專利名稱：：用于嗜酸粒細胞增多綜合征的嘧啶基氨基苯甲酰胺衍生物的制作方法
技術領域：
：本發明涉及用于治療TEL-PDGFR(3或FIPlLl-PDGFRa誘導的骨髓增生性疾病的嘧啶基氨基苯曱酰胺衍生物的用途，涉及用于治療TEL-PDGFR卩或FIPlLl-PDGFRa誘導的骨髓增生性疾病的藥物的生產，還涉及治療包括人類在內的溫血動物的方法，在該方法中將嘧咬基氨基苯甲酰胺衍生物給藥于患有TEL-PDGFR卩或FIPlLl-PDGFRa誘導的骨髓增生性疾病的溫血動物，特別是骨髓單核細胞白血病、嗜酸粒細胞增多綜合征和慢性嗜酸粒細胞白血病，尤其是對伊馬替尼有耐藥性的嗜酸粒細胞增多綜合征或對伊馬替尼有耐藥性的骨髓單核細胞白血病。本發明也涉及治療骨髓單核細胞白血病、嗜酸粒細胞增多綜合征、慢性嗜酸性粒細胞白血病和對伊馬替尼有耐藥性的嗜酸粒細胞增多綜合征或其它與TEL-PDGFRP、FIPLl-PDGFRa或使PDGFR活化的相似變異有關的疾病。
背景技術：
：TEL-PDGFRP為與慢性骨髓單核細胞白血病(CMML)有關的融合激酶，所述疾病為骨髓增生性疾病，其特征在于異常的骨髓細胞生成、噬酸粒細胞增多、骨髓纖維化，時常發展為急性骨髓性白血病。FIPlLl-PDGFRa為與嗜酸粒細胞增多綜合征(HES)或慢性嗜酸性粒細胞白血病(CEL)有關的融合激酶，所述疾病為與血液噬酸粒細胞過多和器官損傷有關的純系(clonal)骨髓增生性疾病。已經有證據顯示嘧M氨基苯甲酰胺衍生物具有能夠對抗臨床上相關的融合激酶TEL-PDGFRP和FIPlLl-PDGFRa的活性，所述激酶分別與骨髓增生性疾病CMML和HES有關。另外，此類嗜咬基氨基苯甲酰胺衍生物能夠有效對抗TEL-PDGFR卩和/或FIPlLl-PDGFRa導致的骨髓增生性疾病。嘧#氨基苯甲酰胺衍生物能夠有效抑制上述兩種融合激酶轉化的Ba/F3細胞的生長，能夠抑制這些融合激酶中酪氨酸殘基的磷酸化以及其下游信號耙的活化。嘧啶基氨基苯曱酰胺衍生物也能夠在體外有效對抗TEL-PDGFR卩中伊馬替尼抗性的T681I突變。該殘勤目應于BCR-ABL中的T315I,它是一種在患者中導致伊馬替尼耐藥性的突變，以難以抑制而著稱。伊馬替尼(通用名)為酪氨酸激酶抑制劑，在美國以GLEEVEC⑧上市，在歐洲以GLIVEC⑧上市。已經發現嘧"^氨基苯甲酰胺衍生物可以用于治療TEL-PDGFRP-或FIPlLl-PDGFRa誘導的骨髓增生性疾病，特別是用于治愈性治療和/或預防性治療骨髓單核細胞白血病、嗜酸粒細胞增多綜合征、'隄性嗜酸性粒細胞白血病和對伊馬替尼有耐藥性的嗜酸粒細胞增多綜合征。本發明涉及式(I)的嘧咬基氨基苯曱酰胺化合物及此類化合物的N-氧化物或藥學上可接受的鹽的用途&代表氫、低級烷基、低級烷l^-低級烷基、酰氧基-低級烷基、羧基-低級烷基、低級烷氧基-低級烷基或苯基-低級烷基；R2代表氫、任選被一或多個相同或不同基團R3取代的低級烷基、環烷基、苯并環烷基(benzcycloalkyl)、雜環基、芳基或含有0、1、2或3個環氮原子和0或1個氧原子和0或1個硫原子的單環或雙環雜芳基，該基團在任何情況下均為未取代的或單取代或多取代的；
發明內容其中:并且R3代表羥基、低級烷M、酰氧基、羧基、低級烷llJJ^、氨基甲酰基、N-單-或N，N-二取代的氨基甲酰基、氨基、單取代或二取代的氨基、環烷基、雜環基、芳基或含有0、1、2或3個環氮原子和0或l個氧原子和0或1個硫原子的單環或雙環雜芳基，該基團在任何情況下均為未取代的或單取代或多取代的；或者其中Ri和R2—起代表具有4、5或6個碳原子的亞烷基，任選被下列基團單取代或二取代低級烷基、環烷基、雜環基、苯基、羥基、低級烷氧基、氨基、單取代或二取代的氨基、氧代、吡咬基、吡溱基或嘧啶基；具有4或5個碳原子的benzalkylene;具有1個氧原子和3或4個碳原子的氧雜亞烷基；具有1個氮原子和3或4個碳原子的氮雜亞烷基，其中氮為未取代的或被下列基團取代低級烷基、苯基-低級烷基、低級烷氧基羰基-低級烷基、g-低級烷基、氨基甲酰基-低級烷基、N-單-或N,N-二取代的氨基甲酰基-低級烷基、環烷基、低級烷氧基羰基、羧基、苯基、取代的苯基、吡咬基、嘧^^基或吡漆基；R4代表氫、低級烷基或卣素；所述化合物用于制備治療FIPlLl-PDGFRa或TEL-PDGFRP-誘導的骨髓增生性疾病的藥用組合物，特別是用于治愈性治療和/或預防性治療骨髓單核細胞白血病、嗜酸粒細胞增多綜合征、慢性嗜酸性粒細胞白血病和對伊馬替尼有耐藥性的嗜酸粒細胞增多綜合征或對伊馬替尼有耐藥性的骨髓單核細胞白血病。本發明也涉及式I化合物在治療或預防FIPlLl-PDGFRa或TEL-PDGFR卩誘導的骨髓增生性疾病中的用途，特別是用于治愈性治療和/或預防性治療骨髓單核細胞白血病、慢性嗜酸性粒細胞白血病、嗜酸粒細胞增多綜合征和對伊馬替尼有耐藥性的嗜酸粒細胞增多綜合征。除非另外說明，在上下文中采用的通用術語優選在本文中具有下列定義前綴"低級"代表具有至多并包括最多7個碳原子的基團，特別是具有至多并包括最多4個碳原子的基團，所述基團可以是直鏈的或具有單個或多個支鏈的支鏈。當化合物、鹽等采用復數形式時，也意味著包括單數形式的化合物、鹽等。