專利名稱：一種改善貧血的何首烏提取物藥劑及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥提取物藥劑，具體的說，涉及一種改善貧血的何首烏提取物藥劑及其制備方法和應用。
背景技術：
貧血是指外周血液血紅蛋白量低于正常值的下限，一般伴有紅細胞數量或壓積的減少。貧血是一種癥狀，而不是具體的疾病。根據不同的發病機理、臨床表現和血細胞學的特征，貧血可分為不同的綜合病征，如再生障礙性貧血、缺鐵性貧血、骨髓病性貧血、溶血性貧血、血紅蛋白病等。近年來對貧血的診斷治療，雖然有長足的進步，但目前還是一種難治性疾病，貧血的治療一般強調對癥治療，如缺鐵性貧血的治療主要是補充鐵劑，但目前常用的鐵劑仍有一定比例的胃腸道反應。上海醫科大學《實用內科學》編輯委員會編，《實用內科學》(第九版)(下冊)，人民衛生出版社1636和《醫學綜述》，2005，11(2)183-185“再生障礙性貧血的治療。”中公開了再生障礙性貧血和腎性貧血的藥物治療主要是采用雄激素；免疫抑制劑如環孢菌素A(CsA)、抗淋巴細胞球蛋白(ALG)和抗胸腺細胞球蛋白(ATG)、大劑量環磷酰胺(HD-CTX)；免疫調節劑(免疫刺激劑)如植物血凝素(PHA)左旋咪唑；糖蛋白類激素藥物造血生長因子等。而自身免疫性溶血性貧血因缺乏根治手段，極易復發并遷延不愈，目前治療藥物主要應用單克隆抗體、免疫抑制劑和雙磷酸鹽等。以上用于治療貧血的藥物或毒副作用較大，或療效仍有待進一步肯定和提高，而且費用昂貴，患者及家庭難以承受。因此，研究開發療效好、毒副作用小、價格低的貧血治療藥物仍然是目前需要解決的問題。
近二十年有關何首烏和制何首烏有效成分的分析報道，主要著重于磷脂、羥基蒽醌類化合物和均二苯烯化合物，有關多糖的研究文獻報道較少。最近國外學者已從何首烏中分離得到具有免疫促進作用的酸性多糖，國內也有研究表明，制首烏多糖類成分可能為制首烏抗衰老的主要活性成分之一。尚未見有關何首烏和制何首烏多糖的制劑報道。
發明內容
本發明的目的就是提供一種改善貧血的何首烏提取物藥劑。
本發明的另外一個目的就是提供該何首烏提取物藥劑的制備方法。
本發明還提供了該何首烏提取物藥劑在制備改善貧血的藥物中的應用。
為了實現本發明目的，本發明提供了一種改善貧血的何首烏提取物藥劑，其中何首烏提取物中多糖含量大于60％，優選多糖含量80％～99％。
本發明還提供了一種制備改善貧血的何首烏提取物藥劑的方法，包括將何首烏或制何首烏粉碎成顆粒或粗粉，提取粗制多糖，用蒸餾水溶解使粗制多糖質量含量為1％～10％，溶液除去蛋白，過濾，濾液濃縮至相對密度1.05～1.35(20～30℃)，加相對于濃縮液體積4～9倍體積量乙醇(同比例量綱)，靜置沉淀，過濾，濾渣用乙醇洗滌后干燥，與醫/藥學可接受的載體加工制得。
其中提取粗制多糖的過程優選為將何首烏或制何首烏粉碎成顆粒或粗粉，取相對于何首烏或制何首烏質量4～12倍體積量(同比例量綱)的含醇量80％～95％的乙醇溶液回流提取3～5次，每次1～3小時，過濾，濾渣揮干乙醇，加5～12倍量蒸餾水60～100℃溫浸或回流3～5次，每次1～3小時，過濾，合并濾液，濃縮至相對密度1.05～1.35(20～30℃)，濃縮物加乙醇至含醇量75％～90％，靜置沉淀，過濾，重復沉淀1～2次，過濾，濾渣用乙醇洗滌，干燥即得。
重復沉淀為將“濾渣加5～12倍量蒸餾水60～100℃溫浸或回流3～5次，每次1～3小時，過濾，合并濾液，濃縮至相對密度1.05～1.35(20～30℃)，濃縮物加乙醇至含醇量75％～90％，靜置沉淀。”重復操作。
