包含替加環素的口服制劑的制作方法

專利名稱：：包含替加環素的口服制劑的制作方法包含替加環素的口服制劑本申請要求于2005年12月22日提交的美國專利申請第60/753，035號的優先權，在此將其引入本文作為參考。在一個實施方案中，本發明涉及包含替加環素的口服制劑。替加環素是一種甘氨酰環素類抗生素，即^又丁基甘氨酰基取代的并四苯曱酰胺游離堿，半合成四環素米諾環素的類似物。N(CH3)2替加環素四環素類例如鹽酸氯四環素(金霉素)和氧四環素(土霉素)是安全的抗生素，自從1948年以來就一直作為廣鐠抗菌藥用于治療。但是，對這些抗生素的耐藥性的出現卻限制了它們的持續廣泛使用。因此研制了替加環素作為活性劑，通過克服四環素的耐藥機制而潛在地恢復四環素類藥物的治療應用。替加環素還對新出現的對多種藥物耐受的病原體具有活性。甘氨酰環素類藥物(包括替加環素)對于多種對抗生素耐藥的格蘭氏陽性致病菌例如耐受甲氧西林的金黃色葡萄球菌、耐受青霉素的肺炎鏈球菌和耐受萬古霉素的腸球菌(Weiss等，1995;Fraise等，1995)具有活性。對于以兩種主要方式即外流和核糖體保護兩種方式耐受四環素的菌種(SchnappingerandHillen,1995)，替加霉素同樣有效。米諾霉素目前有口服和靜脈內施用兩種劑型。盡管已經研制了替加環素的靜脈內注射制劑，但是含有替加環素的簡單口服即時釋放制劑原型卻存在在動物中口月艮利用度較差的問題(Petersen等，^jft7m'croWa/^ge"tofl/idC^e附o^cfl/y;，1999年4月，Vol.43，No.4p.738-744.)。替加環素在水中易溶，溶解度在pH1-14的整個范圍內都在295mg/mL以上。但是，關于替加環素(lmM在乙醇和緩沖液中的溶液，pH6-6.4)的細胞單層滲透性研究卻顯示滲透值很低，為0.411ms-1,表明GI滲透性很低，這與動物實驗中發現的口服生物利用度低的結果一致。因此，仍然需要研制替加環素的口服制劑。附圖簡述圖1是替加霉素釋放百分比(y軸)對時間(x軸，分鐘)作圖。圖2是低QC(質量控制)-300ng/mL的替加環素在猴血漿中的分析結果，為替加環素血漿濃度(y軸)對曲線編號(x軸)作圖。圖3是中等QCA-663ng/mL的替加環素在猴血漿中的分析結果，為替加環素血漿濃度(y軸)對曲線編號(x軸)作圖。圖4是中等QCB-556ng/mL的替加環素在猴血漿中的分析結果，為替加環素血漿濃度(y軸)對曲線編號(x軸)作圖。圖5是高QC-3000ng/mL的替加環素在猴血漿中的分析結果，為替加環素血漿濃度(y軸)對曲線編號(x軸)作圖。圖6是單次靜脈內注射5mg/kg的替加環素后，猴血漿中替加環素濃度(y軸)對時間(x軸)作圖。圖7是替加環素血漿濃度(y軸)對曲線編號(x軸)作圖，顯示低QC(質量對照)-30ng/mL的替加環素在猴血漿中的分析結果。圖8是替加環素血漿濃度(y軸)對曲線編號(x軸)作圖，顯示中等QC畫300ng/mL的替加環素在猴血漿中的分析結果。圖9是替加環素血漿濃度(y軸)對曲線編號(x軸)作圖，顯示高QC-800ng/mL的替加環素在猴血漿中的分析結果。圖10是口服給藥一次(100mg微粒膠嚢)替加環素后，禁食雄性短尾猴血漿中替加環素濃度(ng/ml，y軸)對時間(h，x軸)作圖。本發明的一個實施方案提供包含替加環素的藥物組合物，其具有至少一種腸溶包衣包衣。在一個實施方案中'，所述組合物是口服劑型。所述的腸溶包衣替加環素組合物可進一步包含一種或多種本文描述的其它成分。在一個實施方案中，"具有腸溶包衣"是指包圍一堆替加環素。在另一實施方案中，所述腸溶包衣基本包圍每一個替加環素顆粒。"包衣"可以包含包衣或亞包衣。本文使用的"包衣"或"包圍"可以從例如至少部分地包衣或包圍到包括完全的包衣或包圍。在一個實施方案中，包衣或包圍是指充分地包衣，例如卯重量％、95重量°/。和99重量的包衣。在一個實施方案中，腸溶包衣可以足夠均勻以賦予替加環素物理穩定性，例如通過本文公開的任何方法預防降解。在一個實施方案中，"腸溶包衣"可允許至少大部分的制劑通過胃在腸中崩解。用于制備腸溶包衣的材料的實例包括但不限于羥丙基甲基纖維素、羥乙基纖維素、曱基羥乙基纖維素、羧甲基纖維素鈉、羥丙基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、二甲基^JL乙基曱基丙烯酸酯丙烯酸甲酯共聚物、陰離子丙烯酸樹脂例如甲基丙烯酸/丙烯酸甲酯共聚物和甲基丙烯^7丙烯酸乙酯共聚物、丙烯酸乙酯-曱基丙烯酸甲酯共聚物、醋酸羥丙基甲基纖維素琥珀酸酯(HPMCAS)、羥丙基曱基纖維素鄰苯二甲酸酯(HPMCP)、醋酸纖維素鄰苯二甲酸酯(CAP),醋酸羧曱基纖維素鄰苯二甲酸酯(CMCAP)、蟲膠、甲基纖維素和乙基纖維素和它們的混合物和共聚物。在一個實施方案中，腸溶包衣可以才艮據本領域已知的形成聚合物膜的方法形成。在一個實施方案中，所述組合物進一步包含密封包衣。在一個實施方案中，所述密封包衣位于腸溶包衣下面。在另一個實施方案中，所述組合物可包含至少一種額外的密封包衣，其包裹在腸溶包衣外面，腸溶包衣又包裹在第一密封包衣外面。