專利名稱：人溶菌酶在制備治療痤瘡的化妝品中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及人溶菌酶的新用途，特別是人溶菌酶在化妝品領域的新用途。
背景技術：
由金黃色葡萄球菌、表葡菌、丙酸桿菌引起的痤瘡非常普遍，一般的人都采用化妝品來減輕癥狀或治療，現有化妝品治療痤瘡產品大部分使用抗生素，由于抗生素長期使用細菌產生耐藥性，所以治療痤瘡效果不理想，并且毒副作用非常大。抗生素創造了許多醫學奇跡，使許多疾病消失無蹤，如肺炎、腦膜炎、產褥熱、敗血癥、結核等。然而，耐藥菌的發展令人觸目驚心。如耐青霉素的肺炎鏈球菌，過去對青霉素、紅霉素、磺胺等藥品都很敏感，現在幾乎“刀槍不入”。肺炎克雷伯氏菌對西力欣、復達欣等16種高檔抗生素的耐藥性高達51.85％-100％。而耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌(MRSA)除萬古霉素外已經無藥可治，從細菌的耐藥發展史可以看出，在某種新的抗生素出現以后，就有一批耐藥菌株出現，而且在化妝品中添加抗生素藥物是不被允許的，所以目前針對痤瘡還沒有理想的化妝品。
發明內容
本發明的目的是克服上述不足問題，提供一種人溶菌酶在制備治療痤瘡的化妝品中的新用途，不過敏，不耐藥，無副作用，效果佳。
實際上，本發明涉及人溶菌酶在制備治療痤瘡的化妝品中的應用，尤其是人溶菌酶在制備治療由金黃色葡萄球菌、表葡菌、丙酸桿菌或螨蟲引起的痤瘡的化妝品中的應用。
所述人溶菌酶為基因工程表達的重組人溶菌酶或基因工程表達人溶菌酶的氨基端帶有(谷氨酸-丙氨酸)2或(谷氨酸-丙氨酸)3修飾的人溶菌酶或基因工程表達或化學合成突變體重組人溶菌酶。所述化妝品中含有人溶菌酶300U～300萬U/mL/g。還可以加入殺螨止癢劑SM-650。化妝品為系統列護膚品，如洗面奶、化妝水、護膚膏、面霜、乳液和面膜等，具體配方及生產工藝如下所述1、護膚膏配方(重量份數)(1)重組人溶菌酶 300U～300萬U/mL/g(2)二甲基硅油200cst 2.0-4.0(3)18醇 3.0-6.0(4)辛碳癸酸甘油酯/GTCC2-5.0(5)棕櫚酸異辛酯/GD-5103 4.0-7.0(6)維生素E/VE 0.3-0.7(7)乳化劑Montanov 68 1.0-3.0(8)甘油 5-15(9)乳化劑HR-S11.0-3.0(10)透明脂酸HA0.01-0.04(11)增稠劑SepiGEL305 0.1-1
(12)杰瑪-II 1.0-2.0(13)香精 0.10-0.20(14)去離子水 71.-77.
(15)殺螨止癢劑SM-650 0.5～1生產工藝1、將原料二甲基硅油200cst、18醇、辛碳癸酸甘油酯/GTCC、棕櫚酸異辛酯/GD-5103、維生素E/VE、乳化劑Montanov68加入油相化料鍋中，攪拌加熱到85℃；2、將原料甘油、乳化劑HR-S1、透明脂酸HA、杰瓊-II和去離子水加至乳化鍋中加熱攪拌至87-89℃；3、啟動真空泵將乳化鍋抽真空到0.06Mpa，停止真空，將油相抽進乳化鍋內高速均質10分鐘，攪拌轉速70轉，高速均質后停止；低速均質10分鐘，停止均質，繼續攪拌10分鐘，轉速為60轉；4、通水慢速冷卻，溫度60℃時加入原料增稠劑SepiGEL305和殺螨止癢劑SM-650均質2分鐘后真空脫氣；5、當45℃時加入原料去離子水和人溶菌酶溶液，攪拌至40℃時停機出料，(在符合GMP要求的制藥工廠，按制藥規程完成)制成護膚膏。
2、面霜配方(重量份)(1)重組人溶菌酶 300U～300萬U/mL/g(2)二甲基硅油200cst 2.0-4.0(3)18醇 3.0-6.0(4)辛碳癸酸甘油酯/GTCC 2-5.0(5)棕櫚酸異辛酯/GD-5103 4.0-7.0(6)維生素E/VE0.2-1.2
