使用方便等特點。

發明內容
本發明的目的在于公開一種中藥組合物；本發明的另一個目的在于公開一種治療陰道及宮頸炎的中藥組合物及該組合物氣霧劑的制備方法；本發明的第三個目的在于公開該中藥組合物的質量控制方法。
本發明目的是通過如下技術方案實現本發明藥物組合物的原料藥組成及配比如下黃柏55-65重量份莪術35-45重量份 枯礬6-9重量份上述原料優選配比為黃柏60重量份 莪術40重量份枯礬8重量份本發明氣霧劑的制備方法為以上三味，莪術加8-12倍量水，浸泡1-1.5小時，加熱提取揮發油4-6小時，收集揮發油，揮發油加0.7-0.8重量份吐溫-80乳化備用；提油后的藥液另器存放，藥渣與黃柏合并，加8-12倍量水，煎煮1-3次，每次1-3小時，濾過，濾液與提油后藥液合并，80～90℃，真空度為-0.08～-0.09Mpa減壓濃縮至60℃時相對密度為1.10-1.20的清膏，加乙醇，使含醇量達50-70％，攪勻，靜置12-36h，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，備用；枯礬加水30-40重量份加熱煮沸0.5-1小時，趁熱濾過，濾液中加入黃柏莪術提油后的藥液，加入與混合藥液的體積比1-1.7∶4的乙二醇，再加入50％聚維酮K30水溶液5-7重量份，加熱攪拌均勻，放冷，加入莪術揮發油溶液，加水80～90重量份，攪勻，靜置40-50小時，濾過，灌裝，充入與灌封體積比為2-4∶5的丙丁烷氣體，即得。
本組合物制成藥劑的質量控制方法包括鑒別和/或含量測定。
鑒別方法包括下列方法中的一種和/或幾種A取本藥物組合物制備的藥液2-3ml，加甲醇4-8ml，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液；取2-3ml缺黃柏的陰性樣品加甲醇4-8ml，搖勻，濾過，濾液作為缺黃柏陰性對照品溶液；取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得鹽酸小檗堿對照品溶液；取黃柏對照藥材0.1g，加甲醇5ml，超聲處理30-60分鐘，濾過，濾液補充甲醇至5ml，即得黃柏對照藥材溶液；吸取上述三種溶液各1μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以6∶3∶1.5∶1.5∶0.5苯-醋酸乙酯-異丙醇-甲醇-25％～28％氨水試液為展開劑，置氨蒸氣飽和的展開缸內，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視。
B取本藥物組合物制備的藥液20-30ml，置分液漏斗中，30～60℃加石油醚40-50ml，振搖，如乳化再加無水乙醇50-60ml，振搖；靜置，分取石油醚層，濃縮至約1ml，作為供試品溶液；取20-30ml缺莪術的陰性樣品置分液漏斗中，30～60℃加石油醚40-50ml，振搖，如乳化再加無水乙醇50-60ml，振搖；靜置，分取石油醚層，濃縮至約1ml，作為缺莪術陰性對照品溶液；取莪術對照藥材2-3g，30～60℃加石油醚30-40ml，超聲處理30-60分鐘，濾過，濾液濃縮至約1ml，作為對照藥材溶液；吸取上述兩種溶液各10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，60～90℃以石油醚為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛硫酸溶液，用自來水沖淋至斑點顯色清晰。
含量測定方法包括如下方法鹽酸小檗堿含量測定方法色譜條件與系統適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液與乙腈按1∶1的比例共950-1000ml，其中含作為流動相十二烷基硫酸鈉1.7-2.0g；檢測波長為265nm；理論板數按鹽酸小檗堿峰計算不低于2000。
對照品溶液的制備 稱取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每1ml含0.025-0.03mg的溶液，搖勻，即得。
供試品溶液的制備 吸取正交濃縮液1.0-1.5ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇稀釋至刻度，密塞，搖勻，濾過，取續濾液5ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，用0.45μm微孔濾膜濾過，即得。
測定法 分別吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
本發明氣霧劑為每1ml含黃柏以鹽酸小檗堿C20H18ClNO4計不得少于1.0mg-1.63mg。
本發明含量測定試驗中，陰性對照試驗表明陰性無干擾；精密度試驗RSD為0.34％，精密度良好；穩定性試驗RSD為0.48％，表明樣品溶液在24h內穩定性良好；重現性試驗RSD為0.46％，表明本含量測定試驗重現性良好；加樣回收率為99.08％，RSD為1.87％。三批樣品中鹽酸小檗堿含量測定含鹽酸小檗堿平均為1.63mg/ml。
宮糜消氣霧劑(由本藥物組合物制備而成)從陰道給藥，對苯酚膠漿、和金黃色葡萄球菌致大鼠陰道及宮頸炎有明顯的治療作用，使模型大鼠的陰道和宮頸重量指數明顯降低，病理損傷明顯好轉，體重恢復明顯，與賦形劑組比較，有顯著性差異；體外抑菌實驗表明對金黃色葡萄球菌、加特納氏菌、陰道棒狀桿菌、大腸桿菌、變形桿菌、肺炎克氏菌、綠膿桿菌、脆弱類桿菌、消化鏈球菌和白色念珠菌等10種細菌有明顯的抑制作用，其中作用最強的是金黃色葡萄球菌和加特納氏菌，其MIC50為1.56mg/ml。還能顯著降低2，4-二硝基酚致大鼠體溫升高，明顯抑制冰醋酸和熱板致小鼠的疼痛，說明宮糜消氣霧劑①具有速效和定位作用；②藥物的穩定性高；③給藥劑量準確，副作用較小；④無局部用藥的刺激性，同時具有明顯的清熱燥濕、化腐生肌的功效，對陰道及宮頸炎有良好的治療作用。下述實驗例進一步說明本發明。
實驗例1莪術揮發油的提取考察按一個處方量稱取莪術，加10倍量水浸泡1小時后，用揮發油測定器收集揮發油，觀察不同時間出油情況，按藥材采購來源不同進行3次試驗，考察提油時間，結果見表1。
表1不同采購來源的藥材揮發油收集情況