其中提取粗制多糖的過程優選將何首烏或制何首烏粉碎成顆粒或粗粉，加5～12倍量蒸餾水60～100℃溫浸或回流3～5次，每次1～3小時，過濾，合并濾液，濃縮至相對密度1.05-1.35(20～30℃)，濃縮物加乙醇至含醇量75％～85％，靜置沉淀，過濾，重復沉淀2～4次，過濾，濾渣用乙醇洗滌，干燥即得。
重復沉淀為“濾渣加5～12倍量蒸餾水60～100℃溫浸或回流3～5次，每次1～3小時，過濾，合并濾液，濃縮至相對密度1.05-1.35(20～30℃)，濃縮物加乙醇至含醇量75％～85％，靜置沉淀。”重復操作。
所述除去蛋白的方法優選為加鞣酸溶液沉淀除蛋白或通過蛋白酶酶解除蛋白。
其中鞣酸溶液沉淀除蛋白方法為將何首烏或制何首烏粗制多糖溶解于水，加適量活性碳(藥用規格)脫色，濾過，濾液加1％鞣酸溶液(藥用規格)適量，攪勻，靜置沉淀，除去沉淀，上清液加乙醇至含醇量80％，冰箱靜置沉淀，過濾，沉淀用無水乙醇洗滌，干燥制得何首烏或制何首烏多糖。
蛋白酶酶解除蛋白方法為將何首烏或制何首烏粗制多糖溶解于水，加適量活性碳(藥用規格)脫色，濾過，濾液加入蛋白酶水解，酶解液用其4倍體積的乙醇沉淀，沉淀用無水乙醇洗滌，干燥制得何首烏或制何首烏多糖。
本發明還提供了所述的改善貧血的何首烏提取物藥劑在制備改善貧血的藥物中的應用。
本發明的何首烏提取物可以與醫/藥學上可接收的載體制得任何醫藥學上可接受的劑型。
本發明所述何首烏提取物藥劑為口服或注射用藥，口服劑量為3g-30g/天，一次或分次服用；注射劑劑量為30mg-300mg/次，1-2次/天。
本發明所述何首烏提取物藥劑可改善血虛動物模型的貧血指征和提高白細胞水平，具有極好的治療貧血療效。
具體實施例方式
通過下面給出的本發明的具體實施例可以進一步清楚地理解本發明，但下述實施例不是對本發明的限定。
本實施例所用原料為蓼科植物何首烏(Polygonum multiflorumThunb.)的干燥塊根，具有解毒、消癰、潤腸通便之功效；或何首烏經炮制后的制首烏，具有補肝腎，益精血，烏須發等功效。
制何首烏采用常規的炮制方法炮制。
何首烏或制何首烏中多糖含量的測定方法為多糖含量測定儀器與試劑儀器紫外-可見光分光光度儀(美國發瑪西亞公司，B20-RAD UV/V 4000型)；連續移液槍(德國BRAND)；電子恒溫水浴鍋(廣東省汕頭市醫用設備廠)。供含量測定用D-葡萄糖對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號110833-200302)，蒽酮，98％濃硫酸，無水乙醇(以上均為分析純)。
對照品溶液的制備精密稱取105℃干燥至恒重的無水葡萄糖60mg，置100ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml中含無水葡萄糖0.6mg)。
標準曲線的制備精密量取對照品溶液0.0ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml，置具塞試管中，分別加蒸餾水至1.0ml，迅速加入0.5％硫酸蒽酮溶液4.0ml，混勻，冰浴20min，90℃恒溫水浴保溫25min，迅速置常水中冷卻至室溫。照2005版《中華人民共和國藥典》分光光度法(附錄VB)，以第一份為空白，于627nm測定吸收度，以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程和相關系數為A＝4.8884C+0.0309，r＝0.9992。線性范圍為0.06～0.60mg/ml。