(7)乳化劑Montanov 681.0-3.0(8)甘油 5-8(9)乳化劑HR-S11.0-3.0(10)透明脂酸HA 0.01-0.04(11)增稠劑SepiGEL3050.1-.5(12)杰瓊-II 1.0-2.0(13)香精0.1-0.2(14)去離子水71.0-76.0(15)殺螨止癢劑SM-6500.5～1生產工藝1、將原料二甲基硅油200cst、18醇、辛碳癸酸甘油酯/GTCC、棕櫚酸異辛酯/GD-5103、維生素E/VE、乳化劑Montanov68加入油相化料鍋中，攪拌加熱到85℃；2、將原料甘油、乳化劑HR-S1、透明脂酸HA、杰瓊-II和去離子水加至乳化鍋中加熱攪拌至87-89℃；3、啟動真空泵將乳化鍋抽真空到0.06Mpa，停止真空，將油相抽進乳化鍋內高速均質10分鐘，攪拌轉速70轉，高速均質后停止；低速均質10分鐘，停止均質，繼續攪拌10分鐘，轉速為60轉；4、通水慢速冷卻，溫度60℃時加入原料增稠劑SepiGEL305和殺螨止癢劑SM-650均質2分鐘后真空脫氣；5、當45℃時加入原料去離子水和人溶菌酶溶液，攪拌至40℃時停機出料，(在符合GMP要求的制藥工廠，按制藥規程完成)制成面霜。
3、乳液配方(重量份)(1)重組人溶菌酶300U～300萬U/mL/g
(2)二甲基硅油200cst 2.0-5.0(3)18醇 3.-5.0(4)辛碳癸酸甘油酯/GTCC 2-5.0(5)棕櫚酸異辛酯/GD-5103 4.0-7.0(6)維生素E/VE0.3-0.7(7)乳化劑Montanov 68 1.0-3.0(8)甘油 5-8(9)乳化劑HR-S11.0-4.0(10)透明脂酸HA 0.01-0.04(11)杰瓊-II 1.0-2.0(12)香精 0.10-0.20(13)去離子水 70.0-76.0(14)殺螨止癢劑SM-650 0.5～1生產工藝1、將原料二甲基硅油200cst、18醇、辛碳癸酸甘油酯/GTCC、棕櫚酸異辛酯/GD-5103、維生素E/VE、乳化劑Montanov68加入油相化料鍋中，攪拌加熱到85℃；2、將原料甘油、乳化劑HR-S1、透明脂酸HA、杰瓊-II和去離子水加至乳化鍋中加熱攪拌至87-89℃；3、啟動真空泵將乳化鍋抽真空到0.06Mpa，停止真空，將油相抽進乳化鍋內高速均質10分鐘，攪拌轉速70轉，高速均質后停止；低速均質10分鐘，停止均質，繼續攪拌10分鐘，轉速為60轉；4、通水慢速冷卻，溫度60℃時加入殺螨止癢劑SM-650均質2分鐘后真空脫氣；5、當45℃時加入原料去離子水和人溶菌酶溶液，攪拌至40℃時停機出料，(在符合GMP要求的制藥工廠，按制藥規程完成)制成乳液。
4、面膜配方(重量份)(1)重組人溶菌酶 300U～300萬U/mL/g(2)卡波樹脂CP9410.2-0.5(3)羧甲基纖維素CMC 0.3-0.6(4)聚乙烯醇1788(PVA)7-10(5)甘油 6-8(6)吐溫-80(T-80)0.5-1.5(7)氮酮 0.3-1.0(8)乙醇 5-10(9)香精 0.1-0.5(10)水 67.6-80.45(11)杰瑪-II 0.15-0.3(12)殺螨止癢劑SM-6500.5～1生產工藝1、首先將原料卡波樹脂941和羧甲基纖維素CMC均勻分散于甘油中，在攪拌情況下將離子水加入充分混均勻，此過程應在生產前4小時備好。之后攪拌下加入原料聚乙烯醇1788。2、將攪拌均勻的1加入乳化鍋內，然后加入吐溫-80、氮酮和水溶性硅油攪拌加熱到75℃，啟動均質，高速均質10分鐘，然后停止高速均質，低速均質15分鐘后停止，再繼續攪拌10分鐘，攪拌轉速為60轉/分。3、通過冷卻水使其慢速冷卻，當溫度達到50℃加入乙醇和香精和殺螨止癢劑SM-650然后繼續攪拌到冷卻，并在溫度低于45℃時加入人溶菌酶和杰瓊后均質2分鐘，之后進行真空脫氣。攪拌到物料40℃停機出料，制備成治療痤瘡的面膜成品。(此膜劑型要在符合GMP要求的制藥工廠，按制藥規程完成)。