在一個實施方案中，所述密封包衣可包含任何適合于形成腸溶包衣的材料，例如羥丙基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、羧曱基纖維素鈉和羥丙甲纖維素或本文公開的任何其它腸溶包衣材料。在一個實施方案中，所述的至少一種腸溶包衣可保護替加環素使之不被顯著降解。替加環素可具有至少兩種降解機制。在低pH下，已認定主要降解路線是4位上的二曱基氨基基團發生差向異構化作用。在pH高于7.4時，因為酚羥基可以去質子化，因而降解機制轉為氧化作用。可以通過例如除去氧而穩化固體和溶液狀態的替加環素。一旦除去氧之后，穩定性最佳的pH值從(5變為8，此時的差向異構化作用最小。在一個實施方案中，腸溶包衣可允許將口服制劑遞送至胃腸道以選擇性地釋放至胃腸道中，例如胃腸道下段。胃腸道包括上段和下段。上段胃腸道包括胃和食管。在一個實施方案中，本文使用的"胃腸道下段"是指回腸和大腸。本文使用的"回腸"是指小腸的延續至十二指腸和空腸的第三部分。本文使用的"大腸"包括盲腸、結腸和直腸。"盲腸"是指從大腸開始至回腸結束的盲袋(盡端管)。在一個實施方案中，所述口服制劑在胃中不釋放明顯量的替加環素，當制劑到達胃腸道例如胃腸道下段時才開始大量釋放。在一個實施方案中，所述組合物還包含至少一種螯合劑。鈣與四環素結合，降低四環素的水溶解度。在pH7.4時，由于鈣復合物的沉淀可導致30-40%的替加環素損失。因此，4丐結合和隨后的鉤/替加環素鹽的沉淀可能至少部分地導致口服生物利用度較差。螯合劑的實例包括乙二胺四乙酸(EDTA)、0，0，-雙(2-氨基乙基)乙二醇-N，N，N，，N，-四乙酸(EGTA)、檸檬酸鹽和酒石酸鹽。在一個實施方案中，所述組合物還包含至少一種堿。在一個實施方案中，所述的至少一種堿在釋放時為所述組合物提供pH為4-8.5,例如7.8-8.5的微環境。在一個實施方案中，微環境的pH是指直接包圍組合物的區域的pH。在一個實施方案中，微環境是指密封包衣內的區域。堿的實例包括但不限于磷酸鹽例如至少一種鈉磷酸鹽，碳酸鹽例如碳酸鈉和碳酸鉀、碳酸氯鹽例如碳酸氫鈉和碳酸氫鉀、檸檬酸鹽例如檸檬酸鈉和酒石酸鹽。此外，在一些實施方案中，緩沖劑物種可對替加環素的穩定性造成負面影響。在一個實施方案中，所述的至少一種堿可能可以對抗所述緩沖劑物種的影響。在一個實施方案中，所述組合物還包含至少一種生物聚合物。例如，在其中組合物用于治療胃腸道例如內胃腸道或胃腸道下段感染的實施方案中，所述的至少一種生物聚合物可作為內胃腸道的粘著劑，因此可增強替加環素的吸收。生物聚合物的實例包括但不限于羥丙曱纖維素和黃原膠和卡波姆。本文使用的"藥物組合物"是指醫藥組合物。所述的藥物組合物可含有至少一種可藥用載體。在一個實施方案中，所述組合物還包含至少一種可藥用惰性賦形劑或載體。本文使用的"可藥用賦形劑"是指適用于施用替加環素的藥物載體或賦形劑，包括本領域技術人員已知的適合于口服施用的任何這種載體。適合的賦形劑包括例如(a)填充劑或增量劑例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合劑例如纖維素和纖維素衍生物(例如羥丙基曱基纖維素，羥丙基纖維素和羧甲基纖維素)、褐藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯膠；(c)保濕劑例如甘油；(d)崩解劑例如淀粉乙醇酸鈉、交聯羧甲基纖維素、瓊脂、碳酸釣、馬鈴署淀粉或木薯淀粉、褐藻酸、某些珪酸鹽和碳酸鈉；(e)溶液阻滯劑例如液體石蠟；(f)吸收促進劑例如季銨鹽化合物；(g)濕潤劑例如鯨蠟醇和硬脂酸單甘油酯、脫水山梨糖醇脂肪酸酯、泊洛沙姆和聚乙二醇；(h)吸收劑例如高嶺土和膨潤土；(i)潤滑劑例如滑石、硬脂酸鉤、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、月桂1^危酸鈉和它們的混合物；和(j)助流劑(抗粘著劑)例如滑石和二氧化硅。其它合適的賦形劑包括例如檸檬酸鈉或磷酸二鈣。劑型中還可包含緩沖劑。口服劑型還可以在硬明膠膠嚢和軟明膠膠嚢中使用填充劑，使用賦形劑例如乳糖或高分子量聚乙二醇。所述的藥物組合物還任選包含遮光劑和著色劑。它們還可以是可以控釋或持續釋放的形式。可用于該目的的植入組合物的實例包括聚合物和蠟。若所述組合物是含有替加環素粉末的混懸劑，則該混懸液還可包含例如約0.05重量％-5重量°/。的助懸劑，糖漿劑含有例如約10重量％-50重量％的糖，酏劑含有例如約20重量％一50重量％的乙醇。本文公開的藥物組合物可以包含例如占組合物總重約25%至約卯％或約5重量％至60重量％的活性成分。替加環素可以作為可藥用鹽的形式提供。術語"可藥用鹽，，可以指本發明化合物的酸加成鹽或堿加成鹽。可藥用鹽是保留母體化合物活性且對其施用的個體和在其施用的環境中不產生任何有害或不期望作用的任何鹽。可藥用鹽包括金屬復合物和有機酸鹽和無機酸鹽。可藥用鹽包括金屬鹽例如鋁、鈣、鐵、鎂、錳和復合鹽。