3，11b-順-二氫丁苯喹嗪用于治療亨廷頓病癥狀的用途的制作方法

專利名稱：：3，11b-順-二氫丁苯喹嗪用于治療亨廷頓病癥狀的用途的制作方法3,11b-順-二氬丁苯喹嗪用于治療亨廷頓病癥狀的用途本發明涉及二氫丁苯喹嗪在治療亨廷頓疾病中的用途。發明背景亨廷頓疾病，以前稱為亨廷頓舞蹈病是一種通常不能治愈的遺傳神經變異性疾病，該疾病由CAG三核苦酸在位于染色體4p16.3中的IT15基因中重復表達(稱為HD突變)，產生稱為亨廷頓的異常蛋白質形式引起。異常蛋白質觸發導致大腦紋狀體區域中神經元的死亡的過程，可能是通過在許多類型神經元中異常蛋白質的結塊或凝集。亨廷頓疾病(HD)基因包含DNA片段，它含有編碼氨基酸谷氨酸的核苷CAG的重復序列，人們發現如果在基因中存在30或更少的CAG重復單元，帶有該基因的人將不感染HD,然而帶有存在超過40個CAG重復單元的基因的人有感染該疾病的傾向。亨廷頓疾病通過正染色體顯性的遺傳類型遺傳，因而每個HD感染的雙親的小孩有50%遺傳該癥狀的機會。亨廷頓疾病的癥狀通常出現在約30-50歲的年齡，疾病通常進展超過10-25年時期。疾病的特征和癥狀包括個性改變、壓抑、情緒波動、不穩定步態、無意識舞蹈、顫搐和抽搐動作和顫動、癡呆、說話含糊、下降的判斷力、難以吞咽和喝醉外表。一旦個體出現亨廷頓疾病的癥狀，疾病過程可持續10-30年，HD過程通常可大致分成三個階段，早期、中期和晚期。在早期，患者仍可進行大多數正常活動，他們仍可工作，仍能夠駕駛。盡管他們會顯示輕微的不可控制的動作、絆倒和笨拙、缺乏注意力、短時記憶力下降和憂郁以及情緒波動，無意識動作相對輕微，說話仍然清晰和癡呆，如果存在，是輕微的。在中期階段，患者變得更加喪失能力，在某些日常活動中，通常需要幫助，在此階段，跌倒、體重降低和吞咽困難會變成問題，對不熟悉的觀察者癡呆變得更加明顯，此外，不可控制的活動變得更加明顯。在晚期，患者惡化到需要幾乎全天護理的程度，許多人需要在醫院或療養院里持續照料。在此階段，它們不再能夠行走或說話，雖然它們會顯示較少的無意識動作，會變得更加呆板。在此階段的患者通常不能夠吞咽代食物，在此階段，大多數患者失去觀察力，明顯對其周期環境無意識。當患者最終死亡時，死亡原因通常與相同自然原因有關，導致以其它嚴重患者，例如營養不良或肺炎死亡。根據US神經學癥狀和休克國家學會(NINDS),國家健康學會(NIH)的一個分會，目前還沒有停止或逆轉亨廷頓疾病進程的辦法。已作出努力以開發HD的治療方法，Karpuj等在NatureMedicine,2002年2月，vol.8,no.2,pl43-149中的一項研究包括給藥烏洛托品，顯然烏洛托品失活谷氨酰胺酶，該酶有助于產生引起該疾病的亨廷頓蛋白質的結塊。然而，目前據申請人所知，目前沒有用于治療或停止亨廷頓疾病進程的可用藥物。引起亨廷頓疾病的基因的發現(參見i侖文theHuntington'sDiseaseColla隱borativeGroup,Cell,Vol.72，March26,1993,p971)能夠開發診斷存在基因突變形式的試驗。利用聚合酶鏈(PCR)測定IT-15基因中CAG重復單元的數目的診斷試驗是目前廣泛采用的，能夠預言患者是否會發展為亨廷頓疾病的癥狀；參見例如M.Hayden等人的綜述Am.J.Hum.Genet.55:606-617(1994》S.Hersch的文章"TheNeurogeneticsGenie:TestingfortheHuntington'sdiseasemutation."Neurol.1994;44:1369-1373和R.R.Brinkman等人的文章(1997)"ThelikelihoodofbeingaffectedwithHuntingtondiseasebyaparticularage,foraspecificCAGsize",Am.J.Hum.Genet.60:1202-1210。丁苯喹嗪(化學名1,3,4,6,7,1lb-六氫-9,10-二曱氧基-3-(2-曱基丙基)-2H-苯并(a)喹。秦-2-酮)從50年代后期開始用作治療藥物，最初開發為安定藥，目前丁苯p奎。秦用于運動機能亢奮動作疾病，例如亨廷頓疾病、單側抽搐、老年舞蹈病、痙攣、遲緩運動障礙和圖雷特綜合癥的癥狀治療，參見Jankovic等，Am.J.Psychiatry.(1999)Aug;156(8):1279-81和Jankovic等，Neurology(1997)Feb;48(2):358-62。丁苯喹嗪的主要病理學作用是通過抑制人體小泡單胺輸送因子同型2(hVMAT2)降低中樞神經系統中單胺(例如多巴胺、5-羥色胺和降腎上腺素)的供給，藥物還阻斷突觸后多巴胺受體。丁苯喹嗪是治療各類運動機能亢奮運動癥狀的有效和安全的藥物，與典型的精神抑制藥相比，沒有顯示導致遲緩運動障礙。然而，丁苯喹溱顯示許多與劑量有關的副作用，包括引起壓抑、帕金森病、睡意、神經過敏或焦慮、失眠和在個別情況下，精神抑制的惡性綜合癥。丁苯喹。秦的主要作用密切類似于利血平的作用，但與利血平不同的是，它沒有對VMAT1輸送因子的活性，沒有對VMAT1輸送因子的活性意味著比利血平更小的末梢活性，因而不產生與VMAT1有關的副作用，例如血壓過4氐。丁苯喹嗪的化學結構示于附圖1中。附圖l-丁苯喹。秦的結構該化合物在3和llb碳原子有手性中心，因此理論上可存在總共4個異構體形式，如附圖2所示。在附圖2中，每個異構體的立體化學用Cahn,Ingold和Prelog開發的"R和S，，命名法定義，參見JerryMarch的AdvancedOrganicChemistry第4版，JohnWiley&Sons,NewYork,1992,pl09-l14。在附圖2和本專利申請的其他部分，名稱"R，，或"S"以碳原子的位置編號順序給出，因此，例如RS是3R,llbS的速記符號。同樣，當如以下所述的二氳丁苯會溱中存在三個手性中心時，名稱"R，，或"S"以碳原子2,3和llb附圖2-可能的丁苯喹溱異構體的順序列出，因此，2S,3R,llbR以速記形式稱為SRR,等等。商業獲得的丁苯喹。秦是RR和SS異構體的外消旋混合物，顯然RR和SS異構體(由于在3和llb位置的氬原子具有反式相對方向，下文單獨或共同地稱為反式丁苯喹。秦)是熱力學上最穩定的異構體。丁苯喹。秦有稍微差和不定的生物利用率，它被第一次代謝作用大量代謝，通常在尿中檢測到很少或沒有未改變的丁苯喹嗪。主要代謝物是二氳丁苯喹嗪(化學名2-羥基-3-(2-甲基丙基)-1,3,4，6,7，111>六氫-9，10-二甲氧基-苯并(a)喹。秦)，它是通過還原丁苯喹嗪中的2-酮基形成的，被認為是藥物活性的主要原因(參見Mehvar等，DrugMetab.Disp，15,250-255(1987)和J.Pharm.Sci,76,No.6,461-465(1987)),和Roberts等，Eur.J.Clm.Pharmacol,29:703-708(1986)。目前已確認和表征了4種二氫丁苯喹。泰異構體，它們都是由母體丁苯喹。秦的最穩定的RR和SS異構體衍生，在3和llb位置的氫原子之間有反式相對方向)(參見Kilbourn等，Chirality,9:59-62(1997)和Brossi等，Helv.Chim.Acta.,vol.XLI,No.193,ppl793-1806(1958)。該4種異構體是(+)-a-二氳丁苯喹嗪、(-)-a-二氫丁苯喹嗪、(+)-|3-二氫丁苯喹嗪和(-)-|3-二氪丁苯p奎溱。此4種已知二氫丁苯會溱異構體的結構被認為如附圖3中所示。SRROHRSSOH附圖3-二氫丁苯喹溱已知異構體的結構Kilbourn等(參見Eur.J.Pharmacol,278:249-252(1995)和Med.Chem.Res.,5:113-126(1994))研究了在有知覺的大鼠腦中各個放射性標記的二氬丁苯喹。秦異構體的特異結合，它們發現(+)-a-[HC]二氬丁苯喹。秦(2R,3R,llbR)異構體聚集在具有較高濃度的神經元膜多巴胺輸送因子(DAT)和脈管多巴胺輸送因子(VMAT2)的大腦區域。然而，本質上失活(-)-a-[HC]二氬丁苯喹。秦幾乎均勻分布于大腦中，說明沒有出現與DAT和VMAT2的特異結合。體內研究與體外研究密切相關，其顯示(+)-a-["C]二氬丁苯喹嗪顯示的[3司曱氧基丁苯喹嗪的K,比(-)-a-[HC]二氫丁苯喹漆異構體的IQ高2000倍以上。國際專利申請PCT/GB2005/000464(公開號WO2005/077946)公開了由丁苯喹。秦的不穩定的RS和SR異構體(由于在3和lib位置的氪原子具有順式相對方向，下文個別或共同地稱為順式丁苯喹嗪)衍生的藥物二氫丁苯喹嗪異構體的制備和用途。發明概述我們現在發現在我們在先申請PCT/GB2005/000464描述的順-二氳丁苯喹。秦具有停止或減慢亨廷頓疾病的至少某些癥狀的進程的能力。更具體地，我們發現與亨廷頓疾病有關的步態退化和無意識動作(例如震顫和抽搐)的增加可通過給藥本發明的順-二氫丁苯喹嗪停止或明顯減慢。因此，在第一方面，本發明提供3,llb-順-二氫丁苯喹溱在停止或減慢亨廷頓疾病的一種或多種癥狀，更具體地，選自無意識動作，例如無意識舞蹈病、震顫和抽搐和步態退化的癥狀進展中的用途。另一方面，本發明提供3,11b-順-二氫丁苯喹嗪在生產用于停止或減慢亨廷頓疾病的一種或多種癥狀，更具體地，選自無意識動作，例如無意識舞蹈病、震顫和抽搐和步態退化的癥狀進展的藥物中的用途。另一方面，本發明提供在需要治療的患者中，停止或減慢亨廷頓疾病的一種或多種癥狀，更具體i也，選自無意識動作，例如無意識舞蹈病、震顫和抽搐和步態退化的癥狀進展的方法，該方法包括給藥有效治療量的3,11b-順-二氫丁苯喹。秦。目前使用檢測個體是否帶有突變亨廷頓疾病基因的診斷試驗，由于帶有突變基因的人幾乎總是進展亨廷頓疾病，如果疾病的發作或進展能夠在最有可能進展疾病的人的生命周期中預防、停止或減慢，則是有利的。因此，在另一方面，本發明提供了預防治療確定為帶有亨廷頓疾病突變基因的患者的方法，該方法包括向患者給藥有效量的如上定義的順二氬丁苯喹溱以預防或減慢疾病的發作或進展。