(注出油量為揮發油體積，單位為ml)從以上三批藥材提揮發油數據可以看出，每個處方量的莪術可平均出1.86ml揮發油，5小時可平均提出1.80ml，占總提出量的95.74％，可基本認為提出完全。因此，莪術提取揮發油工藝可定為加10倍量水，浸泡1小時，加熱提取揮發油5小時。收集的揮發油加8ml吐溫-80乳化備用。
實驗例2黃柏及莪術提油后藥渣的水提工藝黃柏的主要有效成分為生物堿，且大都為季銨型生物堿，季銨型生物堿溶于水，因此黃柏的提取方法可采用加水直接煎煮提取；莪術提油后的藥渣還含有水溶性成分，可與黃柏合并后加水提取。采用L9(34)正交表設計試驗，來優選水提工藝參數，選取加水量，煎煮次數，煎煮時間三個因素，每個因素設3個水平，因素水平表見表2。
表2 黃柏及莪術藥材的水提取因素水平表

表3 黃柏及莪術水提取正交試驗及試驗結果

從上述結果直觀分析，煎煮次數影響最大，其次是加水量和煎煮時間，應選擇A3B3C2，我們對各因素進行了方差分析，經方差分析，A因素(加水量)、B因素(煎煮次數)有顯著性差異，A3＞A2＞A1，B3＞B2＞B1，為此，A、B因素應選取3水平；C因素水平間無顯著性差異，從節約生產時間及能源，降低成本角度上出發，可選取C1水平；為此我們選擇A3B3C1為較合理的水提取生產工藝，即加12倍量水，煎煮3次，每次1h。
實驗例3水提液濃縮工藝的考察藥液濃縮工藝一般常用為常壓濃縮和減壓濃縮，而工廠大工業化生產時多采用多效濃縮，即減壓濃縮。因此我們采用抽真空減壓濃縮模仿工業大生產，考察藥液濃縮前后有效成分的變化，考察濃縮工藝是否合理。本工藝以鹽酸小檗堿總量變化為考察指標，具體如下取31200ml已知含量(0.1295mg/ml)的藥液，共含鹽酸小檗堿4040.40mg，減壓濃縮(80～90℃，真空度為-0.08～-0.09Mpa)至比重1.10(60℃)，共1300ml，測得鹽酸小檗堿的含量為3.0912mg/ml，共含鹽酸小檗堿4018.56mg，濃縮過程中鹽酸小檗堿的保留率為99.45％，由此可見減壓濃縮過程中鹽酸小檗堿損失很小。因此，水提藥液的濃縮采用減壓濃縮，即工業生產中采用多效濃縮是可行的。
實驗例4醇沉工藝的研究正交表我們采用L9(34)表，選擇浸膏相對密度，醇沉濃度，醇沉時間為因素，確定3個水平，以醇沉后藥液的鹽酸小檗堿含量與醇沉前藥液的鹽酸小檗堿含量相比的鹽酸小檗堿保留率為考察指標，因素水平表見表4。
表4 醇沉工藝因素水平表

正交試驗及試驗結果 見表5。
表5 醇沉工藝正交試驗結果

從上述結果直觀分析，相對密度影響最大，其次是醇沉濃度和醇沉時間，應選擇A1B3C3，我們對各因素進行了方差分析，經方差分析，A因素(相對密度)、B因素(醇沉濃度)有顯著性差異，A1＞A2＞A3，B3＞B2＞B1，為此，A因素應選取1水平、B因素應選取3水平，C因素水平間無顯著性差異，C因素從表看C3最好，但從醇沉實驗過程看，C3醇沉時間長，生產周期延長，C1醇沉時間過短，醇沉界面不太好，藥液不易濾過，而且C因素與A、B因素相比影響最小，因此從方便生產的角度選擇C2，為此我們選擇A1B3C2為較合理的醇沉生產工藝，即水提液濃縮至比重為1.10(60℃)，加乙醇使含醇量達70％，攪勻，靜置24小時，濾過。
實驗例5醇沉藥液回收乙醇工藝的考察醇液濃縮工藝一般采用減壓回收濃縮，因此我們考察減壓回收濃縮過程中藥液的鹽酸小檗堿含量的變化，確定濃縮工藝是否合理。本工藝以鹽酸小檗堿總量變化為考察指標，具體操作如下取4100ml已知含量(0.8358mg/ml)的藥液，共含鹽酸小檗堿3426.78mg，減壓回收乙醇(60～85℃，真空度為-0.08～-0.09Mpa)至無醇味，共835ml，測得鹽酸小檗堿的含量為4.0483mg/ml，共含鹽酸小檗堿3380.33mg，醇沉液回收濃縮過程中鹽酸小檗堿的保留率為98.64％，由此可見減壓回收濃縮過程對鹽酸小檗堿含量影響較小。因此，醇沉藥液回收乙醇可采用減壓回收是可行的。
實驗例6增溶劑的選擇將黃柏、莪術提取液與枯礬水溶液混合，加入莪術揮發油乳化溶液混合均勻，放置觀察，發現有沉淀產生，經檢測沉淀主要成分為鹽酸小檗堿。藥液中須加入增溶劑增加鹽酸小檗堿的溶解度。常用的水相增溶劑有乙二醇、丙二醇、丙三醇等。為了確保藥液的穩定性，我們選擇不同的增溶劑及用量與藥液混合均勻，置三角燒瓶中，觀察藥液穩定性情況，結果見表6。
表6 不同增溶劑與藥液配伍后藥液的穩定性

從上表結果看采用乙二醇作為增溶劑，且其與藥液的比例為10∶40時，可很好的保證藥液的穩定性。經過三批中試產品初步穩定性試驗考察，采用該增溶劑本品基本穩定。
實驗例7成膜劑的選擇因本品為泡沫型氣霧劑，藥液噴出時須成泡沫狀，因此藥液中須加入成膜劑，才能使藥液噴出時成泡沫狀。而常用的成膜劑有聚乙二醇(PEG)、羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)、聚維酮K30(PVP)等。為了確保藥液噴出時成泡沫狀，我們選擇不同的成膜劑及用量與藥液混合均勻，置鋁罐中，密封，充入丙丁烷氣，噴出，觀察藥液噴出時成泡沫情況，結果見表7。
表7 不同成膜劑與藥液配伍后的試驗結果