供試品溶液的制備稱取何首烏或制何首烏多糖提取物5mg溶解并定容至10ml，備用。
測定法 精密量取供試品溶液1.0ml，照標準曲線的制備項下方法，自“迅速加入0.5％硫酸蒽酮溶液4.0ml”起，依法測定吸收度，由標準曲線回歸方程計算供試品中提取物中多糖含量，即得。
多糖含量＝實際測得含量(mg)/多糖取樣量(mg)×100％實施例1口服液體制劑的制備將何首烏粉碎成顆粒或粗粉，用4倍量的含醇量80％的乙醇溶液回流提取5次，每次3小時，過濾，濾渣揮干乙醇，加12倍量蒸餾水60℃溫浸3次，每次3小時，過濾，合并濾液，濃縮至相對密度1.05(20℃)，濃縮物加乙醇至含醇量75％，靜置沉淀，過濾，重復沉淀1次，過濾，濾渣用乙醇洗滌，干燥制得粗制多糖。用蒸餾水溶解使粗制多糖質量含量為1％，鞣酸溶液沉淀除蛋白，過濾，濾液濃縮至相對密度1.05(20℃)，加4倍量乙醇，靜置沉淀，過濾，濾渣用乙醇洗滌后干燥，測得其中多糖的含量為60％，溶解于適量藥用純水，加防腐劑，分裝，滅菌即得。
實施例2散劑的制備將何首烏粉碎成顆粒或粗粉，用8倍量的含醇量95％的乙醇溶液回流提取4次，每次2小時，過濾，濾渣揮干乙醇，加8倍量蒸餾水80℃溫浸4次，每次2小時，過濾，合并濾液，濃縮至相對密度1.20(25℃)，濃縮物加乙醇至含醇量85％，靜置沉淀，過濾，重復沉淀2次，過濾，濾渣用乙醇洗滌，干燥制得粗制多糖。用蒸餾水溶解使粗制多糖質量含量為5％，蛋白酶酶解除蛋白，過濾，濾液濃縮至相對密度1.20(25℃)，加6倍量乙醇，靜置沉淀，過濾，濾渣用乙醇洗滌后干燥，測得其中多糖的含量為80％，過篩，分裝即可。
實施例3膠囊的制備將制何首烏粉碎成顆粒或粗粉，用12倍量的含醇量90％的乙醇溶液回流提取3次，每次1小時，過濾，濾渣揮干乙醇，加5倍量蒸餾水100℃回流提取5次，每次1小時，過濾，合并濾液，濃縮至相對密度1.30(20℃)，濃縮物加乙醇至含醇量90％，靜置沉淀，過濾，重復沉淀1次，過濾，濾渣用乙醇洗滌，干燥制得粗制多糖。用蒸餾水溶解使粗制多糖質量含量為10％，鞣酸溶液沉淀除蛋白，過濾，濾液濃縮至相對密度1.30(20℃)，加9倍量乙醇，靜置沉淀，過濾，濾渣用乙醇洗滌后干燥，測得其中多糖的含量為85％，加適量輔料制粒、裝膠囊即可。
實施例4片劑的制備何首烏粉碎成顆粒或粗粉，加5倍量蒸餾水60℃溫浸3次，每次3小時，過濾，合并濾液，濃縮至相對密度1.05(20℃)，濃縮物加乙醇至含醇量75％，靜置沉淀，過濾，重復沉淀2次，過濾，濾渣用乙醇洗滌，干燥制得粗制多糖。用蒸餾水溶解使粗制多糖質量含量為5％，蛋白酶酶解除蛋白，過濾，濾液濃縮至相對密度1.20(20℃)，加4倍量乙醇，靜置沉淀，過濾，濾渣用乙醇洗滌后干燥，測得其中多糖的含量為90％，粉碎成極細粉，加適量輔料制粒，壓片即可。
實施例5軟膠囊何首烏粉碎成顆粒或粗粉，加9倍量蒸餾水80℃溫浸4次，每次2小時，過濾，合并濾液，濃縮至相對密度1.20(20℃)，濃縮物加乙醇至含醇量85％，靜置沉淀，過濾，重復沉淀3次，過濾，濾渣用乙醇洗滌，干燥制得粗制多糖。用蒸餾水溶解使粗制多糖質量含量為5％，蛋白酶酶解除蛋白，過濾，濾液濃縮至相對密度1.20(20℃)，加6倍量乙醇，靜置沉淀，過濾，濾渣用乙醇洗滌后干燥，測得其中多糖的含量為93％，加聚乙二醇等混合，與藥物混合均勻，明膠、甘油等加水溶解，加入藥物，壓制即可。