在本發明的另一方面，其提供預防治療確定為帶有亨廷頓疾病突變基因的患者的方法，該方法包括向患者給藥有效量的如上定義的順-二氳丁苯喹嗪以預防或減慢疾病的亞臨床進展。亞臨床進展是指，相對于采用掃描技術，例如計算機X射線斷層4i影術或核》茲共振(MRI)在疾病癥狀變得臨床明顯之前的疾病進展。例如順-二氬丁苯喹。秦可預防性地向帶有HD基因突變形式^f旦仍沒有疾病進展癥狀的年齡15-50歲，例如20-50歲或25-50歲或30-50歲的患者給藥。對于亨廷頓疾病基因或類似表面的突變形式，在本申請中是指其中在IT-15基因中CAG重復單元是至少35,更常見為至少40,例如至少45或至少50的基因形式。在某些情況下，可以是非常高數量的CAG重復單元(例如70或以上)，帶有具有如此大量CAG重復單元的基因突變形式的人很可能發展為疾病的青少年發作形式。因此，在另一方面，順-二氬丁苯喹。秦可預防性地向年齡小于30歲的人，例如10-29,更常見為15-29歲的經測試發現帶有CAG重復單元數量超過60,更尤其是至少65,和優選是70或以上的IT-15基因的突變形式的人給藥。用于本發明的順-二氫丁苯喹嗪是3,1lb,順-二氫丁苯喹嗪。用于本發明的3,11b-順-二氬丁苯喹嗪可以是基本上純形式，例如同質異構純化大于90%,通常大于95%,更優選大于98%。用于本發明的術語"同質異構"是指相對于所有異構體形式的總量或濃度存在的3,11b-順-二氫丁苯喹嗪的數量，例如在組合物存在的部二氫丁苯會口秦的90%是3,11b-順-二氫丁苯喹。秦，則同質異構純化是90%。用于本發明的3,11b-順-二氬丁苯喹嗪可以是基本上沒有3,11b-反-二氳丁苯喹噪，優選含有少于5。/。3,11b-反-二氬丁苯喹嗪，更優選少于3%3,111>反-二氫丁苯喹。秦，最優選少于P/。3,llb-反-二氫丁苯喹嗪的組合物形式。用于本文的術語"3,llb-順-"是指在二氫丁苯喹嗪的3-和llb-位置.的氫原子是順相對方向，因此本發明的異構體是式(I)化合物和其對映體(鏡像)。存在4種具有3，11b-順構型的二氳丁苯喹秦的可能的異構體，它們是2S,3S,llbR異構體、2R,3R,llbS異構體、2R,3S,llbR異構體和2S,3R,llbS異構體。4種異構體已凈皮分離和表征，因此，另一方面，本發明提供3,11b-順-二氫丁苯喹。秦的各個異構體。具體地說，本發明提供(a)具有式(Ia)的3,11b-順-二氬丁苯喹嗪的2S,3S,llbR異構體(b)具有式(Ib)的3,11b-順-二氬丁苯喹。秦的2R,!3R,llbS異構體:(c)具有式(Ic)的3,11b-順-二氫丁苯喹嗪的2R,3S,llbR異構體:(d)具有式(Id)的3,11b-順-二氫丁苯喹嗪的2S,3R,llbS異構體:CH30CH30H本發明的各個異構體可用其分光光譜、旋光和色譜性質以及由X射線結晶學測定的絕對立體化學構型表征。優選的異構體是右旋(+)異構體。尤其優選的異構體是異構體(Ia),即3,11b-順-二氫丁苯喹嗪的2S,3S,llbR異構體。沒有暗示任何特定的絕對構型或立體化學，4種新異構體可表征如下異構體A由ORD(甲醇，2rC)測量的旋光性左旋(-)IR光譜(KBr固體),^-NMR譜(CDCl3)和"C-NMR譜(CDCl3)基本上如表1中所示。異構體B由ORD(曱醇，2rC)測量的旋光性右旋(+)IR光譜(KBr固體),^-NMR譜(CDCl3)和"C-NMR譜(CDCl3)基本上如表1中所示，X射線結晶學性質如實施例4中所述。異構體C由ORD(甲醇，21。C)測量的旋光性右旋(+)IR光譜(KBr固體),^-NMR語(CDCl3)和"C-NMR譜(CDCl3)基本上如表2中所示。異構體D由ORD(曱醇，2rC)測量的旋光性左旋(-)IR光譜(KBr固體),^-NMR譜(CDC10和"C-NMR語(CDCl3)基本上如表2中所示。每個異構體的ORD值在如下實施例中給出，但應注意該數值以舉例方式給出，會由于異構體純度的程度和其它變量，例如溫度波動和殘留溶劑分子的影響而變化。對映體A、B、C和D可各處以基本上對映體純形式或作為與本發明的其它對映體的混合物存在。在本發明中的術語"對映體純度"和"對映體純"是指相對于二氳丁苯會。秦的所有對映體和異構體形式的總量或濃度存在的3,11b-順-二氫丁苯喹嗪的指定對映體的數量。例如在組合物中存在總二氫丁苯喹嗪的90%是單環對映體形式，則對映體純度是90%。作為舉例，在本發明的每個方面和實施方案中，選自異構體A、B、C和D的每個單個對映體可以至少55%的對映體純度(例如至少60%，65%,70%,75%,80%,85%,90%,95%，97%,98%,99%,99.5%或100%)存在。本發明的異構體還可以一種或多種異構體A、B、C和D的混合物形式存在，該混合物可以是外消旋混合物或非外消旋混合物。外消旋混合物包括異構體A和異構體B的外消旋混合物和異構體C和異構體D的外消旋混合物。可藥用的鹽除非內容需要，在申請中提到的二氫丁苯喹嗪和其異構體在其范圍內不僅包括二氳丁苯喹口秦的游離堿，還包括其鹽，尤其是酸加成鹽。用于形成酸加成鹽的具體酸包括pKa值小于3.5,更常見的是小于3的酸，例如酸加成鹽可由pKa+3.5至-3.5的酸形成。優選的酸加成鹽包括與磺酸，例如曱磺酸、乙磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、樟腦磺酸和萘-黃酸形成的鹽。可形成酸加成鹽的一種具體磺酸是甲磺酸。酸加成鹽可通過本文描述的方法或常^L化學方法，例如在PharmaceuticalSalts:Properties,Selection,andUse,P.HeinrichStahl(編輯)，CamilleG.Wermuth(編輯)，ISBN:3-90639-026-8,Hardcover,388頁，August2002中描述的方法制備。通常該鹽可通過將化合物的游離堿形式與合適的堿或酸在水或有機溶劑中或在兩種的混合物中反應制備；通常使用非水介質，例如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈。鹽通常是可藥用的鹽，然而，不是可藥用形式的鹽也可作為中間體形式制備，它可隨后轉化成可藥用的鹽，該非可藥用的鹽形式也構成發明的部分。制備二氫丁苯喹溱異構體的方法本發明的二氫丁苯喹嗪可通過如下方法制備，其包括使式(n)的化合物與適用于水合式(II)化合物中的2,3-雙鍵的試劑反應，隨后根據需要分離和離析所需二氫丁苯喹溱異構體形式。2,3-雙鍵的水合可通過用硼烷試劑，例如乙硼烷或硼烷-醚(例如硼烷-四氫呋喃(THF))硼氳化得到中間體烷基硼烷加合物，隨后氧化烷基硼烷加合物和在石咸存在下水解進行。氬硼化反應通常在無水才及性非質子溶劑，例如乙醚(例如THF),通常在非高溫，例如室溫下進行。硼烷-烯烴加合物通常用氧化劑，例如過氧化氳，在提供氫氧根離子源的堿，例如氪氧化銨或石成金屬氫氧化物，例如氬氧化鉀或氳氧化鈉存在下氧化。方法A反應的氫硼化反應-氧化-水解順序通常提供其中在2-和3-位的氫原子具有反式相對方向的二氫丁苯喹。秦異構體。式(II)化合物可通過還原丁苯喹。秦得到二氫丁苯喹溱，隨后二氬丁苯查。秦脫水制備。丁苯喹。秦的還原可用鋁氫化物試劑，例如氫化鋰鋁或硼氬化物試劑，例如硼氪化鈉、硼氪化鉀或硼氬化物衍生物，例如烷基硼氪化物，例如三仲丁基硼氫化鋰完成。或者，還原步驟可用催化氬化，例如用雷鈉鎳或氧化鉑催化劑進行。用于進行還原步驟的合適條件在如下更詳細描述或可在US2,843,591(Hoffmann-LaRoche)和Brossi等，Helv.Chim.Acta.,vol.XLI,No.193,pl793陽1806(1958)中找到。由于用作還原反應的原料丁苯喹嗪通常是RR和SS異構體的混合物(即反式-丁苯會溱)，通過還原步驟形成的二氫丁苯喹喚將具有圍繞3-和llb位置的相同反式構型，將采用示于如上附圖3中的已知二氬丁苯喹嗪異構體的一種或多種形式。因此，方法A可包括采用二氬丁苯喹溱的已知異構體，脫水形成烯烴(II),隨后用獲得本發明所需新順式二氫丁苯喹。秦異構體的條件"再水合"烯烴(II)。二氪丁苯唾。秦向烯烴(II)的脫水可用脫水醇形成烯烴的各種標準條件進行，參見例如J.March(idem)389-390頁和其中的參考文獻。該條件的實例包括使用磷基脫水劑，例如卣化磷或氧氯化磷，例如POCl3和PC15。作為直接脫水的替代方法，二氬丁苯喹溱的羥基可連接化離去基團L,例如卣素(例如氯或溴)，隨后進行條件(例如在石咸存在下)脫除H-L。羥基向鹵化物的轉化可用熟練化學工作者已知的方法實現，例如通過與四氯化碳或四溴化碳在三烷基或三芳基膦，例如三苯基膦或三丁基膦存在下反應。用作還原得到二氳丁苯喹。秦的原料丁苯喹溱可商業上得到或可通過在US2,830,993(Hoffmann-LaRoche)描述的方法合成。制備本發明的二氫丁苯喹嗪的另一種方法(方法B)包括使式(in)化合物經歷式(III)化合物中2,3-環氧化物基團開環的條件，隨后根據需要分離和離析所需二氫丁苯喹。秦異構體形式。開環可根據用于環氧化物開環的已知方法進行，然而，開環環氧化物的普遍優選方法是還原開環，它可用還原劑，例如硼烷-THF實現。使用硼烷-THF的還原可在極性非質子溶劑，例如乙醚(例如四氬呋喃)中在室溫下進行，所形成的硼烷配合物隨后通過在水和堿存在下在溶劑回流溫度下加熱水解。方法B通常產生其中在2-和3-位的氫原子具有順式相對方向的二氫丁苯喹嗪異構體。式(m)的環氧化物化合物可通過如上式(n)的烯烴的環氧化制備，環氧化反應可用熟練化學工作者.已知的條件和試劑進行，參見例如J.March(idem),826-829頁和其中的參考文獻。通常可使用過酸，例如偏氯過苯甲酸(MCPBA)或過酸和其它氧化劑，例如高氯酸的混合物以進行環氧化過程。當用于方法A和B的原料是對映體混合物時，則方法的產物通常是對映體對，例如外消旋混合物，可能與非對映體雜質。