5、化妝水將純度95％～99％的基因重組人溶菌酶制得1500U～30萬U/ml/g，磷酸鹽緩沖液10～20mM(pH6.0～7.5)75～85％、5～25％丙二醇或丙三醇、5～15％2-吡咯烷酮-5-羧酸鈉、萬分之1～5吐溫80，1～5％水溶性氮酮、尼泊金0.01～0.05％、山梨酸鉀0.01～0.1％，在常溫下混合均質，制成化妝水。
上述配方中的重組人溶菌酶由大連奇龍生物技術研究所提供，其它原料由北京日化研究所提供。
為了更好地理解本發明的實質，下面將用基因重組人溶菌酶的藥理試驗及結果來說明其在化妝品領域中的針對痤瘡的新用途。
基因重組人溶菌酶以配制200毫升培養基為基準，用H3PO44-8毫升、MgSO41-5克，K2SO42-6克，KOH1-3克，CaSO42H2O1-3.5克，加蒸餾水至200毫升，高壓滅菌后接種甘油管種子，搖床轉數為每分鐘250轉，培養溫度為20-35℃，在恒溫床上培養36-48小時。進行種子罐培養后進行生產罐培養。將發酵表達完成的培養液進行提取純化，對提取純化的蛋白濃縮液冰凍干燥，測定蛋白量、純度和重組人溶菌酶活性(30000U/mg)保存。
一、基因重組人溶菌酶(HLZ)體外抗菌作用評價藥品及試劑1、基因重組人溶菌酶濃縮液(Human Lysozyme HLZ)活性單位30000單位/mL，由大連奇龍生物技術研究所提供，
2、對照溶菌酶(contral Lysozyme，CLZ)白色粉未，活性單位50000單位/mg，美國SIGMA公司產品，批號L6876。
3、克拉霉素效價948μ/mg，中國藥品生物制品檢定所標準品，批號4、羅紅霉素效價878μ/mg，中國藥品生物制品檢定所標準品，批號5、注射用阿莫西林哈爾濱制藥廠產品，批號010504。
6、瓊脂糖(B10WEST AGAROSE)7、三羥甲基氨基甲烷(Tris)成都化學試驗廠，批號010211試驗菌株所用菌株均為2002.4～2003.9月于四川、北京地區收集的臨床分離致病菌。經本室用API方法重新鑒定后用于試驗。
質控菌株金黃色葡萄球菌ATCC25923腸埃希菌ATCC25922銅綠假單孢菌ATCC27853培養基1、Tris-HCl緩沖液0.1M Tris 100ml，0.1M HCl 70ml，HighWater 800ml，測PH值，用HCl溶液調至PH7.2，加High Water至1000ml。
2、Tris-HCl脂瓊養基在Tris-Cl緩沖液中加入脂瓊糖116℃無菌后使用。
3、M-H培養基中國藥品生物制品檢定所產品，M-H肉湯培養基稱取25g加1000ml蒸餾水，加熱溶解，分裝，高壓滅菌，116℃20分鐘。M-H固體培養基稱取36g，加1000ml蒸餾水，高壓滅菌，116℃20分鐘，用于革蘭陽性、陰性需氧菌的藥敏試驗。
4、血培養基，即在M-H培養基中加5-10％脫纖維兔血配制而成，用于腸球菌、鏈球菌的藥敏試驗。
試驗方法采用瓊脂二倍稀釋法測定受試藥物對試驗菌株的最低抑菌濃度(MIC)。將受試藥物用滅菌蒸餾水溶解，適當稀釋。分別取1ml藥液加9ml融化的Tris-HCl瓊脂糖固體培養基混勻，以二倍稀釋，制備系列含藥平皿。每皿所含藥物終濃度分別為4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.06、0.03……0.001mg/ml；用多點接種儀(DenleyA400，England)將稀釋至105CFU/ml的試驗菌液接種于各含藥平皿表面，置于37℃培養8-10小時，取出分別吸取6ml融化的M-H培養基(50℃)覆蓋上述系列平皿表面，再置于37℃培養10小時取出，觀察結果，以無細菌生長平皿內所含最低藥物濃度為該菌的最低抑菌濃度(MIC)。
試驗結果(1)人溶菌酶對臨床分離菌株的體外抗菌活性見表1。(2)人溶菌酶對379株臨床分離致病菌的MIC50、MIC90見表1。
根據以上試驗結果表明人溶菌酶體外具有一定抗菌作用，對耐藥菌株的抗菌活性也有很好的作用。人溶菌酶是一種小分子蛋白質，存在于機體的淚液、痰、鼻涕、白細胞和血清中，對多種革蘭氏陽性菌和少數革蘭氏陰性菌有殺菌作用，基因重組人溶菌酶(HumanLysozyme)主要切斷肽聚糖中N-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰胞壁酸之間的β-1、4糖苷鍵之間的聯結，破壞肽聚糖支架，引起細菌裂解。