任何不對稱碳原子均可以(R)-、(S)-或(R，S)-構型存在，優選以(R)-或(S)-構型存在。因此，化合物可以為異構體的混合物或為純異構體，優選為對映體純的非對映異構體。本發明也包括可能存在的式I化合物的互變異構體。低級烷基優選為l(包括l)至7(包括7)的烷基，優選為l(包括l)至4(包括4)的烷基，為直鏈或支鏈；優選低級烷基為丁基，例如整丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基；丙基，例如整丙基或異丙基；乙基或甲基。優選低級烷基為曱基、丙基或叔丁基。低級酰基優選為甲酰基或低級烷基羰基，特別是乙酰基。芳基為通過位于該基團的芳環碳原子的鍵與分子結合的芳族基團。在優選的實施方案中，芳基為具有6-14個碳原子的芳族基團，特別是苯基、萘基、四氫萘基、芴基或菲基，所述芳基為未取代的或被一或多個(優選至多3個，特別是1或2個)取代基所取代，所述取代基特別選自氨基、單取代或二取代的氨基、卣素、低級烷基、取代的低級烷基、低級鏈烯基、低級炔基、苯基、羥基、醚化或酯化的羥基、硝基、氰基、羧基、酯化的羧基、烷酰基、苯甲酰基、氨基曱酰基、N-單-或N，N-二取代的氨基曱酰基、脒基、胍基、脲基、巰基、硫代、低級烷硫基、^^基、苯基-低級烷硫基、低級烷基苯硫基、低級烷基亞磺酰基、苯基亞磺酰基、苯基-低級烷基亞磺酰基、低級烷基苯基亞磺酰基、低級烷基磺酰基、苯基磺酰基、苯基-低級烷基磺酰基、低級烷基苯基磺酰基、卣素-低級烷基巰基、卣素-低級烷基磺酰基(例如特別是三氟曱磺酰基)、二羥基硼雜基(dihydroxybora)(-B(OH)2)、雜環基、單環或雙環雜芳基和與所述環的鄰位碳原子相連的低級亞烷基二氧基(例如亞甲基二氧基)。所述芳基更優選為苯基、萘基或四氫萘基，在任何情況下它們均可以是未取代的或被1或2個選自下列基團的取代基所獨立取代鹵素，特別是氟、氯或溴；羥基；被低級烷基(例如甲基)、被鹵素-低級烷基(例如三氟甲基)或被苯基醚化的羥基；與相鄰碳原子相連的低級亞烷基二氧基，例如亞曱基二氧基；低級烷基，例如甲基或丙基；鹵素-低級烷基，例如三氟甲基；羥基-低級烷基，例如羥基甲基或2-羥基-2-丙基；低級烷氧基-低級烷基，例如甲氧基甲基或2-甲氧基乙基；低級烷lL&羰基-低級烷基，例如曱氧基羰基甲基；低級炔基，例如l-丙炔基；酯化的羧基，特別是低級烷氧基羰基，例如甲氧基羰基、正丙氧基羰基或異丙氧基羰基；N-單-取代的氨基甲酰基，特別是被低級烷基(例如甲基、正丙基或異丙基)單取代的氨基甲酰基；氨基；低級烷基氨基，例如甲基氨基；二-低級烷基氨基，例如二曱基氨基或二乙基氨基；低級亞烷基-氨基，例如吡咯烷子基或哌啶子基；低級氧雜亞烷基-氨基，例如嗎啉代；低級氮雜亞烷基-氨基，例如旅，秦子基；酰基氨基，例如乙酰基M或苯甲酰基氨基；低級烷基磺酰基，例如曱基磺酰基；氨磺酰基或M酰基。環烷基優選為環丙基、環戊基、環己基或環庚基，并且可以是未取代的或被一或多個(特別是1或2個)選自上面芳基的取代基中所定義的取代基所取代，最優選被低級烷基(例如甲基)、低級烷氧基(例如甲氧基或乙氧基)或羥基所取代，也可以被氧代取代或者與苯并環稠合，例如與苯環稠合，例如苯并環戊基或苯并環己基。取代的烷基為上面所定義的烷基，特別是低級烷基，優選曱基；其中可以存在一或多個(特別是至多3個)取代基，取代基主要選自囟素(特別是氟)、氨基、N-低級烷基氨基、N,N-二-低級烷基氨基、N-低級烷酰基氨基、羥基、氰基、羧基、低級烷氧基羰基和苯基-低級烷氧基羰基。特別優選三氟曱基。單取代或二取代的M優選為被l或2個選自下列彼此互相獨立的基團所取代的氨基低級烷基，例如甲基；羥基-低級烷基，例如2-羥基乙基；低級烷氧基低級烷基，例如甲氧基乙基；苯基-低級烷基，例如爺基或2-苯基乙基；低級烷酰基，例如乙酰基；苯甲酰基；取代的苯甲酰基，其中苯基特別被一或多個(優選1或2個)選自下列的基團所取代硝基、氨基、卣素、N-低級烷基氨基、N,N-二-低級烷基M、羥基、、、低級烷氧基tt、低級烷酰基和氨基曱酰基；苯基-低級烷氧基羰基，其中苯基為未取代的或特別被一或多個(優選1或2個)選自下列基團的取代基所取代硝基、M、鹵素、N-低級烷基M、N,N-二-低級烷基M、羥基、氰基、羧基、低級烷氧基羰基、低級烷酰基和氨基甲酰基；并且所述單取代或二取代的M優選N-低級烷基氨基，例如N-甲基氨基；羥基-低級烷基氨基，例如2-羥基乙基氨基或2-羥基丙基氨基；低級烷ftj^低級烷基氨基，例如甲氧基乙基氨基；苯基-低級烷基氨基，例如節基氨基；N，N-二-低級烷基氨基；N-苯基-低級烷基-N-低級烷基氨基；N，N-二-低級烷基苯基氨基；低級烷酰基氨基，例如乙酰基氨基，或一個選自苯甲酰基氨基和苯基-低級烷氧基氨基的取代基，其中苯基在任何情況下均可以是未取代的或者特別被硝基或氨基所取代，或者也可以被下列基團取代閨素、氨基、N-低級烷基M、N，N-二-低級烷基氨基、羥基、氰基、羧基、低級垸氧基羰基、低級烷酰基、氨基甲酰基或氨基羰基氨基。