可藥用鹽包括酸鹽例如乙酸鹽、天冬氨酸鹽、烷基磺酸鹽、芳基磺酸鹽、Axetil、笨璜酸鹽、苯曱酸鹽、碳酸氬鹽、硫酸氫鹽、酒石酸氫鹽、丁酸鹽、依地酸鉀、樟腦磺酸鹽、碳酸鹽、氯苯甲酸鹽、Cilexetil、杵檬酸鹽、依地酸鹽、乙二磺酸鹽、十二烷基磺酸鹽、乙磺酸鹽、甲酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡萄糖酸鹽、谷氨酸鹽、乙醇酸鹽、乙醇酰阿散酸鹽(glycolylarsanilic)、環己磺酸鹽、己基間苯二酚酸鹽、hydrabamic、氬溴酸鹽、鹽酸鹽、氫碘酸鹽、羥萘甲酸鹽、羥乙磺酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、馬來酸鹽、蘋果酸鹽、丙二酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、甲基賄酸鹽、甲基硫酸鹽、粘酸鹽、粘康酸鹽、萘磺酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、對硝基甲磺酸鹽、樸酸鹽、泛酸鹽、磷酸鹽、磷酸一氫鹽、磷酸二氫鹽、鄰苯二甲酸鹽、多聚半乳糖酸鹽、丙酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、氨基磺酸鹽、磺胺酸鹽、磺酸鹽、硫酸鹽、鞣酸鹽、酒石酸、teoclic、甲苯磺酸鹽等。可藥用鹽可衍生于氨基酸包括但不限于半胱氨酸。其它可藥用鹽可以在例如Stahl等，」PAfl/7Wfl"ric/5^to:尸m/7eW/ey，Se/e"iWi，"e，Wiley-VCH;第1版(2002年6月15日)中找到。另一實施方案提供一種制備藥物組合物的方法，其包括用至少一種腸溶包衣對替加環素包衣。包衣可以根據本領域已知的任何方法進行，例如將替加環素引入包含腸溶包衣材料的流化床加工器(或其它包衣裝置例如包衣盤)中。在引入包衣裝置之前，可將替加環素與至少一種^緩沖劑、至少一種螯合劑、至少一種生物聚合物和適合于口服制劑的其它成分中的一種或多種混合。另一實施方案提供治療至少一種細菌感染的方法，其包括向有需要的個體口服施用包含治療有效量的替加環素的藥物組合物，其具有至少一種腸溶包衣。另一實施方案提供一種治療抗生素相關的由困難腸梭菌引起的偽膜性腸炎和由金黃色葡萄球菌及相關甲氧西林耐受菌種引起的小腸結腸炎的方法，其包括向有需要的個體施用包含治療有效量的替加環素的藥物組合物，其具有至少一種腸溶包衣。在一個實施方案中，"治療有效量"是指在患者中可預防或改善癥狀或者可產生期望的生物學結果例如臨床征象改善、疾病發作延遲、淋巴細胞和/或抗體水平減少或升高等的化合物的量。本領域技術人員可確定有效量。所選擇的劑量水平可以取決于待治療病癥的嚴重程度、被治療患者的狀況和病史。但是本領域的常規做法是從低于獲得期望治療效果所需水平的化合物劑量開始逐漸增加劑量直至獲得期望效果。在一個實施方案中，被治療的個體可以是哺乳動物，例如人類。在一個實施方案中，個體被懷疑罹患細菌感染，例如顯示與感染有關的至少一種癥狀。在另一實施方案中，個體易于罹患細菌感染，例如遺傳上有罹患該疾病的傾向。本文使用的術語"治療"指治療性治療和預防性措施。需要治療的個體包括已經罹患具體醫學疾病的個體以及有風險罹患該疾病的個體(即可能最終罹患該病癥的個體)。治療方法得到的結果是預防或改善癥狀或者得到期望的生物學效果，且可以通過改善的臨床征象、疾病發病的延遲、淋巴細胞和/或抗體水平減少或升高等進行評價。在一個實施方案中，給藥通過鼻胃管進行。本發明的藥物組合物中替加環素的實際劑量水平可以變化以獲得為在具體患者中產生期望治療應答所必需的治療有效量。通常的劑量水平為約0.1ng/kg至約50mg/kg，例如每日每kg體重約5至約20mg的活性化合物，可以經局部、口服或靜脈內途徑施用于哺乳動物患者。其它劑量水平有每日約1fig/kg至約20mg/kg、約1jng/kg至約10mg/kg、約1ng/kg至約1mg/kg、10ng/kg至1mg/kg、10jig/kg至100將/kg、100pg至1mg/1^，約500將/kg至約5mg/kg。如需要，有效日劑量可分為多個劑量施用，例如每日兩個至四個劑量。在一個實施方案中，藥物組合物可每日施用一次或兩次。在一個實施方案中，替加環素是多顆粒的。本文使用的"多顆粒替加環素"是指替加環素顆粒的集合。在一個實施方案中，多顆粒替加環素的平均粒徑為0.3mm至1.5mm。多顆粒替加環素可以以粉末形式提供，或者可以以膠嚢殼內的膠嚢劑形式或本文所述的任何其它劑型提供。在一個實施方案中，用于口服施用的劑型包括但不限于膠嚢劑、片劑、丸劑、散劑(例如可*的粉末，含有這種粉末的混懸劑)、錠劑、顆粒劑和低壓凍干餅和粉末。這種劑型可包括在口腔環境中溶解或崩解迅速的劑型。在另一實施方案中，口服劑型在口服施用后立即使藥物溶出速度放慢，使之在胃腸道例如胃腸道下段溶出大部分。在一個實施方案中，劑型(例如散劑、餅)以小瓶或其它合適容器的形式提供。在一個實施方案中，藥物組合物包含壓制的片劑，其含有替加環素，替加環素的含量為100mg至300mg。