從上表結果看采用50％聚維酮K30(PVP)為成膜劑，且其與藥液的比例為7∶100時，可很好的保證藥液的成膜性。經過三批中試產品初步穩定性試驗考察，采用該成膜劑本品基本穩定。
實驗例8拋射劑量的確定本品為泡沫型氣霧劑，藥液須借拋射劑的壓力，以泡沫狀形式噴出，因此藥液灌裝后須壓入拋射劑，才能使藥液正常噴出。常用的拋射劑有氟氯烷，低級烷烴(如丙烷、丁烷、異丁烷等)，壓縮惰性氣體(如CO2、N2等)等。壓縮惰性氣體雖價廉、無毒，但蒸氣壓較高，要求容器有較高的耐壓性，還應它們的溶解性和配方特點性均存在一定的問題。氟氯烷類即氟利昂類化合物蒸氣壓較低，對容器耐壓要求不高，灌裝工藝也較簡單，但氟氯烷類化合物穩定，在大氣層不易分解，當升至大氣層的頂端受到紫外線的作用而分解出活性的元素氯，破壞大氣層中的臭氧層，造成環境污染。低級烷烴類分子量小，蒸氣壓適宜，價格低，來源廣，因此選用低級烷烴丙丁烷作為本制劑的拋射劑。為了確保藥液噴出時成泡沫狀，且保證藥液能基本全部噴出，須充入一定量的丙丁烷氣體，將配好的藥液灌封于鋁罐中，每瓶50ml藥液，然后充入不同重量的丙丁烷氣體，噴出，觀察藥液噴出時成泡沫情況及藥液的噴出總量，結果見表8。
表8 不同重量拋射劑與藥液配伍后藥液的噴出試驗結果

從上表結果看，拋射劑的多少與藥液的成膜情況無影響，只是與藥液的噴出量有影響，當每瓶灌封50ml藥液時，充入25g(相當于30ml)丙丁烷氣體，即可保證藥液完全噴出。經過三批中試產品穩定性試驗考察，采用該劑量拋射劑可保證本品藥液完全噴出。
實驗例9黃柏的薄層層析供試品溶液的制備 取本藥物組合物藥液2ml，加甲醇6ml，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液。
缺黃柏陰性對照品溶液的制備 取2ml缺黃柏的陰性樣品同法制備。
鹽酸小檗堿對照品溶液的制備 取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。
黃柏對照藥材溶液的制備 取黃柏對照藥材0.1g，加甲醇5ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液補充甲醇至5ml，即得。
照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各1μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以6∶3∶1.5∶1.5∶0.5苯-醋酸乙酯-異丙醇-甲醇-25％～28％氨水試液為展開劑，置氨蒸氣飽和的展開缸內，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視。試驗證明三批樣品的色譜中，分別在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。而缺黃柏的陰性對照液對被測成分黃柏無干擾，故黃柏薄層鑒別成立。
實驗例10莪術的薄層層析供試品溶液的制備 取本藥物組合物藥液20ml，置分液漏斗中，加30～60℃石油醚40ml，振搖(如乳化再加無水乙醇50ml，振搖)，靜置，分取石油醚層，濃縮至1ml，作為供試品溶液；缺莪術陰性對照品溶液的制備 取20ml缺莪術的陰性樣品同法制備。
莪術對照藥材溶液的制備 取莪術對照藥材2g，加30～60℃石油醚30ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至約1ml，作為對照藥材溶液。
照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以60～90℃石油醚為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛硫酸溶液，用自來水沖淋至斑點顯色清晰。試驗證明三批樣品的色譜中，分別在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。而缺莪術的陰性對照液對被測成分莪術無干擾，故莪術薄層鑒別成立。
實驗例11鹽酸小檗堿含量測定測定波長的選擇對鹽酸小檗堿對照品溶液(0.01mg/ml)進行紫外光譜掃描，結果顯示，鹽酸小檗堿在265nm處有最大吸收峰，且HPLC法在265nm波長處檢測，鹽酸小檗堿峰無干擾，故選擇265nm為檢測波長。
色譜條件的選擇選擇以0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液-乙腈(50∶50，每1000ml流動相含十二烷基硫酸鈉1.7g)為流動相；能夠較好地達到鹽酸小檗堿與其他成分分離，故選擇用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液-乙腈(50∶50，每1000ml流動相含十二烷基硫酸鈉1.7g)為流動相；柱溫室溫；流速1.0ml/min；檢測波長為265nm。理論板數按鹽酸小檗堿峰計算應不低于4000。
實驗例12標準曲線的繪制與線性范圍考察對照品溶液的制備稱取鹽酸小檗堿對照品5.00mg，置50ml量瓶中，加50％甲醇適量振搖使溶解，再加50％甲醇稀釋至刻度，密塞，搖勻，即得濃度為0.09814mg/ml的對照品溶液。
標準曲線的繪制分別精密吸取對照品溶液1.25，2.5，5.0，7.5，10.0，12.5，15.0μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖與峰面積，結果見表9。
表9 鹽酸小檗堿的量(μg)與峰面積(A)相關性

結果表明鹽酸小檗堿在0.12～1.47μg范圍內，其對照品的量與峰面積呈良好的線形關系。
實驗例13樣品測定取宮糜消氣霧劑樣品，按正文含量測定項下的方法測定鹽酸小檗堿含量，分別制備對照品溶液與供試品溶液，分別精密吸取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖與峰面積值，計算鹽酸小檗堿含量，結果見表10。
表10 宮糜消氣霧劑鹽酸小檗堿測定結果(n＝2)

根據宮糜消氣霧劑中鹽酸小檗堿含量測定結果表明，三批樣品中含鹽酸小檗堿平均為1.63mg/ml，考慮到藥材的來源，以及制劑生產，貯藏等各種因素，加之工業化大生產的特點，將含量限(幅)度暫定在下限，故暫定宮糜消氣霧劑含量限度為每1ml含黃柏以鹽酸小檗堿C20H18ClNO4計不得少于1.0mg。
實驗例14對苯酚膠漿致陰道及宮頸炎模型動物的治療作用取體重200～250g雌性大鼠，按體重均分成正常組(等容量賦形劑，用棉球適當堵塞)宮頸炎康栓陽性藥物組(0.40g/kg，0.04g/100g體重，按體公斤體重計算，相當臨床人每天用量1.2g的20倍量)，宮糜消氣霧劑小(0.27g生藥/kg，108％，0.025ml/100g體重)、中(0.54g生藥/kg，108％，0.05ml/100g體重)、大劑量(1.08g生藥/kg，108％，0.1ml/100g體重)組(按公斤體重計算，相當于臨床人每天用3.24g生藥的5、10和20倍)，用藥前稱體重，然后每鼠陰道內注射0.1ml/100g體重苯酚膠漿，每天1次，連續3次成模，正常組注射等容積蒸餾水，肉眼可見用苯酚膠漿后大鼠陰道口紅腫、有的有膿性物流出，然后各組按劑量從陰道給藥(用棉球適當固定，以下試驗中相同)，連續7天，共10天，末次藥后1小時稱體重后，用20％烏拉坦麻醉，腹主動脈取血，用血流變儀測相關指標，然后取陰道及宮頸稱重計算重量指數，再取一塊組織備檢，用10％中性甲醛固定，石蠟包埋、切片，HE染色，光鏡觀察，試驗結果見表11、12、13。
表11 宮糜消氣霧劑對苯酚膠漿陰道及宮頸炎模型動物的陰道和宮頸重量指數的影響(x±s)