二取代的氨基也可以是低級亞烷基-氛基，例如吡咯烷子基、2-氧代吡咯烷子基或哌啶子基；低級氧雜亞烷基-氨基，例如嗎啉代或低級氮雜亞烷基-氨基，例如旅，秦子基或N-取代的哌，秦子基，例如N-甲基哌溱子基或N-甲氧基羰基哌，秦子基。鹵素優選為氟、氯、溴或碘，特別是氟、氯或溴。醚化的羥基優選為CVC2。烷基氧基，例如正癸基氧基；低級烷氧基(優選)，例如甲氧基、乙氧基、異丙氧基或叔-丁基氧基；苯基-低級烷氧基，例如芐氧基；苯基氧基；卣素-低級烷氧基，例如三氟甲氧基、2,2，2-三氟乙氧基或1,1，2，2-四氟乙氧基或被含有1或2個氮原子的單環或雙環雜芳基取代的低級烷氧基，優選被下列基團取代的低級烷氧基咪唑基(例如IH-咪喳-l-基)、吡咯基、苯并咪喳基(例如l-苯并咪唑基)、吡^(特別是2-、3-或4-p比^&)、嘧"^(特別是2-嘧^)、吡溱基、異會啉基(特別是3-異查啉基)、奮啉基、吲咮基或噻唑基。酯化的羥基優選為低級烷酰基氧基、苯甲酰基氧基、低級烷氧基羰基氧基(例如叔-丁氧基羰基氧基)或苯基-低級烷氧基羰基氧基(例如節氧基羰基氧基)。酯化的M優選為低級烷氧基羰基(例如叔-丁g氛基、異-丙氧基羰基、甲氧基羰基或乙氧基羰基)、苯基-低級烷氧基羰基或苯氧基羰基。烷酰基主要為烷基羰基，特別是低級烷酰基，例如乙酰基。N-單—或N，N-二取代的氨基甲酰基優選被1或2個獨立選自下列基團的取代基所取代低級烷基、苯基-低級烷基和羥基-低級烷基或低級亞烷基、氧雜-低級亞烷基或在末端氮原子上任選被取代的氮雜-低級亞烷基。含有0、1、2或3個環氮原子和0或1個氧原子以及0或1個確^原子或多取代的)是指連接雜芳基與式I分子中其它部分的環為不飽和的雜環基團，其中在連接環中(也任選在任何捏合(annealed)環中)，至少1個碳原子被選自氮、氧和硫的雜原子所代替；其中所述連接環優選具有5-12個、更優選具有5或6個環原子；并且它可以是未取代的或^:一或多個(特別是1或2個)選自上面芳基的取代基中所定義的取代基所取代，最優選被低級烷基(例如曱基)、低級烷氧基(例如曱氧基或乙氧基)或羥基所取代。優選所述單環或雙環雜芳基選自2H-吡咯基、吡咯基、咪唑基、苯并咪哇基、吡唑基、吲唑基、噤呤基、吡淀基、吡噢基、嘧啶基、噠喚基、4H-喹喚基、異會啉基、查啉基、2,3-二氮雜萘基、1,5-二氮雜萘基、喹喔啉基、喹唑啉基、查啉基、蝶咬基、中氮茚基、3H-吲咮基、吲咪基、異吲咮基、噁唑基、異噴、唑基、噻唑基、異噻唑基、三唑基、四唑基、呋咱基、苯并[d吡唑基、瘞吩基和呋喃基。更優選單環或雙環雜芳基選自吡咯基、咪唑基(例如1H-咪哇-l-基)、苯并咪唑基(例如l-苯并咪唑基)、P引唑基(特別是5-吲唑基)、吡^(特別是2-、3-或4-吡咬基)、嘧^^(特別是2-嘧^&)、p比溱基、異會啉基(特別是3-異會啉基)、查啉基(特別是4-或8-會啉基)、吲哚基(特別是3-吲咪基)、噻唑基、苯并[d]吡哇基、瘞吩基和呋喃基。在本發明的一個優選的實施方案中，所述吡咬基基團可以在氮原子的鄰位被羥基取代，從而至少部分以吡啶-(lH)2-酮的相應的互變異構體形式存在。在另一個優選的實施方案中，所述嘧^基團可以在2和4位上同時^皮羥基取代，從而可以以幾種互變異構體形式存在，例如嘧咬-(lH，3H)2，4-二酮。雜環基優選為具有1或2個選自氮、氧和石危的雜原子的5、6或7元雜環體系，它可以是不飽和的或者也可以是完全或部分飽和的，并且可以是未取代的或是特別被下列基團取代的低級烷基(例如甲基)、苯基-低級烷基(例如千基)、氧代或雜芳基(例如2-哌溱基)；所述雜環基特別為2-或3-吡咯烷基、2-氧代-5-吡咯烷基、哌咬基、N-千基-4-哌"^基、]\-低級烷基-4-哌咬基、N-低級烷基-哌溱基、嗎啉基(例如2-或3-嗎啉基)、2-氧代-lH-氮雜萆-3-基、2-四氫呋喃基或2-曱基-l，3-二氧戊環-2-基。鹽優選為式I化合物藥學上可接受的鹽。此類鹽優選由具有堿性氮原子的式I化合物與有機酸或無機酸形成，例如，為酸加成鹽，特別是藥學上可接受的鹽。適當的無機酸為，例如，面酸(例如鹽酸)、硫酸或磷酸。適當的有機酸為，例如，羧酸、膦酸、磺酸或M磺酸，例如乙酸、丙酸、辛酸、癸酸、十二烷酸、羥基乙酸、乳酸、富馬酸、琥珀酸、己二酸、庚二酸、辛二酸、壬二酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、氨基酸(例如谷氨酸或天冬氨酸)、馬來酸、羥基馬來酸、甲基馬來酸酸、環己烷甲酸、金剛烷曱酸、苯甲酸、水楊酸、4-氨基7JC楊酸、鄰苯二曱酸、苯乙酸、扁桃酸、肉桂酸、甲烷-或乙垸-磺酸、2-羥基乙烷磺酸、乙烷-l，2-二磺酸、M酸、2-^t酸、1,5-萘-二磺酸、2-、3-或4-甲基恭晴酸、曱基硫酸、乙基硫酸、十二烷硫酸、N-環己基氨基磺酸、N-甲基-、N-乙基-或N-丙基-^J^磺酸或其它有機質子酸，例如抗壞血酸。當有負電荷的基團存在時，例如g或磺M在時，也可以與堿形成鹽，例如金屬鹽或銨鹽，如堿金屬或堿土金屬鹽(例如鈉、鉀、鎂或鈞鹽)，或者與氨或適當的有機胺形成的銨鹽，所述胺例如叔單胺類(如三乙胺或三(2-羥基乙基)胺)或雜環堿類(例如N-乙基-哌咬或N，N'-二甲基旅噪)。當堿性基團和酸性基團存在于同一分子中時，式I化合物也可以形成內鹽。