不要的非對映體可通過才支術，例如色"i普法(例如HPLC)拆分，單個的，于映體可通過熟練化學工作者已知的方法分離，例如，它們可通過如下方法分離(i)手性色譜法(基于手性載體的色譜法)；或(II)與旋光純手性酸形成鹽，通過分餾結晶分離兩種非對映體的鹽，隨后由鹽釋放二氬丁苯喹。秦；或(III)與旋光純手性衍生試劑(例如酯化試劑)形成衍生物(例如酯)，分離生成的差向異構體(例如用色譜法)，隨后將衍生物轉化成二氫丁苯喹嗪。被發現尤其有效的分離方法A和B得到的對映體對的一種方法是用旋光形式的Mosher，s酸，例如如下所示的R(+)異構體或其活化形式酯化二氬丁苯喹溱的羥基得到的二氳丁苯查。秦的兩種對映體的酯隨后用色譜法(例如HPLC)分離，分離的酯用堿，例如石咸金屬氫氧化物(例如NaOH)在極性溶劑，例如曱醇中水解得到單個的二氫丁苯喹嗪異構體。作為使用對映體混合物作為方法A和B原料，隨后分離對映體的替代方法，方法A和B可分別用單一的對映體原料進行，形成其中單一對映體占多數的產物。烯烴(II)的單一對映體可通過使RR/SS丁苯喹。秦用三仲丁基硼氫化鋰進行丁苯喹秦的立體選擇性還原以得到二氬丁苯喹。秦的SRR和RSS對映體的混合物，分離對映體(例如通過分餾結晶)，隨后脫水分離的單一二氬丁苯喹溱對映體得到占多數或排他的式(n)化合物的單一對映體。方法A和B分別在如下方案1和2中詳細說明。方案1<formula>formulaseeoriginaldocumentpage16</formula>方案1說明具有2S,3S,llbR和2R,3R,llbS構型的單個二氫丁苯喹溱異構體的制備方法，其中連接于2-和3-位的氫原子以反式相對方向排列，該反應方案包括如上定義的方法A。方案1反應順序起點是商業獲得的丁苯喹嗪(IV),它是丁苯喹嗪的RR和SS旋光異構體的外消旋混合物。在每個RR和SS異構體中，在3_和llb-位置的氬原子以反式相對方向排列。作為使用商業獲得的化合物的替代方法，丁苯喹，秦可根據在US2,830,993中所述的方法合成(尤其參見實施例11)。RR和SS丁苯喹溱的外消旋混合物用硼氫化物還原試劑三仲丁基硼氳化鋰("L畫Selectride")還原得到二氫丁苯喹口秦的已知2S,3R，llbR和2R,3S，llbS異構體(V)的混合物，為簡便以見，僅顯示2S，3R,llbR異構體。通過使用更加空間位阻的L-Selectride的硼氫化物還原試劑而不是硼氪化鈉，二氫丁苯喹溱的RRR和SSS異構體的形成^f皮降低到最少或二氫丁苯喹溱異構體(V)與脫水劑，例如五氯化磷在非質子溶劑，例如氯代烴(例如氯仿或二氯曱烷，優選二氯甲烷)中反應形成不飽和化合物(II)對映體對，僅R-對映體顯示于方案中。脫水反應通常在低于室溫的溫度下，例如約0-5。C進^亍。不飽和化合物(n)隨后進行立體選擇再水合以產生二氫丁苯喹。秦(vi)和其鏡像或對映體(未顯示)，其中在3-和llb-位置的氫原子以順式相對方向排列，在2-和3-位置的氫原子以反式相對方向排列。立體選擇再水合通過采用在四氫呋喃(THF)中4吏用硼烷-THF的氫硼化方法形成中間體硼烷配合物(未顯示)，它隨后用過氧化氳在堿，例如氳氧化鈉存在下氧4b而完成。隨后進行初步的純化步驟(例如通過HPLC)以得到再水合反應順序的產物(V),2S,3S,llbR和2R,3R,llbS異構體的混合物，在方案中僅顯示2S,3S,llbR異構體。為分離異構體，混合物用R(+)Mosher，s酸在草酰氯和二曱基氨基吡啶(DMAP)在二氯甲烷中處理得到一對非對映體酯(VII)(僅顯示其中的一個非對映體)，它們隨后用HPLC分離。單個的酯隨后用堿金屬氳氧化物，例如氬氧化鈉水解得到單一的異構體(VI)。在方案1所示步驟順序的變化中，在丁苯喹。秦還原后，得到的二氳丁苯喹溱(V)對映體混合物可分離得到單個的對映體，分離可通過與手性酸，例如(+)或(-)樟腦磺酸形成鹽，通過分離結晶分離得到的非對映體得到單一對映體的鹽，隨后由鹽釋放游離堿。分離的二氫丁苯喹。秦對映體可脫水得到烯烴(n)的單一對映體，隨后烯烴(n)再水合得到占多數或排他的順-二氫丁苯喹。秦(vi)的單一對映體。此變化的優點是不包括形成Mosher，s酸酯，從而避免通常用于分離Mosher's酸酯的色語分離。方案2說明具有2R,3S，llbR和2S,3R,llbS構型的單一二氫丁苯喹溱異構體的制備方法，其中連接于2-和3-位的氫原子以順式相對方向排列，該反應方案包4舌如上定義的方法B。方案2(VIII)單異構體在方案2中，不飽和化合物(II)通過還原丁苯喹。秦得到二氫丁苯喹。秦的2R,3S,llbR和2S,3R,llbS異構體(V),用PCl5以方案1中所述的方法脫水制備。然而，不采用使化合物(II)進行硼氫化反應，2,3-雙鍵通過與偏氯過苯甲酸(MCPBA)和高氯酸反應轉化成環氧化物。環氧化反應方便地在醇溶劑，例如曱醇中，通常在大致室溫下進行。環氧化物(VII)隨后進行還原開環，使用硼烷-THF作為親電子還原劑以得到中間體硼烷配合物(未顯示)，它隨后用過氧化氫在堿，例如氬氧化鈉存在下氧化和斷裂以得到二氬丁苯喹嗪(Vin)2R,3S,llbR和2S,3R,llbS異構體的混合物，為筒便，僅顯示2R,3S,llbR。在草酰氯和二曱基氨基吡啶(DMAP)存在下在二氯曱烷中用R(+)Mosher's酸處理異構體(vm)的混合物得到一對差向異構體酯(IX)(僅顯示一種差向異構體)，它可隨后用色譜法分離，用氪氧化鈉在曱醇中以相應方案1中所述的方法水解。生物學性質和治療用作丁苯喹。秦通過抑制大腦中脈管單胺輸送因子VMAT2和抑制突觸前和突觸后多巴胺受體發揮其治療效果。本發明的新二氫丁苯喹口秦異構體同樣是VMAT2的抑制劑，其中異構體C和B產生最大程度的抑制作用。與丁苯喹嗪相同，本發明的化合物對VMAT1,在末梢組織和某些內分泌細胞中發現的VMAT同型，僅有低的親和力，因此，它們不會產生與利血平有關的副作用。化合物C和B還顯示對兒茶酚O-甲基轉移酶(COMT)、單胺氧化酶同型A和B和5-羥色胺同型Id和Ib沒有抑制活性。出乎意料的是，異構體C和D還顯示明顯的VAMT2和多巴胺受體活性的分離，因而雖然它們在結合VMAT2中是高活性的，但兩個化合物僅顯示弱或不存在多巴胺受體結合活性和沒有多巴胺輸送因子(DAT)結合活性。事實上，沒有一種異構體顯示明顯的DAT結合活性，這說明化合物沒有丁苯喹。秦產生的多巴胺能的副作用。異構體C和B作為腎上腺素受體的抑制劑還是弱活性或沒有活性的，這說明化合物沒有丁苯喹嗪通常遇到的腎上腺素副作用。事實上，在對大鼠進行的運動研究中，丁苯喹。秦顯示與鎮靜效果相關的劑量，而在給藥本發明的二氫丁苯喹。秦異構體B和C后沒有觀察到鎮靜效果。此外，異構體C和異構體B均是5-羥色胺輸送因子蛋白質SERT的有效抑制劑，SERT抑制是抗抑郁藥，例如氟西汀(Prozac⑧)提供其治療作用的一種機理。因此異構體C和B抑制SERT的活性表明這些異構體可用作抗抑郁藥，與丁苯喹。秦的壓抑是已知的副作用明顯相反。異構體B在亨廷頓疾病的轉基因小鼠模型中測試，顯示停止許多亨廷頓疾病癥狀的進程，包括無意識動作，例如無意識舞蹈病、震顫和抽搐和步態退化。基于到目前進行的研究，因此可以設想本發明的順-二氫丁苯喹。秦化合物將用于治療亨廷頓疾病，尤其是用于停止或減緩疾病的進程，或用于預防方式以避免疾病的進程。化合物將通常向需要給藥的患者，例如人或動物患者，優選人給藥。化合物將通常以治療或預防有用的并且是無毒的數量給藥，然而，在某些情況下，給藥本發明的二氳丁苯喹。秦的效果會超過任何毒性作用或副作用的缺點，在這種情況下，可以考慮以與毒性程度相關的數量給藥化合物。化合物的典型日劑量可高達1000/天，例如在0.01mg-10mg/kg體重，更常見為0.025mg-5mg/kg體重，例如至多3mg/kg體重，更常用為0.15-5mg/kg體重，雖然在需要時也可給藥更高或更低劑量。例如，最初12.5mg的起始劑量可一天》會藥2-3次，劑量可每3-5天一天增加12.5mg直至經臨床測定個體達到最大容忍和有效劑量，最后，給藥的化合物數量將與所治療的疾病或生理學癥狀的性質和治療效果和存在或不存在通過給定劑量制度產生的副作用相當，將取決于臨床醫生的判斷力。藥物制劑二氫丁苯喹溱化合物通常以藥物組合物形式給藥。藥物組合物可以適用于口服、腸胃外、局部、鼻內、支氣管內、目艮、耳、直腸、鞘內或皮膚給藥的任何形式。當組合物打算腸胃外給藥時，它們可以配制成用于靜脈內、肌內、腹膜內、皮下給藥或通過注射、輸液或其它輸送方法直接輸送到目標器官或組織。適用于口服給藥的藥物劑量形式包括片劑、膠嚢、嚢片、丸劑、錠劑、糖漿、溶液、噴霧劑、粉劑、粒劑、酏劑和懸浮液、舌下片劑、噴霧劑、圓片或斑點和含片。含有本發明二氫丁苯喹溱化合物的藥物組合物可根據已知技術配制，參見例如Remington'sPharmaceuticalSciences,MackPublishingCompany,Easton,PA,USA。因此，片劑組合物可含有單位劑量的活性化合物與惰性稀釋劑或載體，例如蔗糖或糖醇，例如乳糖、蔗糖、山梨糖醇或甘露糖醇；和非糖衍生的稀釋劑，例如氯化鈉、磷酸鉤、滑石、碳酸釣或纖維素或其衍生物，例如曱基纖維素、乙基纖維素、羥基丙基曱基纖維素，和淀粉，例如玉米淀粉。片劑還可含有標準成分作為粘合和造粒劑，例如聚乙烯基吡咯烷酮、崩解劑(例如膨脹交聯聚合物，例如交聯羧甲基纖維素)、潤滑劑(例如硬脂酸鹽)、防腐劑(例如對羥基苯甲酸酯)、抗氧化劑(例如BHT)、緩沖劑(例如磷酸鹽或檸檬酸鹽緩沖劑)和泡騰劑，例如檸檬酸鹽/碳酸氫鹽水合物。該賦形劑是已知的，不需要詳細討論。膠嚢制劑可以是硬凝膠或軟凝膠種類，可含有固體、半固體或液體形式的活性組分。凝膠膠嚢可以動物凝膠或合成或植物衍生的等價物質。固體劑量形式(例如片劑、膠嚢等)可以是涂覆或非涂覆的，但通常有涂層，例如保護薄膜涂層(例如蠟或凡士林)或釋放控制涂層。涂層(例如EudmgitTM型聚合物)可設計用來在胃腸道中在所需位置釋放活性成分。因此，可選擇涂層從而在胃腸道中在某些pH條件下降解，從而在胃或在回腸或十二指腸中選擇性地釋放。