與賦形劑組比#P＜0.05，與模型組比**P＜0.01表12 宮糜消氣霧劑對苯酚膠漿致大鼠陰道及宮頸炎炎癥治療作用療效積分(x±s)

與賦形劑組比#P＜0.05 ##P＜0.01，與模型組比*P＜0.05 **P＜0.01
表13 宮糜消氣霧劑對苯酚膠漿致陰道及宮頸炎模型大鼠體重的影響(x±s)

與賦形劑組比#P＜0.05，與模型組比*P＜0.05 **P＜0.01由表11、12、13可見，用苯酚膠漿可引起大鼠陰道及宮頸炎癥狀明顯，體重減輕，與賦形劑組比，有顯著性差異，說明模型成立；用宮糜消氣霧劑后，使模型大鼠的陰道和宮頸重量指數明顯降低，病理損傷明顯好轉，體重恢復明顯，與賦形劑組比，有顯著性差異，說明宮糜消氣霧劑對苯酚膠漿致大鼠陰道及宮頸炎炎癥治療作用效果明顯。
實驗例15對金黃色葡萄球菌致陰道及宮頸炎模型動物的治療作用取體重200～250g雌性大鼠，按體重均分成正常組(等容量賦形劑)宮頸炎康栓陽性藥物組(0.04g/100g體重)，宮糜消氣霧劑小(0.27g生藥/kg，108％，0.025ml/100體重，)、中(1.00g生藥/kg，108％，0.05ml/100體重)、大劑量(1.08g生藥/kg，108％，0.10ml/100體重，)組，用金黃色葡萄球菌(4×109CFU)每鼠陰道內黏膜下注射2各點，每點0.2ml，每天1次，連續3天成模，正常組注射等容積生理鹽水。肉眼可見用金黃色葡萄球菌的大鼠陰道口紅腫、有的有膿性物流出，然后各組按劑量陰道給藥，連續7天，共10天，末次藥后1小時稱重，處死動物，取陰道及宮頸稱重計算重量指數，再取一塊組織備檢，用10％中性甲醛固定，石蠟包埋、切片，HE染色，光鏡觀察，試驗結果見表14、15、16。
表14 宮糜消氣霧劑對金黃色葡萄球菌陰道及宮頸炎模型動物的陰道和宮頸重量指數的影響(x±s)

與賦形劑比##P＜0.01 與模型組比**P＜0.01(下同)表15 宮糜消氣霧劑對金黃色葡萄球菌致大鼠陰道及宮頸炎炎癥治療作用的療效積分(x±s)

與賦形劑組比#P＜0.05 ##P＜0.01，與模型組比*P＜0.05 **P＜0.01表16 宮糜消氣霧劑對金黃色葡萄球菌陰道及宮頸炎模型動物體重的影響(x±s)

與賦形劑組比##P＜0.01 與模型組比**P＜0.01由表14、15、16可見，用金黃色葡萄球菌可引起大鼠陰道及宮頸炎癥狀明顯，體重減輕，與賦形劑組組比，有顯著性差異，說明模型成立；用宮糜消氣霧劑后，使模型大鼠的陰道和宮頸重量指數明顯降低，病理損傷明顯好轉，體重恢復明顯，與賦形劑組比，有顯著性差異，說明宮糜消氣霧劑對金黃色葡萄球菌致大鼠陰道及宮頸炎炎癥治療作用效果明顯。
實驗例16體外抗菌MIC試驗供試菌種中標準菌株來自北京生物制品檢驗所菌種保存中心，其余菌株均由安徽中醫學院微生物教研室從臨床患者的宮頸分泌液中分離得到。需O2菌選用MH培養基；厭O2菌用厭O2培養基、真菌選用沙保氏培養基。其中加特納氏菌在MHA培養基加5％O型人血。
菌液的配制將個供試菌株分別接種于上述相應的培養基中，37℃培養，白色念珠菌、脆弱類桿菌、消化鏈球菌培養48h，其他細菌培養24h，選標準菌落移種于液體培養基中，白色念珠菌、脆弱類桿菌、消化鏈球菌培養24h，其他細菌培養6h后，調整細菌濃度約為108CFU/ml，備用。
含藥培養基的制備在供試培養基中分別加入受試藥物，使培養基的藥物濃度分別為200mg、100mg、50mg、25mg、12.5mg、6.25mg、3.125mg、1.56mg和0.78mg/ml，另設一個不含藥物的培養基，陽性對照含培養基的制備方法同上。
供試菌接種用接種環分別取供試菌液一環(含菌量約為104CFU/ml)接種于不同藥物濃度的培養基上，37℃溫箱(厭O2菌置厭O2袋)白色念珠菌、脆弱類桿菌、消化鏈球菌培養48h，其他細菌培養24h后，觀察結果。
結果判定在前后兩個不同梯度藥物濃度的兩個平板上，細菌生長數量有80-90％的突然減少為MIC.計算MICR、MIC90、MIC50。結果，見表17表17 宮糜消氣霧劑對60株細菌MIC(mg/ml)測定結果