為方便分離或純化，也可以采用藥學上不可接受的鹽，例如苦p木酸鹽或高氯酸鹽。當在治療中使用時，只能采用藥學上可接受的鹽或游離化合物(當應用于藥物制劑中時)，因此優選上述這些鹽。考慮到新化合物游離形式與其鹽形式(包括那些用作中間體的鹽，例如在新化合物純化或鑒別中使用的鹽)之間的緊密聯系，因此，如果適當且方便的話，在上下文中任何時候提及游離化合物時都可以理解為也是指其相應的鹽。式I范圍中的化合物及其生產方法公開于2004年1月15日公開的WO04/005281,該文獻引入本申請作為參考。優選的化合物為式(II)的4-甲基-3-[[4-(3-吡咬基)-2-嘧啶基]氨基-AM5-(4-甲基-lH-咪唑-l-基)-3-(三氟甲基)苯基苯甲酰胺及其N-氧化物和藥學上可接受的鹽在任何情況下，當引用的專利申請或科學出版物特別用于述及式(I)化合物時，這些出版物中的終產物、藥物制劑以及權利要求均引入本申請作為參考。由編碼、通用名或商品名標示的活性成分的結構可以通過新版"TheMerckIndex"標準大綱或數據庫查找，例如PatentsInternational(如IMSWorldPublications)。其相應的內容也引入本文作為參考。申請人驚喜地發現，式(I)化合物具有治療性能，特別是可以用作PDGFRa(血小板衍生的生長因子a，也可以縮寫為PDGRA)的抑制劑，特別是用于治療和預防TEL-PDGFR卩和FIPlLl-PDGFRai秀導的疾病，例如HES、CEL和對伊馬替尼有耐藥性的HES。在上下文中采用的FIPlLl-PDGFRa代表基因FIP1L1(FIP1likel)與PDGFRa的融合產物。在上下文中采用的TEL-PDGFRP代表基因TEL與PDGFR卩的融合產物。化合物(II)能夠抑制采用TEL-PDGFR(3轉化的Ba/F3細胞，也能夠有效抑制TEL-PDGFR(3酪氨酸的自磷酸化以及已知的PDGFR卩信號中間體(包括PLC和PI3K)的磷酸化。化合物(II)也能夠抑制采用TEL-PDGFRPT6811突變體轉化的Ba/F3細胞，該突變體為與BCR-ABL中T3151突變(它導致了對伊馬替尼的耐藥性)同源的突變。所以，本發明涉及式(I)化合物在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療FIPlLl-PDGFRa-和TEL-PDGFR卩i秀導的骨髓增生性疾病或其它與FIPLl-PDGFRa或TEL-PDGFR卩或能夠激活PDGFR的相似突變有關的疾病。本文中所用術語"FIPlLl-PDGFRa;誘導的骨髓增生性疾病，，包括但不限于慢性嗜酸性粒細胞白血病、嗜酸粒細胞增多綜合征和對伊馬替尼有耐藥性的嗜酸粒細胞增多綜合征。該術語也特別包括由FIPlLl-PDGFRa突變導致的疾病，特別是FIPlLl-PDGFRaT6741突變導致的疾病。本發明更特別涉及式(I)化合物在制備用于治療下列疾病的藥物中的用途骨髓單核細胞白血病、慢性嗜酸性粒細胞白血病、CMML嗜酸粒細胞增多綜合征、對伊馬替尼有耐藥性的嗜酸粒細胞增多綜合征和對伊馬替尼有耐藥性的骨髓單核細胞白血病。在另一個實施方案中，本發明提供了治療FIPlLl-PDGFRa-和TEL-PDGFRP誘導的骨髓增生性疾病的方法，它包括給予需要此類治療的哺乳動物治療有效量的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽或其前藥。優選本發明提供治療患有FIPlLl-PDGFRa-或TEL-PDGFR卩誘導的骨髓增生性疾病的哺乳動物(尤其是人類)的方法，它包括給予需要此類治療的哺乳動物FIPlLl-PDGFRa或TEL-PDGFR卩抑制量的4-甲基-3-[[4-(3-吡咬基)-2-嘧咬基]氨基-N-[5-(4-甲基-lH-咪唑-l-基)-3-(三氟甲基)苯基]苯曱酰胺(化合物(II))或其藥學上可接受的鹽。優選所述方法用于治療FIPlLl-PDGFRa誘導的骨髓增生性疾病。更優選所述方法用于治療嗜酸粒細胞增多綜合征或對伊馬替尼有耐藥性的嗜酸粒細胞增多綜合征。在另一個實施方案中，本發明涉及式(I)化合物在制備用于治療FIPlLl-PDGFRa-或TEL-PDGFR卩誘導的骨髓增生性疾病的藥用組合物中的用途，更優選用于治療骨髓單核細胞白血病、慢性嗜酸性粒細胞白血病、嗜酸粒細胞增多綜合征或對伊馬替尼有耐藥性的嗜酸粒細胞增多綜合征。在本說明書中，術語"治療"包括預防性治療以及治愈性治療或疾病抑制性治療，包括對具有患病風險或疑似具有患病風險的患者以及已患病患者的治療。該術語還包括用于延緩疾病進程的治療。本文中所用術語"治愈性治療，，是指能夠有效治療正在進行的疾病發作，包括FIPlLl-PDGFRa-或TEL-PDGFR|3誘導的骨髓增生性疾病。術語"預防"是指對疾病包括FIPlLl-PDGFRa-或TEL-PDGFR(3誘導的骨髓增生性疾病的發作和復發的預防。本文中所用術語"延緩進程"是指在待治療疾病發作之前或發作的初級階段給予患者活性化合物，其中患者例如在相應疾病的前期被診斷，或者患者處于病癥中(例如藥物治療期間)或由于意外導致的病癥中，在這些情況下，4艮有可能發展為相應的疾病。