專利名稱：化合物6－糠氨基嘌呤用于制備抗心肌缺血損傷藥物的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及化合物6-糠氨基嘌呤(6-Furfurylaminopurine)的新藥物用途，特別涉及化合物6-糠氨基嘌呤用于制備抗心肌缺血損傷藥物的應用，經申請人的實驗研究證明6-糠氨基嘌呤能夠提高動物機體在心肌缺血狀態下抗心肌缺血損傷的能力。
背景技術：
心臟病是目前嚴重威脅人類身體健康的疾病之一。在世界范圍內，在大多數西方發達國家，心血管疾病是第1位死亡原因；在發展中國家心血管疾病死亡目前占死亡原因的四分之一，但預計至2020年將達到三分之一。世界衛生組織已預計至2020年，心血管疾病將成為世界上第一位死因。而心肌缺血為多數心血管系統疾病的病因所在。心臟是人體內最大的需氧器官，而充足的氧的供應有賴于良好的血液循環，心臟的重量雖不足全身體重的1％，但卻需要全身血液量的20％才能滿足心臟自身的供血。心肌細胞供能的主要方式是在有氧條件下的脂肪酸β氧化，而非依賴于糖代謝，這種獨特的功能方式決定了心肌細胞對有氧代謝的高度依賴性和對缺氧性損傷的高度敏感性。心肌缺血狀態主要是由于冠狀動脈供血不足或心肌耗氧量增加引起的。在缺血性心臟病的發生中，常常是上述兩種因素綜合作用的結果。
心肌缺血時最早出現的病理生理改變是代謝變化。當心肌發生缺血時，能量的供應以糖酵解為主，使組織中乳酸和丙酮酸增多，細胞內K+外移和Ca2+增加，且由于兒茶酚胺釋放增多等因素促使游離脂肪酸形成增加，從而增加心肌耗氧量、加重心肌缺血，導致進行性細胞膜功能減退、離子平衡失調，以致引起細胞水腫。繼而引起心肌功能的改變，最終引起細胞超微結構的變化，導致心肌中出現不均一的小灶性病變，使心肌缺血發展為不可逆的心肌壞死。缺血引起心肌損傷主要與下列因素有關自由基爆發性生成引起心肌組織損傷，心肌細胞鈣超載，中性粒細胞含有的高活性磷脂酶損傷心肌細胞膜，高能磷酸化合物生成明顯減少，發生酸中毒、β氧化受阻時代謝產物如乳酸、長鏈脂酞CoA、脂酞肉毒堿、游離脂肪酸等在心肌中堆積，損害心肌，影響心肌功能。其中，自由基損傷被認為是心肌組織損傷的主要機制之一。自由基是指具有未配對電子的離子、原子、原子團或分子。其特點是活性強，結構不穩定，存在時間短暫，一旦發生反應即呈鏈鎖式進行，可對機體造成損害。正常生理條件下，體內存在自由基清除劑，維持自由基產生與清除之間的動態平衡。病理狀態下自由基產生過多，超過自由基清除系統的清除能力，則引起一系列過氧化反應，破壞機體組織。
心肌缺血過程中，自由基代謝紊亂主要表現為缺血導致釋放到心肌的氧氣不能滿足線粒體的需要，造成其呼吸鏈的電子泄露增加，泄漏的電子與線粒體內膜上的分子氧反應產生大量的活性氧自由基；缺血狀態下，能量生成發生障礙，維持細胞膜兩側離子濃度梯度的泵功能衰竭，細胞內Ca2+濃度升高，激活黃嘌呤氧化酶，該酶利用ATP分解產生的次黃嘌呤和黃嘌呤，在低氧條件下產生大量的超氧陰離子自由基；缺血的心肌中有大量的兒茶酚胺釋放，通過形成腎上腺素而增加自由基的含量；缺血區白細胞大量浸潤，激活中性粒細胞，產生氧自由基。再加上心肌缺血使自由基清除系統活性降低，改變了心肌細胞內氧自由基生成和清除間的平衡，致使心肌組織中自由基的大量蓄積。過量的自由基可與各種細胞成分，如膜磷脂、蛋白質、核酸等發生反應，造成細胞結構損傷和功能代謝障礙。因而，尋找清除自由基的有效藥物是目前研究保護缺血心肌的重要途徑之一。