表1 人溶菌酶、雞溶菌酶、克拉霉素和羅紅霉素體外抗菌活性
表4
表5
如上所述，在步驟16以后，利用如表3所示的新的液晶驅動電壓vy和vx，可以得到新的亮度電平新_yi(i表示灰度指數)(步驟18)。
圖5為表示灰度數與新的亮度電平關系的圖，以升序排列。x軸和y軸分別表示灰度數目和新的亮度電平。
例如，假設新的亮度電平由亮度電平發生器50獲得，G()的γ為3.2，灰度數N＝21，圖像信號可以有的不同尺寸數目為28，v0＝149，v1＝150，y0＝45.688和y1＝46.677，則表3所示的新的液晶驅動電壓vy和vx和新的亮度電平新_y可以用表6和圖5表示。
表6
<p>續表1
注HLZ指人溶菌酶，CLZ指對照溶菌酶(雞溶菌酶)，CLA指克拉霉素，ROX指羅紅霉素二、重組人溶菌酶(HLZ)加殺螨止癢劑SM-650體外殺螨作用評價1、基因重組人溶菌酶濃縮液活性單位300單位/mL試驗藥品及試劑1、基因重組人溶菌酶濃縮液(Human Lysozyme HLZ)活性單位300單位/mL，由大連奇龍生物技術研究所提供，2、殺螨止癢劑SM-650白色粉未，純度為≥99％，ph6～8，生產單位北京耐特生化技術研究所試驗螨蟲所用螨蟲標本為第四軍醫大學臨床門診痤瘡病人。
試驗方法體外殺螨蟲活性測定采用圖片法測定了人溶菌酶(HLZ)加殺螨止癢劑SM-650最低殺螨濃度(MIC)。將螨蟲標本分離到玻片上，用人溶菌酶(HLZ)300單位/mL，殺螨止癢劑SM-650 1％/M1。滴到玻片螨蟲標本上，觀察結果，以最低殺螨濃度(MIC)。
試驗結果見表2，結果表明人溶菌酶加殺螨止癢劑SM-650體外殺螨有殺滅作用。
表2
2、基因重組人溶菌酶濃縮液活性單位3000單位/mL試驗藥品及試劑1、基因重組人溶菌酶濃縮液(Human Lysozyme HLZ)活性單位3000單位/mL，由大連奇龍生物技術研究所提供，2、殺螨止癢劑SM-650白色粉未，純度為≥99％，ph6～8，
此外，儀器上還配備了實時時鐘芯片(如DS1302)、非易失性存貯器(如24LC64)、1-wire溫度傳感器(如DS1820)以及RS-232串行接口芯片(如MAX3233)，從而實現了數據存貯、溫度測量、PC機通訊及串行打印等功能，方便了用戶的使用。系統監控電路(包括看門狗、自動復位、電壓監控等子電路)保證了儀器的穩定可靠。
多通道手持式食品安全檢測儀的程序可以采用國外流行的Keil C單片機語言編寫，包括通道設置、樣品測量、數據處理、系統設置四大模塊。這種模塊化程序設計語言既有通用C語言的特點，又具有直接操作單片機硬件的能力，其基本特點包括運行速度快、編譯效率高、具有良好的移植性以及豐富的多種復雜運算的庫函數與浮點運算能力。樣品測量模塊的軟件流程示意圖見圖2。
參照已有的國家標準與國家推薦分析方法，我們開發了一系列適于現場分析的化學試劑包。配合這些試劑包，我們試制的八通道手持式食品安全檢測儀目前可以測量有機磷和氨基甲酸酯類農藥、硝酸鹽、亞硝酸鹽、鉛、鎘、六價鉻、氟化物、氰化物、甲醛與吊白塊等多種有毒有害物質含量。表1列出了對應的分析方法及方法來源。
表1測量指標與分析方法
螨止癢劑SM-650最低殺螨濃度(MIC)。將螨蟲標本分離到玻片上，用人溶菌酶(HLZ)30000單位/mL，殺螨止癢劑SM-650 1％/M1。滴到玻片螨蟲標本上，觀察結果，以無活螨蟲為殺螨濃度。
試驗結果見表4，結果表明人溶菌酶加殺螨止癢劑SM-650體外殺螨有殺滅作用。
表4