這些無法預見的性能意味著式(I)化合物特別適用于生產用于治療包括FIPlLl-PDGFRa-或TEL-PDGFR卩誘導的骨髓增生性疾病在內的疾病的藥物。該作用在臨床上可能特別與患有嗜酸粒細胞增多綜合征或對伊馬替尼有耐藥性的嗜酸粒細胞增多綜合征的患者相關。為證明式(I)化合物特別適用于治療FIPlLl-PDGFRa-或TEL-PDGFRJ3誘導的骨髓增生性疾病并具有良好的治療范圍和其它優點，可以通過技術人員所熟知的方法進行臨床試驗。能夠抑制FIPlLl-PDGFRa或TEL-PDGFR(3活性從而用于治療FIPlLl-PDGFRcv-或TEL-PDGFR|3豫導的骨髓增生性疾病的式(I)化合物的精確劑量取決于多個因素，包括宿主、待治療病癥的性質和嚴重性、給藥的模式。式I化合物可以通過各種途徑給藥，包括口服給藥，胃腸外給藥，例如，靜脈、腹膜內、肌肉、皮下、腫瘤內或直腸給藥，或者腸道給藥。優選式I化合物通過口服給藥，優選日劑量為1-300mg/kg體重，或者對于較大的靈長類動物，日劑量為50-5000mg，優選500-3000mg。優選口服日劑量為l-75mg/kg體重，或者，對于較大的靈長類動物，日劑量為10-2000mg,可以單劑量給藥或者多劑量給藥，例如每天二次。通常，初期給予小劑量，然后逐漸增加劑量直到確定待治療宿主的最佳劑量。劑量的上限取決于副作用，可以通過對待治療的宿主的臨床試驗力口以確定。式I化合物可以與一或多種藥學上可接受的載體以及任選的一或多種其它傳統藥用輔助劑結合，以片劑、膠嚢、囊片等形式通過胃腸道例如口服給藥，或者以無菌注射溶液或懸浮液的形式通過腸胃外例如腹膜內或靜脈內給藥。胃腸道和胃腸外給藥的組合物可以通過傳統方法進行制備。式(I)化合物可以單獨使用或者與至少一種在這些病理狀態下4吏用的其它藥用活性化合物組合使用。這些活性化合物可以在相同藥物制劑中組合應用，或者以組合制劑"套盒"的形式組合應用，也就是說組合成分可以獨立給藥或通過不同的固定組合以不同量的組合成分使用，即同時或在不同的時間點使用。套盒的成分可以例如同時給藥或者按順序交替(即在不同的時間點)給藥，套盒的任何成分均可以采用相同的時間間隔或不同的時間間隔給藥。與式(I)化合物組合應用的化合物的非限定性實例為細胞毒化療藥物，例如阿糖胞苷、柔紅霉素、阿霉素、環磷酰胺、VP-16或伊馬替尼等。另外，式(I)化合物可以與其它信號轉導抑制劑或其它致癌基因靶向藥物組合應用，預期能夠產生有顯著的協同作用。本發明也涉及上文中所述的式(I)化合物與伊馬替尼的組合應用，用于治療上文中所述的疾病和病癥。此類組合的給藥可以同時進行，例如以固定的、組合的藥用組合物或制劑的形式，或者按順序或交替給藥。目前優選采用上文中所述劑型的式(I)化合物和在美國以GLEEVEC、在歐洲以GLIVEC⑧上市的伊馬替尼的給藥以及這些劑型的設定的劑量。采用上述組合對FIPlLl-PDGFRo;-或TEL-PDGFR卩誘導的骨髓增生性疾病的治療可以是所謂的一線治療，即可以用于治療剛剛診斷出來并且沒有進行任何化療等的疾病，或者它也可以是所謂的二線治療，即用于治療那些已經采用伊馬替尼或式(I)化合物治療過的疾病，這取決于疾病的嚴重性或階段以及患者的整體情況。用于治療FIP1L1-PDGFR0！或TEL-PDGFRPi秀導的骨髓增生性疾病的式(I)化合物的療效可以通過下列實施例的結果說明。這些實施例只是用于說明本發明，在任何情況下并非用于限定其范圍。構建將在MSCV畫IRES-GFP[MSCV-GFP和J^X-尸Z)(7i^iS、r五丄？DGF及i8T6811和[T/F中克隆的T^丄-ZV)(7F及i8[T/P、FJP!L-戶DGFia[F/P和尸/P!U-尸Z)(7FiaT674I在MSCV國新霉素[MSCV-neo]中克隆。將D842V突變引入野生型尸DGjPJ^cDNA并在MSCV-噤呤霉素[MSCV-puro中克隆。細胞培養、逆轉錄病毒生產和Ba/F3細胞的轉導將293T細胞在Dulbecco改良Eagle培養基(DMEM)+10。/o胎牛血清(FBS)中進行培養。將Ba/F3細胞在RPMI1640(RPMI)十10%FBS+lng/mL小鼠白細胞介素(IL)-3中進行進行培養。產生逆轉錄病毒的上清液，用于轉化Ba/F3細胞。在IL-3存在下，采用1mg/mLG418篩選T/PMSCV-neo和T/FMSCV-neo細胞系8-10天。在沒有IL-3的RPMI中，篩選F/PMSCV-GFP細胞系7-10天。在2照/mL噤呤霉素中，篩選PDGFRaD842VMSCV-puro細胞系7-14天。轉化的Ba/F3細胞在沒有IL-3的RPMI中生長。IL-3非依賴性細胞增殖分析根據供應商的說明書，采用PerkinElmerLifeSciences(Cat.No:繁殖的作用。該分析系統根據由ATP與加入的熒光素酶和D-熒光素的反應引起光(熒光)的產生而建立。