在一個實施方案中，藥物組合物包含引入硬明膠膠嚢中的腸溶包衣的多顆粒小丸，其中每個小丸包含替加環素和微晶纖維素以及以下成分中一個或多個的組合至少一種堿/緩沖劑(例如至少一種磷酸鈉)、至少一種螯合劑(例如EDTA)和至少一種生物聚合物(例如黃原膠)。在一個實施方案中，藥物組合物包含腸溶包衣片劑，其包含替加環素和孩吏晶纖維素以及以下成分中的一種或種至少一種^緩沖劑(例如至少一種磷酸鈉)、至少一種螯合劑(例如EDTA)和至少一種生物聚合物(例如黃原膠)。在一個實施方案中，藥物組合物包含引入腸溶包衣的軟明膠膠嚢中的多顆粒小劑，其中每個小丸包含替加環素和微晶纖維素以及以下成分中的一種或多種至少一種堿/緩沖劑(例如至少一種磷酸鈉)、至少一種螯合劑(例如EDTA)和至少一種生物聚合物(例如黃原膠)。在一個實施方案中，藥物組合物包含腸溶包衣的軟液體凝膠膠嚢，其還包含替加環素的非水性溶液以及以下成分中的一種或多種至少一種*緩沖劑(例如至少一種磷酸鈉)、至少一種螯合劑(例如EDTA)和至少一種生物聚合物(例如黃原膠)。在一個實施方案中，藥物組合物包含膠嚢劑或雙層片劑，其中包含即時釋放部分和延時釋放部分。在一個實施方案中，"延時釋放"包括在至少4小時的時間內、例如至少6小時內、至少12小時、至少24小時或至少48小時內基^#放全部的替加環素。在一個實施方案中，藥物組合物可用作對抗藥物耐受性細菌的治療劑。例如，它可能對耐受甲氧西林的金黃色葡萄球菌、耐受青霉素的肺炎鏈球菌、耐受萬古霉素的腸球菌有效(D.J.Beidenbach等，DiagnosticMicrobiologyandInfectiousDisease40:173-177(2001);H.W.Boucher等，AntimicrobialAgents&Chemotherapy44:2225-2229(2000);P.A.BradfordClin.Microbiol.Newslett.26:163-168(2004);D.Milatovic等，Antimicrob.AgentsChemother.47:400-404(2003);R.Patel等，DiagnosticMicrobiologyandInfectiousDisease38:177-179(2000);P.J.Petersen等，Antimicrob.AgentsChemother.46:2595-2601(2002);和P.J.Petersen等，Antimicrob.AgentsChemother.43:738-744(1999)，并且對以兩種主要方式即外流和核糖體l呆護兩種方式耐受四環素的菌種有效(C.Betriu等，Antimicrob.AgentsChemother.48:323-325(2004);T.Hirata等Antimicrob.AgentsChemother.48:2179-2184(2004);和P.J.Petersen等,Antimicrob.AgentsChemother.43:738-744(1999)。在一個實施方案中，藥物組合物可用于多種細菌感染，例如復雜的腹腔感染(cIAI)、復雜的皮膚和皮膚結構感染(cSSSI)、社區獲得性肺炎(CAP)和醫院獲得性肺炎(HAP)適應征，所述適應征可能由格蘭氏陰性和格蘭氏陽性病原體、厭氧菌、甲氧西林敏感和甲氧西林耐受的金黃色葡萄球菌菌抹(MSSA和MRSA)引起。此外，藥物組合物可用于治療或控制由具有TetM和TetK耐藥決定子的細菌引起的溫血動物的細菌性感染。此外，藥物組合物可用于治療骨和關節感染、與導管有關的嗜中性粒細胞減少癥、婦產科感染或治療其它耐藥病原體例如VRE、ESBL、腸道病原體、快速生長的分枝桿菌等。在一個實施方案中，藥物組合物可用于治療胃腸道細菌感染，例如胃腸道下段的細菌感染。在一個實施方案中，厭氧菌是困難腸梭菌。實施例實施例l在該實施例中，研究膠嚢中腸溶包衣替加環素顆粒在37°C下在0.1NHC1溶液、然后在pH6.8的磷酸鹽緩沖液中的溶出行為。這些條件模擬胃系統(0.1N)和腸道下段(pH6.8)的條件。使用的制劑描述于下面的實施例3中。將含有100mg替加環素的腸溶包衣顆粒的明Mi^嚢加至三個獨立的容器中(膠嚢l、2、3)。將膠嚢用USP裝置2(漿式)在750mL0.1NHC1中溶解，轉速100rpm，溫度為37。C。溶出進行2小時，然后加入250mL0.2MNa3PO4。將該混合物的pH調至6.8。下表l列出了溶出數據。表I.100mg腸溶包衣替加環素顆粒明膠膠嚢的釋放百分比<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>圖l是表l的釋放百分比數據(x軸)對時間(分鐘)的作圖。AUC與mg/ml的比例根據方程y=16279x畫58.773計算。該實施例表明例如在2小時后，該制劑在較高pH基本釋放出大部分替力口環素。實施例2本實施例研究作為口服制劑施用時替加環素在短尾猴中的口服生物利用度(管伺法)。本實施例還給出了單次口服施用和靜脈內施用后替加環素的藥代動力學特征。首先向短尾猴口服施用(管祠法)15mg/kg的替加環素，然后在一周的洗脫期后，向其靜脈內施用5mg/kg的替加環素。材料和方法1.實騶"沒計實驗中使用四只短尾猴。