由表17可見，上述10種細菌均為陰道常見感染均，其中脆弱類桿菌、消化鏈球菌為厭O2菌，常和O2菌混合感染，白色念珠菌為真菌，在引起霉菌性陰道炎后，致宮頸炎。實驗結果表明，該藥對受試10種細菌都有不同程度的抑制作用。其中作用最強的是金黃色葡萄球菌和加特納氏菌，其MIC50為1.56mg/ml。
實驗例17對2，4-二硝基酚所致大鼠的體溫升高的解熱試驗取經過篩選體溫(肛溫)在37.5～39.0℃(室溫25℃)體重180～200g雌性大鼠60只，按體重隨機均分成6組，測量正常體溫后，在背部皮下注射2％2、4-二硝基酚30mg/kg，待體溫上升超過1℃以上后，按劑量給藥，正常組(0.10ml/100g體重賦形劑)宮頸炎康栓陽性藥物組(0.04g/100g體重)，宮糜消氣霧劑小(0.27g生藥/kg，108％，0.025ml/100g體重，)、中(0.54g生藥/kg，108％，0.05ml/100g體重，)、大劑量(1.08g生藥/kg，108％，0.10ml/100g體重，)組，分別于藥后0.5、1、1.5、2、3h分別測體溫，結果見表18。
表18 宮糜消對2，4-二硝基酚致熱的解熱作用(n＝10 x±s)

與賦形劑組比*P＜0.05 **P＜0.01與模型組比#P＜0.05 ##＜P0.01由表18可見2，4-二硝基酚明顯升高大鼠體溫，用宮糜消后大鼠體溫逐漸下降，1.5h時，大劑量組作用明顯，之后盡管體溫有所下降，但與模型組比沒有顯著性差異。說明宮糜消能降低由2，4-二硝基酚所致的大鼠體溫升高，但作用時間短暫。
實驗例18熱板法鎮痛試驗取經過篩選(二次痛閾均不超過30s，大于5s)體重18～22g雌性小鼠50只，均分成5組，將恒溫水浴鍋水溫調到55℃±0.5℃，玻璃燒杯底接觸水面，加熱后作為熱刺激板。用秒表記錄小鼠自投入燒杯內至出現舔后足時間(s)作為該鼠的痛閾指標。先測正常痛閾值，然后按劑量分別陰道給藥，正常組(0.025ml/10體重賦形劑)宮頸炎康栓陽性藥物組(0.60g/kg，0.006g/10g體重，按體公斤體重計算，相當臨床人每天用量1.2g的30倍量)，宮糜消氣霧劑小(0.025ml/10g體重，0.405g生藥/kg)、中(0.025ml/10g體重，0.810g生藥/kg)、大劑量(0.025ml/10g體重，1.620g生藥/kg)組(用棉球適當堵塞)，于藥后30、60、90、120、180、240min測痛閾一次，超過60s即停止測試，按60s計，結果見表19、20。
表19 宮糜消氣霧劑對熱板致痛的抑制作用(n＝10 x±s)

與賦形劑組比*P＜0.05 **P＜0.01表20 宮糜消氣霧劑對熱板法鎮痛百分率(n＝10)

由表19、20可見宮糜消氣霧劑對熱板刺激引起的疼痛有良好的抑制作用。從30min就有明顯作用，可維持到180min，與賦形劑組比痛閾明顯提高，有非常顯著差異。
實驗例19扭體法鎮痛試驗取體重18～22g小鼠50只，雌雄兼用，隨機均分成5組，分別按表11中劑量分別從陰道給藥，給藥方法同上，連續給藥5d。末次藥后40min腹腔注射0.7％醋酸溶液0.1ml/10g體重，分別記錄注射醋酸后，各組各小鼠10min，20min內扭體次數，結果見表21。
表21 宮糜消氣霧劑對扭體法致痛的抑制作用(n＝10 x±s)