作為涂層的替代或除涂層之外，藥物可存在于固體基質中，所述基質包括釋放控制劑，例如釋放延遲劑，它適用于在胃腸道中在改變酸性或堿性條件下選擇性地釋放。或者，基質材料或釋放延遲涂層可采用易蝕聚合物(例如馬來酸酐聚合物)形式，它在劑量形式通過胃腸道時基本上連續消蝕。用于局部使用的組合物包括軟膏、乳油、噴霧劑、斑點、凝膠、液滴劑和植入物(例如皮下植入物)，該組合物可根據已知方法配制。用于腸胃外給藥的組合物通常作為無菌含水或油質溶液或細懸浮液存在，或以與無菌水注射前即刻配制的細粉碎的無菌粉末形式提供。用于直腸或鞘內給藥的制劑實例包括子宮托和栓劑，它可以是例如由含有活性化合物的正式形狀;t莫制或蠟材料形成。用于吸入給藥的組合物可以采用可吸入4分末組合物或液體或4分末噴霧劑形式，可以標準形式用粉末吸入裝置或氣溶膠分散裝置給藥。該裝置是已知的，用于通過吸入給藥，粉末制劑通常含有活性成分與惰性固體粉末稀釋劑，例如乳糖。本發明的化合物通常以單位劑量形式存在，同樣將含有足夠的化合物以提供所需水平的生理學活性。例如用于口服給藥的制劑可含有2mg-200mg活性成分，更常用為10mg-100mg,例如12.5mg、25mg和50mg。活性化合物將以足以達到所需治療效果的數量向需要的患者(例如人或動物患者)給藥。實施例如下非限制實施例說明本發明二氫丁苯喹脊化合物的合成和性質。實施例1二氬丁苯喹。秦的2S,3S,llbR和2R,3R,llbS異構體制備1A.RR/SS丁苯喹。秦的還原<formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula>將在四氫呋喃中的1ML-Sdectride(135ml,135mmol,2.87eq.)在30分鐘內在0。C緩慢加入丁苯喹漆RR/SS外消旋體(15g,47mmol)在乙醇(75ml)和四氫呋喃(75ml)中的攪拌溶液中，加完后，混合物在0。C攪拌30分鐘，隨后使其溫熱到室溫。將混合物傾在碎水(300g)上，加水(IOOml),溶液用乙醚(2x200ml)提取，合并的乙醚提取物用水(IOOml)洗滌，用無水碳酸鉀部分干燥。用無水>琉酸鎂完全干燥，隨后過濾，減壓除去溶劑(避光，浴溫〈2crc)得到淺黃色固體。固體用石油醚C30-40。C)成漿，過濾得到白色粉末固體(12g,80%)。1B.還原的丁苯喹。秦脫水HOH2R,3S,11bS將五氯化石壽(32.8g,157.5mmol,2.5叫)在30分鐘內在(TC分批加入實施例1A的還原丁苯喹，秦產物(20g,62.7mmol)在二氯甲烷(200ml)中的攪拌溶液中，在加完后，反應混合物在0。C攪拌30分鐘，將溶液緩慢傾入含有石爭冰的2M含水石友酸鈉溶液中((TC)。在最初的酸性氣體逸出停止后，混合物用固體硫酸鈉堿化(約pH12)。堿性溶液用乙酸乙酯(800ml)提取，合并的有機提取液用無水硫酸鎂干燥。在過濾后，減壓除去溶劑得到棕色油，它經柱色鐠法(硅膠，乙酸乙酯)得到半純烯烴黃色固體(10.87g,58%)。1C.實施例1B的j)S烯烴的水合將實施例1B的粗烯烴(10.87g,36.11mmol)在無水THF(52ml)中的溶液在室溫下以滴加方式用1M硼烷-THF(155.6ml,155.6mmol,4.30eq)處理。反應攪拌2小時，力口入水(20ml),溶液用30%含水石友酸鈉溶液石咸化至pH12。向攪拌的堿性反應混合物中加入含水30%過氧化氫溶液(30ml)，溶液回流加熱l小時，隨后冷卻。加入水(100ml),混合物用乙酸乙酯(3x250ml)提取，有機提取物合并，用無水硫酸鎂干燥，過濾后，減壓除去溶劑得到黃色油(9g)。油用制備性HPLC(柱LichrospherSi60,5pm,250x21.20mm,移動相己烷乙醇:二氯甲烷(85:15:5);UV254nm,流量10mlmm")以每注射350mg，隨后真空濃縮所需餾分純化。產物油隨后溶解在乙醚中，再在真空下濃縮得到如上所示的二氫丁苯喹。秦外消旋體黃色泡沫(5.76g，50%)。lD.制備Mosher，s酯衍生物將R-(+)-a-甲氧基-(x-三氟甲基苯基乙酸(5g,21.35mmol)、草酰氯(2.02ml)和DMF(0.16ml)加入無水二氯甲烷(50ml)中，溶液在室溫下攪拌45分鐘。減壓濃縮溶液，殘余物再次溶解在無水二氯曱烷(50ml)中。得到的溶液用水水浴冷卻，加入二曱基氨基吡啶(3.83g,31.34mmol),隨后加入實施例1C的固體產物(5g,15.6mmol)在無水二氯曱烷中的預干燥溶液(用4A分子篩)。在室溫下攪拌45分鐘后，加入水(234ml),混合物用乙醚(2x200ml)提取。乙醚提取物用無水硫酸鎂干燥，通過硅膠墊，用乙醚洗脫產物。收集的乙醚洗脫液經減壓濃縮得到油，它用柱色語法(硅膠，己烷乙醚(IO:I))。蒸發收集的柱餾分，減壓除去溶劑得到固體，它進一步用柱色謙法(硅膠，己烷乙醚(l:l))得到三個主要組分，它部分拆分成Mosher，s酯峰1和2。三個組分以300mg裝填量進行制備性HPCL(柱2xLichrospherSi60:5jim，250x21.20mm,移動相己烷:異丙醇(97:3),UV254nm;flow:10mlmm"),隨后真空濃縮所需餾分得到純Mosher，s酯衍生物。峰1(3.89g,46.5%)峰2(2.78g,33%)相應于兩個峰的餾分進行水解以釋放單個的確認和表征為異構體A和B的二氬丁苯p奎。秦異構體，異構體A和B一皮認為具有如下結構之一2S,3S,11bR2ff,3R,1化S更具體地，根據在如下實施例4中描述的X-射線結晶學實驗，異構體B被認為具有2S,3S,1lbR絕對構型。IE.水解峰1得到異構體A將含水20%氫氧化鈉溶液(87.5ml)加入Mosher，s峰1(3.89g,7.27mmol)在甲醇(260ml)中的溶液中，混合物攪拌，回流加熱150分鐘。在冷卻到室溫后，加入水(200ml)，溶液用乙醚(600ml)提取，用無水石克酸4美干燥，過濾后，減壓濃縮。殘余物溶解在乙酸乙酯(200ml)中，溶液用水(2x50ml)洗滌，有機相用無水硫酸鎂干燥，過濾后減壓濃縮得到黃色泡沫。該物質用柱色語法純化(硅膠，乙酸乙酯己烷(l:l)至乙酸乙酯的梯度洗脫)純化，合并所需餾分，減壓除去溶劑。殘余物溶解在乙醚中，再次減壓除去溶劑得到異構體A灰白色泡沫(l.lg,47%)。異構體A,被認為具有2R^R,llbS構型(絕對立體化學未測定)，用iH-NMR、13C-MVIR、IR、質鐠、手性HPLC和ORD表征。異構體A的IR、MNR和MS數據在表1中給出，手性HPLC和ORD數據在表3中給出。IF.水解峰2得到異構體B將含水20%氳氧化鈉溶液(62.5ml)力卩入Mosher，s峰2(2.78g,5.19mmol)在曱醇(185ml)中的溶液中，混合物攪拌，回流加熱150分鐘。在冷卻到室溫后，加入水(142ml),溶液用乙醚(440ml)提取，用無水碌u酸4美干燥，過濾后，減壓濃縮。殘余物溶解在乙酸乙酯(200ml)中，溶液用水(2x50ml)洗滌，有機相用無水石危酸4美干燥，過濾后減壓濃縮。在殘余物中加入石油醚(30-40。C),再次濃縮溶液得到異構體B白色泡沫(1.34g,81%)。異構體B,被認為具有2S,3S,llbR構型，用iH-NMR、13C-MVIR、IR、質譜、手性HPLC、ORD和X-射線結晶學表征。異構體B的IR、MNR和MS數據在表1中給出，手性HPLC和ORD數據在表3中給出，X-射線結晶學數據在實施例4中給出。實施例2制備二氫丁苯喹。秦的2R,3S,llbR和2S,3R,llbS異構體2A義3-二氳丁苯喹嗪制備將含有RR和SS丁苯喹。秦外消旋體混合物(15g,47mmol)在四氳呋喃中的溶液才艮據實施例1A的方法用L-Selectride⑧進行還原得到二氫丁苯喹。秦2R,3S,llbR和2S,3R,llbS對映體的混合物白色粉末固體(12g,80%)。部分純化的二氫丁苯喹，秦隨后用PCls才艮據實施例1B的方法脫水得到2,3-脫氳丁苯喹。秦的llbR和llbS異構體的半純混合物(llbR對映體顯示如下)黃色固體(12.92g,68%)。向實施例2A的粗烯烴(12,92g，42.9mmol)在曱醇(215ml)中的攪拌溶液中加入70%高氯酸(3.70ml,43mmol)在甲醇(215ml)中的溶液。向反應中加入77%3-氯過氧苯曱酸(15.50g,65mmol),得到的混合物在室溫下避光攪拌18小時。將反應混合物傾入飽和含水亞硫酸鈉溶液(200ml)中，加入7jc(200ml)。向符到的乳液中加入氯仿(300ml),混合物用飽和含水碳酸氬鈉(400ml)堿化。收集有機層，水相用附加的氯仿(2x150ml)洗滌，合并的氯仿層用無水硫酸鎂干燥，過濾后減壓除去溶劑得到棕色油(14.35§,收率〉100%-很可能溶劑殘留在產物中)，使用該物質無需進一步純化。2C.2B環氧化物的還原開環2B.實施例2A的粗烯烴的環氧化<formula>formulaseeoriginaldocumentpage27</formula>實施例2B的粗環氧化物(14.35g，42.9mmo1,假定100%收率)在無水THF(80ml)中的攪拌溶液在15分鐘內緩慢地用1M硼烷/THF(184.6ml，184.6mmol)處理，反應攪拌2小時，加入水(65ml),攪拌加熱溶液至回流30分鐘。冷卻后，向反應混合物中加入30。/。氫氧化鈉溶液(97ml),隨后加入300/o過氧化氫溶液(48.6ml),攪拌反應，再加熱到回流l小時。冷卻的反應混合物用乙酸乙酯(500ml)提取，用無水硫酸鎂干燥，過濾后，減壓除去溶劑得到油。向油中加入己烷(230ml),溶液再減壓濃縮。油殘余物用柱色鐠法(硅膠，乙酸乙酯)純化，合并所需餾分，減壓除去溶劑。殘余物再次用柱色譜法(硅膠，梯度，己烷至乙醚)。合并所需餾分，減壓蒸發溶劑得到淺黃色固體(5.18g,38%)。2D.制備二氫丁苯p奎溱2R,3S,llbR和2S,3R,llbS異構體的Mosher，s酯衍生物將R-(+)-a-曱氧基-a-三氟曱基苯基乙酸(4.68g,19.98mmo1)、草酰氯(1.90ml)和DMF(0.13ml)加入無水二氯曱烷(46ml)中，溶液在室溫下攪拌45分鐘。