實施例6顆粒劑何首烏粉碎成顆粒或粗粉，加12倍量蒸餾水100℃回流5次，每次1小時，過濾，合并濾液，濃縮至相對密度1.30(20℃)，濃縮物加乙醇至含醇量80％，靜置沉淀，過濾，重復沉淀3次，過濾，濾渣用乙醇洗滌，干燥制得粗制多糖。用蒸餾水溶解使粗制多糖質量含量為5％，蛋白酶酶解除蛋白，過濾，濾液濃縮至相對密度1.20(20℃)，加6倍量乙醇，靜置沉淀，過濾，濾渣用乙醇洗滌后干燥，測得其中多糖的含量為89％，加適量可溶性口服制劑藥用輔料，制粒，干燥，分裝即得。
實施例7水針劑和輸液劑制何首烏粉碎成顆粒或粗粉，加8倍量蒸餾水80℃溫浸4次，每次3小時，過濾，合并濾液，濃縮至相對密度1.20(20℃)，濃縮物加乙醇至含醇量80％，靜置沉淀，過濾，重復沉淀5次，過濾，濾渣用乙醇洗滌，干燥制得粗制多糖。用蒸餾水溶解使粗制多糖質量含量為10％，蛋白酶酶解除蛋白，過濾，濾液濃縮至相對密度1.20(20℃)，加6倍量乙醇，靜置沉淀，過濾，濾渣用乙醇洗滌后干燥，測得其中多糖的含量為95％，取何首烏或制何首烏多糖溶解于適量注射用水，加入針用活性炭，煮沸、過濾，再分別用100000分子量和10000分子量的超濾膜過濾，加等滲調節劑、調節pH值，濾過，分裝，滅菌，即得。
實施例8粉針劑制何首烏粉碎成顆粒或粗粉，加8倍量蒸餾水80℃溫浸4次，每次3小時，過濾，合并濾液，濃縮至相對密度1.20(20℃)，濃縮物加乙醇至含醇量80％，靜置沉淀，過濾，重復沉淀5次，過濾，濾渣用乙醇洗滌，干燥制得粗制多糖。用蒸餾水溶解使粗制多糖質量含量為10％，蛋白酶酶解除蛋白，過濾，濾液濃縮至相對密度1.20(20℃)，加6倍量乙醇，靜置沉淀，過濾，濾渣用乙醇洗滌后干燥，測得其中多糖的含量為95％，取何首烏或制何首烏多糖溶解于適量注射用水，加入針用活性炭，煮沸、過濾，再分別用100000分子量和10000分子量的超濾膜過濾，加等滲調節劑、調節pH值，濾過，冷凍干燥，即得。
實驗例11.材料1.1實驗動物雄性SD大鼠，體重(150±20g)，購于廣州中醫藥大學實驗動物中心，合格證編號廣東省科委實驗動物監測所合格證(粵檢證字)第2002A001。
1.2試劑環磷酰胺，上海華聯制藥有限公司，批號050215，乙酰苯肼，廣州化學試劑廠，批號20040901-1。
1.3供試樣品何首烏或制何首烏提取物藥劑制備成口服液體制劑，給藥量高劑量4.0g/kg、中劑量組2.0g/kg、低劑量組0.5g/kg。
2.方法2.1分組將雄性SD大鼠隨機分組，每組10-11只。設模型對照組，正常對照組和藥物組。每種受試藥物為一組藥物組。
2.2模型大鼠血虛模型分別于實驗第2日、第5日給動物皮下注射乙酰苯肼20mg/kg、40mg/kg。第5日起腹腔注射環磷酰胺40mg/kg，連續4日。末次給藥1.5h后動物在麻醉狀態下心臟采血1ml，用臨床檢測患者標本的全自動生化分析儀檢測血常規。除正常對照組外，其余組別均按上述方法造模。正常對照組在上述時間點分別皮下和腹腔注射等量生理鹽水。
2.3給藥方式和劑量于實驗第1日開始給藥，連續9天，灌胃給藥，給藥劑量3ml/200g。
統計學分析采用方差分析進行方差齊性檢驗和顯著性檢驗，如分析數據方差不齊時，使用非參數統計方法分析。統計軟件采用PEMS3.0 for Windows Package for encyclopaedia of medical statistics(《中國醫學百科全書·醫學統計學》統計軟件包)。結果見表1。
表1.何首烏和制首烏多糖對血虛動物模型紅細胞(RBC)、血紅蛋白(HGB)、紅細胞壓積(HCT)、紅細胞平均血紅蛋白濃度(MCHC)、白細胞(WBC)指標的影響