第一個給藥期內，向每只短尾猴單次口服給藥(管伺法)15mg/kg替加環素在0.9%鹽水中的溶液。給藥體積為10mL/kg。給藥之前(O小時)和口服給藥后0.5、1、2、4、6、8、12、24、32和48小時取血樣(每份樣品2mL)。經過一周的洗脫期，向每只短尾猴單次靜脈內給藥5mg/kg替加環素在0.9。/。鹽水中的溶液。給藥前(O小時)和給藥后5分鐘、0.5、1、2、4、6、8、12、24、32和48小時取血樣(2mL)。使用不銹鋼針頭和含有肝素鈉作為抗凝劑的真空試管^jk樣。將血樣置于冰上，在約4。C下離心。分離血漿樣品，在約-70。C下冷凍儲存直至分析。猴血漿中替加環素的定量才艮據先前在大鼠和狗血漿中驗證過的HPLC方法測定替加環素濃度，但是該方法經過修改后才用于猴血漿。在該方法中，通過蛋白質沉淀法用乙腈萃取0.2mL猴血漿樣品中的替加環素，離心分離沉淀的蛋白質。蒸發上清液，萃取物再次溶解于0.05NHC1中用于HPLC分析。使用二次方程擬合用標準曲線進行回歸分析，加權因子為1/(濃度)2。使用0.2mL猴血樣樣品的分析定量限(LOQ)為100ng/mL，曲線范圍為100至6400ng/mL。藥代動力學計算使用藥代動力學分析軟件WinNonlin，2.1版本(ScientificConsultingInc.)從每個動物血漿濃度對時間曲線計算其藥代動力學參數。該軟件使用非房室才莫型法和GibaldiandPerrier(GibaldiM，PerrierD.，/%fli7mia^/""/"，2nded.，MarcelDekker，Inc.,NY，1982)所述的標準方法。在該分析中，沒有在靜脈內推注后立即反向外推濃度，而是假設O時(Q，給藥后立即取樣)與第一次測量濃度(5分鐘，Csmin)相等。為測量平均血漿藥物濃度，定量限以下的所有值(LOQ-100ng/mL)都作為0處理。最終半衰期(tm)由0.693/入確定，其中X是最終的速率常數，通過濃度時間曲線末端的對數線性擬合確定。AUC(m通過AUC(m+CA計算，其中AUC(m是時間0至t的AUC，t是最后一個可定量的時間點，Ct是最后一個可定量的濃度。使用線性梯形法計算從時間0至t的血漿濃度-時間曲線下面積(AUC(m)。靜脈內給藥后的系統清除率(CLT)用劑量/AUC(m計算。穩態分布容積(Vdss)根據式MRTivxCLT來計算，其中MRTiv是靜脈內給藥后的平均滯留時間，并且等于AUMCoVAUC(m。對于口服給藥，從濃度時間曲線上獲得C隨和t咖x值。由于口服給藥后缺乏可定量的濃度，因而無法計算AUCo隱4。猴血漿中替加環素的HPLC分析方法的分析結果進行五次樣品分析。反向計算的標準曲線值見表II。替加環素標準物的CV為2.1至6.3%，偏差值為-5.4至3.8%。表II.猴血漿替加環素分析的分析結果反向計算的替加環素標準物值-------------替加環素的標稱濃度，ng/ML--------編號100200400500寨16003200400050006400昏加環素實際濃度，ng/ML.97.7205418494825160430703861484867092100194429NA763158132843851515863353100202416478724154935104377482960694103189404NA73616523259430051095996698.021640944777915123403429751205968平均99.720141547376515803305413750136215SD2.1210.49.5223.939.853.3165259160312%cv2.15.22.35.15.23.45.06.33.25.0%偏差-0.30.53.8國5.4-4.4國1.33.33.40.3-2.9n5553555555NA:不適用標準曲線參數見表III。表III.猴血漿替加環素分析的分析結果標準曲線參數<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>根據以下方程進行回歸分析y=ax+bx+c其中a=第2級回歸線常數b=第l級回歸線常數c=截距y=替加環素內標峰高比例x=替加環素濃度(ng/mL)全部分析中，確定系數(R、為X).99。全部分析中，一式兩份的低QC、中等QC和高QC樣品與實驗樣品一起分析。低QC和高QC樣品的標稱濃度分別為300和3000ng/mL。中等QC樣品的標稱濃度為900ng/mL。配制兩批中等QC的樣品，其濃度都在目標濃度以下(約600ng/mL)。通過分析四份(A批)或八份(B批)重復的各個中等QC批次確定中等QC批次的目標濃度。用曲線1和2分析A批中等QC樣品(測定濃度為663ng/mL)。用曲線3、4和6分析B批中等QC樣品(測定濃度為556ng/mL)。QC樣品的分析結果見表IV。表IV.猴血漿替加環素分析的分析結果QC樣品結果<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>NA:不適用；該批QC樣品沒有用于此次分析。