采用圖片法測定了人溶菌酶(HLZ)加殺螨止癢劑SM-650對臨床分離五人份的螨蟲標本體外殺螨作用，結果表明人溶菌酶加殺螨止癢劑SM-650對螨蟲有殺滅作用。殺螨止癢劑SM-650最低殺螨濃度MICRange為0.2％～2％。人溶菌酶(HLZ)活性單位300單位/ml～30000萬單位/ml。由大連奇龍生物技術研究所研制的基因重組人溶菌酶(Human Lysozyme)具有其它溶菌酶相同作用機制，主要切斷肽聚糖中N-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰胞壁酸之間的β-1、4糖苷鍵之間的聯結，破壞肽聚糖支架，引起細菌裂解。殺螨止癢劑SM-650產品有很強的殺螨作用。
三、人溶菌酶對巴豆油誘發小鼠耳廓腫脹的影響選用體重27-30克的健康雄性昆明小鼠50只，動物自由飲水，試驗室溫度控制在22-28℃左右，動物喂飼大鼠標準飼料。隨機分成5組，每組10只。第一組為空白對照組；第二、三、四組為人溶菌酶，劑量分別為120、60、30IU/只；第五組為雞溶菌酶(陽性對照)，30IU/只。首先，各組小鼠全部右耳內側涂1％巴豆油(巴豆油，淺棕色油狀液體，藥用級，批號000309，由江西吉水縣華寶天然藥用廠生產。臨用前用乙醇∶水∶乙醚25∶5∶70混合溶媒配制成1％濃度備用。)30μL致炎，半小時后分別用雙蒸水20μl、人溶菌酶(6000IU/ML)20μl、人溶菌酶(3000IU/ML)20μl、人溶菌酶(1500IU/ML)20μl、雞溶菌酶(1500IU/ML)20μl涂抹各組小鼠右耳內側。致炎后4小時將小鼠脫頸椎致死，沿耳廓基線剪下左右兩耳片，用8mm打孔器沖下兩耳片，精確稱重，左右耳片重量之差為腫脹度。經T檢驗比較藥物組與空白對照組的差異，并求出抑制率。試驗重復一次。
試驗結果見表17-22。小鼠經外涂人溶菌酶120、60、30IU/只，使小鼠由巴豆油誘發耳廓腫脹度明顯減輕，經T檢驗，藥物組與空白對照組比較，有顯著性差異(P＜0.05)，說明人溶菌酶具有抗炎作用。
表17-22 人溶菌酶對巴豆油誘發小鼠耳廓腫脹的影響
注與空白對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。
本發明對基因重組人溶菌酶發掘了新的用途，開拓了一個新的應用領域。由重組人溶菌酶制得的化妝品安全無毒副作用，有很好的應用前景。基因重組人溶菌酶來源豐富，制備工藝簡單，并可做成洗面奶或潔面乳、香皂、化妝水、乳液、面霜或面膜等，使用方便，和現有各種化妝品使用方法相同，可以構成系列化妝品成套使用。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明做進一步的描述實施例1基因重組人溶菌酶以配制200毫升培養基為準，用磷酸6毫升、硫酸鎂3克，硫酸鉀4克，氫氧化鉀1克，硫酸鈣1.5克，加蒸餾水至200毫升，高壓滅菌后接種甘油管種子，搖床轉數為每分鐘250轉，培養溫度為20-35℃，在恒溫床上培養36-48小時。進行種子罐培養，最后進行生產罐培養。將發酵表達完成的培養液進行提取純化，對提取純化的基因重組人溶菌酶濃縮液進行測蛋白、測活性保存。將純度95％基因重組人溶菌酶濃縮液溶于水中制得30000U/mL備用。
將純度95％的基因重組人溶菌酶制得30000U/mL/g，磷酸鹽緩沖液10～20mM(pH6.5～7.5)80％、15％丙二醇、6％2-吡咯烷酮-5-羧酸鈉、0.9％水溶性氮酮、萬分之三吐溫80，殺螨止癢劑SM-650純度為≥99％，ph6～8(商品)1％，在常溫下混合均質，制成化妝水。
實施例2按照實施例1所述方法制備人溶菌酶，人溶菌酶治療痤瘡護膚膏按下述配方及工藝生產配方(重量)
(1)重組人溶菌酶 3萬U/mL/g(2)二甲基硅油200cst 2.0(3)18醇 3.0(4)辛碳癸酸甘油酯/GTCC2(5)棕櫚酸異辛酯/GD-5103 4.0(6)維生素E/VE 0.3(7)乳化劑Montanov 68 1.0(8)甘油 8(9)乳化劑HR-S11.0(10)透明脂酸HA0.01(11)增稠劑SepiGEL305 0.1(12)杰瑪-II 1.0(13)香精 0.10(14)去離子水 71.