注與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01；與正常組比較△P＜0.05，△△P＜0.01。
結果表明，模型組與正常組比較各項指標均有顯著差異，說明造模成功。何首烏和制何首烏提取物藥劑三個劑量組均有抵抗模型所致紅細胞、血紅蛋白、紅細胞壓積和白細胞水平降低等作用，對貧血癥狀有改善作用。
權利要求
1.一種改善貧血的何首烏提取物藥劑，其特征在于所述何首烏提取物中多糖含量大于60％。
2.如權利要求1所述的改善貧血的何首烏提取物藥劑，其特征在于所述何首烏提取物中多糖含量為80％～99％。
3.如權利要求2所述的改善貧血的何首烏提取物藥劑，其特征在于所述何首烏提取物中多糖含量為90％～99％。
4.如權利要求1～3任一所述的一種改善貧血的何首烏提取物藥劑，其特征在于所述何首烏提取物藥劑為任何醫藥學上可接受的劑型。
5.一種制備如權利要求1～4任一所述的改善貧血的何首烏提取物藥劑的方法，其特征在于包括以下步驟將何首烏或制何首烏粉碎成顆粒或粗粉，提取粗制多糖，用蒸餾水溶解使粗制多糖質量含量為1％～10％，溶液除去蛋白，過濾，濾液濃縮至相對密度1.05～1.35(20～30℃)，加相對于濃縮液體積4～9倍體積量乙醇，靜置沉淀，過濾，濾渣用乙醇洗滌后干燥，與醫/藥學可接受的載體加工制得。
6.如權利要求5所述的一種制備改善貧血的何首烏提取物藥劑的方法，其特征在于提取粗制多糖的過程為將何首烏或制何首烏粉碎成顆粒或粗粉，取相對于何首烏或制何首烏質量4～12倍體積量的含醇量80％～95％的乙醇溶液回流提取3～5次，每次1～3小時，過濾，濾渣揮干乙醇，加5～12倍量蒸餾水60～100℃溫浸或回流3～5次，每次1～3小時，過濾，合并濾液，濃縮至相對密度1.05～1.35(20～30℃)，濃縮物加乙醇至含醇量75％～90％，靜置沉淀，過濾，重復沉淀1～2次，過濾，濾渣用乙醇洗滌，干燥即得。
7.如權利要求5所述的一種制備改善貧血的何首烏提取物藥劑的方法，其特征在于提取粗制多糖的過程為將何首烏或制何首烏粉碎成顆粒或粗粉，加5～12倍量蒸餾水60～100℃溫浸或回流3～5次，每次1～3小時，過濾，合并濾液，濃縮至相對密度1.05～1.35(20～30℃)，濃縮物加乙醇至含醇量75％～85％，靜置沉淀，過濾，重復沉淀2～4次，過濾，濾渣用乙醇洗滌，干燥即得。
8.如權利要求5所述的一種制備改善貧血的何首烏提取物藥劑的方法，其特征在于所述除去蛋白的方法為加鞣酸溶液沉淀除蛋白或加蛋白酶酶解除蛋白。
9.如權利要求1～4中任一所述的改善貧血的何首烏提取物藥劑在制備改善貧血的藥物中的應用。
全文摘要
本發明涉及一種治療貧血的何首烏提取物藥劑，何首烏提取物中多糖含量大于60％。其制備方法為將何首烏或制何首烏粉碎成顆粒或粗粉，提取粗制多糖，用蒸餾水溶解使粗制多糖質量含量為1％～10％，溶液除去蛋白，過濾，濾液濃縮至相對密度1.05～1.35(20～30℃)，加相對于濃縮液體積4～9倍體積量乙醇，靜置沉淀，過濾，濾渣用乙醇洗滌后干燥，與醫/藥學可接受的載體加工制得。本發明所述何首烏提取物藥劑可改善血虛動物模型的貧血指征和提高白細胞水平，具有極好的治療貧血療效。
文檔編號A61P7/06GK101081250SQ20061001202
公開日2007年12月5日 申請日期2006年5月29日 優先權日2006年5月29日
發明者丘小惠, 古興華, 孫景波, 巫志峰, 黃志海, 歐潤妹 申請人:廣州中醫藥大學第二附屬醫院