QC樣品的CV為5.9至13.1%，偏差為-1.0至7.7%。QC結果描述于QC圖表中，見圖2至5。替加環素在短尾猴中的藥代動力學單次口服給藥15mg/kg替加環素后其在猴中的濃度見表V。表V.單次口服(管飼法)給藥15mg/kg后替加環素的血漿濃度(ng/mL)<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>單次靜脈內給藥5mg/kg后替加環素的濃度見表VI。表VI.單次靜脈內給藥5mg/kg替加環素后其在猴中的血漿濃度(ng/mL)<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>單次靜脈內給藥替加環素后其在猴血漿中的濃度對時間的曲線如圖6所示。每只動物的藥代動力學參數見表vn。表VII.單次口服(管飼法)給藥15mg/kg或單次靜脈內給藥5mg/kg后替加環素在猴子中的藥代動力學參數的單值及平均值(士SD)_<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>aCmax=靜脈給藥后Cs幽。bt=2hr，用于確定AUC。et=lhr,用于確定AUC。NA:不適用。nc:AUC0—4或11/2值由于在表觀終期數據不足而沒有計算。單次口服(管飼法)給藥15mg/kg后，2小時之內可在樣品中檢測到替加環素。平均(士SD)C隨值為163±27.1ng/mL，t咖x值為l至2小時之間。由于口服給藥后濃度時間曲線終期缺乏可定量的濃度，因此口服給藥后沒有估算AUQM和tm值。此夕卜，由于可定量替加環素濃度和估算的部分AUC值的時間點數目有限，因此無法確定口服給藥后替加環素的絕對生物利用度。血液生物利用度為0.5%適合于治療胃腸道感染，因為所需的作用位點是胃腸道而不是血液。因此，0.5%的血液生物利用度在胃腸道中可解釋為99%的生物利用度。單次靜脈內給藥5mg/kg后，猴血漿中替加環素濃度呈高指數級下降。從血漿濃度時間曲線終期估算的平均11/2值為14.1±3.4小時，與MRTiv=12.8±5.4小時相似。替加環素平均(士SD)AUC(M值為18267±3030ng*hr/mL。平均替加環素C1T為0.280±0.053L/kg/hr，平均Vdss為3.47±1.09L/kg。討論該實驗結果表明替加環素在口服施用后血液生物利用度較低。治療胃腸道感染時，期望血液生物利用度較低，因為這樣藥物停留在胃中在局部針對胃腸道中的微生物發揮作用。由于用于估算AUQM值的終期數據不足，因此無法估算在單次口服給藥15mg/kg后的絕對生物利用度。在猴中單次靜脈內給藥后，替加環素的血漿濃度呈高指數級下降。從血漿濃度時間曲線的終期估算的終期半衰期為11.4至19.1(平均14.1)小時，與MRTiv相似(平均12.8小時)。GAR-936在猴中的系統清除率(ClT)相對較低(平均0.280L/kg/hr),但與狗相似(單次給藥5mg/kg后約0.26L/kg/hr)。替加環素在猴中的穩態分布容積(Vdss)較大(3.47L/kg)，高于該物種體內總水量(參見DaviesB，MorrisT."Physiologicalparametersinlaboratoryanimalsandhumans.，，，1993;10:1093-95),表明替加環素應該分布在各組織和器官中。實施例3本實施例研究單次給藥腸溶包衣口服制劑后100mg包嚢的微粒制劑在禁食雄性短尾猴中的口服生物利用度。該制劑類型的替加環素血漿濃度通過LC/MS/MS方法測定。材料和方法制劑替加環素制劑為100mg的包嚢多顆粒制劑，其具有下表VIII列出的組分表VIII<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>a針對微晶纖維素(MCC)調節替加環素效力。腸溶包衣包含密封包衣、YS-l-7006和腸溶包衣(Acryl-EZE)。腸溶包衣替加環素的最終效力為209mg/g。每100mg膠嚢劑含有478.5mg腸溶包衣顆粒。實驗設計和樣品收集在四只體重為5.5至7.1kg的雄性短尾猴中研究替加環素的生物利用度。將猴子飼養于Bioresources動物飼養所中，自由進食和飲水。四只猴子接受如上所述的口服制劑(lx100mg多顆粒膠囊)。制劑與10mL水一起施用。給藥前所有動物都禁食過夜(自由飲7K)，給藥后4小時進食。給藥后0(給藥前)、0.5、1、2、3、4、8、12和24小時從隱靜脈取血樣。用含有肝素鈉抗凝劑的Vacutainer⑧真空試管取血約3mL。低溫離心分離血漿，在-70。C下儲存。將血漿樣品在干冰上包裝遞送至分析場所。根據上述LC/MS/MS方法測定血漿替加環素濃度。在樣品體積為0.5mL的^i^fe上，方法的定量限為10ng/mL。猴血漿中替加環素濃度的測定根據LC/MS/MS方法測定替加環素濃度。使用0.50mL含有肝素鈉的猴血漿，定量下限(LLOQ)為10.0ng/mL，分析范圍為10.0至1000ng/mL。為監測分析結果，每次分析均伴隨一式四份的低、中、高三個濃度(標稱濃度為30、300和800ng/mL)的質量控制樣品(QCs)。