將在RPMI1640(Invitromex，Cat.No.:L0501)、10%胎牛血清(Amimed，Cat.No.:2-01F86-I)、2mML-谷氨酰胺(Gibco)懸浮液中生長的Ba/F3FIP-PDGFRa和Ba/F3Tel-PDGFRj8細胞系以每孔10000個細胞的密度接種于黑色96孔組織培養板(Packard)，每孔中加入所述細胞系的50完全培養基，然后每孔立即加入50nL2倍濃縮的化合物(雙份)的系列兩倍稀釋液。采用不含化合物的細胞作為對照，不含細胞的培養基用于測定分析的基線信號。培養70小時(37。C,5。/。C02)后，通過每孔加入50的哺乳動物細胞溶解溶液(試劑盒提供)并在軌道平板震蕩器中以700rpm速度震蕩5分鐘將細胞溶解。隨后，加入50jiL底物溶液(熒光素酶和D-熒光素)，震蕩5分鐘并使平板暗-適應10分鐘后，采用PackardT叩Count測定光發射。以細胞培養的總生長抑制率(TGI)測定化合物活性，并計算如下減去基線信號后，將自對照細胞獲得的信號作為100%。化合物的作用通過對照信號的減少百分數表示。通過圖解外推法自劑量響應曲線測定TGIso值。1<:50值<100nM的化合物(II)能夠抑制Ba/F3FIP-PDGFRa和Ba/F3Tel-PDGFR/3兩種細胞的增殖。BCR-ABL中T315I突變導致了對伊馬替尼的耐藥性，并且任何已知的小分子酪氨酸激酶抑制劑均不能抑制該突變。TEL-PDGFRP中的類似突變為T681I，該突變也導致了伊馬替尼-耐藥性。ICs。值〈25nM的化合物(H)能夠抑制TEL-PDGFRPT681I突變轉化的Ba/F3細胞，該值與非突變TEL-PDGFRP融合的值相似。Western印跡法對于F/P:將Ba/F3細胞采用指定濃度的化合物(II)在不含FBS或IL-3的RPMI中培養4小時。將細胞在緩沖液[含有lMNa2EDTA、1MNaF、0.1。/。TritonX-100、200mMNa3VO4、200mM苯基氧化砷和完全蛋白酶抑制劑片劑(Roche)的PBS]中溶解。將50pg蛋白溶解產物與還原SDS上樣緩沖液十二硫蘇糖醇(CellSignaling)混合，然后在10-12%SDS-PAGE凝膠(Tris-HCl預制凝膠，Bio-Rad)上電泳并轉移到硝基纖維素膜上。采用的抗體為磷酸畫PDGFRa(Tyr720)、PDGFRa951、Stat5-b(SantaCruz);磷酸-Stat5(Tyr694)(CellSignaling);抗兔-過氧化物酶(AmershamPharmaciaBiotech)。對于T/P:在進行細胞溶解之前，將穩定表達T/P或T/F的Ba/F3細胞采用血清饑餓法在普通RPMI1640中處理4小時。通過離心使得細胞抽提物澄清，然后用于免疫沉淀反應或免疫印跡法。酶聯免疫印跡法的步驟根據下列描述進行。采用的抗體包括兔抗-PDGFRP血清(Pharmingen);兔抗-PI3K(p85)血清；鼠抗磷酸酪氨酸4G10(UpstateBiotechnology);抗FGFR3抗體，磷酸-PI3Kp85(Tyr國508)(SantaCruzBiotechnology);PLCy，磷酸-PLCy(Tyr隱783)(Ce11Signaling).小鼠的骨髓移植和藥物治療小鼠的骨髓抑制試驗如前所述進行。采用上清液(加上polybrene，10Hg/mL)，將MSCV-GFP逆轉錄病毒上清液通過轉換Ba/F3細胞進行效價測定，轉導后48小時，通過流動血細胞計數儀分析GFP+細胞的百分數。釆用5-氟尿嘧啶(150mg/kg,腹膜內注射)將Balb/C供體小鼠(Taconic)處理5-6天。收集供體小鼠的骨髓細胞，用紅細胞溶解緩沖液處理，在移植培養基(RPMI+10%FBS+6ng/mLIL曙3、10ng/mLIL-6和10ng/mL干細胞因子)中培養24小時。將細胞采用逆轉錄病毒上清液(lmL上清液中含有4x106細胞，加上polybrene)通過旋轉感染(spininfection)處理，以2500rpm離心90分鐘。24小時后，重復旋轉感染，然后洗滌細胞，再懸浮于Hank氏平衡鹽溶液中，然后以0.5-1xl06細胞/小鼠的劑量將其注射到接受致命照射(2x450rad)的Balb/C小鼠(Taconic)的側尾部靜脈中。采用的化合物(II)為粉末形式，在NMP(N-甲基-2-吡咯烷酮，Aldrich)中制備為儲備液，注射時用聚乙二醇300(Sigma)稀釋。移植后ll天開始，每24小時用22號管飼針頭通過經口管飼法將動物釆用75mg/kg/天的化合物(II)或安慰劑(聚乙二醇，與化合物(II)的體積相同)處理。當動物明顯脾大時或者垂死時將其處死，或者，如果還是健康時，在安慰劑組中最后的動物被處死后的7天處死。小鼠骨髓增生性疾病分析采用肝素處理的玻璃毛細管自眼窩后槽收集外周血，通過自動全血和分類血細胞計數儀和涂布劑(采用Wright和Giemsa染色)進行分析。通過細胞濾器壓緊組織制備脾和骨髓的單細胞懸浮液，然后進行紅細胞溶解。將細胞在90。/oFBS、10VoDMSO中冷凍。對于組織病理學研究，將組織在10%中性緩沖的福爾馬林中固定至少72小時，在乙醇中脫水，二甲苯中清除，在全自動分析儀(Leica)中用石蠟浸潤。將得自石蠟包埋的組織塊的組織切片(4nm)置于帶電玻片上，在二甲苯中脫去石蠟，通過分級乙醇溶液再水合，用蘇木精和曙紅染色。