減壓濃縮溶液，殘余物再次溶解在無水二氯曱烷(40ml)中。得到的溶液用冰水浴冷卻，加入二曱基氨基吡啶(3.65g,29.87mmo1),隨后加入實施例2C的固體產物(4.68g,14.6mmol)在無水二氯甲烷(20ml)中的預干燥溶液(用4A分子篩)。在室溫下攪拌45分鐘后，加入水(234ml),混合物用乙醚(2x200ml)提取。乙醚提取物用無水石危酸鎂干燥，通過硅膠墊，用乙醚洗脫產物。收集的乙醚洗脫液經減壓濃縮得到油，它用柱色譜法(硅膠，己烷乙醚(1:1》。蒸發收集的所需柱餾分，減壓除去溶劑得到粉色固體(6.53g)。以100mg裝填量進行固體的制備性HPCL(柱2xLichrospherSi60，5(im,250x21.20mm,移動相己烷異丙醇(97:3)，UV254nm;流量:lOmlmin-1),隨后真空濃縮所需餾分得到純固體，它與石油醚(30-40。C)成漿，過濾收集得到純Mosher，s酯衍生物。峰1(2.37g,30%)峰2(2.42g，30%)相應于兩個峰的餾分進行水解以釋放單個的確認和表征為異構體C和D的二氬丁苯喹。秦異構體，異構體C和D被認為具有如下結構之一2R,3S,窗2S,3R,窗2F.水解峰1得到異構體C將含水20。/o氳氧化鈉溶液(53ml)加入Mosher，s峰l(2.37g,4.43mmo1)在甲醇(158ml)中的溶液中，混合物回流攪拌150分鐘。在冷卻后，在反應混合物中加入水(88ml)，得到的溶液用乙醚(576ml)提取。有機提取物用無水硫酸鎂干燥，過濾后，減壓除去溶劑。向殘余物加入乙酸乙酯(200ml),溶液用水(2x50ml)洗滌，有機溶液用無水硫酸鎂干燥，過濾后減壓除去溶劑。殘余物用石油醚(30-4(TC)處理，得到的懸浮固體用過濾收集。濾液減壓濃縮，用過濾收集第二批懸浮的固體。合并兩次收集的固體，減壓干燥得到異構體C(l.Og,70%)。異構體c，被認為具有2R，3S,llbR或2S,3R，llbS構型(絕對立體化學未測定)，用！H-NMR、13C-MVIR、IR、質譜、手性HPLC和ORD表征。異構體C的IR、MNR和MS數據在表2中給出，手性HPLC和ORD數據在表4中給出。2G.水解峰2得到異構體D將含水20%氳氧化鈉溶液(53ml)力卩入Mosher，s酯峰2(2.42g,4.52mmol)在曱醇(158ml)中的溶液中，混合物攪拌回流150分鐘。在冷卻后，加入水(88ml),得到的溶液用乙醚(576ml)提取，有才幾提取物用無水硫酸鎂干燥，過濾后，減壓除去溶劑。向殘余物中加入乙酸乙酯(200ml),溶液用水(2x50ml)洗滌，有機溶液用無水石危酸4美干燥，過濾后減壓除去溶劑。殘余物用石油醚(30-40。C)處理，得到的懸浮橙色固體用過濾收集，固體溶解在乙酸乙酯己烷(15:85),用柱色譜法(硅膠，梯度乙酸乙酯己烷(15:85)到乙酸乙酯)。收集所需餾分，減壓除去溶劑，殘余物與石油醚(30-40。C)成漿，過濾收集得到的懸浮液，收集的固體減壓干燥得到異構體D白色固體(0.93g,64%)。異構體D,被認為具有2R,3S,llbR或2S,3R,llbS構型(絕對立體化學未測定)，用^-NMR、13C-MVIR、IR、質譜、手性HPLC和ORD表征。異構體D的IR、MNR和MS數據在表2中給出，手性HPLC和ORD數據在表4中給出。在表1和2中，紅外光譜用KBr圓盤方法測定，力NMR光譜在氘化氯仿溶液中用VananGeminiNMR光i普儀(200MHz.)進行，13CNMR光譜在氘化氯仿溶液中用VarianGemmiNMR光譜儀(50MHz.)進行。質譜用MicromassPlatformII(ES+條件)光譜儀得到。在表3和4中，OpticalRotatoryDispersion圖像用OpticalActivityPoIAAr2001儀器在曱醇溶液中在24。C得到，HPLC滯留時間測量用HP1050HPLC色譜儀用UV檢測進4亍。表1和2-分光光譜數據表l二氫丁苯喹嗪異構體i普(CI^C13)"c-nmr^普(CDC13)i普(KBr固體)質譜(ES，異構體A和B"751H(s);6.5751H(s);3.8456H(s);147.7S147.6S130.562950cm'1;2928cm";2868cm";MH""3203.5551H(br.d);127.652834cm";3.0851H(m);112.1S1610cm";2.7952H(m);108.451511咖"；H、OH2.55S3H(m》70,58;函cm"2S,3S,11W2.17"H(m);57.55;1364cm'1;或1.7256H(m);56.5S;1324cm";1,02SlH(m);56.3S;1258cm";lw1^丄0.8886H(t)54.85;53.25;1223cm";1208cm";H''OH2R3R,11bS40.45;40-18;36.08;28.85;1144crrT';簡cm-1;1006cm";870cm";表l二氫丁苯喹溱異構體'h-nmri普(CDC13)"c墨n^1R{普(cd￡i3)"i普(KBr固體)質譜(ES,26.25;23.75;22.95785citf';764cm"表2<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>表3和4-色譜法和ORD數據表3二氫丁苯喹。秦異構體手性HPLC方法和停留時間ORD(MeOH,21。C)異構體A和B柱異構體AH、、0HChirex(S)-VAL,(R)-NEA,250x4.6mm移動相己烷1,2-二氯乙烷乙醇(36:62:2)[(Xd]-114.60流量l力mmin'1異構體B2S,3S,11b/UV:254nm[aD]+123°或CH。0H、甲化，、H|停留時間異構體A16.6min異構體B15.3minH''OH2R,3R,滿表4異構體C和D柱異構體cChirex(S)-VAL,(R)-NEA,250x4,6mm[aD〗+150.90移動相己烷乙醇(92:8)i充量1.0mlmin'1異構體DH''0HUV:254nm[aD]-145.7。或4亭留時間異構體C20.3min異構體D19.4minH、、0H實施例3制備異構體B和制備曱磺酸鹽的替代方法3A.RR/SS丁苯喹。秦的還原夕卜消》走P-DHTBZ2S,3R,11bR2R,3S,"bS將在四氫吹喃中的1ML-Sdectride(52ml，52mmol，1.1eq)在30分鐘內緩慢地加入丁苯喹嗪外消旋體(15g,47mmol)在四氫呋喃(56ml)中的冷卻(冰浴)的攪拌溶液中。在加入完成后，-使混合物溫熱到室溫，再攪拌6小時。TLC分析(硅膠，乙酸乙酯)顯示僅殘留非常少量的原料。將混合物傾在石爭水(112g)、水(56ml)和冰醋酸(12.2g)的攪拌混合物中，得到的黃色溶液用乙醚(2x50ml)洗滌，通過緩慢加入固體碳酸鈉(約13g)堿化。在攪拌下向混合物加入石油醚(30-40。C)(56ml),經過濾收集粗卩-DHTBZ白色固體。粗固體溶解二氯曱烷(約150ml)中，得到的溶液用水(40ml)洗滌，用無水硫酸鎂干燥，過濾和減壓濃縮至約40ml,形成白色固體的粘稠懸浮液。加入石油醚(30-40。C)(56ml),懸浮液在實驗溫度下攪拌15分鐘。過濾收集產物，在過濾器上用石油醚(30-40。C)(40-60ml)洗滌直至雪白色，隨后在室溫下空氣干燥得到卩-DHTBZ(10.1g,67%)白色固體。TLC分析(硅膠，乙酸乙酯)顯示僅一個組分。3B.外消旋B-DHTBZ的樟腦磺酸的制備和分餾結晶將實施例3A的產物和1當量(S)-(+)-樟腦-10^黃酸在加熱下溶解在少量甲醇中，得到的溶液冷卻，隨后用乙醚緩慢稀釋直至形成固體沉淀完成。得到的白色結晶固體通過過濾收集，在干燥前用乙醚洗滌。樟腦^t酸鹽(10g)溶解在熱無水乙醇(170ml)和甲醇(30ml)的混合物中，得到的溶液攪拌，使其冷卻。在2小時后，過濾收集形成的固體為白色結晶固體(2.9g)。結晶材料樣品在單獨的漏斗中與過量飽和含水碳酸鈉和二氯曱烷振蕩，分離有機相，用無水硫酸鎂干燥，過濾和減壓濃縮。殘余物用石油醚(30-40。C)研制，再次濃縮有機溶液。用Chirex(S)-VAL和(R)-NEA250x4.6mm柱和己烷乙醇(98:2)洗脫液，以lml/分鐘的流量進行鹽的手性HPLC分析，顯示分離的卩-DHTBZ富集一種對映體(e.e.約80%)。將富集的樟腦磺酸鹽(14g)溶解在熱無水乙醇(140ml)中，加入丙-2-醇(420ml),攪拌得到的溶液，在l分鐘內開始形成沉淀。使混合物冷卻到室溫，攪拌l小時，過濾收集得到的沉淀，用乙醚洗滌，干燥得到白色結晶固體(12g)。將結晶物質在分液漏斗中用過量飽和含水碳酸鈉和二氯甲烷中振蕩，分離有機相，用無水硫酸鎂干燥，過濾和減壓濃縮。殘余物用石油醚P040。C)研制，再次濃縮有機溶液得到(在真空干燥后)(+)-(3-DHTBZ(6.6g,ORD+107.80),分離的對映體具有e.e.>97%。3C.制備異構體B將五氯化磷(4.5g,21.6mmol,1.05eq)在二氯甲烷(55ml)中的溶液在IO分鐘內穩定地加入實施例3B產物(6.6g,20.6mmol)在二氯甲烷(90ml)中的攪拌、冷卻(冷水浴)溶液中。在加完后，再攪拌得到的黃色溶液10分鐘，隨后傾入碳酸鈉(15g)在水(90ml)和碎水(90g)中的迅速攪拌水合物中。混合物再攪拌10分鐘，轉移到分液漏斗中。一旦相分離后，除去棕色二氯甲烷層，用無水硫酸鎂干燥，過濾和減壓濃縮得到粗烯烴中間體椋色油(約6.7g)。TLC分析(硅膠，乙酸乙酯)顯示在粗產物中沒有殘留(+)-|3-DHTBZ。將粗烯烴溶解(無水氮氣氣氛)在無水四氬呋喃(40ml)中，在攪拌下在15分鐘內加入硼烷在THF中的溶液(lM溶液，2.5叫，52ml)中。反應混合物隨后在室溫下攪拌2小時，TLC分析(硅膠，乙酸乙酯)顯示在反應混合物中沒有殘留烯烴中間體。