目前，臨床上依然缺乏防治心肌缺血的有效藥物，因此開發一種來源廣，純度高，成分明確，效果好，安全無毒無害的抗心肌缺血損傷的藥物顯得非常迫切且具有重大的意義。
6-糠基氨基嘌呤是1956年Mliller在加熱滅菌過的鯡魚精子DNA提取物中發現了一種具有促進細胞分裂活性的小分子化合物。它是一種非天然的細胞分裂素，俗稱激動素(kinetin，KT)，分子式C10H9N5O。純品為白色固體，熔點是265-266℃，系兩性化合物。易溶于稀鹽酸或稀堿溶液；難溶于水、乙醇、乙醚和丙酮。其6-糠氨基嘌呤的分子結構式如下 6-糠基氨基嘌呤是第一個被發現具有細胞分裂素作用的物質。除具有促進細胞分裂、分化、和生長的作用外，還具有延緩器官衰老，誘導芽分化，增加氣孔開度，誘導愈傷組織長芽，解除頂端優勢，打破側芽休眠和促進種子發芽，延緩蛋白質和葉綠素的降解的作用。主要用于組織培養，促進細胞分裂和調節細胞分化，延緩衰老，果蔬保鮮，調節營養物質的運輸，促進結實等方面。6-糠基氨基嘌呤在植物上的抗氧化和抗衰老的作用是非常明顯的，在動物和人體方面的研究還很少，近年來的研究發現6-糠基氨基嘌呤還具有多種藥理作用，如抑制蛋白質、多糖和DNA的氧化損傷，清除自由基，抑制體內血栓的形成等。
發明內容
本發明的目的在于，提供化合物6-糠氨基嘌呤用于制備抗心肌缺血損傷藥物的應用。申請人經過大量的試驗證明，6-糠基氨基嘌呤的抗氧化損傷清除自由基的作用非常明顯，具有抗心肌缺血損傷的作用。可望用于抗心肌缺血損傷藥物的開發。可以制備成目前所有的劑型，如粉劑、丸劑、片劑、針劑、沖劑、膏劑、納米乳劑、膠囊或口服液等，給藥方式為口服、注射或透皮給藥用量限定在450mg/kg·b·w以內。
具體實施例方式
本發明所述的藥物性心肌缺血損傷是腦垂體后葉素或麥角新堿、異丙腎上腺素或腎上腺素引起的心肌缺血性損傷。所述的實驗性心肌梗塞損傷是由結扎冠狀動脈、冠脈內栓塞、冠脈氣囊壓迫或冠脈內血栓形成引起的心肌缺血性損傷。所述的離體心臟灌流損傷是由結扎離體心臟的冠狀動脈、低氧或無氧灌流引起的心肌缺血性損傷。
下面結合發明人給出的具體試驗，進一步驗證6-糠基氨基嘌呤能夠用于制備抗心肌缺血損傷的藥物應用。
1材料與方法1.1藥品與試劑6-糠基氨基嘌呤購于廈門星隆達化學試劑有限公司，由美國Sanland公司生產；用0.06mol/L的鹽酸配制成2000mg/L的儲備液，備用。異丙腎上腺素注射液(Iso)上海禾豐制藥有限公司生產，批號6E2003。速眠新II注射液長春軍需大學獸醫研究所，批號20040115。AST、LDH、CK檢測試劑盒上海復星長征醫學科學有限公司生產。SOD、MDA檢測試劑盒南京建成生物工程研究所生產。
1.2儀器心電圖機上海光電醫用電子儀器有限公司ECG-6511型；紫外可見分光光度計德國analytikjena公司SPECORD 50型；冷凍離心機美國BECKMAN公司J2-MC型；全自動生化分析儀日本島津公司CL8000型；分析天平北京賽多利斯儀器系統有限公司BS224S型。
1.3實驗動物健康家兔(心電圖異常者剔除)，雌雄兼有，雌性未孕，體重2.3±0.2Kg，由西北農林科技大學實驗動物中心提供。