對于流動血細胞計數研究，將細胞在PBS+l。/o牛血清蛋白(BSA)中洗滌，在冰上用Fc-Block(BDPharmingen)包封10分鐘，在冰上用單克隆抗體在PBS+1%BSA中染色20分鐘。采用的抗體為別藻藍蛋白(APC)-共軛的Grl、CD19和TCRB;藻紅蛋白(phycoethrin)(PE)-共軛的Mac-l、B220和CD3^BDPharmingen)。流動血細胞計數分析在FACSCalibur儀器上進行，采用CellQuest軟件進行分析。通過采用7AAD(BDPharmingen)將細胞培養5分鐘然后進行流動血細胞計數評價存活力。根據細胞存活力(采用前向角散射光和7AAD)和GFP進行正性分級，從該亞類中分析IO，OOO個用于標記物表達的事件。采用雙側Mann-WhitneyU-檢驗(Wilcoxonranksumtest),評價化合物(II)處理組和安慰劑處理組在存活時間、白血細胞計數和脾臟重量之間的差別的統計學意義。小鼠BMT分析顯示化合物(II)能夠有效治療TEL-PDGFRf3和FIPlLl-PDGFRa誘導的骨髓增生性疾病。小鼠骨髓移植方案用于制備由TEL-PDGFR(3和FIPlLl-PDGFRa引起的骨髓增生性疾病模型。通過將這些融合激酶的逆轉錄病毒轉導進5FU處理的供體小鼠的骨髓細胞中，然后將其移植到經過致命照射的受體中，從而產生快速致命的骨髓組織增殖表型，其特征在于骨髓支配的白細胞增多、脾臟腫大和髓外造血。將供體骨髓細胞采用表達TEL-PDGFR^或FIPlLl-PDGFRa的小鼠逆轉錄病毒載體轉導并移植進受體中。將T/P或F/P移植的小鼠分成兩組，采用每日口服管飼安慰劑或者采用化合物(II)進行處理，劑量為150mg/kg/天，移植后第ll天開始。TEL-PDGFRP安慰劑組發展為完全的滲透性骨髓增生性疾病，平均潛伏期為17天；所有的T/P處理的動物由于疾病的M在第18天時死亡。相反，所有化合物(II)處理組的動物在前面定義的研究終點(安慰劑動物死亡時間后7天)仍然存活，化合物(II)組中存活率具有統計學意義的延長(26天；pO.OOl)。與安慰劑處理動物相比，化合物(II)處理動物在總白細胞數(WBC)(安慰劑為563.7xl06細胞/mL，而化合物(II)為18.6x106細胞/mL，p〈0.05)和脾臟重量(安慰劑為802.5mg，而化合物(II)為350.0mg，pO.Ol)方面也具有統計學意義的減少(表1)。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>患有TEL-PDGFR(3誘導的疾病的安慰劑處理小鼠的造血器官的組織病理學表明成熟骨髓形態的大量浸潤，完全改變了正常的脾臟結構。進一步的研究表明具有成熟骨髓形態占據完全優勢的明顯的高白細胞性骨髓。在肝臟中觀察到髓外造血，在外周血中觀察到明顯的白細胞增多。與安慰劑處理的對照組相比，盡管也存在骨髓擴張的跡象，但TEL-PDGFR卩化合物(II)處理小鼠的器官的組織病理學實驗表明非常少見嚴重骨髓增生性疾病。與安慰劑處理組相比，盡管TEL-PDFGR(3化合物(II)處理動物的脾臟結構也會發生改變時，但是其脾臟的紅髓和白髓可以保存的相對完好。與安慰劑處理動物中觀察到的骨髓占據優勢的情況相比，化合物(II)處理動物脾臟的其它分析也證明脾臟紅髓似乎被成熟骨髓形態和紅細胞成分的混合物擴張。在化合物(n)處理動物的骨髓中也觀察到相似的改變，盡管白細胞過多，但與安慰劑處理組中骨髓細胞在骨髓中完全占據優勢的情況相比，它仍然顯示了骨髓細胞和紅細胞成分的混合物。最后，TEL-PDGFRP化合物(II)處理動物中肺瘤發生明顯減少也反映在這些動物的肝臟切片中，它顯示只有髓外造血的病灶斑，而在安慰劑處理動物中X!i察到廣泛的肝臟損害。與正常脾臟相比，T/P安慰劑處理動物脾臟的FACS分析顯示Grl+/Macl+細胞的明顯增加和B淋巴細胞(B220+,CD19+)的降低。在組織病理學研究的證據中，化合物(II)處理動物顯示了相似的骨髓增生的模式，但與安慰劑相比，Grl+/Macl+細胞的百分率保持降4氐，而B220十/CD19+的百分率略有增加。在FIPlLl-PDGFRa骨髓移植試驗中，在安慰劑組和化合物(II)組之間觀察到更大的差異。安慰劑處理動物4艮快a成致命的骨髓增生性疾病，與前面所述的FIPlLl-PDGFRa的情況相似。所有的安慰劑動物均由于疾病在24天時死亡，而所有的化合物(II)處理動物直到33天4^研究中止時仍然保持存活和健康。與安慰劑處理相比，化合物(II)處理使得總WBC(安慰劑為569.7x106細胞/mL，而化合物(II)為5.6x106細胞/mL，pO.01)和脾臟重量(安慰劑為731.8mg，而化合物(II)為88.0mg，p<0.01)(表l)顯著降低。組織病理學和FACS分析顯示在FIPlLl-PDGFRa安慰劑處理動物中出現嚴重的骨髓增生性疾病，脾臟和骨髓中成熟骨髓成分的大量浸潤以及安慰劑處理組肝臟中廣泛的髓外造血也對此加以了證明。相反，化合物(n)處理動物造血器官的試驗顯示正常脾臟結構保持非常好，并且紅髓中成熟骨髓成分的量顯著減少，這些動物的脾細胞的流動血細胞分析對此也加以確證。