(15)殺螨止癢劑SM-650 0.5工藝1、將原料二甲基硅油200cst、18醇、辛碳癸酸甘油酯/GTCC、棕櫚酸異辛酯/GD-5103、維生素E/VE、乳化劑Montanov 68加入油相化料鍋中，攪拌加熱到85℃；2、將原料甘油、乳化劑HR-S1、透明脂酸HA、杰瓊-II和去離子水加至乳化鍋中加熱攪拌至87-89℃；3、啟動真空泵將乳化鍋抽真空到0.06Mpa，停止真空，將油相抽進乳化鍋內高速均質10分鐘，攪拌轉速70轉，高速均質后停止；低速均質10分鐘，停止均質，繼續攪拌10分鐘，轉速為60轉；4、通水慢速冷卻，溫度60℃時加入原料增稠劑SepiGEL305和殺螨止癢劑SM-650均質2分鐘后真空脫氣5、當45℃時加入原料去離子水和人溶菌酶溶液，攪拌至40℃時停機出料，(在符合GMP要求的制藥工廠，按制藥規程完成)制成護膚膏。
實施例3按照實施例2所述方法制備護膚膏，配方(重量)如下所述(1)重組人溶菌酶溶液 100萬U/mL/g(2)二甲基硅油200cst 2.0(3)18醇 5.0(4)辛碳癸酸甘油酯/GTCC2(5)棕櫚酸異辛酯/GD-5103 4.0(6)維生素E/VE 0.3(7)乳化劑Montanov 68 1.0(8)甘油 9(9)乳化劑HR-S11.0(10)透明脂酸HA0.01(11)增稠劑SepiGEL305 0.1(12)杰瑪-II 1.0(13)香精 0.10(14)去離子水 73.
(15)殺螨止癢劑SM-650 0.5實施例4按照實施例1所述方法制備人溶菌酶，按下述配方及工藝制備成治療痤瘡面霜
配方(重量)(1)重組人溶菌酶溶液 30萬U/mL/g(2)二甲基硅油200cst 2.0(3)18醇 3.0(4)辛碳癸酸甘油酯/GTCC3(5)棕櫚酸異辛酯/GD-5103 4.0(6)維生素E/VE 0.2(7)乳化劑Montanov 68 1.0(8)甘油 8(9)乳化劑HR-S11.0(10)透明脂酸HA0.01(11)增稠劑SepiGEL305 0.1(12)杰瓊-II 1.0(13)香精 0.1(14)去離子水 76.0(15)殺螨止癢劑SM-650 0.5工藝1、將原料二甲基硅油200cst、18醇、辛碳癸酸甘油酯/GTCC、棕櫚酸異辛酯/GD-5103、維生素E/VE、乳化劑Montanov 68加入油相化料鍋中，攪拌加熱到85℃；2、將原料甘油、乳化劑HR-S1、透明脂酸HA、杰瓊-II和去離子水加至乳化鍋中加熱攪拌至87-89℃；3、啟動真空泵將乳化鍋抽真空到0.06Mpa，停止真空，將油相抽進乳化鍋內高速均質10分鐘，攪拌轉速70轉，高速均質后停止；低速均質10分鐘，停止均質，繼續攪拌10分鐘，轉速為60轉；4、通水慢速冷卻，溫度60℃時加入原料增稠劑SepiGEL305和殺螨止癢劑SM-650均質2分鐘后真空脫氣；5、當45℃時加入原料去離子水和人溶菌酶溶液，攪拌至40℃時停機出料，(在符合GMP要求的制藥工廠，按制藥規程完成)制成面霜。
實施例5根據實施例4所述方法制成面霜，具體配方(重量)如下(1)重組人溶菌酶溶液 300萬U/mL/g(2)二甲基硅油200cst 2.0(3)18醇 3.0(4)辛碳癸酸甘油酯/GTCC2(5)棕櫚酸異辛酯/GD-5103 4.0(6)維生素E/VE 0.2(7)乳化劑Montanov 68 1.0(8)甘油 5(9)乳化劑HR-S11.0(10)透明脂酸HA0.01(11)增稠劑SepiGEL305 0.1(12)杰瓊-II 1.0(13)香精 0.1(14)去離子水 75.0(15)殺螨止癢劑SM-650 0.5實施例6按照實施例1所述方法制備人溶菌酶，然后按照下述配方(重量)制成治療痤瘡乳液(1)重組人溶菌酶溶液 200萬U/mL/g(2)二甲基硅油200cst 2.
(3)18醇 3.