向攪拌的反應混合物中加入氫氧化鈉(3.7g)在水(10ml)中的溶液，隨后加入過氧化氫(50%,約7ml)水溶液，形成的兩相混合物回流4覺拌1小時。此外有機相的TLC分析(硅膠，乙酸乙酯)顯示產物的形態根據為預期的異構體B，還看出特征非極性組分。使反應混合物冷卻到室溫，傾入分液漏斗中，除去上層有機層，減壓濃縮除去大多數THF。殘余物溶解在乙醚(穩定的(BHT),75ml)中，用水(40ml)洗滌，用無水硫酸鎂干燥，過濾和減壓濃縮得到淺黃色油(8.1g)。黃色油用柱色語法(硅膠，乙酸乙酯己烷(80:20),增加到100%乙酸乙酯)純化，收集所需柱餾分，結合和減壓濃縮得到淺色油，用乙醚(穩定化，18ml)處理，減壓濃縮得到異構體B淺黃色固體泡沫(2.2g)。用實施例3B列出的條件的手性HPLC證實異構體B以對映體過量(e.e.)大于97%產生。旋光性用BellinghamStanleyADP220旋光計測量，得到[a]+123.5°。3D.制備異構體B的甲碭酸鹽通過將1當量實施例3C的異構體B和1當量甲磺酸溶解在當量乙醇中，隨后加入乙酸乙酯制備異構體B的曱磺酸鹽。過濾收集形成的白色沉淀，真空干燥以約85%收率和約96%純度(由HPLC)得到甲磺酸鹽。實施例4異構體B的X-射線結晶研究制備異構體B的(S)-(+)-樟腦-10-磺酸鹽，單一結晶在如下條件下進行X-射線結晶研究書亍射4義NomusKappaCCD面積4僉測計(t/i掃描和OJ掃描以滿足不對稱單元)。晶胞測定DirAx(Duisenberg，AJ.M.(1992).J.Appl.Cryst.25,92-96.)數據收集(Collect:數據收集軟件，R.Hooft,NonmsB.V51998)數據還原和晶月包精制Demo(Z.Otwinowski&W.Minor,MethodsmEnzymology(1997)Vol.276:MacromolecularCrystallography,partA,pp.307-326;C.W.Carter,Jr&R.M.Sweet,Eds"AcademicPress)。吸收4交準Shddrick,G.M.SADABS-BmkerNonms面積4全測計，比例和吸收+吏準-V2.\0結構溶液SHELXS97(G.M.Sheldrick,ActaCryst.(1990)A46467-473),結構精制SHELXL97(G.M.Sheldrick(1997),UniversityofGoettingen,Germany)制圖法Cameron-AMolecularGraphicsPackage(D.M.Watkin,L.PearceandCK.Prout,ChemicalCrystallographyLaboratory,UniversityofOxford,1993)具體細節所有氳原子在理想化位置被置換，用ndmg模式精制，位于衍射圖中的NH和OH除外，用抑制劑精制。手性NI=R，CI2=S,CB=S,CI5=R,C21=S,C24=R。研究結果在表A、B、C、D和E中列出。在表才各中，標記RUS035O稱為異構體B。原子xyzLtegS.o.f,Nl4839⑧11119(2)2180(1)24(1)012515(3).13171(1>349(1)31(1)025581(3)14030(1)598(1)32(1)039220(3)12834(2)2385(1)36(1)CI870(4)12674(2)190(1)36(1)C23176(3)12838(2)739(1)25(1)表A體積Z密度(校準)吸收系數F卿結晶結晶尺寸數據收集的e范閨系數范圍收集的反射獨立反射完備性(=27.37。吸收校準最大和￡小反射精制方法數據/約束/夸數擬合優度-最終R系數[,>20^)R系數(alldata)牟，,構參數賓光《數最大衍射峰和孔200Sbdy058S(RUS03S0)C29H4SN07S551.72120(2)K0,71073A正交的a=7.1732(9)A6=12.941(2)Ac=31.025(4)A2880.1(7)41.272Mg/m30.158mm-11192元色厚片0.2x0.2x0.04mm33.06-27.37°一""9,—16:S"16,-3""3936802632及,",-0.086397.1%來自等價物的半經驗式0.9937和O.卿O的全矩陣最小平方6326/1/3571.042及/-0.0498,0.0967及/-0.0901,=0.11080.04(8)0.0059(7)0.236和-0.336eA—3表B原子等同物[x104]等價同位素替換系數[A2x103]和占位系數L/e定義為正交化，V張量的痕量三分之一規統團寸法式量系基t認驗子度長晶隔胞確經分溫波結間晶NI-CIO1.498(3)NI-CI51.522^3)NI-CII1.524(3)01-C21.368(3)OI-CI1.432(3)02-C71.369(3)02-C81.433(3)03-C131,425(3)C2-C31.372(3)C2-C71.417(3)C3-C41.407(3)C4-C51.384^5C4-C91.506(3)C14-C151.518(3)C16-C171.526(3)C17-C181.527(4)C17-C191.527(4)C20-C211.525(3)C20-SI1.784(2)SI-051.4442(19)SI-041.4607(17)SI-061.4676(18)07-C221.208(3)C21-C221.537(4)C21-C261.559(3JC21-C271.565(3〉32346(4)43124(3)54773(3)65629(4)74861(4)87189(4)92182(3)ID2759(3)115366(3)127292(4)137468(4)145988(4)155773(4)167734(4)177752(4〉189198(6)198"4(4〉207509(4)17409(1Jt7758(2);8831(3J55524(2)'7406(3)216858(3;227154(4〉237073(4〉246648(3)254742(3)264742(3)277773(4)28.7431(4)299895(4)12109(2)11821(2)12276(2)雷4(2)13308(2)14582(2)11023(2)""8(2)11096(2)11536(2)12663(2)12911(2)12010(2)11477(2)10418(2)9696(3)10562(2)8131(2)8792(1)7965(1)9582(2)9221(1)6932(1)8622(2)7851(2)8450(2J9544(2)8877(2)8877(2)9610(2)10628(2)9489(2)997(1)1395(1)1527(1)1262(1)875(1)747(1)1673(1)2137(1i2656(1)2747(1)2590(1)2252(1)1943(1)3232(1)3449(1)3249(1)3930(1)1250(1)1754(1)2064(1)1760(1)1798(1)498(1)830(1)459(1)40(1)203(1)787(1)787(1)630(1)868(1)569(1)25(1)24(1)23(1)24(1)25(1)38(1)28(1)26(1)25(1)25(1)25(1)25(1)24(1)28(1)34(1)65(1)41(1)31(1)27(1)30(1)49(1)32(1)48(1)25(1)30(1)32(1)28(1)29(1)29(1)25(1)29(1)36(1)表C鍵長[A]和角度0CCCCCCCCCCCCCCCJCCCS&SSSCCCC3CCC3CC5C5-C61.411(3)C22-C231.517(4)C5-C151.516(3)C23-C241.535(4)C6-G71.372(3)C24-C251.548(4)C9-CI01.504(3)C24-C271.554(4)CII-CI21.521(3)C25-C261.557(4)C12-C161.540(3)C27-C281.529(3)C12-C131.544(3)C27-C291.542(4)C13-C141.524(3)CI-CI5113.33(19)CI2-CII-NI113,43(19)CI-CII109.46(18)CII-CI2-C舊110.5(2)CI5-NI-CII111.96(19)CII-CI2-CI3111.7(2)C2-01-CI116.6(2)C舊-CI2-CI3109.84(19)C7-02-C8116.27(19)03-CI3-CI4106.0(2)01-C2-C3125.5(2)03-CI3-CI2111-1(2)01-C2-C7115.0(2)CI4-CI3-CI2111.0(2)C3-C2-C7119.5(2)CI5-CI4-CI3110.1(2)C2-C3-C4121.5(2)C5-CI5-CI4114.3(2)C5-C4-C3119.2(2)C5-CI5-NI112.0(2)C5-C4-C9120.3(2)CI4-CI5-NI108.7(2)C3-C4-C9120.5(2)CI7-C舊-CI2"8.4(2)C4-C5-C6119.4(2)C舊-CI7-C舊112.2(2)C4-C5-Cl5124.1(2)C舊-CI7-CI9108.7(2)C6-C5-CI5116.6(2)CI8-CI7-CI9110.8(3)C7-C6-C5121.3(2)C21-C20-S1122.51(18)02-C7-C6125.4(2)05-SI-04112.93(11〉02-C7-C2115.4(2)05-SI-06112.47(12)C6-C7-C2119.2(2)04-SI-06"1.93J1"CI0-C9-C4111.7(2)05-SI-C2D108.81(13)NI-CI0-C9111.0(2)D4-S卜C20102.60(11)06-SI-C20107.44(12)C23-C24-C25106.4(2)C20-C21-C22109.0(2)C23-C24-C27103.3(2)C20-C21-C26117,3(2)C25-C24-C27102.3(2)C22-C21-C26102.1(2)C24-C25-C26102.9(2)C20-C21-C27123.4(2)C25-C26-C21104.2(2)C22-C21-C27100.21(19)C28-C27-C29107.8(2)C26-C21-C27101.7(2)C28-C27-G24112.0(2)07-C22-C23126.4(2)C29-C27-C24113.7(2)07-C22-C21125.9(2;C28-C27-C21116.5(2)C23-C22-C21107.7(2)C29-C27-C21"2.3J2)C22-C23-C24101.3(2)C24-C27-C2194.27(19)表D各向異性替換系數[A2x103j。