藥物處理動物的骨髓切片也顯示其較安慰劑處理動物具有顯著的改善，脂肪空間再現時幾乎沒有白細胞，骨髓成分與紅細胞成分的比例更加正常。最后，在這些藥物處理動物中化合物(II)的功效可以通過在其肝臟中沒有出現任何髓外造血而證明。臨床研究評價化合物(II)對FIPlLl-PDGFR-a轉錄水平和對取自血液和/或骨髓的惡性細胞中c-kit/PDGFR-a的突變情況的作用。HES、SM和CEL可以產生自新的融合激酶FIPlLl-PDGFR-a。SM也可以產生自KIT基因中激活的突變。用于基線FIPlLl-PDGFR-a轉錄的Q-RT-PCR，循環1:第15天，循環l、2、3:第28天，每第3個循環交替一次循環，研究結束。c-kit、PDGFR-a的突變分析。三個不同的組，每一個包括下列患者A^:HES/CEL。終點治療3個月后響應率。權利要求1.式(I)的嘧啶基氨基苯甲酰胺衍生物及此類化合物的N-氧化物或藥學上可接受的鹽的用途其中R1代表氫、低級烷基、低級烷氧基-低級烷基、酰氧基-低級烷基、羧基-低級烷基、低級烷氧基羰基-低級烷基或苯基-低級烷基；R2代表氫、任選被一或多個相同或不同基團R3取代的低級烷基、環烷基、苯并環烷基、雜環基、芳基或含有0、1、2或3個環氮原子和0或1個氧原子和0或1個硫原子的單環或雙環雜芳基，該基團在任何情況下均為未取代的或單取代或多取代的；并且R3代表羥基、低級烷氧基、酰氧基、羧基、低級烷氧基羰基、氨基甲酰基、N-單-或N，N-二取代的氨基甲酰基、氨基、單取代或二取代的氨基、環烷基、雜環基、芳基或含有0、1、2或3個環氮原子和0或1個氧原子和0或1個硫原子的單環或雙環雜芳基，該基團在任何情況下均為未取代的或單取代或多取代的；或者其中R1和R2一起代表具有4、5或6個碳原子的亞烷基，任選被下列基團單取代或二取代低級烷基、環烷基、雜環基、苯基、羥基、低級烷氧基、氨基、單取代或二取代的氨基、氧代、吡啶基、吡嗪基或嘧啶基；具有4或5個碳原子的benzalkylene；具有1個氧原子和3或4個碳原子的氧雜亞烷基；具有1個氮原子和3或4個碳原子的氮雜亞烷基，其中氮為未取代的或被下列基團取代低級烷基、苯基-低級烷基、低級烷氧基羰基-低級烷基、羧基-低級烷基、氨基甲酰基-低級烷基、N-單-或N，N-二取代的氨基甲酰基-低級烷基、環烷基、低級烷氧基羰基、羧基、苯基、取代的苯基、吡啶基、嘧啶基或吡嗪基；R4代表氫、低級烷基或鹵素；它們用于生產治療FIP1L1-PDGFRα誘導的或TEL-PDGFRβ誘導的骨髓增生性疾病的藥物。2.權利要求l的用途，其中所述骨髓增生性疾病選自骨髓單核細胞白血病、嗜酸粒細胞增多綜合征、慢性嗜酸性粒細胞白血病和對伊馬替尼有耐藥性的嗜酸粒細胞增多綜合征。3.權利要求1或2的用途，其中式(I)化合物為式(II)的4-曱基-3-[[4-(3-吡咬基)-2-嘧咬基1氨基]-7\45-(4-甲基-lH-咪唑-l-基)-3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺及其N-氧化物或藥學上可接受的鹽4.式(II)化合物或其N-氧化物或藥學上可接受的鹽的用途:用于治療或預防選自骨髓單核細胞白血病、嗜酸粒細胞增多綜合征、慢性嗜酸性粒細胞白血病和對伊馬替尼有耐藥性的嗜酸粒細胞增多綜合征的骨髓增生性疾病。5.權利要求1-3中任一項的用途，用于治療FIP1L1-PDGFR"誘導的骨髓增生性疾病，其中突變出現在FIPlLl-PDGFRa。6.權利要求5的用途，其中所述突變為T674L7.權利要求4的用途，用于治療嗜酸粒細胞增多綜合征。8.權利要求7的用途，其中所述嗜酸粒細胞增多綜合征對伊馬替尼的治療具有耐藥性。9.治療患有FIPlLl-PDGFRa誘導的或TEL-PDGFR卩誘導的骨髓增生性疾病的哺乳動物的方法，該方法包括給予需要此類治療的哺乳動物FIPlLl-PDGFRa或TEL-PDGFRP-誘導抑制量的式(II)化合物或其N-氧化物或藥學上可接受的鹽10.用于治療FIPlLl-PDGFRa誘導的或TEL-PDGFR卩誘導的骨髓增生性疾病的藥用組合物，該藥用組合物包括式(II)化合物或其N-氧化物或藥學上可接受的鹽<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>全文摘要本發明涉及嘧啶基氨基苯甲酰胺衍生物在制備用于治療FIP1L1-PDGFRα誘導的或TEL-PDGFRβ誘導的骨髓增生性疾病的藥物中的用途，特別是用于治愈性治療和/或預防性治療嗜酸粒細胞增多綜合征和對伊馬替尼有耐藥性的嗜酸粒細胞增多綜合征的藥物，本發明還涉及治療嗜酸粒細胞增多綜合征、慢性嗜酸性粒細胞白血病和對伊馬替尼有耐藥性的嗜酸粒細胞增多綜合征或其它與FIP1L1-PDGFRα、TEL-PDGFRβ或能夠激活PDGFR的相似突變有關的疾病的方法。文檔編號A61K31/506GK101160130SQ200680012650公開日2008年4月9日申請日期2006年5月2日優先權日2005年5月2日發明者D·法布羅,J·梅斯坦,P·W·曼雷申請人:諾瓦提斯公司