猴血漿中替加環素的LC/MS/MS分析的分析結果本實驗中猴血漿樣品中替加環素的定量只使用一種分析方法。在猴血漿中制備的替加環素標準物的反向計算值和標準曲線回歸常數見表XI。200680048210.1說明書第23/28頁表IX.猴血漿中替加環素分析的分析結果標準物的反向計算濃度和標準曲線回歸常數(A)猴血漿中替加環素標準物的反向計算濃度<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>(B)猴血漿中替加環素分析的標〉1陣曲線a回歸常數<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>使用線性回歸方法，加權因子為1/濃度使用加權因子1/(濃度)2進行線性回歸分析。反向計算的標準物的平均偏差為-11.6%至13.0%。標準曲線的W值為0.9895。在猴血漿中制備并與實驗樣品一起分析的替加環素質量控制(QC)樣品的分析結果見表X。表X.猴血漿中替加環素分析的分析結果質量控制(QC)樣品分析結果替加環素QC樣品<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>QC樣品的CV為1.9%至6.1%，平均偏差為-14.3%至-2.7%。QC結果見圖7至9。替加環素在猴血漿中的濃度用包嚢微粒制劑單次口服給藥(100mg膠嚢)替加環素后禁食猴子的替加環素血漿濃度(ng/mL)見表XI和圖10。<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>*SAN:實-驗動物編號血漿濃度時間數據分析使用WinNonlin，Model200對單個猴血漿替加環素濃度-時間曲線進行非房室分析。根據對數/線性梯形原則計算替加環素血漿濃度時間曲線下面積(AUC)。血漿替加環素濃度峰值(Cmax)和達峰時間(Uax)可從替加環素血漿濃度時間曲線中直接觀察到。制劑的AUC(ng'hr/mL，平均值±SD)為2830±1111。制劑的C鵬x值(ng/mL，平均值±SD)為225±92.4。藥代動力學單個和平均的猴子藥代動力學參數見表XII。表XII.單次給藥(100mg包嚢微粒膠嚢，批號L23290-29B)后替加環素在禁食雄性短尾猴中的單個和平均藥代動力學參數<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>表XIII比較了平均藥代動力學參數和包嚢多顆粒制劑中替加環素的絕對生物利用度和相對于靜脈內給藥和口服給藥(管飼法)的0.9%替加環素鹽水溶液的相對利用度，如實施例2所示。表XIII.單次給藥替加環素后雄性短尾猴藥代動力學參數的比較[平均值(n=4)<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>參見實施例2制劑的AUC(ng'hr/mL，平均值±SD)值為2830±1111。Cmax值(ng/mL，平均值士SD)為225±92.4。在短尾猴中進行替加環素制劑生物利用度實驗以評價改進的包嚢微粒口服劑型的生物利用度。實驗結果表明替加環素在口服給藥后在血液中的絕對生物利用度為5%。與先前進行的15mg/kg的臨床前實驗的結果相比，膠嚢制劑(16mg/kg)的口服暴露程度(AIJC)明顯較高。治療細菌感染時，至少為5。/。的血液生物利用度是合適的。對于治療胃腸道感染而言，5。/。的血液生物利用度可解釋為95。/。的胃腸道生物利用度。實施例4本實施例描述制備口服制劑的干粉包衣方法。表XIV列出了制劑成分。表XIV<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>在本實施例中，將替加環素、乳糖、磷酸鈉和EDTA混合，經螺式加料斗加至流化床旋轉制粒機中，其中含有蔗糖或微晶球狀體。同時向旋轉的球狀體床內噴霧5-10%羥丙甲基纖維素的粘合劑溶液，同時緩慢加入替加環素混合物。向球狀體加入所需量的替加環素混合物后，將其干燥，移出以進行腸溶包衣。通過流化床加工機使用聚甲基丙烯酸酯進行腸溶包衣包衣。也可以使用工業中通常使用的其它腸溶包衣聚合物。考慮了本文公開的說明書和實踐方法，本發明的其它實施方案對于本領域技術人員而言將是顯而易見的。本說明書和實施例都應該僅僅被看作是示例性的，本發明的實際范圍和精神則由以下的權利要求書界定。若非另外說明，在說明書和權利要求書中用于表達成分的量、反應條件等的所有數值應被理解為在所有情況下都被術語"約，，修飾。因此，若非另外說明，說明書和所附權利要求書中的數字參數都是大約的數字，可能根據本發明旨在獲得的期望性質而變化。權利要求1.一種包含替加環素的藥物組合物，其具有至少一種腸溶包衣。2.