與賦形劑組比**P＜0.01由表21可見，宮糜消氣霧劑對醋酸刺激所致的疼痛有明顯抑制作用，與賦形劑組比，各劑量組均有顯著性差異。
實施例1氣霧劑的制備黃柏60kg莪術40kg枯礬8kg以上三味，莪術加10倍量水，浸泡1小時，加熱提取揮發油5小時，收集揮發油，揮發油加0.7kg吐溫-80乳化備用；提油后的藥液另器存放，藥渣與黃柏合并，加12倍量水，煎煮3次，每次1小時，濾過，濾液與提油后藥液合并，85℃，真空度為-0.08Mpa減壓濃縮至60℃時相對密度為1.10的清膏，加乙醇，使含醇量達70％，攪勻，靜置24h，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，備用；枯礬加水30kg加熱煮沸0.5小時，趁熱濾過，濾液中加入黃柏莪術提油后的藥液藥液，加入與混合藥液的體積比3∶7的乙二醇，再加入50％聚維酮K30水溶液7kg，加熱攪拌均勻，放冷，加入莪術揮發油溶液，加水85kg，攪勻，靜置48小時，濾過，灌裝，充入與灌封體積比為3∶5的丙丁烷氣體，即得。
實施例2氣霧劑的制備黃柏60kg莪術40kg枯礬8kg以上三味，莪術加8倍量水，浸泡1小時，加熱提取揮發油4小時，收集揮發油，揮發油加0.75kg吐溫-80乳化備用；提油后的藥液另器存放，藥渣與黃柏合并，加8倍量水，煎煮1次，每次1小時，濾過，濾液與提油后藥液合并，80℃，真空度為-0.08Mpa減壓濃縮至60℃時相對密度為1.10的清膏，加乙醇，使含醇量達50％，攪勻，靜置12h，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，備用；枯礬加水30kg加熱煮沸0.5小時，趁熱濾過，濾液中加入黃柏莪術提油后的藥液藥液，加入與混合藥液的體積比3∶9的乙二醇，再加入50％聚維酮K30水溶液5kg，加熱攪拌均勻，放冷，加入莪術揮發油溶液，加水80kg，攪勻，靜置40小時，濾過，灌裝，充入與灌封體積比為2∶5的丙丁烷氣體，即得。
實施例3氣霧劑的制備黃柏65kg莪術45kg枯礬9kg以上三味，莪術加10倍量水，浸泡1.5小時，加熱提取揮發油5小時，收集揮發油，揮發油加0.8kg吐溫-80乳化備用；提油后的藥液另器存放，藥渣與黃柏合并，加10倍量水，煎煮2次，每次2小時，濾過，濾液與提油后藥液合并，85℃，真空度為-0.09Mpa減壓濃縮至60℃時相對密度為1.15的清膏，加乙醇，使含醇量達60％，攪勻，靜置24h，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，備用；枯礬加水35kg加熱煮沸1小時，趁熱濾過，濾液中加入黃柏莪術提油后的藥液藥液，加入與混合藥液的體積比3∶10的乙二醇，再加入50％聚維酮K30水溶液6kg，加熱攪拌均勻，放冷，加入莪術揮發油溶液，加水85kg，攪勻，靜置45小時，濾過，灌裝，充入與灌封體積比為4∶5的丙丁烷氣體，即得。
實施例4氣霧劑的制備黃柏70kg莪術50kg枯礬10kg以上三味，莪術加12倍量水，浸泡1.5小時，加熱提取揮發油6小時，收集揮發油，揮發油加0.8kg吐溫-80乳化備用；提油后的藥液另器存放，藥渣與黃柏合并，加12倍量水，煎煮3次，每次3小時，濾過，濾液與提油后藥液合并，80～90℃，真空度為-0.08～-0.09Mpa減壓濃縮至60℃時相對密度為1.20的清膏，加乙醇，使含醇量達70％，攪勻，靜置36h，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，備用；枯礬加水40kg加熱煮沸1小時，趁熱濾過，濾液中加入黃柏莪術提油后的藥液藥液，加入與混合藥液的體積比1∶4的乙二醇，再加入50％聚維酮K30水溶液7kg，加熱攪拌均勻，放冷，加入莪術揮發油溶液，加水90kg，攪勻，靜置50小時，濾過，灌裝，充入與灌封體積比為3∶5的丙丁烷氣體，即得。
實施例5氣霧劑的質量控制方法A取本藥物組合物制備的藥液3ml，加甲醇6ml，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液；取3ml缺黃柏的陰性樣品加甲醇6ml，搖勻，濾過，濾液作為缺黃柏陰性對照品溶液；取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得鹽酸小檗堿對照品溶液；取黃柏對照藥材0.1g，加甲醇5ml，超聲處理40分鐘，濾過，濾液補充甲醇至5ml，即得黃柏對照藥材溶液；吸取上述三種溶液各1μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以6∶3∶1.5∶1.5∶0.5苯-醋酸乙酯-異丙醇-甲醇-25％氨水試液為展開劑，置氨蒸氣飽和的展開缸內，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視。
B取本藥物組合物制備的藥液25ml，置分液漏斗中，40℃加石油醚45ml，振搖，如乳化再加無水乙醇55ml，振搖；靜置，分取石油醚層，濃縮至1ml，作為供試品溶液；取25ml缺莪術的陰性樣品置分液漏斗中，30～60℃加石油醚45ml，振搖，如乳化再加無水乙醇55ml，振搖；靜置，分取石油醚層，濃縮至約1ml，作為缺莪術陰性對照品溶液；取莪術對照藥材3g，40℃加石油醚35ml，超聲處理40分鐘，濾過，濾液濃縮至1ml，作為對照藥材溶液；吸取上述兩種溶液各10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，70℃以石油醚為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛硫酸溶液，用自來水沖淋至斑點顯色清晰。
C色譜條件與系統適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液與乙腈按1∶1的比例共950ml，其中含作為流動相十二烷基硫酸鈉2.0g；檢測波長為265nm；理論板數按鹽酸小檗堿峰計算不低于2000。
對照品溶液的制備 稱取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每1ml含0.03mg的溶液，搖勻，即得。
供試品溶液的制備 吸取正交濃縮液1.5ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇稀釋至刻度，密塞，搖勻，濾過，取續濾液5ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，用0.45μm微孔濾膜濾過，即得。
測定法 分別吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
本藥物組合物的氣霧劑為每1ml含黃柏以鹽酸小檗堿C20H18ClNO4計不得少于1.60mg。
實施例6氣霧劑的質量控制方法A取本藥物組合物制備的藥液2.5ml，加甲醇8ml，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液；取2.5ml缺黃柏的陰性樣品加甲醇8ml，搖勻，濾過，濾液作為缺黃柏陰性對照品溶液；取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得鹽酸小檗堿對照品溶液；取黃柏對照藥材0.1g，加甲醇5ml，超聲處理50分鐘，濾過，濾液補充甲醇至5ml，即得黃柏對照藥材溶液；吸取上述三種溶液各1μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以6∶3∶1.5∶1.5∶0.5苯-醋酸乙酯-異丙醇-甲醇-28％氨水試液為展開劑，置氨蒸氣飽和的展開缸內，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視。
B取本藥物組合物制備的藥液30ml，置分液漏斗中，50℃加石油醚50ml，振搖，如乳化再加無水乙醇60ml，振搖；靜置，分取石油醚層，濃縮至1ml，作為供試品溶液；取30ml缺莪術的陰性樣品置分液漏斗中，50℃加石油醚50ml，振搖，如乳化再加無水乙醇60ml，振搖；靜置，分取石油醚層，濃縮至約1ml，作為缺莪術陰性對照品溶液；取莪術對照藥材2.5g，50℃加石油醚40ml，超聲處理50分鐘，濾過，濾液濃縮至1ml，作為對照藥材溶液；吸取上述兩種溶液各10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，80℃以石油醚為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛硫酸溶液，用自來水沖淋至斑點顯色清晰。
C色譜條件與系統適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液與乙腈按1∶1的比例共1000ml，其中含作為流動相十二烷基硫酸鈉1.8g；檢測波長為265nm；理論板數按鹽酸小檗堿峰計算不低于2000。
對照品溶液的制備 稱取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每1ml含0.025mg的溶液，搖勻，即得。