(4)辛碳癸酸甘油酯/GTCC2(5)棕櫚酸異辛酯/GD-5103 4.0(6)維生素E/VE 0.3(7)乳化劑Montanov 68 1(8)甘油 5(9)乳化劑HR-S11.0(10)透明脂酸HA0.01(11)杰瓊-II 1.0(12)香精 0.1(13)去離子水 76.0(14)殺螨止癢劑SM-650 0.5工藝1、將原料二甲基硅油200cst、18醇、辛碳癸酸甘油酯/GTCC、棕櫚酸異辛酯/GD-5103、維生素E/VE、乳化劑Montanov 68加入油相化料鍋中，攪拌加熱到85℃；2、將原料甘油、乳化劑HR-S1、透明脂酸HA、杰瓊-II和去離子水加至乳化鍋中加熱攪拌至87-89℃；3、啟動真空泵將乳化鍋抽真空到0.06Mpa，停止真空，將油相抽進乳化鍋內高速均質10分鐘，攪拌轉速70轉，高速均質后停止；低速均質10分鐘，停止均質，繼續攪拌10分鐘，轉速為60轉；4、通水慢速冷卻，溫度60℃時加入殺螨止癢劑SM-650均質2分鐘后真空脫氣；5、當45℃時加入原料去離子水和人溶菌酶溶液，攪拌至40℃時停機出料，(在符合GMP要求的制藥工廠，按制藥規程完成)制成乳液。
實施例7按照實施例6所述方法制備乳液，具體配方(重量)如下所述(1)重組人溶菌酶溶液 80萬U/mL/g(2)二甲基硅油200cst 2.0(3)18醇 3.
(4)辛碳癸酸甘油酯/GTCC2(5)棕櫚酸異辛酯/GD-5103 4.0(6)維生素E/VE 0.3(7)乳化劑Montanov 68 1.0(8)甘油 5(9)乳化劑HR-S11.0(10)透明脂酸HA0.01(11)杰瓊-II 1.0(12)香精 0.10(13)去離子水 76.0(14)殺螨止癢劑SM-650 0.5實施例8按照實施例1所述方法生產人溶菌酶，然后按照下述配方(重量)制成治療痤瘡的面膜(1)重組人溶菌酶溶液 6萬U/mL/g
(2)卡波樹脂CP941 0.4(3)羧甲基纖維素CMC0.5(4)聚乙烯醇1788(PVA) 8(5)甘油 7(6)吐溫-80(T-80) 1.0(7)氮酮 0.6(8)乙醇 6(9)香精 0.3(10)水73(11)杰瑪-II 0.2(12)殺螨止癢劑SM-650純度為≥99％，0.6工藝流程為成膜材料漿液配制→加入配方藥物→著色劑等→脫泡→涂膜→干燥→脫膜→含量測定→成品包裝。具體工藝為1、首先將原料卡波樹脂941和羧甲基纖維素CMC均勻分散于甘油中，在攪拌情況下將離子水加入充分混均勻，此過程應在生產前4小時備好。之后攪拌下加入原料聚乙烯醇1788。
2、將攪拌均勻的1加入乳化鍋內，然后加入吐溫-80、氮酮和水溶性硅油攪拌加熱到75℃，啟動均質，高速均質10分鐘，然后停止高速均質，低速均質15分鐘后停止，再繼續攪拌10分鐘，攪拌轉速為60轉/分。
3、通過冷卻水使其慢速冷卻，當溫度達到50℃加入乙醇和香精和殺螨止癢劑SM-650然后繼續攪拌到冷卻，并在溫度低于45℃時加入人溶菌酶和杰瓊后均質2分鐘，之后進行真空脫氣。攪拌到物料40℃停機出料。制備成治療痤瘡的面膜成品。(此膜劑型要在符合GMP要求的制藥工廠，按制藥規程完成)。
實施例9按照實施例8所述方法制備治療痤瘡的面膜，具體配方(重量)如下(1)重組人溶菌酶溶液 182萬U/mL/g(2)卡波樹脂CP9410.3(3)羧甲基纖維素CMC 0.4(4)聚乙烯醇1788(PVA)9(5)甘油 6(6)吐溫-80(T-80)1.2(7)氮酮 0.8(8)乙醇 6(9)香精 0.2(10)水 75(11)杰瑪-II 0.2(12)殺螨止癢劑SM-650純度為≥99％0.8。
權利要求
1.人溶菌酶在制備治療痤瘡的化妝品中的應用。
2.人溶菌酶在制備治療由金黃色葡萄球菌、表葡菌、丙酸桿菌或螨蟲引起的痤瘡的化妝品中的應用。
3.根據權利要求1或2所述人溶菌酶在制備治療痤瘡的化妝品中的應用，其特征是人溶菌酶為基因工程表達的重組人溶菌酶或基因工程表達人溶菌酶的氨基端帶有(谷氨酸—丙氨酸)2或(谷氨酸—丙氨酸)3修飾的入溶菌酶或基因工程表達或化學合成突變體重組人溶菌酶。
4.根據權利要求1或2所述人溶菌酶在制備治療痤瘡的化妝品中的應用，其特征是所述化妝品中含有人溶菌酶300U～300萬U/mL/g。