1.4實驗方法1.4.1分組與給藥健康家兔30只，隨機分為5組I組(正常對照組，0.06mol/L鹽酸)；II組(模型對照組，0.06mol/L鹽酸)；III組(6-糠基氨基嘌呤低劑量組，20mg/kg)；IV組(6-糠基氨基嘌呤中劑量組，40mg/kg)；V組(6-糠基氨基嘌呤高劑量組，80mg/kg)。各組均每日2次，每次20ml/kg體重灌胃給藥，連續14d。于最后一次灌胃后2h，II、III、IV、V腹腔注射Iso誘發心肌缺血，I組腹腔注射等體積的生理鹽水。
1.4.2家兔心肌缺血模型的制備每組家兔以Iso上、下午各一次，每次按照10mg/kg體重直接注入腹腔。第二次給Iso后，肌肉注射速眠新II注射液(0.1ml/kg)，待家兔麻醉后，仰位固定于解剖臺上，用針狀電極插入家兔四肢皮下，電極和心電圖機相連，標準電壓1mV＝20mm，紙速50mm/s描記肢體II導聯心電圖，40min內每隔5min記錄標準肢體II導聯。全部動物于末次給藥后24h心臟放血處死，收集血液，制備血清。迅速開胸取出心臟，取適量心室肌，在4℃制備10％勻漿，離心取上清液冷凍保存，備用。
1.4.3SOD、MDA和心肌酶譜的檢測取血清和心肌勻漿上清液，按試劑盒說明書操作測定SOD(黃嘌呤氧化酶法)活性和MDA(硫代巴比妥酸鹽法)含量。血清中心肌酶譜通過全自動生化分析儀檢測。
1.5數據分析數據處理使用醫學統計軟件SPLM 3.0進行方差分析，試驗結果以平均數±標準差(X±SD)表示。
2結果
2.16-糠基氨基嘌呤對心肌缺血家兔心電圖的影響在用Iso造成心肌缺血模型后，各組家兔在腹腔注射Iso前后不同時間點心率、J點變化見表1，表2。
表1可見，腹腔注射Iso后5min和30min，模型對照組(II組)家兔心率均極顯著加快(P＜0.01)。腹腔注射Iso后5min，6-糠基氨基嘌呤各劑量組(III、IV、V組)家兔心率較模型組(II組)均有一定程度的減慢，其中IV組與II組比較顯著減慢(P＜0.05)；腹腔注射Iso后30min，III、IV組心率較II組極顯著減慢(P＜0.01)。
表1 各組家兔給Iso前后不同時間心率的變化(X±S，n＝6)
注與模型對照組(II)比較▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；與正常對照組(I)比較★P＜0.05，★★P＜0.01。以下各表同。
表2結果表明，模型對照組(II組)家兔腹腔注射Iso引起J點極顯著升高(P＜0.01)。給予不同劑量6-糠基氨基嘌呤，J點升高均受到一定的抑制。腹腔注射Iso后5min，6-糠基氨基嘌呤各劑量組(III、IV、V組)J點較模型對照組(II組)均顯著降低(P＜0.01或P＜0.05)；腹腔注射Iso后30min，V組J點較II組極顯著降低(P＜0.01)。
表2 6-糠基氨基嘌呤對心肌缺血家兔ECG的J點升高的影響(X±S，n＝6)
注與模型對照組(II)比較▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；與正常對照組(I)比較★P＜0.05，★★P＜0.01。以下各表同。
2.26-糠基氨基嘌呤對家兔心肌缺血后血清中AST、LDH、CK活性的影響表3結果顯示，模型對照組(II組)血清中3種酶的活性均極顯著高于正常對照組(I組)(P＜0.01)。6-糠基氨基嘌呤各劑量組(III、IV、V組)3種酶活性升高均受抑制，其中，中劑量組(IV組)AST和CK活性極顯著降低(P＜0.01)，高劑量組(V組)AST、LDH和CK活性極顯著降低(P＜0.01)。