權利要求1所述的組合物，其中所述的至少一種腸溶包衣選自于二甲基氨基乙基甲基丙烯酸酯丙烯酸甲酯共聚物、陰離子丙烯酸樹脂例如曱基丙烯^/丙烯酸曱酯共聚物、甲基丙烯^/丙烯酸甲酯共聚物和甲基丙烯酸/丙烯酸乙酯共聚物、丙烯酸乙酯-曱基丙烯酸曱酯共聚物、醋酸羥丙基甲基纖維素琥珀酸酯(HPMCAS)、羥丙基曱基纖維素鄰苯二甲酸酯(HPMCP)、醋酸纖維素鄰苯二曱酸酯(CAP)、醋酸羧曱基纖維素鄰苯二曱酸酯(CMCAP)、羥丙基甲基纖維素、羥乙基纖維素、甲基羥乙基纖維素、羧甲基纖維素鈉、羥丙基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、蟲膠、曱基纖維素和乙基纖維素和它們的混合物和共聚物。3.權利要求1或2所述的組合物，其中所述組合物是口服劑型形式。4.權利要求1至3之任一項所述的組合物，其中所述口服劑型形式選自于膠嚢劑、片劑、丸劑、散劑、顆粒劑和低壓凍干餅和粉末。5.權利要求1至4之任一項所述的組合物，其中的替加環素是多顆粒。6.權利要求5所述的組合物，其中多顆粒替加環素的平均粒徑為0.3mm至1.5mm。7.—種藥物組合物，其包含引入硬明膠膠嚢中的腸溶包衣多顆粒小丸，其中每個小丸包含替加環素和微晶纖維素以及至少一種選自于至少一種堿、至少一種螯合劑和至少一種生物聚合物的組分。8.—種藥物組合物，其包含腸溶包衣片劑，其中所述片劑包含替加環素和微晶纖維素以及至少一種選自于至少一種堿、至少一種螫合劑和至少一種生物聚合物的組分。9.一種藥物組合物，其包含引入腸溶包衣的軟明膠膠嚢中的多顆粒小丸，其中每個小丸包含替加環素和微晶纖維素以及至少一種選自于至少一種堿、至少一種螯合劑和至少一種生物聚合物的組分。10.—種藥物組合物，其包含腸溶包衣的軟液體凝膠膠嚢，其還包含替加環素的非水性溶液以及至少一種選自于至少一種堿、至少一種螯合劑和至少一種生物聚合物的組分。11.上述權利要求之任一項所述的組合物，其進一步包含至少一種堿、至少一種螯合劑和至少一種生物聚合物。12.上述權利要求之任一項所述的組合物，其進一步包含至少一種械。13.權利要求7至12之任一項所述的組合物，其中所述的至少一種堿選自于磷酸鹽、碳酸鹽、碳酸氫鹽、檸檬酸鹽和酒石酸鹽。14.權利要求13所述的組合物，其中所述的至少一種堿選自于磷酸鈉、碳酸鈉、碳酸氬鈉和檸檬酸鈉。15.上述權利要求之任一項所述的組合物，其進一步包含至少一種螫合劑。16.權利要求7至12之任一項或權利要求15所述的組合物，其中所述的至少一種螯合劑選自于EDTA、EGTA、檸檬酸鹽和酒石酸鹽。17.上述權利要求之任一項所述的組合物，其進一步包含至少一種生物聚合物。18.權利要求7至12之任一項或權利要求17所述的組合物，其中所迷的至少一種生物聚合物選自于羥丙甲基纖維素、黃原膠和卡波姆。19.一種制備藥物組合物的方法，其包括用至少一種腸溶包衣為替加環素包衣。20.治療至少一種細菌感染的方法，其包括向有需要的個體口服施用包含治療有效量的替加環素的藥物組合物，所述替加環素具有至少一種腸溶包衣。21.權利要求20所述的方法，其中所述的至少一種細菌感染選自于復雜的腹腔感染(cIAI)、復雜的皮膚和皮膚結構感染(cSSSI)、社區獲得性肺炎(CAP)和醫院獲得性肺炎(HAP)適應征、由具有TetM和TetK耐藥決定子的細菌引起的細菌性感染、骨和關節感染、與導管有關的嗜中性粒細胞減少癥、婦產科感染、由VRE、ESBL、腸道病原體和快速生長的分枝桿菌引起的細菌性感染。22.權利要求20或21所述的方法，其中的替加環素是多顆粒替加環素。23.—種治療抗生素相關的由困難腸梭菌引起的偽膜性腸炎和由金黃色葡萄球菌及相關甲氧西林耐受菌種引起的小腸結腸炎的方法，其包括向有需要的個體施用包含治療有效量的替加環素的藥物組合物，所述替加環素具有至少一種腸溶包衣。24.具有至少一種腸溶包衣的替加環素在制備用于治療至少一種細菌感染的藥物中的用途。25.治療至少一種細菌感染的權利要求的用途，其包括其中所述的至少一種細菌感染選自于復雜的腹腔感染(cIAI)、復雜的皮膚和皮膚結構感染(cSSSI)、社區獲得性肺炎(CAP)和醫院獲得性肺炎(HAP)適應征、由具有TetM和TetK耐藥決定子的細菌引起的細菌性感染、骨和關節感染、與導管有關的嗜中性粒細胞減少癥、婦產科感染、由VRE、ESBL、腸道病原體和快速生長的分枝桿菌引起的細菌性感染。26.治療至少一種細菌感染的權利要求的用途，其包括或者權利要求20的方法，其中所述的至少一種細菌感染選自于復雜的腹腔感染(cIAI)、復雜的皮膚和皮膚結構感染(cSSSI)、社區獲得性肺炎(CAP)和醫院獲得性肺炎(HAP)適應征、由具有TetM和TetK耐藥決定子的細菌引起的細菌性感染、骨和關節感染、與導管有關的嗜中性粒細胞減少癥、婦產科感染、由VRE、ESBL、腸道病原體和快速生長的分枝桿菌引起的細菌性感染，其中替加環素是多顆粒替加環素。27.具有至少一種腸溶包衣的替加環素在制備用于治療抗生素相關的由困難腸梭菌引起的偽膜性腸炎和由金黃色葡萄球菌及相關甲氧西林耐受菌種引起的小腸結腸炎的藥物中的用途。全文摘要本文公開了一種包含替加環素的用于口服施用的藥物組合物。所述組合物可包含具有至少一種腸溶包衣的替加環素。文檔編號A61K31/65GK101340895SQ200680048210公開日2009年1月7日申請日期2006年12月20日優先權日2005年12月22日發明者C·R·迪奧里奧,K·A·阿里,S·M·夏申請人:惠氏公司