各向異性替換因子指數釆用-2n>2a*2L/"+…+2//ca*6*Ul2，Atom(/i/2t/33"23"3i/2<formula>formulaseeoriginaldocumentpage40</formula>25430295858583333323230303030303029333341979797626262373738383337373535444444545454H1C-154H31220H66760H8A6872H8B7600H8C8193H9A814H9B2505H10A2250H10B2235H11A4431H11B5322H128230H137334H14A4783H14B6354H157056H16A8973H16B6813IH17H18AH18BH18C1H19AH19BH19CH20AH20BH23AH23BH24H25AH25BH26AH26BH28AIH28BH28CH29A'H29B'H29C'39590413531009523810165115672259230428222759258928402397209018643278338634122944340032763971407340541207128633aJrJ3rJ5470783240031897SW55SS2站287727590601551S的SSSS78668634348672Q0168364956416951-526333883411147O1963400表6.氫鍵[A和在30%可能性水平畫出的熱橢圓體。基于如上所示的數據，異構體B被認為具有2S,3S,llbR構型，相當于式(Ia):(Ia)-異構體BNl-H98".060.885(W)1.,2)2.773(3)Nl-跳"S10.885(10)2.914(14)3.771(2)03-鵬,.'041O.,1.94(4)2.766(3)03-H99...S1'0.84(4)2.98(4)3.811(2)對稱轉變過程用子產生等價原子:(i)-x+2,y+l/2廣z+l/2i3597VO66實施例5異構體B在亨廷頓疾病的轉基因小鼠中的效果分析將B6CBA-Tg(HDexonl)62Gpb/1J轉基因(R6/2)小鼠進行帶有(CAG)115-(CAG)150重復表達的人體HD基因的5-末端的轉基因改造，R6/2轉基因小鼠顯示顯示模仿許多亨廷頓疾病的許多特性的發展型神經學顯型，包括舞蹈病樣動作、無意識老一套動作、震顫和癲癇發作。他們頻繁小便，在疾病過程中體重降低，這些癥狀在6-8歲間顯現。進^亍研究以通過評^介在一組^亍為測試中的動物評^介異構體B在亨廷頓疾病的轉基因'J、鼠模型中的效果。方法將雌性B6CBa-Tg(HDexonl)62Gpb/1J轉基因小鼠(JacksonLaboratory,USA)在21±2°C室溫和50土15%濕度下以12h-12h(在7.00am光照，在7.00pm關閉)亮-暗周期下在富集環境下每籠5只飼養。小鼠獲得商業小鼠食品(小鼠/飼養率，ref.9341ProvimiKliba,Switzerland)和自來水。將玉米油中的異構體B向10周齡小鼠每天一次重復給藥(5mg/kgi.p)4周。在試驗日期中，動物用實驗方案部分中所述的實驗方案進行如下測試1.簡化的Irwin試驗在觀察前2小時，動物放在單個的籠子內，首先進行單個籠子的測量，記錄動物抽搐、震顫-抽搐、動作單一和發聲。隨后將動物放置在帶有6cm邊框的58.5x68.5cm開放場所，觀察約3分鐘。將步態特征歸類，再次觀注抽搐、震顫-抽搐和動作單一的存在。在3分鐘結束時，記錄排泄物和尿的數量，隨后在測試后將小鼠回到各自的籠子內。2.運動4亍為將小鼠放置在低光強度(最大20lux)室內的場地尺寸30x30cm的透明塑料盒子中，在10分鐘內用錄l象分析器(Videotrack,ViewPomt,Lyon,France)測定運動行為，測量無意識運動的次數、距離和平均速度，在測試后小鼠返回它們原來的籠子。3.轉棒(rotarod)在首次給藥后連續兩天，訓練動物使用轉棒將它們放在加速轉棒(UgoBasile,Italy)至多450秒，它們通過以4rpm開始的2個訓練時期300秒，隨后以40rpm停留150秒。兩個訓練時期以1小時間隔進4亍，在測試日，每個動物在如上所述條件下進行一次試驗。當小鼠跌落或當它已停留在轉棒450秒結束試驗，在試驗后小鼠回到原來籠子。試驗結果顯示在表5-9中。實驗方案實-驗組數量10只組1:用賦形劑i.p每天一次測試4天(0-3天)的半合子轉基因B6CBA-Tg(HDexon1)62Gpb/lJ小鼠組2:用5mg/kgi.p測試物每天一次測試4天(0-3天)的半合子轉基因B6CBA-Tg(HDexon1)62Gpb/lJ小鼠試驗方案在10周齡，在給藥前(O天)和給藥后的3天，動物進行如下所述的測試-2天轉^f奉訓練，2個時期，l小時間隔隱l天轉棒訓練，2個時期，l小時間隔0天參簡^匕的Irwm試-驗*運動活動試-驗，直接在簡化的Irwin試驗后*轉棒試—險，直接在運動活動試一驗后*筒化的Irwin試驗，在給藥后40分鐘參運動活動，直接在運動活動試驗后1天參試馬全物纟會藥*簡化的Irwm試驗，在給藥后40分鐘參轉棒試一驗，直接在運動活動試一驗后2天*試-驗物給藥*簡化的Irwin試驗，在給藥后40分鐘參轉棒試驗，直接在運動活動試一驗后3天參試-驗物纟會藥*簡化的Irwm試驗，在給藥后40分鐘參運動活動試-驗，直纟妻在運動活動試-驗后統計分析簡化的Irwm得分用非參數Mann-Whitney'sU試驗分析，運動活動數據用Dunnett'st-試驗分析，轉棒得分用非參數Mann-Whitney'sU試驗分析。統計分析用軟件StatviewSE+graphlcs軟件，BrainPower進行。第5-異構體B在豪廷頓疾病的轉基因小鼠模型中的效果階段I:在急性研究中的功效，給藥0-3天-簡化的Irwin試驗玉光油，ioml/ki-仏給藥前O天給藥后o天第l天第2天第3天第17天第21天第24天第27天第31天家籠結論一—_0.78±0.400.67±0.44XXXXX震顫-抽搐1.33±0.171.00=b0270.78±0220.88士0.131.44±029XXXXX刻板動作——一O.Il土(Ul一XXXXX儀容整潔(sec)21.00±8.494.00士4.001.33±U314_22±8.187.72XXXXX發聲——一——XXXXX開闊地n=2/8n=3/7結論一一—一一一——-一震顫-抽搐2.11±0_261.89±0.112_22±0.151.89±0201.67±0.242.78±0.152.69±0_293.38±0252-00±0.252.71±刻板動作一—一一———一——<table>tableseeoriginaldocumentpage47</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table>—:未觀察到征兆(相當于0.00±0.00)a:p-0.06相對于對照值，Maan-WhitiieyU-試一驗X:未觀察*;**:明顯不同時對照組(p<0.05;p<0.01)，Mann-WhitoeyU-試驗表6異構體B在亨廷頓疾病的轉基因小鼠模型中的效果階段I:在急性研究中的功效-運動活動試驗平均記錄結果0天，給藥前<table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table>表7異構體B在亨廷頓疾病的轉基因小鼠模型中的效果階段I:在急性研究中的功效-相對于給藥前的運動活動試驗平均結果0天，^合藥前49<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>0天，給藥后40mn<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>表8異構體B在亨廷頓疾病的轉基因小鼠模型中的效果階段I:在急性研究中的功效-運動活動試驗平均結果24天<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>表9異構體B在亨廷頓疾病的轉基因小鼠;溪型中的效果階段I:在急性研究中的功效給藥0-3天對急性研究的功效轉棒試一險,在每天給藥異構體B后由轉棒落下的測量的反應時間<table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table>相對于O天(在第l次給藥前)反應時間<table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table>結果顯示，雖然對照小鼠和用異構體B治療的小鼠在給藥后的最初三天均顯示亨廷頓疾病的典型癥狀的某些進展，但用異構體B治療的小鼠在給藥后的17-24天期間比對照小鼠顯示明顯小的退化。尤其是在此期間步態的退化明顯停止或減緩，在21天，在異構體B治療的小鼠中無意識動作，例如無意識舞蹈病、震顫和抽搐與給藥異構體B之前相比沒有變壞。