供試品溶液的制備 吸取正交濃縮液1.3ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇稀釋至刻度，密塞，搖勻，濾過，取續濾液5ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，用0.45μm微孔濾膜濾過，即得。
測定法 分別吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
本藥物組合物的氣霧劑為每1ml含黃柏以鹽酸小檗堿C20H18ClNO4計不得少于1.40mg。
實施例7氣霧劑的制備取黃柏60kg、莪術50kg和枯礬8kg，按上述方法制成氣霧劑，陰道炎患者使用，每日1次。
實施例8氣霧劑的制備取黃柏70kg、莪術40kg、枯礬10kg按上述方法制成氣霧劑，宮頸炎患者使用，每日1次。
權利要求
1.一種治療陰道及宮頸炎的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由如下原料藥按重量份組成黃柏55-65重量份莪術35-45重量份枯礬6-9重量份。
2.如權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由如下原料藥按重量份組成黃柏60重量份莪術40重量份枯礬8重量份。
3.如權利要求1或2所述的藥物組合物氣霧劑的制備方法，其特征在于該方法包括以下步驟按照原料藥重量比例取莪術加8-12倍量水，浸泡1-1.5小時，加熱提取揮發油4-6小時，收集揮發油，揮發油加0.7-0.8重量份吐溫-80乳化備用；提油后的藥液另器存放，藥渣與黃柏合并，加8-12倍量水，煎煮1-3次，每次1-3小時，濾過，濾液與提油后藥液合并，80～90℃，真空度為-0.08～-0.09Mpa減壓濃縮至60℃時相對密度為1.10-1.20的清膏，加乙醇，使含醇量達50-70％，攪勻，靜置12-36h，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，備用；枯礬加水30-40重量份加熱煮沸0.5-1小時，趁熱濾過，濾液中加入黃柏莪術提油后的藥液，加入與混合藥液的體積比1∶4-3∶7的乙二醇，再加入50％聚維酮K30水溶液5-7重量份，加熱攪拌均勻，放冷，加入莪術揮發油溶液，加水80～90重量份，攪勻，靜置40-50小時，濾過，灌裝，充入與灌封體積比為2-4∶5的丙丁烷氣體，即得。
4.如權利要求3所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法包括以下步驟按照原料藥重量比例取莪術加10倍量水，浸泡1小時，加熱提取揮發油5小時，收集揮發油，揮發油加0.75重量份吐溫-80乳化備用；提油后的藥液另器存放，藥渣與黃柏合并，加12倍量水，煎煮3次，每次1小時，濾過，濾液與提油后藥液合并，80～90℃，真空度為-0.08～-0.09Mpa減壓濃縮至60℃時相對密度為1.10的清膏，加乙醇，使含醇量達70％，攪勻，靜置24h，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，備用；枯礬加水30重量份加熱煮沸0.5小時，趁熱濾過，濾液中加入黃柏莪術提油后的藥液，加入與混合藥液的體積比1∶4的乙二醇，再加入50％聚維酮K30水溶液7重量份，加熱攪拌均勻，放冷，加入莪術揮發油溶液，加水85重量份，攪勻，靜置48小時，濾過，灌裝，充入與灌封體積比為3∶5的丙丁烷氣體，即得。
5.如權利要求1或2所述的藥物組合物的質量控制方法，其特征在于該方法中的鑒別方法包括如下鑒別中的一種A取本藥物組合物制備的藥液2-3ml，加甲醇4-8ml，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液；取2-3ml缺黃柏的陰性樣品加甲醇4-8ml，搖勻，濾過，濾液作為缺黃柏陰性對照品溶液；取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得鹽酸小檗堿對照品溶液；取黃柏對照藥材0.1g，加甲醇5ml，超聲處理30-60分鐘，濾過，濾液補充甲醇至5ml，即得黃柏對照藥材溶液；吸取上述三種溶液各1μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以6∶3∶1.5∶1.5∶0.5苯-醋酸乙酯-異丙醇-甲醇-25％～28％氨水試液為展開劑，置氨蒸氣飽和的展開缸內，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；B取本藥物組合物制備的藥液20-30ml，置分液漏斗中，30～60℃加石油醚40-50ml，振搖，如乳化再加無水乙醇50-60ml，振搖；靜置，分取石油醚層，濃縮至1ml，作為供試品溶液；取20-30ml缺莪術的陰性樣品置分液漏斗中，30～60℃加石油醚40-50ml，振搖，如乳化再加無水乙醇50-60ml，振搖；靜置，分取石油醚層，濃縮至約1ml，作為缺莪術陰性對照品溶液；取莪術對照藥材2-3g，30～60℃加石油醚30-40ml，超聲處理30-60分鐘，濾過，濾液濃縮至1ml，作為對照藥材溶液；吸取上述兩種溶液各10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，60～90℃以石油醚為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛硫酸溶液，用自來水沖淋至斑點顯色清晰。
6.如權利要求5所述的藥物組合物的質量控制方法，其特征在于該方法中的鑒別方法包括如下鑒別中的一種A取本藥物組合物藥液2ml，加甲醇6ml，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液；取2ml缺黃柏的陰性樣品加甲醇6ml，搖勻，濾過，濾液作為缺黃柏陰性對照品溶液；取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得鹽酸小檗堿對照品溶液；取黃柏對照藥材0.1g，加甲醇5ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液補充甲醇至5ml，即得黃柏對照藥材溶液；吸取上面三種溶液各1μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以6∶3∶1.5∶1.5∶0.5苯-醋酸乙酯-異丙醇-甲醇-25％～28％氨水試液為展開劑，置氨蒸氣飽和的展開缸內，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；B取本藥物組合物制備的藥液20ml，置分液漏斗中，30～60℃加石油醚40ml，振搖，如乳化再加無水乙醇50ml，振搖；靜置，分取石油醚層，濃縮至1ml，作為供試品溶液；取20ml缺莪術的陰性樣品置分液漏斗中，30～60℃加石油醚40ml，振搖，如乳化再加無水乙醇50ml，振搖；靜置，分取石油醚層，濃縮至1ml，作為缺莪術陰性對照品溶液；取莪術對照藥材2g，30～60℃加石油醚30ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至1ml，作為對照藥材溶液；吸取上述兩種溶液各10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，60～90℃以石油醚為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛硫酸溶液，用自來水沖淋至斑點顯色清晰。
7.如權利要求1或2所述的藥物組合物的質量控制方法，其特征在于該方法中的含量測定為包括如下測定方法色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液與乙腈按1∶1的比例共950-1000ml，其中含作為流動相十二烷基硫酸鈉1.7-2.0g；檢測波長為265nm；板數按鹽酸小檗堿峰計算不低于2000；對照品溶液的制備 稱取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每1ml含0.025-0.03mg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備 吸取正交濃縮液1.0-1.5ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇稀釋至刻度，密塞，搖勻，濾過，取續濾液5ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，用0.45μm微孔濾膜濾過，即得；測定法 分別吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得；本藥物組合物的氣霧劑為每1ml含黃柏以鹽酸小檗堿C20H18ClNO4計不得少于1.0mg-1.63mg。