5.根據權利要求1或2所述人溶菌酶在制備治療痤瘡的化妝品中的應用，其特征是化妝品為洗面奶、化妝水、護膚膏、面霜、乳液或面膜。
6.根據權利要求5所述人溶菌酶在制備治療痤瘡的化妝品中的應用，其特征是將純度95％～99％的基因重組人溶菌酶制得1500U～30萬U/ml/g，磷酸鹽緩沖液10～20mM(pH6.0～7.5)75～85％、5～25％丙二醇或丙三醇、5～15％2-吡咯烷酮-5-羧酸鈉、萬分之1～5吐溫80，1～5％水溶性氮酮、尼泊金0.01～0.05％、山梨酸鉀0.01～0.1％，在常溫下混合均質，制成化妝水。
7.根據權利要求5所述人溶菌酶在制備治療痤瘡的化妝品中的應用，其特征是所述化妝品為護膚膏，其配方重量份比為(1)重組人溶菌酶溶液300U～300萬U/mL/g(2)二甲基硅油200cst2.0-4.0(3)18醇3.0-6.0(4)辛碳癸酸甘油酯/GTCC 2-5.0(5)棕櫚酸異辛酯/GD-51034.0-7.0(6)維生素E/VE 0.3-0.7(7)乳化劑Montanov 68 1.0-3.0(8)甘油5-15(9)乳化劑HR-S11.0-3.0(10)透明脂酸HA 0.01-0.04(11)增稠劑SepiGEL305 1.0-3.0(12)杰瑪-II1.0-2.0(13)香精 0.10-0.20(14)去離子水 70.0-75.0(15)殺螨止癢劑SM-650 0.5～1。
8.根據權利要求5所述人溶菌酶在制備治療痤瘡的化妝品中的應用，其特征是所述化妝品為面霜，配方重量份比為(1)重組人溶菌酶溶液300U～300萬U/mL/g(2)二甲基硅油200cst2.0-4.0(3)18醇3.0-6.0(4)辛碳癸酸甘油酯/GTCC 2-5.0(5)棕櫚酸異辛酯/GD-51034.0-7.0(6)維生素E/VE 0.5-1.2(7)乳化劑Montanov 68 1.0-3.0(8)甘油5-8(9)乳化劑HR-S11.0-3.0(10)透明脂酸HA 0.01-0.04(11)增稠劑SepiGEL305 0.8-1.5(12)杰瓊-II1.0-2.0(13)香精 0.10-0.20(14)去離子水 70.0-75.0(15)殺螨止癢劑SM-650 0.5～1。
9.根據權利要求5所述人溶菌酶在制備治療痤瘡的化妝品中的應用，其特征是護膚乳液的配方重量份比為(1)重組人溶菌酶溶液300U～300萬U/mL/g(2)二甲基硅油200cst2.0-5.0(3)18醇3.-5.0(4)辛碳癸酸甘油酯/GTCC 2-5.0(5)棕櫚酸異辛酯/GD-51034.0-7.0(6)維生素E/VE 0.3-0.7(7)乳化劑Montanov 68 1.0-3.0(8)甘油5-8(9)乳化劑HR-S11.0-4.0(10)透明脂酸HA 0.01-0.04(11)杰瓊-II1.0-2.0(12)香精 0.10-0.20(13)去離子水 70.0-76.0(14)殺螨止癢劑SM-650 0.5～1
10.根據權利要求5所述人溶菌酶在制備治療痤瘡的化妝品中的應用，其特征是面膜的配方重量份比為(1)重組人溶菌酶溶液 300U～300萬U/mL/g(2)卡波樹脂CP941 0.2-0.5(3)羧甲基纖維素CMC0.3-0.6(4)聚乙烯醇1788(PVA) 7-10(5)甘油 6-8(6)吐溫-80(T-80) 0.5-1.5(7)氮酮 0.3-1.0(8)乙醇 5-10(9)香精 0.1-0.5(10)水67.6-80.45(11)杰瑪-II 0.15-0.3(12)殺螨止癢劑SM-650 0.5～1。
全文摘要
本發明涉及人溶菌酶的新用途，特別是人溶菌酶在化妝品中的新用途。本發明是人溶菌酶在制備治療痤瘡的化妝品中的應用，特別是在制備治療由金黃色葡萄球菌、表葡菌、丙酸桿菌或螨蟲引起的痤瘡的應用。化妝品可做成化妝水、護膚膏、護膚乳、護膚霜、面膜等。本發明基因重組人溶菌酶發掘了新的化妝品中用途，開拓了一個新的應用領域。安全無毒副作用，有很好的應用前景。并且基因重組人溶菌酶來源豐富，制備工藝簡單，使用方便。
文檔編號A61K38/43GK1679504SQ20051004579
公開日2005年10月12日 申請日期2005年1月26日 優先權日2005年1月26日
發明者安米 申請人:安米