可以預計通過以合適的間隔(在試驗中沒有進行)重復給藥異構體B,癥狀的進展可停止或減緩進展。因此，結果表明異構體B將用于預防與亨廷頓疾病有關的癥狀的發作或減緩癥狀的進展。實施例6丁苯喹嗪和二氫丁苯喹嗪異構體B和C的鎮靜性質的比較研究用大鼠進行以確定本發明的二氫丁苯喹溱異構體是否具有鎮靜作用。異構體在大鼠中對自發運動行動的作用與采用如下所述的方法丁苯喹溱和氟哌啶醇產生的作用相比較，結果示于表10中。方法將研究開始時體重200-250g的雄性Sprague-Dawley大鼠(CharlesRiverLaboratories,Saint-Germain/L'Arbresle,France)用于研咒,將大鼠每籠2或3只飼養在設定為如下環境條件的房間的MakrolontypeIII籠子內溫度20+-2°C,濕度最小45%,空氣改變>12/小時，12h/12h的亮/暗周期[從7:00a.m.開始]。在開始研究前4吏大鼠適應條件至少5天，大鼠隨意攝取食物(Dietex,Vigny,France,ref.811002)和飲水(水瓶中的自來水)。在羥l基纟;維素中制備，在去離子水中o.5:。:-形劑或試驗化二:均作為單一劑量給藥(0.3、1、3和10mg/kg,2mL/kgi.p.),參考化合物氟哌啶醇(lmg/kg)i.p.給藥(2mL/kg)。動物放在樹脂玻璃籠子中在攝像機下低光強度(最大50lux)室內，在給藥后45分鐘和3小時，用視頻圖像分析器(Videotrack,ViewPomt,France)在20分鐘內測定運動動作。參考組(氟哌啶醇)的運動動作在給藥后1小時記錄，測量非固定運動的次數和持續時間和靜止的持續時間，在運動動作測量結束時(45分鐘和3小時)，如下記錄樹脂玻璃籠子中眼瞼閉合和覺醒眼瞼閉合0:(正常)眼瞼大開1:眼瞼輕^微下垂2:下垂，眼瞼下垂約一半3:眼瞼完全閉合覺醒1:非常低昏迷、昏迷、短暫或沒有響應2:低、輕微昏迷、"呆滯"、輕微頭或身體運動3:稍微低、輕微昏迷、有些固定周期的探測運動4:正常、警覺、探測運動/緩慢停頓5:稍微高、輕微刺激、緊張、突然飛奔或停頓6:非常高、高度緊張警覺、刺激、突然回合的奔跑或身體運動非固定(大)運動的出現次數和持續時間(秒)和靜止周期的持續時間(秒)用視頻圖像分析器(Videotmck，ViewPomt,Lyon,France)在20分鐘時(給藥后45分鐘和3小時)，圖像跟蹤用放置在樹脂玻璃籠子上方的圖像照相機進行，記錄其全面運動動作。用視頻照相機記錄的圖像被數字化，數字圖像點的重力重心的移動留下痕跡，用如下方法分析測量點的重力重心的移動速度，設定兩個極限值以確定運動類型極限l(高速)和極限2(低速)。當動物移動，點的重力重心的移動速度超過極限1時，動作被認為是非固定動作，當動物保持靜止，速度低于極限2，動作被認為是靜止。結果用12個單個數值的平均士SEM表示，統計分析用ANOVA(單程)和Dunnett，st-試驗進行，Kmskal-Wallis的非參數試驗和隨后的Mann&WhitneyU-試驗用于鎮靜cotation。p<0.05的p值采取所示的意見。實驗方案組數量n=12組1:參考，氟哌啶醇(lmg/kgi.p.)組2:賦形劑對照組(2ml/kgi.p.)組3:丁苯喹漆(0.3mg/kgi.p)組4:丁苯喹嗪(lmg/kgi.p)組5:丁苯喹。秦(3mg/kgi.p)組6:丁苯喹漆(10mg/kgi.p)組7:異構體C(0.3mg/kgi.p)組8:異構體C(lmg/kgi.p)組9:異構體C(3mg/kgi.p)組10:異構體C(10mg/kgi.p)組11:異構體B(0.3mg/kgi.p)組12:異構體B(Img/kgi.p)組13:異構體B(3mg/kgi.p)組14:異構體B(10mg/kgi.p)結果表10丁苯喹。秦、異構體B5、異構體C(0.3、1、3和10mg/kgi.p.)對大鼠自發動作活動的效果觀察時間給藥后45分鐘大移動靜止治療劑量(mg/kg)發生持續時間(sec)持續時間(sec)載體2mL/kg286±3576.4±歸349.0±37.4氟哌啶醇1mg/kg58±33**14,8±8.5**637.2±60.1**丁苯喹嗪0,3邁g/kg253±3266.8±10.73卯.4±37.4丁苯喹溱1mg/kg189±3246.5±8.6456.5±50.5丁苯喹嗪3mg/kg38±25**8.7±5.9**697.8±39.7**丁苯喹溱10mg/kg1±1**0.2±0.2**723.1±46.5**異構體c0.3mg/kg285±3479.2±10.0323.7±25.6異構體C1mg/kg295±3071.8±8.3324.6±38.1異構體c3mg/kg308±3684.0士9.4322.7±27.8異構體c10mg/kg254±3266.5±9.9368.7±30.9異構體B0.3mg/kg268±3672.0±9.6346.1±36.9異構體B1mg/kg297±2287,0±7.6334.0±23.2異構體B3mg/kg313±3889.1±12.4342.2±33.3異構體B10mg/kg298±3784.0±11.2333.1±26.9觀察時間給藥后3小時大移動靜止治療劑量(mg/kg)發生持續時間(sec)持續時間(sec)載體2mL/kg101±2324.8±6.0540.9±37.5氟哌啶醇1mg/kg9±8**2.2土2,0**723.6±50.2**丁苯喹嗪0.3mg/kg96±1424.3±4.2545.9±37.1丁苯喹嗪1mg/kg90±1621.5±4.0556.9±31.1<table>tableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table>**與賦形劑組(p,0.01)ANOVA單程然后Dunnett，s試驗明顯不同。結果表示給藥后45分鐘和3小時丁苯喹。秦產生劑量依賴的鎮靜效果，而異構體B和異構體C在任何時間沒有顯示鎮靜作用，雖然異構體C在給藥后3小時沒有顯示輕微和不明顯過度運動。實施例7藥物組合物(i)片劑制劑-II含有本發明的片劑組合物通過混合50mg二氫丁苯喹。秦與197mg乳糖(BP)稀釋劑和3mg硬脂酸4美濕潤劑和以已知方法壓制成片制備(ii)片劑-n含有本發明的二氬丁苯喹嗪的片劑組合物通過混合化合物(25mg)與氧化鐵、乳糖、硬脂酸鎂、白色玉米淀粉和滑石，和以已知方法壓制形成片劑制備。(iii)膠嚢制劑膠嚢制劑通過混合100mg本發明的二氫丁苯喹。秦和100mg乳糖，將得到的混合物填充入標準不透明硬明膠膠嚢制備。等同物顯然柯對如上所述的本發明的具體實施方案作出許多改性和改變而不違背本發明的原理，所有這些改性和改變包含在本申請中。權利要求1.在患者中用于停止或減慢亨廷頓疾病的一種或多種癥狀，更具體地，選自無意識動作，例如無意識舞蹈病、震顫和抽搐和步態退化的癥狀進展的3，11b-順-二氫丁苯喹嗪。2.用于預防治療確定為帶有亨廷頓疾病突變基因的患者的3，llb-順-二氬丁苯喹溱。3.用于預防治療年齡15-50歲，帶有HD基團突變形式，但還沒有發作疾病癥狀的患者的3,11b-順-二氪丁苯喹。秦，預防治療用于預防或減緩與亨廷頓疾病有關癥狀的發作。4.權利要求1-3的任何之一用途的3,11b-順-二氪丁苯喹嗪，其中3,11b-順-二氫丁苯喹。秦為基本上純形式，例如異構體純度超過卯％,大于95%，更優選大于98%。5.上述權利要求的任何一項的用途的3,11b-順-二氬丁苯喹。秦，其中3,11b-順-二氬丁苯喹嗪是(+)-異構形式。6.上述權利要求的任何一項的用途的3，11b-順-二氳丁苯喹。秦，其中3,11b-順-二氳丁苯喹嗪具有式(Ia):7.上述任何的任何一項的用途的3,11b-順-二氫丁苯喹。秦，其中二氳丁苯喹嗪是酸加成鹽形式。8.權利要求7的用途的3,11b-順-二氫丁苯喹嗪，其中鹽是甲磺酸鹽。9.上述權利要求的任何一項中定義的3，11b-順-二氬丁苯喹。秦在生產用于停止或減慢亨廷頓疾病的一種或多種癥狀，更具體地，選自無意識動作，例如無意識舞蹈病、震顫和抽搐和步態退化的癥狀進展的藥物中的用途。10.上述權利要求的任何一項中定義的3,11b-順-二氫丁苯喹。秦在生產用于預防治療確定為帶有導致亨廷頓疾病的突變基因的患者的藥物中的用途。11.上述權利要求的任何一項中定義的3,11b-順-二氳丁苯喹。秦在生產用于預防治療年齡15-50歲，帶有HD基團突變形式，但還沒有進展成疾病癥狀的患者的藥物中的用途，預防治療是用于預防和減緩與亨廷頓疾病有關的癥狀的發作。12.在需要治療的患者中停止或減慢亨廷頓疾病的一種或多種癥狀，更具體地，選自無意識動作，例如無意識舞蹈病、震顫和抽搐和步態退化的癥狀進展的方法，該方法包括給藥治療有效量的上述權利要求的任何之一定義的3,11b-順-二氫丁苯喹漆。13.預防治療確定為帶有導致亨廷頓疾病的突變基因的患者的方法，該方法包括向患者給藥有效量的上述權利要求的任何之一的順-二氪丁苯p套。秦，以防止或減緩疾病的發作或進程。14.上述權利要求的任何一項的用途的化合物、方法或用途，其中給藥順-二氬丁苯喹。秦的患者帶有基因突變形式，其中在IT-15基因中CAG重復單元數量是至少35,更常見為至少40,例如至少45或至少50。15.預防治療確定為帶有導致亨廷頓疾病的突變基因的患者的方法，方法包括向患者給藥有效量的上述權利要求的任何一項定義的順-二氫丁苯喹嗪以防止或減緩疾病的亞臨床癥狀進程。16.基本上如本文實施例中所述的用途的化合物、方法或用途。全文摘要本發明提供用于在患者中停止或減慢亨廷頓疾病的一種或多種癥狀，更具體地，選自無意識動作，例如無意識舞蹈病、震顫和抽搐和步態退化的癥狀進展的3，11b-順-二氫丁苯喹嗪。文檔編號A61P25/00GK101282726SQ200680033975公開日2008年10月8日申請日期2006年7月13日優先權日2005年7月14日發明者R·特理吉特,T·菲尤申請人:劍橋實驗室(愛爾蘭)有限公司