8.如權利要求7所述的藥物組合物的質量控制方法，其特征在于該方法中的含量測定為包括如下測定方法色譜條件與系統適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液與乙腈按1∶1的比例共1000ml，其中含作為流動相十二烷基硫酸鈉1.7g；檢測波長為265nm；理論板數按鹽酸小檗堿峰計算不低于2000；對照品溶液的制備 稱取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每1ml含0.025mg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備 吸取正交濃縮液1.0ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇稀釋至刻度，密塞，搖勻，濾過，取續濾液5ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，用0.45μm微孔濾膜濾過，即得；測定法 分別吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得；本藥物組合物的氣霧劑為每1ml含黃柏以鹽酸小檗堿C20H18ClNO4計不得少于1.0mg。
9.如權利要求1或2所述的藥物組合物的質量控制方法，其特征在于該方法包括如下方法中一種A取本藥物組合物制備的藥液2-3ml，加甲醇4-8ml，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液；取2-3ml缺黃柏的陰性樣品加甲醇4-8ml，搖勻，濾過，濾液作為缺黃柏陰性對照品溶液；取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得鹽酸小檗堿對照品溶液；取黃柏對照藥材0.1g，加甲醇5ml，超聲處理30-60分鐘，濾過，濾液補充甲醇至5ml，即得黃柏對照藥材溶液；吸取上述三種溶液各1μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以6∶3∶1.5∶1.5∶0.5苯-醋酸乙酯-異丙醇-甲醇-25％～28％氨水試液為展開劑，置氨蒸氣飽和的展開缸內，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；B取本藥物組合物制備的藥液20-30ml，置分液漏斗中，30～60℃加石油醚40-50ml，振搖，如乳化再加無水乙醇50-60ml，振搖；靜置，分取石油醚層，濃縮至1ml，作為供試品溶液；取20-30ml缺莪術的陰性樣品置分液漏斗中，30～60℃加石油醚40-50ml，振搖，如乳化再加無水乙醇50-60ml，振搖；靜置，分取石油醚層，濃縮至約1ml，作為缺莪術陰性對照品溶液；取莪術對照藥材2-3g，30～60℃加石油醚30-40ml，超聲處理30-60分鐘，濾過，濾液濃縮至1ml，作為對照藥材溶液；吸取上述兩種溶液各10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，60～90℃以石油醚為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛硫酸溶液，用自來水沖淋至斑點顯色清晰；C色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液與乙腈按1∶1的比例共950-1000ml，其中含作為流動相十二烷基硫酸鈉1.7-2.0g；檢測波長為265nm；理論板數按鹽酸小檗堿峰計算不低于2000；對照品溶液的制備稱取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每1ml含0.025-0.03mg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備吸取正交濃縮液1.0-1.5ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇稀釋至刻度，密塞，搖勻，濾過，取續濾液5ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，用0.45μm微孔濾膜濾過，即得；測定法 分別吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得；本藥物組合物的氣霧劑為每1ml含黃柏以鹽酸小檗堿C20H18ClNO4計不得少于1.0mg-1.63mg。
10.如權利要求9所述的藥物組合物的質量控制方法，其特征在于該方法包括如下方法中一種A取本藥物組合物藥液2ml，加甲醇6ml，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液；取2ml缺黃柏的陰性樣品加甲醇6ml，搖勻，濾過，濾液作為缺黃柏陰性對照品溶液；取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得鹽酸小檗堿對照品溶液；取黃柏對照藥材0.1g，加甲醇5ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液補充甲醇至5ml，即得黃柏對照藥材溶液；吸取上面三種溶液各1μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以6∶3∶1.5∶1.5∶0.5苯-醋酸乙酯-異丙醇-甲醇-25％～28％氨水試液為展開劑，置氨蒸氣飽和的展開缸內，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；B取本藥物組合物制備的藥液20ml，置分液漏斗中，30～60℃加石油醚40ml，振搖，如乳化再加無水乙醇50ml，振搖；靜置，分取石油醚層，濃縮至1ml，作為供試品溶液；取20ml缺莪術的陰性樣品置分液漏斗中，30～60℃加石油醚40ml，振搖，如乳化再加無水乙醇50ml，振搖；靜置，分取石油醚層，濃縮至1ml，作為缺莪術陰性對照品溶液；取莪術對照藥材2g，30～60℃加石油醚30ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至1ml，作為對照藥材溶液；吸取上述兩種溶液各10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，60～90℃以石油醚為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛硫酸溶液，用自來水沖淋至斑點顯色清晰；C色譜條件與系統適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液與乙腈按1∶1的比例共1000ml，其中含作為流動相十二烷基硫酸鈉1.7g；檢測波長為265nm；理論板數按鹽酸小檗堿峰計算不低于2000；對照品溶液的制備 稱取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每1ml含0.025mg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備 吸取正交濃縮液1.0ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇稀釋至刻度，密塞，搖勻，濾過，取續濾液5ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，用0.45μm微孔濾膜濾過，即得；測定法 分別吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得；本藥物組合物的氣霧劑為每1ml含黃柏以鹽酸小檗堿C20H18ClNO4計不得少于1.0mg。
11.如權利要求1或2所述的藥物組合物在制備治療陰道炎或宮頸炎的藥物中的應用。
12.如權利要求11所述的藥物組合物的應用，其特征在于所述的治療陰道炎或宮頸炎是指抑制疼痛、抑制充血水腫、減少炎細胞浸潤、抑制膿腫、炎性肉芽組織或纖維增生。
13.如權利要求11所述的藥物組合物的應用，其特征在于所述的治療陰道炎或宮頸炎是指抑制金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、變形桿菌、肺炎克氏菌、綠膿桿菌、加特納氏菌、脆弱類桿菌、消化鏈球菌、白色念珠菌或陰道棒狀桿菌。
全文摘要
本發明公開一種用于治療陰道及宮頸炎的中藥組合物，同時公開該組合物氣霧劑的制備方法和質量標準。該中藥組合物主要由黃柏、莪術、枯礬組成。氣霧劑的制備方法為莪術浸泡，加熱提取揮發油，乳化備用；藥渣與黃柏合并，煎煮濾過，濾液與提油后藥液合并，減壓濃縮加乙醇，攪勻，靜置濾過；枯礬加熱濾過，濾液中加黃柏莪術提油后的藥液，加入乙二醇、聚維酮K30水溶液，加熱攪拌放冷，加入莪術揮發油溶液，加水攪勻靜置濾過，灌裝，充入丙丁烷氣體，即得。本組合物制成藥劑的質量控制方法包括鑒別和含量測定，鑒別方法包括黃柏及莪術的薄層色譜法試驗；含量測定方法包括鹽酸小檗堿含量測定。本藥物組合物具有明顯的清熱燥濕、化腐生肌的功效，對陰道及宮頸炎有良好的治療作用。
文檔編號A61P31/00GK1718237SQ20041006882
公開日2006年1月11日 申請日期2004年7月8日 優先權日2004年7月8日
發明者韓冰, 朱成舉 申請人:黃文峰