表36-糠基氨基嘌呤對心肌缺血家兔心肌酶譜(AST、LDH、CK)的影響(X±SD，n＝6)
注與模型對照組(II)比較▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；與正常對照組(I)比較★P＜0.05，★★P＜0.01。以下各表同。
2.36-糠基氨基嘌呤對家兔心肌缺血后心肌組織和血清中SOD活性和MDA含量的影響表46-糠基氨基嘌呤對心肌缺血家兔心肌組織和血清中SOD活性和MDA含量的影響(X±SD，n＝6)
注與模型對照組(II)比較▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；與正常對照組(I)比較★P＜0.05，★★P＜0.01。以下各表同。
從表4中可以看出，模型對照組(II組)心肌組織和血清中SOD活性較正常對照組(I組)均顯著降低(P＜0.01)。6-糠基氨基嘌呤各劑量組(III、IV、V組)心肌組織中SOD活性較模型對照組(II組)均有一定程度的提高，其中IV、V組心肌組織中SOD活性較模型對照組(II組)有極顯著提高(P＜0.01)。III、IV、V組血清中SOD活性均較II組顯著升高(P＜0.01或P＜0.05)。
模型對照組(II組)心肌組織和血清中MDA含量較正常對照組(I組)極顯著升高(P＜0.01)。IV、V組心肌組織和血清中MDA含量較模型對照組(II組)顯著降低(P＜0.01或P＜0.05)。
3結論實驗結果表明，6-糠基氨基嘌呤對Iso誘發的家兔心電圖心率加快、J點升高，心肌酶活性升高，SOD活性降低和MDA含量升高有抑制作用。通過該實驗可以證明6-糠基氨基嘌呤具有保護家兔心肌缺血損傷的作用。
權利要求
1.化合物6-糠氨基嘌呤用于制備抗心肌缺血損傷藥物的應用。
2.如權利要求1所述的應用，其特征在于，所述的心肌缺血損傷是藥物性心肌缺血損傷、實驗性心肌梗塞損傷或離體心臟灌流損傷。
3.如權利要求2的應用，其特征在于，所述的藥物性心肌缺血損傷是腦垂體后葉素或麥角新堿、異丙腎上腺素或腎上腺素引起的心肌缺血性損傷。
4.如權利要求2的應用，其特征在于，所述的實驗性心肌梗塞損傷是由結扎冠狀動脈、冠脈內栓塞、冠脈氣囊壓迫或冠脈內血栓形成引起的心肌缺血性損傷。
5.如權利要求2所述的應用，其特征在于，所述的離體心臟灌流損傷是由結扎離體心臟的冠狀動脈、低氧或無氧灌流引起的心肌缺血性損傷。
6.如權利要求1的應用，其特征在于，所述的藥物的給藥方式包括口服給藥、注射給藥和透皮給藥，用量限定在450mg/kg·b·w以內。
7.如權利要求1的應用，其特征在于，所述的藥物制成粉劑、丸劑、片劑、針劑、沖劑、膏劑、納米乳劑、膠囊或口服液。
全文摘要
本發明公開了化合物6－糠氨基嘌呤(6－Furfurylaminopurine)用于制備抗心肌缺血損傷藥物的新用途。6－糠基氨基嘌呤作為外源性嘌呤類物質，能改善由心肌缺血引起的家兔心電圖異常，提高心臟抗氧化損傷能力，減輕膜脂質過氧化，維持膜的完整性，減少心肌細胞谷草轉氨酶、乳酸脫氫酶、肌酸激酶的釋放，提高心肌組織抗氧化損傷和清除自由基的能力，減輕缺血引起的氧化損傷，對家兔心肌缺血損傷有一定保護作用。
文檔編號A61K9/08GK101066270SQ20071001798
公開日2007年11月7日 申請日期2007年6月4日 優先權日2007年6月4日
發明者歐陽五慶, 魏硯明 申請人:西北農林科技大學